（生物化学与分子生物学专业论文）嗜麦芽黄单胞菌cg样受体及xcg蛋白的基因研究——嗜麦芽黄单胞菌cg样受体跨膜域的克隆基因组文库的构建筛选及xcg蛋白的基因多型性分析.pdf

博士学位论文抽。要 嗜麦芽黄单胞菌c g 样受体及x c g 蛋白的基因研究 嗜麦芽黄单胞菌c g 样受体跨膜域的克隆 基因组文库的构建筛选及x c g 蛋白的基因多型性分析 媾士生：梁淑芳 导师：陈曼玲教授 摘要：嗜麦芽黄单胞菌( x a n t h o m o n a s m a l t o p h i l i a a t c c l3 6 3 7 ) 属于g 一，既具有类似哺乳动物调节妊娠与生殖 的l h c g ( 黄体生成素绒毛膜促往腺激素) 受体的c g 类受 体蛋白( c g l i k er e c e p t o f ) ，又能分泌分子量为4 8 5 k d 、 与h c g 分子b 链有一定同源性的x c g 蛋白。m a l t o p h i l i a 是第一个发现既具有内源性配基( x c g 蛋白) ，又具有受体( c g 样受体) 的原核生物。 j 册a j t o p h i l i ac g 样受体在蛋白质分子量、配基结合特 性等方面与大鼠l r c g 受体有一定的相似性，至今对该菌c g 样受体的基因、结构与功能均不清楚。为了进一步了解嗜麦 芽黄单胞菌c g 样受体的生物学功能，深入研究其结构，需 从分子水平研究编码c g 样受体的基因及其结构特点，并与 哺乳类l h c g 受体基因及其蛋臼序列进行比对分析。这对于 探讨原核生物c g 样受体与真核生物l h c g 受体是否存在共 源性，以及该菌的致病机制均有重要意义。 博士掌位论文 摘要 首先，鉴定确证菌种x m a l t o p h i l i a a t c c l 3 6 3 7 属于嗜麦 芽黄单胞菌；并建立了一种快速简便提取嗜麦芽黄单胞菌基 因组d n a 的方法，即用去污剂s d s 和c t a b 破坏细胞膜结 构，使胞内核酸释放，用酚氯仿异戊醇去除c t a b 多 聚糖蛋白质复合物，异丙醇沉淀d n a ，t e 溶解d n a 。该 方法简便快速，节省实验试剂和时间；所提取的d n a 纯度 和浓度均较好，为进一步酶切分析、p c r 操作及构建基因组 文库提供了良好的实验材料。 其次，根据已知生物l h c g 受体同源性较大的跨膜域序 列设计了一对引物，以嗜麦芽黄单胞菌基因组d n a 为模板进 行p c r 扩增，约6 0 0b p 目的p c r 产物克隆到p u c m ，t 载体 上，经酶切及p c r 扩增鉴定，获得重组质粒p u c m r e c 。以 d i g 标记的p c r 扩增片段作为探针进行d n a 斑点杂交，探针 与x b a l 消化的重组质粒( p u c m - r e c ) d n a 和嗜麦芽黄单胞 菌染色体d n a 有阳性杂交信号，说明约6 0 0b p p c r 扩增片段 与嗜麦芽黄单胞菌染色体d n a 有同源性，是以嗜麦芽黄单胞 菌染色体d n a 为模板的扩增结果。重组质粒p u c m r e c 测序 分析表明，5 9 3 b pc g 样受体跨膜域的核酸序列及其推定编码 的1 9 7 a a 序列，分别与哺乳类l h c g 受体跨膜域相应区域的 碱基序列和氨基酸序列无同源性。推定编码1 9 7a m 跨膜域序 列的5 l9 6 a a 部分与新月柄杆菌c b l5 5 7 2 a a 功能未知的推 定蛋白的19 9 3 8 8 a a 序列具有5 1 相同序列；其l 6 7 6 a a 部分与线虫鸟苷酸环化酶的9 8 5 1 0 4 6 a a 部分具有3 3 相同 2 博士掌位论文摘要 序列，提示嗜麦芽黄单胞菌可能具有类似鸟苷酸环化酶 c g m p 信号系统，为进一步研究其信号转导机制提供线索。 第三，自行构建了嗜麦芽黄单胞菌基因组文库，并对文 库进行了筛选。嗜麦芽黄单胞菌基因组d n a 分别用妇“3 ai 和p s t i 进行不完全酶解后，凝胶电泳分别回收纯化l 5 k b 和0 5 7 k bd n a 片段；分别用如删i 和一fi 消化载体p u c l 8 后进行去磷酸化处理，再分别与d n a 如u 3 ai 和o n a p s ti 回收片段连接，转化感受态j m l 0 9 ，各得到4 2 0 0 个左右白色 转化子，转化平板上白色菌落与蓝色菌落之比约为7 ：3 。从 d n a 铀u 3 ai + p u c l 8 b a m hi 和d n a p s ti + p u c l 8 p s i 转化 平板上各挑出约2 0 0 0 个白色菌落于n c 膜上，以地高辛标记 的跨膜域序列为探针进行菌落杂交，初步得到2 0 个阳性杂 交信号的菌落。 对阳性信号菌落的质粒进行p s # i 酶切鉴定后，对杂交 信号强的4 个菌落的质粒进行测序分析，未获得嗜麦芽黄单 胞菌c g 样受体的全基因序列。但是，6 8 5 b p 克隆片段与编码 组氨酸激酶反应调节子杂合蛋白的野油菜黄单胞菌 x c c 2 8 4 6 基因和柑桔黄单胞菌x a c 3030 基因部分序列有较 大的相似性和同源性，表明在嗜麦芽黄单胞菌中存在着编码 组氮酸激酶反应调节子杂合蛋白的基因和功能蛋白。另一 3 7 5 b p 片段编码12 5 a a 完整o r p 与柑桔黄单胞菌铁受体蛋白 部分序列有3 2 相同氨基酸残基，表明嗜麦芽黄单胞菌可能 具有编码类似铁受体蛋白的基因和功能蛋白质。为诠释嗜麦 博士掌位论文摘要 芽黄单胞菌的基因功能，深入了解该菌的遗传、进化和生物 学地位提供了实验依据。 越来越多的研究表明，l h c g 受体及其配基均具有异质 性。因此，我们还对腰a t o p h f i a 配基x c g 蛋白的基因多 型性进行了研究。