（药理学专业论文）硫化氢对大鼠急性心肌缺血的影响.pdf

1 l i 目录 帅i l ll i l i i i i i i i i i l u l i ii l l l l l l li i i i l l l l t l l y 1 8 01615 中文摘要1 英文摘要d o oo o ooo oooo 5 英文缩写o o oo o o oo o oo ooo oo ooo o o oo 1 0 研究论文硫化氢对大鼠急性心肌缺血的影响 引言o o o oo d oo oo 11 第一部分急性心肌缺血大鼠内源性硫化氢胱硫醚一y 一裂解酶体系 的变化 前言1 2刖舌1 2 材料与方法1 2 结果o o o oo oo o o o oo oo 1 5 附图- - 1 6 附表2 2 讨论2 4 j 、结”“一一2 5 参考文献2 5 第二部分硫化氢对心肌缺血大鼠线粒体功能及细胞凋亡的影响 前言7 2 7日i j 舌- ? 2 7 材料与方法- 2 7 结果- 3 2 附图o o oo 3 4 附表4 2 讨论- 4 5 j 、结一”一一一一一一”“4 7 参考文献4 7 结论4 9 综述内源性硫化氢与心血管疾病的研究进展5 0 致谓十- 6 1 个人简历6 2 中文摘要 硫化氢对大鼠急性心肌缺血的影响 摘要 心肌缺血是指心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量 代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态，严重威胁人类的身 心健康，因而对于缺血心肌保护的研究是倍受关注的课题。大量动物实验 及临床试验均表明，细胞凋亡是急性心肌缺血损伤发病机制的重要环节之 一，线粒体在细胞整合各种凋亡刺激信号的过程中处于枢纽地位。 作为继一氧化氮( n i t r i co x i d e ，n o ) 和一氧化碳( c a r b o nm o n o x i d e ，c o ) 之 后的第三种重要化学递质和细胞内信号分子一硫化氢( h y d r o g e n s u l f i d e ，h 2 s ) 一直倍受医学界的关注。内源性h 2 s 主要由半胱氨酸等含硫氨 基酸在胱硫醚1 3 合成酶( c y s t a t h i o n i n e p s y n t h a s e ，c b s ) 和胱硫醚y 裂解 酶( c y s t a t h i o n i n e - 丫1 y a s e ，c s e ) 作用下生成的，人们对其在体内各种生理和 病理过程的调节作用进行了大量研究，发现其在舒张血管、抑制血管重构 和保护心肌等方面具有重要的生理作用，并且与多种心血管疾病相关。近 年来研究发现，h 2 s 在心肌缺血再灌注损伤中起着十分重要的作用，对缺 血再灌注损伤心肌具有保护作用，但关于h 2 s 在心肌缺血中的作用，尚未 见报道。因此，本实验通过建立心肌缺血动物模型，首先观察在心肌缺血 过程中h 2 s 和c s e 的时程性变化，在此基础上给予h 2 s 供体硫氢化钠 ( s o d i u mh y d r o s u l f i d e ，n a r i s ) ，观察其对心肌损伤的改善作用，并探讨其 心肌保护作用机制，为其临床应用提供实验依据。 第一部分急性心肌缺血大鼠内源性硫化氢胱硫醚一y 一裂解酶体系的 变化 目的：观察大鼠急性心肌缺血过程中不同时间内源性h 2 s c s e 体系 的变化。 方法：健康雄性s d 大鼠( 2 7 0 2 0 9 ) 共8 0 只，随机分为6 组假手术 组；缺血1h 组；缺血3h 组；缺血6 h 组；缺血9 h 组；缺血 1 2 h 组，假手术组共4 0 只( 不同时间点各8 只) 。大鼠麻醉后连接心电图电 极，记录术前i i 导联心电图，消毒手术区域，结扎左冠状动脉前降支2 分钟后再次记录心电图的变化，以s t 段较术前抬高0 1 5 m v 以上作为模 中文摘要 型成功，假手术组只穿线不结扎。分别于lh 、3h 、6h 、9h 和12h 后 p o w e r l a b 8 s 多导生理仪记录各组大鼠缺血末左室收缩峰压( l v s p ) 、左室 舒张末压( l v e d p ) 、左室压力变化速率( 士d p d t m a x ) 、计算左室发展压 ( l v d p ) ，经颈总动脉取血并迅速开胸取心脏，采用去蛋白法检测血浆中 h 2 s 含量，亚甲基蓝法检测心肌组织中c s e 的活性，电镜观察心肌组织 结构的变化。 结果： 1 假手术组大鼠l v e d p 、- - d p d t m a 、l v d p 在缺血后l h 1 2 h 之间无 明显变化。