（分析化学专业论文）纳米级固定相的制备及其在毛细管电泳中的应用.pdf

刘尹：纳米级固定相的制备及其在毛细管电泳中的应用! 摘要 本文共分为五章，包括采用纳米颗粒作为内壁修饰固定相及准固定相的研究 进展、在毛细管电泳中用蚀刻的石英毛细管柱在线预富集氨基酸、纳米二氧化硅 的制备及其在毛细管电泳上的应用，以及研究工作的展望等内容。 第一章为前言，主要介绍了纳米颗粒的特性、制备方法、表征及其应用研究 概况，毛细管电泳技术及其应用进展，纳米颗粒作为内壁修饰固定相、准固定相 的研究进展，并在此基础上提出了本论文的研究目标与创新点。 第二章主要研究了金纳米颗粒做为毛细管电色谱中的内壁修饰固定相分离芳 香烃化合物。这种技术采用十八烷基胺稳定的金纳米颗粒修饰石英毛细管内壁。 十八烷基胺保护的疏水性金胶纳米颗粒的制备是通过微波加热的方式用乙醇还原 反相胶束来完成的，颗粒平均粒径为4 5 3 4 - 0 7 9n l n 。本文研究了修饰后的毛细管柱 的电色谱分离性能，通过改变有机添加剂的含量、缓冲液的p h 值和浓度及毛细管 柱内壁修饰方法，有效分离了硫脲、苯酚和联苯。结果表明，采用该方法制备的 开管柱具有较好的分离重现性。 第三章主要研究了在毛细管电泳中用蚀刻的石英毛细管柱在线预富集氨基 酸。在线预富集方法是基于分析物和毛细管柱内壁之间的静电吸附作用：氨基酸 溶解在酸性溶液中时带正电荷，当被注入到柱中时，就被石英毛细管柱内表面的 负电荷吸引；蚀刻过的柱子可用来增加毛细管内表面积，从而可以增加氨基酸和 毛细管柱内表面之间的静电作用。我们发现样品进样在1m i n1 0p s i 和样品p h 值 为4 的条件下时，吸附在毛细管内表面氨基酸的数量最多。与常规的毛细管电泳 分离相比，这些最优化的实验条件下，采用d a d 检测，对天冬酰胺酸，色氨酸和 苯基丙氨酸的检测灵敏度可分别提高5 2 0 0 ，2 8 0 0 和3 1 0 0 倍。这种方法有很好的 重现性，能够成功地用于两性离子的预富集。 第四章主要研究了纳米二氧化硅的制备及其在毛细管电泳上的应用，采用纳 米二氧化硅颗粒作为电泳中的准固定相分离苯胺和硫脲，并简述了纳米二氧化硅 ! 扬州大学硕士学位论文 颗粒的结构与性质，还介绍了在水浴2 5 。c 的条件下反应液中水含量对生成的纳米 二氧化硅颗粒大小的影响。研究了不同颗粒大小、p h 值对毛细管电泳中分离效果 的影响。 第五章对以上的工作作了总结，并对今后的研究提出了展望。 关键词：纳米颗粒，毛细管电色谱，毛细管电泳，准固定相，在线预富集， 金胶，二氧化硅 刘尹：纳米级固定相的制各及其在毛细管电泳中的应用 p r e p a r a t i o no f n a n o m e t e rs t a t i o n a r i e sa n dt h e i r a p p l i c a t i o ni nt h ec a p i l l a r ye l e c t r o p h o r e s i s a b s t r a c t 3 t h i sd i s s e r t a t i o nc o n s i s t so ff j v e c h a p t e r s i n c l u d i n g r e s e a r c h p r o g r e s s o f n a n o p a r t i c l e su s e d 嬲m o d i f i e rs t a t i o n a r ya n dp s e u d o s t a t i o n a r y ；e t c h e db a r ef u s e d - s i l i c a c a p i l l a r i e sf o ro n l i n ep r e c o n c e n t r a t i o no fa m i n oa c i d si nc e ；p r e p a r a t i o no fn a n o m e t e r s i l i c ap a r t i c l e sa n dt h e i ra p p l i c a t i o ni nt h ec a p i l l a r ye l e c t r o p h o r e s i s ，a n dt h ep r o s p e c to f t h ep r e s e n tr e s e a r c hw o r k i nc h a p e r1 ，a p p l i c a t i o n so fn a n o p a r t i c l e sa r er e v i e w e d t h et h e o r yo fc a p i l l a r y e l e c t r o p h o r e s i s a n di t s a p p l i c a t i o n ，u s i n gn a n o p a r t i c l e sa sc o a t i n gm a t e r i a l sa n d p s e u d o s t a t i o n a r yw e r eg i v e n t h eg o