根据嗜麦芽黄单胞菌x c g 蛋白相对保守的 9 1 1 9 3 a a 残基域的核酸序列设计了一对引物，以j r e a l t o p h i l i a 基因组d n a 为模板，p c r 扩增得到约5 0 0 b p 和 2 5 0 b p 的两条带。将p c r 产物克隆入p u c m - t 载体，筛选鉴定 后得到重组质粒p c g 2 和p c g l l 。对重组质粒p e g 2 和p e g l l 测序分析表明，4 7 2 b p 和2 2 4 b p 插入片段及其推定编码的氨 基酸序列与x c g 蛋白保守区域的核酸序列和氨基酸序列均有 异。提示编码嗜麦芽黄单胞菌x e g 蛋白的基因具有多型性。 为进一步研究jm a l t o p h i i ac g 样受体与c g 样蛋白的结构 与功能、及l h c g 受体基因和h c g 基因的进化提供线索。 关键词：噌麦芽黄单胞菌c g 类受体x c g 蛋白 跨膜域基因组文库基因多型性 博士掌位论文摘要 s t u d i e so ng e n e se n c o d i n gc g 一1 i k er e c e p t o r a n dx c gp r o t e i no f xm a l t o p h i l i a c l o n i n go fc g 1 i k er e c e p t o rt r a n s m e m b r a n ed o m a i n c o n s t r u c t i o n s c r e e n i n go fg e n o m i cl i b r a r ya n ds t u d y o ng e n e h e t e r o g e n e i t yo fx c gp r o t e i nf r o mx m a l t o 归m l i a d o c t o rs t u d e n t ： t u t o r ：p r o f e s s o r l i a n gs h u f a n g c h e nm a n l i n g a b s t r a c t ：x m a l t o p h i l i ab e l o n g st ot h e g r a m n e g a t i v eb a e te r i a i tc a n p r o d u c ec g - l ik e r e c e p t o rt h a t is1 i k et oth em a m m a l i a nl h c g r e c e p t o r ， w h i c hp l a y sav i t a ir o l ei nr e p r o d u c t i r ep h y s i o l o g y in m a m m a l i a n s t h eb a c te r i ac a na ls 0 s e c r e t e4 8 5k dx c g p r o t e i n ，w h i c hh a sc e r t a in h o m 0 1 0 9 y w i t ht h e b s u b u n i to fh c g ，m a 7 t o p h i aist h ef i r s tp r o k a r y o t e inw h ic hb o t ht h ec g l i k e r e c e p t o ra n dt h ee n d o g e n ol l s l i g a n dx c gp r o t e i nh a v eb e e nd is c 0 v e r e d t h ec g l i k e r e c e p t o ro fzi n a t o p h i i ah a ss o m e s i m i l a r i t yw i t hr a tl h c gr e c e p t o ri nm 0 1 e el 1 a rw e i g h t a n d 1 i g a n d b i n d i n gc h a r a c t e r is t ics b u ti th a s n t b e e nk n o w nf o rt h eg e n ee n c o d i n gc g - i ik er e c e p t o r ，i ts s t r u c t u r ea n df u n c t i o nb yn o w i no r d e rt o u n d e r s t a n d 5 博士掌位论文摘要 t h es t r u c t u r ea n db io l o g ic a lf u n c t i o no f c g 一1i k e r e c e p t o r ，i tn e e d st os t u d yt h eg e n ee n c o d in gc g l i k e r e c e p t o r ，u n d e r s t a n dt h eg e d es t r u c t u r ea n d c h a r a c t e r is t i c ，a n db ec o m p a r e dw i t ht h a to fm a m m a li a n l h c gr e c e p t o r t h is is i m p o r t a n tf o r1e a r n i n gw h e t h e r t h e r eh a s h o m o i o g yb e t w e e nt h ec g i ik er e c e p t o ro fx m a 7 t o p h i l i aw i t hm a m m a l i a nl h c g r e c e p t o t ，a n d s t u d y i n g o nt h eb a c t e r j a l p a