与相应的假手术组比较，缺血1 h 时大鼠上述各项指标均无明 显变化，缺血3 h 时+ d p d t m a x 、l v d p 明显降低f p o 0 5 或p o 0 1 ) ，l v e d p 明显升高( 氏o 0 1 ) ，随着时间的延长，缺血6 h 、9 h 和1 2 h 时l v d p 、+ d p d t m a x 明显降低，l v e d p 明显升高( p o 0 5 或p o 0 1 ) 。 2 假手术组大鼠血浆中h 2 s 含量和心肌组织c s e 活性在缺血后1 h 1 2 h 之间无明显变化。与相应的假手术组比较，缺血1 h 时大鼠血浆中h 2 s 含量和心肌组织c s e 活性无明显变化，随着时间的延长，缺血3 h 、6 h 、 9 h 和1 2 h 大鼠血浆中h 2 s 含量和心肌组织c s e 活性均明显降低( j p o 0 5 或p o 0 1 ) 。 3 电镜下观察心肌组织的超微结构，假手术组大鼠心肌细胞结构清 晰，肌原纤维排列整齐，线粒体膜完整，嵴清晰。缺血l h 组大鼠心肌组 织的超微结构基本正常。缺血3 h 、6 h 、9 h 和1 2 h 组大鼠心肌组织超微结 构明显受损，核周胞质有水肿，核膜消失，肌原纤维断裂，线粒体嵴和膜 溶解、消失，胞浆内糖原包涵体增多，提示代谢障碍。甚至有的线粒体髓 样化，呈同心圆排列，电子密度增高。 结论：大鼠缺血1 h 时心肌组织未出现明显损伤，缺血3 h 至1 2 h 时均 存在组织损伤，内源性h 2 s 含量和c s e 活性均明显降低。提示h ：s c s e 体系可能参与急性心肌缺血的病理生理过程。 第二部分硫化氢对心肌缺血大鼠线粒体功能及细胞凋亡的影响 目的：观察h 2 s 对大鼠急性心肌缺血的影响并从线粒体功能及细胞 凋亡方面探讨其作用机制。 方法：健康成年雄性s d 大鼠( 2 7 0 + _ 2 0 9 ) 共4 0 只，随机分为5 组，每 组8 只，分别为i 假手术组；i i 缺血组；i i i 缺血+ n a r i s 低剂量组；缺 中文摘要 血+ n a h s 中剂量组；v 缺血+ n a r i s 高剂量组。用1 0 的水合氯醛 3 5 0 m g k g 麻醉大鼠，结扎左冠状动脉前降支，记录心电图的变化，n a r i s 低、中、高剂量组分别于缺血3 h 时腹腔注射o 7 8m 眺g 、1 5 6 m w k g 和 3 1 2m g k g 的n a r i s ，缺血组注射等容量的生理盐水，假手术组只穿线不 结扎。各组大鼠均于缺血6 h 时经颈总动脉取血迅速开胸取心脏，采用去 蛋白的方法检测血浆中h 2 s 含量，亚甲基蓝法检测心肌组织中c s e 的活 性，差速离心法提取心肌线粒体，测定线粒体活性、膜肿胀度，以及线粒 体总a t p 酶、谷胱甘肽过氧化物酶( g s h p x ) 、超氧化物岐化酶( s o d ) 和 丙二醛( m d a ) 含量，流式细胞术( f c m ) 检测心肌细胞凋亡率，免疫组化法 测定b c l 一2 、b a x 蛋白的表达，h e 染色观察心肌组织学变化。 结果： 1 与假手术组大鼠比较，缺血组大鼠血浆中h 2 s 含量和心肌组织中 c s e 活性明显降低( 尸 o 0 5 ) 。与缺血组大鼠比较，缺血+ n a r i s 低、中、高 剂量组大鼠血浆中h 2 s 含量和心肌组织中c s e 活性明显升高( 氏o 0 5 或 p 0 0 1 ) 。 2 与假手术组大鼠比较，缺血组大鼠心肌线粒体总a t p 酶、g s h p x 活性、s o d 活性明显降低( 尸 o 0 1 ) ，m d a 含量明显升高( 氏o 0 1 ) ，心肌线 粒体膜肿胀、线粒体活力下降，表现为5 4 0 n m 和5 7 0 n m 处吸光度值下降 ( p 0 0 1 ) ，与缺血组比较，缺血+ n a h s 低、中、高剂量组大鼠心肌线粒体 总a t p 酶、g s h p x 活性、s o d 活性升高，m d a 含量降低，心肌线粒体 膜肿胀、线粒体活力明显改善( 尸 o 0 5 或p 0 0 1 ) 。 3 与假手术组大鼠比较，缺血组大鼠心肌细胞凋亡率、b a x 表达阳性 细胞数百分率明显升高( 氏o 0 1 ) ，缺血+ n a h s 低、中、高剂量组大鼠心肌 细胞凋亡率、b a x 表达阳性细胞数百分率明显低于缺血组，b c l 2 表达阳 性细胞数百分率明显升高( 尸 o 0 5 或p o 0 5 ) a n dt h el v d p , d p d t m a xw e r es i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e da n dt h e l v e d pw a s m a r k e d l yi n c r e a s e da t3h o u ra f t e ri s c h e m i ac o m p a r e dw i t ht h o s e o fs h a mg r o u p ( p o 0 5 ，p o 0 1 ) ，d u r i n g6h o