a lo f t h i sd i s s e r t a t i o nw a sa l s op r e s e n t e d i nc h a p e r2 ，c a p i l l a r ye l e c t r o c h r o m a t o g r a p h i cs e p a r a t i o no fa r o m a t i cc o m p o u n d s u s i n gg o l dn a n o p a r t i c l e a s s t a t i o n a r yp h a s ew a sr e p o r t e d t h i st e c h n i q u eu s e d o c t a d e c y l a m i n e c a p p e dg o l dn a n o p a r t i c l e st oc o a tt h ei n n e rs u r f a c eo ft h ef u s e ds i l i c a c a p i l l a r yc o l u m n t h eh y d r o p h o b i cg o l dn a n o p a r t i c l e sp r o t e c t e db yo c t a d e c y l a m i n e w e r ep r e p a r e db yu s i n ge t h a n o l 船r e d u c t i o ni nr e v e r s em i c e l l et h r o u g hm i c r o w a v e d i e l e c t r i ch e a t i n g t h ea v e r a g ed i a m e t e ro f o c t a d e c y l a m i n e s t a b i l i z e dg o l d n a n o p a r t i c l e s w a s4 5 3 士0 7 9n n l t h es e p a r a t i o np e r f o r m a n c eo ft h i st y p eo fc o l u m nw a ss t u d i e d u s i n go p e nt u b u l a rc a p i l l a r ye l e c l r o c h r o m a t o g r a p h y ( o t - c e c ) m o d e b yc h a n g i n gt h e p e r c e n t a g eo ft h eo r g a n i cm o d i f i e r , p r iv a l u ea n dc o n c e n t r a t i o no ft h eb u f f e r , a n dt h e m e t h o du s e dt op r e p a r et h ec o l u m n ，t h em i x t u r eo f t h i o u r e a , p h e n o la n db i p h e n y lw a s w e l ls e p a r t e d t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h es e p a r a t i o nr e p e a t a b i l i t yo ft h e s ec o l u n m s w e r ea c c e p t a b l e i n c h a p e r3 ，e t c h e db a r ef u s e d s i l i c ac a p i l l a r i e sf o ro n l i n ep r e c o n c e n t r a t i o no f a m i n oa c i d si nc ea r es t u d i e d a n o n l i n ep r e c o n c e n t r a t i o nm e t h o db a s e do n 一4 扬州大学硕士学位论文 e l e c t r o s t a t i ci n t e r a c t i o nb e t w e e nt h ea n a l y t e sa n di n n e rs u r f a c eo ft h ec a p i l l a r yc o l u m n w a sd e v e l o p e df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fz w i t t e r i o n i ca n a l y t e ss u c ha sa m i n oa c i d si nc e c o u p l e dw i t had a d t h ea m i n oa c i d sp o s s e s s e dp o s i t i v ec h a r g e sw