t h o g e n e s i s f i r s t l y ，w e i d e n t i f ie dt h es t r a tr l b o u g h tf r o m a m e r ic a na t c c ，a n di tw a sx m a 7 t o p h i 7 i a w ed e v e l o p e d a r a p i da p p r o a c hi n e x t r a c t i n gt h eg e n o m i cd n af r o mj m a l t o p h i i a t h ed e t e r g e n ts d s a n dc t a bw e t eu s e dt o d e s t r o yt h es t r u c t u r eo fc e l lm e m b r a n et oi i b e r a t et h e c e l l u l a rn u c l e i ca c i d s ：a n d t h e c t a b p o l y s a c c h a r id e p r o t e i nc o m p l e xw a sr e m o v e d b yu s i n g p h e n o l c h l o r o f o r m is e a m y l a l c o h 0 1 ：t h e nd n aw a s p r e c i p i t a r e d w i t h i s o p r o p a n o l ，a n d f i n a l l y d n aw a s d is s o l r e di nt eb u f f e r t h i sa p p r o a c hw a ss i m p l e ，r a p t d a n d e c o n o m i c a l t h ep u t i t ya n dc o n e e n t r a t i o no fd n a e x t r a c t e dw i t ht h is a p p r o a c hw a se n o u g hf o rd i g e s t io n b yr e s t r l e t i o ne n d o n u c l e a s e s ，p c r a m p i i f i c a t i o n ，a n d c o n s t r u c t i o no f g e n o m i c l i b r a r y s e c o n d l y ，w ed e s i g n e do n ep a i ro fp r i m e r sf r o mt h e 6 博士掌位论文摘要 n u c l e o ti d e s e q u e r i c eo fl h c gr e c e p t o rt r a n s m e m b r a n e d o m a i ni nk n o w n s p e c i e sw h i c hh a sm u c hh o m 0 1 0 9 y t h e g e n o m i cd n a 0 f m a r t o p h i l l aw a su s e da st e m p l a t et 0 p c ra m p l i f yb a s e do i la b o v ep r i m e r s ，a n da b o u t6 0 0 b pa i m p r o d u c t w a sc l o n e di na p u c m t v e c t o r a f te rt h e r e c o m b i n a n t p l a s m i d w a si d e n t i f i e d b yr e s t r i c t i o n e n d o n u c l e a s e d i g e s t i o n a n dp c r a m p l i c a t i o n ，t h e r e c o m b i n a n tp l a s m i d p u c m r e cw a so b t a i n e d u s i n gt h e d i g l a b e le d6 0 0b pf r a g m e n ta sp r o b e ，i tw a sh y b r i d i z e d w i t hp u c m r e c x b aia n dt h eg e n o m i cd n ao fx m a t t o p h i l i a b yd n ad o t b l o t t i n g ，a n dt h e yh a d p o s i t i v e h y b r i d i z a t i o n s i g n a ls t h i ss h o w e d t h a tt h e p c r a m p l i f ie dp r o d u c th a dh o m o l o g yw i t ht h eg e n o m i cd n a o fxm a l t o p h i l i a ，a n da b o u t 6 0 0 b pf r a g m e n tw a sr e a l p c r a m p l i f i e dp r o d u c t w h i c hu s i n gt h eg e n o m i cd n ao f m a 7 t o p h l i a a s t e m p l a t e t h ei h s e r to n th e r e c o m b i n a n t p 1 a s m i dp u c m r e cw a s s e q u e