u rt o1 2h o u ra f t e r l i g a t i n g l a d ct h ec a r d i a cf u n c t i o np a r a m e t e r sw e r es i g n i f i c a n t l ya l t e r e dc o m p a r e d w i t ht h o s eo f s h a mg r o u p 俨 o 0 5 ) a n dt h el v d p , d p d t m a xw e r e s i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e da n dt h e l v e d pw a s m a r k e d l yi n c r e a s e da t3h o u ra f t e ri s c h e m i ac o m p a r e dw i t ht h o s e o fs h a mg r o u p ( p o 0 5 ，p 0 0 1 ) ，d u r i n g6h o u rt o 12h o u ra f t e rl i g a t i n g l a d ct h ec a r d i a cf u n c t i o np a r a m e t e r sw e r es i g n i f i c a n t l ya l t e r e dc o m p a r e d w i t ht h o s eo f s h a m g r o u p ( 尸 o 0 5 ，p 0 0 5 ) t h ec o n t e n to f h 2 si np l a s m aa n dt h ea c t i v i t yo fc s ei nm y o c a r d i u mw e r es i g n i f i c a n t l y 6 l【lllli iiliililililiilllilillllllillllllllililliili 英文摘要 d e c r e a s e da t3h o u ra f t e ri s c h e m i ac o m p a r e dw i t ht h o s eo fs h a mg r o u p ( 尸 0 01 ) d u r i n g6h o u rt o12h o u ra f t e ri s c h e m i a ，t h ec o n t e n to fh 2 si np l a s m a a n dt h e a c t i v i t yo fc s ei nm y o c a r d i u mw e r es i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e dc o m p a r e d w i t ht h o s eo f s h a m g r o u p ( 尸 o 0 5 ，p 0 0 1 ) 3i ns h a mg r o u p ，t h es t r u c t u r eo f m y o c a r d i u mw e r ei n t a c t t h es t r u c t u r e o fm y o c a r d i u mw e r en o ta l t e r e da t1h o u ra f t e ri s c h e m i ac o m p a r e dw i t ht h a t o fs h a mg r o u pr a t s i ni s c h e m i a3h ，6h ，9ha n d12h g r o u p st h em y o c a r d i u m w e r ei n j u r i e d ，s u c ha s p e r i n u c l e a rc y t o p l a s m i ce d e m a ，n u c l e a rm e m b r a n e d i s a p p e a r a n c em y o f i b r i l l a r f r a g m e n t a t i o n ， m i t o c h o n d r i a l c r i s t a ea n d m e m b r a n ed i s s o l u t i o n ，d i s a p p e a r a n c e c o n c l u s i o n ：t h ec o n t e n to fh 2 si np l a s m aa n dt h ea c t i v i t yo fc s ei n m y o c a r d i u ma n dt h es t r u c t u r eo fm y o c a r d i u mw e