h e nt h e yw e r e d i s s o l v e di na na c i d i cs o l v e n t w h e nt h e yw e r e 蛳e c t e di n t ot h ec o l u m n ，t l l e yw e r e a t t r a c t e db yt h en e g a t i v e l yc h a r g e di n n e rs u r f a c eo ft h ef u s e d s i l i c ac a p i l l a r yc o l u m n a ne t c h e dc o l u m nw a su s e dt oi n c r e a s et h ea r e ao ft h ec a p i l l a r y si n n e rs u r f a c ea n d ， c o n s e q u e n t l yi n c r e a s et h e e l e c t r o s t a t i ci n t e r a c t i o nb e t w e e nt h ea m i n oa c i d sa n dt h e i n n e rs u r f a c eo f t h ec a p i l l a r yc o l u m n i tw a sf o u n dt h a tw h e nt h es a m p l ew a si n j e c t e da t 1 0p s if o rir a i na n dt h ep hv a l u eo ft h es a m p l ew s s4 ，t h ea m o u n to fa m i n oa c i d s a t t r a c t e dt ot h ei n n e rs u r f a c eo ft h ec a p i l l a r yw a sm a x i m u m u n d e rt h e s eo p t i m i z e d e x p e r i m e n t a lc o n d i t i o n s ，t h ed e t e c t i o ns e n s i t i v i t yo fc e d a dw a se n h a n c e db y5 2 0 0 ， 2 8 0 0 ，a n d31 0 0t i m e sf o ra s p a r a g i n e ，t r y p t o p h a na n dp h e n y l a l a n i n e ，r e s p e c t i v e l y , c o m p a r e dw i t hn o r m a lc es e p a r a t i o n t h em e t h o dp r o v i d e dg o o dr e p r o d u c i b i l i t yi n t e r m so fb o t hm i g r a t i o nt i m ea n dp e a kh e i g h t i tc a nb es u c c e s s f u l l yu s e df o rt h e p r e c o n c e n t r a t i o nz w i t t e r i o n i nc h a p e r4 ，p r e p a r a t i o no fn a n o m e t e rs i l i c ap a r t i c l e sa n dt h e i ra p p l i c a t i o ni nt h e c a p i l l a r ye l e c t r o p h o r e s i s a r e i n v e s t i g a t e d n a n o m e t e r s i l i c a p a r t i c l e s u s e da s p s e u d o s t a t i o n a r yi nc ec a ns e p a r a t en e u t r a ls a m p l e ss u c ha sa n i l i n ea n dt h i o u r e a t h e s t r u c t u r ea n dc h a r a c t e ro fs i l i c ap a r t i c l e sa r eb r i e f l yr e v i e w e d t h ee f f e c to ft h ec o n t e n t s o f w a t e ri nt h es o l u t i o no nt h ed i a m e t e ro f t h en a n o m e t e rs i l i c ap a r t i c l e sw e r es t u d i e da t 2 5 * ( 3 t h ee f f e c to ft h ed i a m e t e ro ft h es i l i