n ce d t h ep c r p r o d u c t w a s 5 9 3 b p t h i s 5 9 3 b pn u c l e o t i d ea n di ts t r a n s l a t i n g1 9 7a m i r i oa c i d ( a a ) t r a n s m e m b r a n ed o m a i no f c g li k e r e c e p t o rh a d n th o m o l o g yw i t ht h a to f m a m m a l i a nl h c g r e c e p t o rt r a n s m e m b r a n ed o m a i n l - e s p e c t i v e l y b u tt h e5 1 9 6 a af r a g m e n to ft h e1 9 7 a a t r a n s m e m b r a n ed o m a i no fc g ii k e r e c e p t o r ，s h 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t w e e nt h e 6 8 5b p i l u c l e o t i d ew i t ht h e p a r t i a l x a c 3 0 3 0 g e n ee n c o d i n g h is t i d i n ek in a s e r e s p o n s er e g u l a t o rh y b r i dp r o t e i no f x a x o n o p o d d sp v c f t r is t r 3 0 6 t h e s es h o w e dt h e r eh a d t h eg e n ee n c o d i n gh is t id in e k i n a s e r e s p o n s er e g u l a t o r h y b r i d p r o t e i n a n di tsf u n c t i o n a l p r o t e i ni nj m a l t o p h i l i a t h e12 5 a ac o m p l e t eo r fe n c o d e db ya n o t h e r 3 7 5 b pn u c i e o t i d eh a d3 2 s a m ea m i n oa c i dr e s i d u e sw it h 9 堡主兰竺笙奎 苎墨 一 e n c o d i n gi r o nr e c e p t o r 1 ik ep r o t e i ni njm a l t o p h i l i a a 1 1t h es es t u d ie sp r o v i d e de v i d e n c e st o a n n o t a t eg e n e f u n c t i o n 1 e a r ng e n e t icm e c h a n i s ma n db i o i o g ic a lr 0 1e o fxm a lt o p h y l i a m o r ea n dm o r es t u d i e ss h o w e dt h a tb o t hl h c g r e c e p t o ra n di t s h o r m o r e 1 i g a n de x is t e dh e t e r o g e n e i c s o ，w es t u d ie dt h eh e t e r o g e n e i t yo fg e n ee n c o d i n gx c g p r o t e i n w ed e s i g n e dap a i ro fp r i m e r sf r o mt h er e l a t i v e c o n s e r v e d9 1 1 9 3 a ar e s i d u e so fx c g ，a n dt h eg e n o m icd n a o fjm a l t o p h i l i aw a su s e da s t e m p l a t e t op c r a m p l i f y b a s e do nt h ea b o v ep r i m e r s a sar e s u l t ，a b o u t5 0 0b p a n d2 5 0b pp c ra m p t i f i e dp r o d u c t sw e r eo b t a i n e d t h et w o k i n d so fp u r i f i e dp c rp r o d u c tsw e r ec l o n e di nt h ev e c t o r p u c m t ，a n dt h er e c o m b i n a n tp l a s m i dp c g 2a n dp e g l i ，w i t h 5 0 0b pa n d2 5 0b pf r a g m e n tr e s p e c t iv e l y ，w e r es e l e c t e d a n did e n t i f ie d f r o m s e q u e n c i n g r e s u l t so f p c g 2a n d p c g l l ，t h e4 7 2b pa n d2 2 4 b pn u c l e o t i d e sw e r ed i f f e r e n t f r o mt h ec o r r e s p o n d i n gn u c l e o