r en o ta l t e r e da t1h o u ra f t e r i s c h e m i a d u r i n g3h o u rt o12h o u ra f t e rm y o c a r d i a li s c h e m i at h ec o n t e n to f h 2 si np l a s m aa n dt h ea c t i v i t yo fc s ei nm y o c a r d i u mw e r em a r k e d l y d e c r e a s e d i tc o u l db ec o n c l u d e dt h a th 2 s c s es y s t e mm a yb ep l a yar o l ei n t h ep h y s i o p a t h o l o g i cp r o c e s so fa c u t em y o c a r d i a li s c h e m i a p a r t2e f f e c t so fh y d r o g e ns u l f i d eo nt h ef u n c t i o no fm i t o c h o n d r i aa n d a p o p t o s i si na c u t em y o c a r d i a li s c h e m i ar a t s o b j e c t i v e ：t os t u d yt h ee f f e c to fh 2 so na c u t em y o c a r d i a li s c h e m i aa n d e x p l o r ei t sp o s s i b l em o l e c u l a rm e c h a n i s m sf r o mt h ef u n c t i o no f m i t o c h o n d r i a a n da p o p t o s i si nr a t s m e t h o d s ：f o u r t ym a l er a t sw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t of i v eg r o u p s ( n = 8 ) s h a mg r o u p ；i s c h e m i ag r o u p ；i s c h e m i a + n a h sl o wd o s e g r o u p ； i s c h e m i a + n a r i sm i d d l ed o s eg r o u p ； i s c h e m i a + n a h sh i g hd o s eg r o u p t h e l e f ta n t e r i o rd e s c e n d i n gc o r o n a r yw a s l i g a t d e di ni s c h e m i ag r o u pr a t sw h i l ei t w a sn o tl i g a t e di ns h a mg r o u pr a t s i ni s c h e m i a + n a r i sl o w ( o 7 8 m g k g ) ， m i d d l e ( 1 56 m g k g ) a n dh i g h ( 3 12 m g k g ) d o s e g r o u p s r a t ss o d i u m h y d r o s u l f i d e ( n a r i s ) w e r er e s p e c t i v e l ya d m i n i s t r a t e da t3h o u ra f t e ri s c h e m i a t h er a t sw e r er e s p e c t i v e l yk i l l e da t6h o u ra f t e ri s c h e m i a t h ec o n t e n to fh 2 s i np l a s m aa n dt h ea c t i v i t yo fc s ei nm y o c a r d i u mw e r er e s p e c t i v e l yd e t e c t e d t h em i t o c h o n d r i aw e r ep r e p a r e db yd i f f e r e n t i a l c e n t r i f u g a t i o n t h es w e l l i n g 7 英文摘要 a n da c t i v i t yo fm i t o c h o n d r i aw e r ed e