c ap a r t i c l e su s e d ，p hv a l u e ，e t c o nt h e s e p a r a t i o ne f f i c i e n c yw e r ea l s os t u d i e d i nc h a p e r5 ，t h ef i n a lp a r to f t h ed i s s e r t a t i o n ，t h es u m m i n g u po f t h ed i s s e r t a t i o ni s p r e s e n t e da n dt h ep r o s p e c to f t h i sr e s e a r c hi sd i s c u s s e d k e yw o r d s ：n a n o p a r t i c l e s ，c a p i l l a r ye l e c t r o c h r o m a t o g r a p h y , c a p i l l a r y e l e c t r o p h o r e s i s ，p s e u d o s t a t i o n a r y , o n l i n ep r e c o n c e n t r a t i o n ，g o l d ，s i l i c a 刘尹：纳米级固定相的制备及其在毛细管电泳中的应用 第一章前言弟一早刖百 1 1 纳米颗粒概述 1 1 1 纳米技术、纳米颗粒的基本涵义 至少一维，在纳米尺度范围内( 1 1 0 0 m ) ，通过操纵原子、分子或原子团、 分子团使其重新排列组合成新物质的技术称为纳米技术( n a n o t e c h n o l o g y ) 。运用纳 米技术研制出来的物质称纳米材料( n a n o m a t e r i a l ) 。直径 3 时，硅胶表面带负电，与溶液接触时形成一个双电层， 在高电压作用下，双电层水合阳离子层引起整个溶液在毛细管中向负极方向流动， 刘尹：纳米级固定相的制备及其在毛细管电泳中的应用旦 形成电渗流。带电粒子在毛细管内电解质溶液中的迁移速度等于电泳和电渗流二 者的矢量和，在电渗流和电泳的共同作用下，阳离子首先从负极流出；中性离子 速度等于电渗流速度，随后流出；当电渗流速度大于电泳速度时，阳离子最后流 出。 根据分离原理不同，c e 的主要分离模式有6 种，它也能与一些仪器联用，如表 1 1 所示。c e 还可以按操作方式分为手动、半自动及全自动三种类型，或按分离通 道分为圆形、扁型、方型毛细管电泳。毛细管电泳的多种分离模式，给样品分离 提供了不同的选择机会，这对复杂样品的分离分析是非常重要的。 表1 1 毛细管电泳的分离模式和应用 t a b l e1 1s e p a r a t i o nm o d e sa n da p p l i c a t i o no f c e 类型缩写说明应用 使用均匀p h 缓冲 毛细管区带电泳 c z e 离子分离3 乒3 9 1 液 加入一种或多种中性离子型物质 胶束电动毛细管色谱 m e c c 胶束 4 0 - 4 2 1 管内填充凝胶介 毛细管凝胶电泳c g e蛋白质 4 3 - “s 7 质 使用p h 梯度缓冲 蛋白质【4 7 ，4 引、多肽 毛细管等电聚焦c f 液 【4 9 】 使用两种不同离 毛细管等速电泳 c i t p浓缩 5 0 - 5 3 】 子淌度缓冲液 分开管和填充 c e h p l c 的结合 毛细管电色谱c e cc e c 或正、反相与 5 4 - 5 8 1 离子交换等 蛋白质、d n a 与 联用 c e m s 常用电喷雾接口，r n a 、药物与天然 毛细管电泳，质谱需挥发性缓冲液产物、手性物质等 5 9 侧 需用停顿式扫描 毛细管电泳核磁共振c e 仆孙僳样品峰的测定方 氨基酸【6 5 缶8 l 法 毛细管电泳激光诱导荧具有单细胞、单分单细胞、单分子等 光 c d l i f 子分析潜力 【6 9 7 2 】 毛细管电泳激光拉曼 c e l r s无接口联用 罗丹明 7 3 1 扬州大学硕士学位论文 此外，利用微乳液做流动相的微乳液毛细管电动色谱( m e e k c ) 、利用具有 动态结构的缠结网聚合物溶液来代替凝胶进行分离的毛细管无胶筛分电泳 ( c n g s ) 、采用纯有机溶剂做非水介质的非水毛细管电泳( n a c e ) 、毛细管阵 列电泳( c a e ) 和芯片式毛细管电泳( c c e ) 等都是根据实际需要发展的c e 新模 式。 待测成分的富集是c e 样品前处理技术中一个关键。尽管c e m s 联用具有广 阔的发展前景，但浓度灵敏度较低。最新发展了一系列的预富集方法，如柱上等速 电泳富集法、样品堆积技术以及膜富集或固相富集等技术，以增强浓度灵敏度。例 如c h i a n g 等人 7 4 1 就对两种毛细管电泳富集技术进行了对比。 1 2 2 毛细管电泳的应用进展 毛细管电泳技术经过2 0 多年的发展，已经在化学、生命科学、药学、临床医 学、法医学、环境科学及食品科学等领域得到了广泛的应用，特别是在生物医药 领域已经成为极为重要的分析分离手段之一。目前，毛细管电泳仍在以非常快的 速度发展着，多维分析技术、样品柱上浓缩技术、毛细管电色谱、毛细管阵列等 技术的开发和应用大大提高了它的分析精度，拓展了它的适用范围。 ( 1 ) 蛋白质、d n a 、多肽、氨基酸的分析 c e 对生物分离分析领域的应用十分广泛。主要包括肽、蛋白的鉴别、结构分 析、微量制备以及蛋白的定量测定、纯度检测、非均一性检测、定性和动力学研 究：测定氨基酸的组成、序列和一些物化常数、鉴别结构和种类不同的蛋白质。 蛋白质在管壁吸附严重，如何抑制和消除管壁对蛋白质( 特别是碱性蛋白质) 的 吸附，往往是蛋白质c e 分离成败的关键。m e l i s s a 等人【7 5 】就用二维电泳对老鼠胚 胎中的单细胞蛋白质进行了分析，同时采用了激光诱导荧光检测器。蛋白质组学 研究是生命科学中的又一大规模的科学行动，可用于研究蛋白质组的c e 方法还不 少，比如一维和多维c e 、l c c e 、c e m s 、l c c e m s 等。 d n a 的快速测序一直是研究的热门课题，到目前为止，新的高速测序方法有 两类：一是基于d n a 杂交的探针阵列或d n a 芯片技术；另一种就是c e 方法。 刘尹：纳米级固定相的制各及其在毛细管电泳中的应用 旦 正是c e 测序方法解决了基因组计划中高速测序的问题 7 6 1 。 对于多种氨基酸混合物，由于其包括一系列酸性、碱性和中性组分，以阴离 子表面活性剂十二烷基硫酸钠( s d s ) 形成胶束的m e c c 模式可以有效地对氨基酸 进行分离。针对微量生物样品，样品的浓缩和采集也受到人们的重视。采用进样 前萃取与浓缩技术不仅可以提高c e 测定氨基酸的灵敏度，而且从效果和操作简便 性方面要优于其它柱上富集技术如：场放大技术、c i t p 以及色谱技术【7 7 7 扪。 ( 2 ) 药物分析 毛细管电泳分析技术被药物分析工作者在药品检验领域迅速推广应用 7 9 - 8 5 】，近 两年来，研究热点主要可以概括为：手性分离、相互作用、药物代谢和抗癌金属 药物研究。药品是与人们生命息息相关的特殊商品，检验其真伪或质量的优劣， 需要先进、快速、准确的定性和定量手段。 化学药品分析化学药品结构简单、清楚，常规分析方法能基本解决定性、 定量和纯度控制等问题。但有些结构特异( 如手性对映体结构) 或性质特殊的品 种，现代分析手段从灵敏度、分辨率和分析速度等方面，仍有一些难点。c e 技术 的特点、优势，恰恰弥补和解决了某些分析手段的不足。c z e 与m e c c 等均能用 于药物成分分析，分析精度一般在5 以下，c e 也可用于药物原料中的杂质检查。 手性药物拆分手性药物分离和纯度检验是药物研究和制药工业的关键任 务，也是毛细管电泳在药物分析领域发展的重点。毛细管电泳分离手性药物有特殊 的优点，柱子成本低，分离效率高，在某些方面优于h p l c 。旷、1 3 - 、7 - 、环糊精 ( c d ) 及其衍生物、冠醚、胆汁盐、手性混合物胶束等是毛细管电泳中用得较多 的手性选择剂，其中尤以环糊精最为常用。如何选择适当的手性选择试剂以完成 手性拆分是这类问题的关键。 生物样品分析必然要求进一步发展复杂样品前处理和富集技术、更灵敏的检 测技术及与质谱联用出现的一系列问题，如接口技术、样品利用率、浓度灵敏度、 检测波动性。c e 也可以用于药物生产过程全方位控制与检测，以保证药物质量，提 高工艺水平，在体液中药物的测定、违禁药物分析和临床治疗诊断上也有很广泛 的应用。 1 4 扬卅i 大学硕士学位论文 ( 3 ) 单细胞与小离子分析 单细胞在生命行为如新陈代谢、信号转换等方面发挥着重要的作用，单细胞 的研究与发展对分析者提出了一个严峻的挑战。毛细管电泳可以采用极细的分离 通道进行分离，进样体积小于细胞容积，配以适当的检测器就可以实现单细胞分 析。单细胞c e 可以测定细胞胞浆中各种物质的含量，研究或跟踪细胞中的某种生 化过程，研究细胞中物质的空间分布等，它是一种非常前沿的研究领域，目前已 有许多关于c e 分析单细胞的报导 8 6 - 8 9 】。 毛细管电泳在小离子分析上具有许多优势，而且不需要任何复杂的程序，其 具体应用主要在矿泉水、饮用水、牛奶、面包、污水等基体中阴离子和阳离子的 检n t g o j 。张为民等人【9 1 1 应用毛细管电泳仪分离检测复杂的水样，一次分离检测出十 几种阴离子，从而为复杂水样的分析，如污水分析提供了一套可行的、较为快速的 检测方法。 1 3 纳米颗粒作固定相、准固定相的研究进展 1 3 1 纳米颗粒作固定相的研究进展 纳米颗粒和以纳米颗粒为基础的材料具有均一的特性，所以在不同领域的应 用越来越广泛，纳米颗粒在色谱方面的应用已被证实是有利的，例如，早己提出 了可以用纳米颗粒作为色谱的固定相，二氧化硅和聚合物纳米颗粒已经用作毛细 管电泳中的固定相 9 2 - 9 4 】，超高压液相色谱也用有机金属一二氧化硅纳米颗粒( 6 7 0 n m ) 作为填充材料，毛细管的内径为5 00 r n 9 5 1 ，微分离也已利用纳米材料如：四 铵乳胶颗粒( 7 5r i m ) 作为开管芯片液相色谱的固定相 9 6 1 。 填充柱电色谱( c e c ) 是电色谱分离最常用的一种模式【9 7 1 。