t e r m i n e d t h ea c t i v i t i e s o f s o d ， g s h p xa n da t p a s e ，a n dt h ec o n t e n t so fm a l o n d i a l d e h y d e ( m d a ) i n m y o c a r d i a l m i t o c h o n d r i aw e r e m e a s u r e d t h e a p o p t o t i c r a t eo f c a r d i o m y o c y t e sw a se v a l u a t e db yf l o wc y t o m e t r y t h ep o s i t i v ee x p r e s s i o n s o fb c l 一2a n db a xi n c a r d i o m y o c y t e sw e r e r e s p e c t i v e l y d e t e c t e d b y i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y r e s u l t s ： 1t h ec o n t e n to fh 2 si np l a s m aa n dt h ea c t i v i t yo fc s e i nm y o c a r d i u m w e r es i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e di ni s c h e m i ag r o u pr a t s c o m p a r e dw i t ht h o s eo f s h a mg r o u p ( p o 0 5 ) c o m p a r e dw i t ht h o s eo f i s c h e m i ag r o u p t h ec o n t e n to f h 2 si np l a s m aa n dt h ea c t i v i t yo fc s ei nm y o c a r d i u mw e r es i g n i f i c a n t l v i n c r e a s e di ni s c h e m i a + n a h sl o w , m i d d l ea n dh i g hd o s eg r o u p s ( p 0 0 5o r p 0 0 1 ) 2i ni s c h e m i ag r o u p ，t h es w e l l i n go fm i t o c h o n d r i aa n dt h ea c t i v i t y o f m i t o c h o n d r i aw e r em a r k e d l yd e c r e a s e d ( p o 0 1 ) a n dt h ea c t i v i t i e so fs o d g s h p xa n da t p a s ew e r e s i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e da n dt h ec o n t e n to f m a l o n d i a l d e h y d e ( m d a ) i nm y o c a r d i a lm i t o c h o n d r i aw a ss i g n i f i c a n t l v i n c r e a s e d ( p 0 0 1 ) c o m p a r e dw i t ht h o s eo fs h a mg r o u p i ni s c h e m i a + n a h s l o w , m i d d l ea n dh i g hd o s eg r o u p s ，t h ea c t i v i t i e so fs o d ，g s h 。p xa n d a t p a s ea n dt h e a c t i v i t yo fm y o c a r d i u mm i t o c h o n d r i aw e r es i g n i f i c a n t i v e n h a n c e d t h es w e l l i n go fm i t o c h o n d r i aw a sm a r k e d l ya m e l i o r a t e da n dt h e c o n t e n to fm d aw a s s i g n i f c a n t l yd e c r e a s e dc o m p a r e dw i t ht h