毛细管电色谱中 的另一种模式就是开管毛细管电色谱( o t c e c ) ，它的固定相是涂在毛细管柱的 内壁上的。有报导将烷基修饰的金纳米颗粒用在开管毛细管电色谱中 9 8 9 9 。h s i e h 等人【1 0 0 研究出了一种新柱子：是通过二氧化肽纳米颗粒( t i 0 2 n p s ) 与石英毛细 管中的硅烷醇基进行浓缩反应制得。单层保护的纳米颗粒( m p n s ) 特别重要，因 刘尹：纳米级固定相的制备及其在毛细管电泳中的应用 竺 为单层表面能够稳定住它们而相对聚合，它们的性质受单层分子结构的影响。 l i n g 1 0 1 1 等人用t i 0 2 n p s 涂步开管毛细管电色谱成功分离了蛋白质，g w e n 等人【1 蚓 用十二烷基保护的金纳米颗粒作为气相色谱的固定相，通过透射电镜观察，平均 膜厚度为6 0 7 n m 。有研究初次尝试用纳米颗粒填充毛细管电泳( n f c e ) 分析长双 链d n a 分子【1 0 3 1 ，为了避免金纳米颗粒( g n p s ) 的聚合和加强d n a 分子之间的 作用，通过非共价键用聚环氧乙烷( p e o ) 来修饰金纳米颗粒从而形成金纳米颗粒 聚合物合成体( g n p p s ) 。 1 3 2 纳米颗粒作准固定相的研究进展 e k c 法区别于普通色谱的重要特征是它的固定相是移动的，被称之为“准固 定相( p s p s ) ”。因此，准固定相是决定e k c 分离效果好坏的一个重要因素。前人 找到了许多适合分离各种不同性质药物的物质作为“准固定相”，目前有许多类 型的准固定相，如胶束1 洲、环糊精( c d s ) z o s 、蛋白剧1 0 6 ) 、线性硅氧烷【1 胛】、脂质 体【1 吲、微乳液1 0 9 等。 理想的准固定相应是单分散性的，并且在准固定相和缓冲溶液之间能快速地 进行物质转移，具有较好的稳定性，较高的电迁移率用来提供较宽的迁移范围。 w a l l i n g f o r d 和e w i n g 1 1 0 1 在1 9 8 9 年首次用纳米颗粒作为准固定相。与胶束比较， 使用纳米颗粒的一个优点在于它们能与m s 检测器兼容。g u i h e n 和g l e 胁o n 【1 1 1 】已经 对纳米颗粒在分离科学领域的应用作了评论，包括开管柱，缓冲液添加剂，c e 、 l c 、g c 和芯片毛细管电泳等方面的应用。 1 4 本论文的研究目标与创新点 一、十八烷基铵稳定的金纳米颗粒修饰石英毛细管内壁用于开管毛细管电色 谱，采用该方法制备的开管柱分离重现性好，具有明显的反相分离特征。 二、毛细管电泳中用蚀刻的硅胶毛细管在线预富集氨基酸，该方法是基于分 析物和毛细管柱内壁之间的静电作用，这种方法可提供很好的重现性，它能够成 堕扬州大学硕士学位论文 功地用于预富集两性离子。 三、采用纳米二氧化硅颗粒作为电泳中的准固定相，制备简单，操作方便 大大缩短了检测所需时间。 1 5 课题来源 国家自然科学基金( n o 2 0 3 7 5 0 3 4 ，2 0 6 7 5 0 7 1 ) 扬州大学自然科学基金( h k 0 51 31 0 3 ) 参考文献 【1 】l i n d n e rh ，k o c hj ，n i e m a xk p r o d u c t i o no f u l t r a f m ep a r t i c l e sb yn a n o s e c o n dl a s e r s a m p l i n gu s i n go r t h o g o n a lp r e p u l s el a s e rb r e a k d o w n j a n a l c h e m ，2 0 0 5 ，7 7 ( 2 3 ) ： 7 5 2 8 - 7 5 3 3 【2 】c o l v i nvl t h ep o t e n t i a le n v i r o n m e n t a li m p a c to fe n g i n e e r e dn a n o m a t e r i a l s j n a t u r eb i o t e c h ，2 0 0 3 ，2 1 ( 1 0 ) ：11 6 6 - 11 7 0 【3 】李玲等，功能材料与纳米技术【m 】北京：化学工业出版社，2 0 0 2 ：1 2 - 1 7 4 】h o l z i n g e rd ，k i c k e l b i c k c t p r e p a r a t i o n o f a m o r p h o u s m e t a l o x i d e c o r e p o l y m e r - s h e l ln a n o p a r t i c l e sv i aam i c r o e m u l s i o n b a s e ds o l g e la p p r o a c h j c h e m m a t e r ，2 0 0 3 ，15 ( 2 6 ) ：4 9 4 4 - 4 9 4 8 【5 】5 h u d s o nmj ，p e c k e t tjw h a r r i spjf l o w - t e m p e r a t u r es o l g e lp r e p a r a t i o no f o r d e r e dn a n o p a r t i c l e so ft u n g s t e nc a r b i d e o x i d e j i n d e n g c h e m r e s 。，2 0 0 5 ， 4 4 ( 1 5 ) ：5 5 7 5 5 5 7 8 【6 】c h e r v i n cn ，c l a p s a d d l ebj ，e ta 1 r o l eo fc y c l i ce t h e ra n ds o l v e n ti na n o n a l k o x i d es o l g e ls y n t h e s i so fy t t r i a s t a b i l i z e dz i r c o n i an a n o p a r t i c l e s j c h e m m a t e r ，2 0 0 6 ，18 ( 2 0 ) ：4 8 6 5 - 4 8 7 4 【7 】s u b e rl ，i m p e r a t o r ip e ta 1 s y n t h e s i s ，m o r p h o l o g y , a n dm a g n e t i cc h a r a c t e r i z a t i o n o fi r o no x i d en a n o w i r e s a n dn a n o t u b e s j j p h y s c h e m b ，2 0 0 5 ，1 0 9 ( 1 5 ) ： 刘尹：纳米级固定相的制备及其在毛细管电泳中的应用 7 1 0 3 7 1 0 9 【8 】曾令儒，二十一世纪的纳米技术【j 】宇航计测技术，2 0 0 0 ，2 0 ( 1 ) ：5 9 6 1 【9 】m e r c a d ol ，t o r t e spm ，e ta 1 s y n t h e s i sa n dc h a r a c t e r i z a t i o no f h i g h e n e r g y n a n o p a r t i c l e s j j v h y s c h e m b ，2 0 0 4 ，1 0 8 ( 3 3 ) ：1 2 3 1 4 1 2 3 1 7 【1 0 r o n gw ，p e l l i n gae ，e ta 1 c o m p l e m e n t a r yt e ma n da f mf o r c es p e c t r o s c o p yt o c h a r a c t e r i z et h en a n o m e c h a n i c a lp r o p e r t i e so f n a n o p a r t i c l ec h a i na g g r e g a t e s j n a n o l e t t ，2 0 0 4 ，4 ( 1 1 ) ：2 2 8 7 2 2 9 2 【1 1 】j a c k s o nam ，h uy s i l v apj ，s t e l l a c c ief r o mh o m o l i g a n d - t om i x e d 1 i g a n d m o n o l a y e r - p r o t e c t e d m e t a l n a n o p a r t i c l e s ：as c a n n i n gt u n n e l i n gm i c r o s c o p y i n v e s t i g a t i o n j j a m c h e m s o c ，2 0 0 6 ，1 2 8 ( 3 4 ) ：1 1 1 3 5 1 1 1 4 9 1 2 】b e r k oa ，m a g o n ya ，s z o k oj c h a r a c t e r i z a t i o no fm od e p o s i t e do i lat 1 0 2 ( 11 0 、 s u r f a c eb ys c a n n i n gt u n n e l i n gm i c r o s c o p ya n d a u g e re l e c t r o ns p e c t r o s c o p y j l a n g m u i r , 2 0 0 5 ，2 1 ( 1 0 ) ：4 5 6 2 4 5 7 0 【1 3 】b a b e la ，j e n e k h esa h i 曲e l e c t r o nm o b i l i t yi nl a d d e rp o l y m e rf i e l d - e f f e c t t r a n s i s t o r s j j a m c h e m s o c ，2 0 0 3 ，1 2 5 ( 4 5 ) ：1 3 6 5 6 - 1 3 