o s eo fi s c h e m i a g r o u p s ( p 0 0 5o rp 0 0 1 ) 3t h ea p o p t o t i cr a t eo fc a r d i o m y o c y t e sa n dt h ee x p r e s s i o no fb a xi n i s c h e m i ag r o u pw e r es i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e dc o m p a r e dw i t ht h o s eo fs h 锄 g r o u p ( p 0 01 ) c o m p a r e dw i t ht h o s eo fi s c h e m i ag r o u p ，t h ea p o p t o t i cr a t e so f c a r d i o m y o c y t e sa n dt h ee x p r e s s i o no fb a xw e r em a r k e d l yd e c r e a s e da n dt h e e x p r e s s i o no fb c l - 2w a sm a r k e d l yi n c r e a s e di ni s c h e m i a + n a r i sl o w , m i d d l e a n dh i g hd o s eg r o u p s ( p o 0 5o r p 0 0 1 ) 4i ns h a mg r o u p ，m y o c a r d i a lc e l l s a r r a n g e di nn e a tr o w sa n dc o l o r e d e v e n l y m y o c a r d i a lf i b e rs t r i p e do rd i s a p p e a r e d ，t h en u c l e a rm i g r a t e da n de v e n 8 一一 k e y w 。r d s ：h y d r o g e ns u l f i d e ；a c u t em y 。c a r d i a li s c h e m i a ；m i t 。c h 。n d r i a ： a p o p t o s i s ；r a t ” 鲥 l 砉p 删机 呻 耐龇阱砌龇阱 勰试 潞 址 m 陀 s a 币 凇妙懿 d n 喀 a u n 砸 眵撕 c a 阻 比蚕 k 洲沁出埘 墨一 嚼 移 冲 瞎m 双 岭 n 岫 屺善m 讹- 耋 c 毗 狲 喀 a 吧 n t 、j 1 o 札 l 蚕 驴 p 埘山 缩写 h 2 s n a h s c s e c b s l v s p l v d p 英文全称 h y d r o g e ns u l f i d e 英文缩写 ( a b b r e v i a t i o n ) s o d i u mh y d r o s u l f i d e c y s t a t h i o n i n e 一7 - 1 y a s e c y s t a t h i o n i n e p - s y n t h a s e l e f tv e n t r i c u l a rs y s t o l i cp r e s s u r e l e f tv e n t r i c u l a r d e v e l o p e dp r e s s u r e l v e d pl e f tv e n t r i c u l a re n dd i a s t o l i cp r e s s u r e s o d s u p e r o x i d ed i s m u t a s e g s h p xg l u t a t h i o np e r o x i d a s e m d a f c m m t t 中文译名 硫化氢 硫氢化钠 胱硫醚一y 一裂解酶 胱硫醚一1 3 一合成酶 左室收缩压 左室发展压 左室舒张末压 超氧化物歧化酶 谷胱甘肽过氧化酶 m a l o n d i a l d e h y d e丙二醛 f l o wc y t o m e t r y 流式细胞术 m e t h y l t h i a z o l y lt e t r a z o l i u m 甲氮甲唑兰 研究论文 硫化氢对大鼠急性心肌缺血的影响 引言 近些年来，心脑血管疾病的发病率呈不断上升的趋势，其中心肌缺血 的发病率非常高，其最主要、最常见的病因是冠状动脉狭窄，使心脏的血 液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏 正常工作。