6 5 7 1 4 】c o r d i e ryc h e n o ts ，e ta 1 g r o w t hb ym o l e c u l a rb e a me p i t a x yo f a l g a n g a nh i g h e l e c t r o nm o b i l i t yt r a n s i s t o r so ns i o n - p o l y s i c j s u p e r l a t t i c e sa n dm i c r o s t r u c t u r e ， 2 0 0 6 ，4 0 ( 4 6 ) ：3 5 9 3 6 2 【1 5 】a l b e r tj ，n a g l e rb ，e ta 1 t h ee f f e c t so fn o n l i n e a rg a i no nt h es t a b i l i t yo f s e m i d e g e n e r a t et w o - m o d es e m i c o n d u c t o rl a s e r s ：ac a s es t u d yo nv c s e l s j o p t i c sc o m m u n i c a t i o n s ，2 0 0 5 ，2 4 8 ( 4 6 ) ：5 2 7 5 3 4 【1 6 】k a l o g i a n n idp ，k o r a k it ，e ta 1 n a n o p a r t i c l e b a s e dd n ab i o s e n s o rf o rv i s u a l d e t e c t i o no fg e n e t i c a l l ym o d i f i e do r g a n i s m s j b i o s e n s o r sa n db i o e l e c t r o n i c s ， 2 0 0 6 ，2 l ( 7 ) ：1 0 6 9 1 0 7 6 1 7 】f o j t i ka ，h e n g l e i na s u r f a c ec h e m i s t r yo fl u m i n e s c e n tc o l l o i d a ls i l i c o n n a n o p a r t i c l e s j j p h y s c h e m b ，2 0 0 6 ，1 1 0 ( 5 ) ：1 9 9 4 1 9 9 8 18 】g i l b e r tb ，h u a n gf ，e ta 1 s u r f a c ec h e m i s t r yc o n t r o l s c r y s t a l l i n i t yo fz n s 坚扬州大学硕士学位论文 n a n o p a r t i c l e s j n a n o l e t t ，2 0 0 6 ，6 ( 4 ) ：6 0 5 - 6 1 0 【1 9 】w a n ga ，w ucj ，c h e nsh g o l dn a n o p a r t i c l e - a s s i s t e dp r o t e i ne n r i c h m e n ta n d e l e c t r o e l u t i o nf o r b i o l o g i c a ls a m p l e sc o n t a i n i n g l o wp r o t e i nc o n c e n t r a t i o n a p r e l u d eo f g e le l e c t r o p h o r e s i s j j p r o t e o m er e s ，2 0 0 6 ，5 ( 6 ) ：1 4 8 8 1 4 9 2 【2 0 】c h o ij ，z h a oy ，z h a n gd ，c h i e ns ，l oyh p a t t e r n e df l u o r e s c e n tp a r t i c l e sa s n a n o p r o b e sf o rt h ei n v e s t i g a t i o no fm o l e c u l a ri n t e r a c t i o n s j n a n o l e t t ，2 0 0 3 ， 3 ( 8 ) ：9 9 5 1 0 0 0 2 1 】n i eb ，s h o r t r e e dmr s m i t hl m q u a n t i t a t i v ed e t e c t i o no fi n d i v i d u a lc l e a v e d d n am o l e c u l e so ns u r f a c e su s i n gg o l dn a n o p a r t i c l e sa n d s c a n n i n ge l e c t r o n m i c r o s c o p ei m a g i n g j a n