长期心肌缺血可以转变为心绞痛或心肌梗塞，亦可能逐渐演变 为心肌纤维化，出现心脏增大，发生心律失常或心力衰竭，亦可能猝死， 严重威胁人类的健康。目前关于心肌缺血损伤的可能机制包括：内皮功能 紊乱、自由基损伤、炎症反应、线粒体功能障碍、细胞凋亡和细胞内钙超 载等。随着冠脉搭桥术、溶栓术、导管技术的广泛应用，可使缺血缺氧的 心肌得以再灌注，心肌功能得以恢复，但是再灌注损伤成为阻碍缺血心肌 从再灌注疗法中获得最佳疗效的主要难题，因而对于缺血心肌保护的研究 仍是倍受关注的课题。 硫化氢( h y d r o g e ns u l f i d e ，h 2 s ) 是继一氧化氮( n i t r i co x i d e ，n o ) 和一氧化 碳( c a r b o nm o n o x i d e ，c o ) 之后的第3 种气体信号分子【l 】，主要是由半胱氨酸 等含硫氨基酸在胱硫醚。b 合成酶( c y s t a t h i o n i n e 1 3 s y n t h a s e ，c b s ) 和胱硫醚 一y 一裂解酶( c y s t a t h i o n i n e - 7 1 y a s e ，c s e ) 作用下生成的，具有重要的生理功 能，如对中枢神经系统特别是海马的功能具有重要调节作用【2 】，随着对h 2 s 研究的逐渐深入，证实h 2 s 在舒张血管、抑制血管重构和保护心肌等方面 具有重要的生理作用，并可以调节消化道和血管平滑肌的张力。本研究通 过建立大鼠急性心肌缺血损伤模型，观察在缺血过程中h 2 s 和c s e 的时程 性变化，在此基础上给予h 2 s 供体一硫氢化钠( s o d i u mh y d r o s u l f i d e , n a r t s ) ， 观察其对心肌的机械功能，能量代谢，形态损伤的作用，并探讨其作用机 制，为其临床应用提供实验依据。 研究论文 第一部分 急性心肌缺血大鼠内源性硫化氢及胱硫醚一y 一裂解酶的变化 - 工- _ 一 莉声 心肌缺血为发病率较高的心血管疾病，其急性发作死亡率高，且反复 发作易引起心率失常或者心力衰竭，在临床引起广泛的关注，其原因是冠 状动脉血流的供氧能力不足以满足心肌对氧的需求。目前大量研究证实继 n o 和c o 之后的新型气体信号分子h 2 s 参与了心肌缺血再灌注损伤的发 生，对缺血再灌注损伤的心肌起到一定的保护作用，但其与急性心肌缺血 相关性的研究较少。本研究拟采用复制急性心肌缺血大鼠模型，观察内源 性h 2 s c s e 体系在缺血不同时间的动态变化，以探讨其在急性心肌缺血 过程中的作用。 1 材料 1 1 药物和试剂 5 磷酸吡哆醛 n a i l s 考马斯亮兰试剂盒 其余均为国产分析纯试剂 1 2 仪器 八道生理记录仪p o w e r l a b 8 s 电动匀浆器s i l e n t c r u s h e rm 低温高速离心机 分析天平m e ”r l e r - a h 2 4 0 a e 2 4 0 型分析天平 7 2 2 分光光度计 透射电子显微镜h 一7 5 0 0 材料与方法 美国s i g m a 公司 美国s i g m a 公司 南京建成生物工程研究所 澳大利亚a di n s t r u m e n t 公司 德国h e i d o l p h 公司 德国e p p e n d o r f 公司 瑞士梅特勒公司 上海精密科学仪器有限公司 上海第三分析仪器厂 日本h i t a c h i 公司 研究论文 石蜡切片机 恒温水浴箱 s h a c 恒温振荡器 1 3 实验动物 德国l e i c a 公司 余姚市东方电工仪器厂 常州国华电器有限公司 健康雄性s p r a g u e - d a w l e y ( s d ) 大鼠，体重2 7 0 _ + 2 0 9 ，由河北省实验 动物中心提供。 2 模型制备及动物分组 2 1 大鼠心肌缺血模型制备 将大鼠用1 0 水合氯醛3 5 0 m g k g 腹腔注射麻醉，取仰卧位固定，剪 去胸前手术区毛，碘酒消毒，用血管钳沿第四肋间钝性分离肋间肌约3 c m 长，打开胸腔，撑开4 、5 肋骨剪开心包膜将心脏轻轻挤出，在左心耳与 肺动脉圆锥之间平左心耳下缘迅速结扎左冠状动脉前降支近段，立即关闭 胸腔挤出胸腔内的气体，以恢复负压，帮助大鼠恢复自主呼吸。将肌肉层 和皮肤分别缝合，制备急性心肌缺血模型。 2 2 动物分组 健康雄性s d 大鼠8 0 只随机分为：假手术组：仅开胸穿线不结扎， 缺血1 h 组；缺血3 h 组；缺血6 h 组；缺血9 h 组；缺血1 2 h 组。假手术组共4 0 只( 不同时间点各8 只) ，其余各组各8 只。 3 检测指标和方法 3 1 心电图的变化 由p o w e r l a b 8 s 八通道生理记录仪记录各组大鼠术前及术后的心电 图。 3 2 血流动力学指标 各组大鼠于缺血的相应时间点经右侧颈总动脉插管，连接压力换能 器，由p o w e r l a b 8 s