t i d es e q u e n c e so fx c g g e n e a n dt h e i rd e d u c e da m i i oa c i d s d i f f e r e df r o mt h e x c g p r o t e i ns e q u e n c et o o t h isi n d i c a t e dt h eg e n e e n c o d i n g x c gp r o t e i nw a sb e t e r o g e n e i c a 1 lt h e s es t u d i e sp r o v i d e d ac 1 h et os t u d yt h e s t r u c t u r e ，f u n c t i o no ft h ec g 一1 i k e r e c e p t o ra n dx c gp r o t e i n ，e v e nt h ee v o l u t i o n a r yc o u r s e 1 0 博士掌位论文摘要 s t u d ie s p r o v i d e d ac l u et o s t u d y t h es t r u c t u r e f u l 2 q t i o n0 ft h ec g 一1 i k e t h ee v 0 1 u t i o n a r yc o u r s e g e n e r e c e d t o r o fl h c g a n dx c gp r o t e i n e v e n r e c e p t o rg e f i ea n dh c g k e yw o r d s ：jm a 7 t o p h i l i a c g 一1 i k er e c e p t o r x c gp r o t e i n ，t r a n s m e m b r a n ed o m a i n 。g e n o m i c1i b r a r y g e l 3 eh e t e r o g e l 3 e i t y 博士掌位论文 前苫 月u 茜 j 一 受体分子学是当今生命科学的一个重要分枝，通过受 体、胞浆信息传导及基因表达调控的研究，揭示生命体接受 外界信息的奥秘，并已成为生命科学的研究前沿和关注热 点。1 9 8 2 年，n o d a 等用分子生物学方法，根据电鳐的烟碱型 乙酰胆碱受体( n a c h r ) 亚单位的核苷酸序列，推导出了该 受体亚单位的一级结构，这一工作标志着受体研究进入了分 子生物学研究的新阶段。此后，许多经典的神经递质、激素 以及各种生长因子受体的一级结构得以阐明，并根据受体分 子结构的异同对受体的亚型进行了分类。目前许多分子生物 学技术被应用于受体结构与功能的研究，从而改变了过去只 能靠配基结构推测受体结构或纯化受体来研究结构的状况。 重组d n a 技术的发展和应用，为揭示受体的分子结构以及结 构与功能的关系提供了新的有效手段。 黄体生成素( 1 u t e i n i z i n gh o r m o n e ，l h ) 和( 人) 绒毛膜促 性腺激素( h u m a nc h o r i o n i cg o n a d o t r o p in ，h c g 或c g ) 分别是 由垂体和胎盘分泌的糖蛋白激素，二者具有相似的立体结 构，属于同一超家族。绒毛膜促性腺激素受体，即l h c g 受 体( 或称h c g 受体) 是与g 一蛋白偶联的糖蛋白激素受体超家族 中的一员，在哺乳动物生殖过程中起重要的调控作用。l h 和 c g 通过与靶细胞上的同一l h c g 受体结合，主要通过激活腺 苷酸环化酶系统，弓 起甾体激素的合成与分泌，参与哺乳动 物受精卵着床、性腺发育及功能活动的调节。随者对l h c g 1 2 博士掌位论文前言 受体的深入研究，发现该受体不仅存在于哺乳动物的性腺靶 组织，而且在非性腺组织及非哺乳动物中也存在2 1 。而且， 在非靶组织及其它生物中该受体结构与功能的研究已成为 大家关注的领域。 19 7 5 年d u f a u 等首先报道了h c g 受体的纯化工作【引，1 9 8 6 年k u s u d a 和b r u c h 实验室才纯化出足量、高纯度的有结合活 性的受体4 。关于该受体的研究，与其他受体研究类似， 因纯化材料来源的困难，影响了其研究进展。九十年代以来， 随着基因克隆技术的应用，l h c g 受体的研究得到突破性进 展，相继对猪、大鼠及人等哺乳类、鸟类、鱼类、两栖类、 无脊椎动物及昆虫等l i i c g 受体基因进行了克隆和表达【们。 对哺乳类l h c g 受体的基因结构与功能的研究表明，人和大 鼠l h c g 受体c d n a 长约2 ，l k b ，编码分子量7 5 k d 的糖蛋白， 成熟l h c g 受体由6 7 4 a a 组成。人、大鼠l i i c g 受体n 端分 别有3 3 5 a a ，3 4 1 a a 残基组成大的胞外域，与激素有较高的亲 和力；7 2 a a 或6 9 a a 组成的c 端位于胞内，中间形成7 个同 源性较高( 9 1 ) 的跨膜域7 ，8 1 。在哺乳动物( 大鼠、猪、羊、 人等) 和鸟类( 鸡) 、鱼中存在多个l h c g 受体m r n a 异构体和 受体蛋白变异体1 6 ，进化过程中具组织特异性的、高度保守 的选择性剪接方式可能是合成l h c g 受体变异体的重要机 制。但目前对于l h c g 变异受体蛋白及受体m r n a 异构体的选 择性剪接机制的生理意义并不清楚。 嗜麦芽黄单胞菌( 肋门t h o m o n a sm a l t o p h i l i a ) 又名嗜 博士掌位论文前。j r 麦芽假单胞菌( p s e u d o m o n a sm a t o p h i l i a ) 或嗜麦芽寡养 单胞菌【9 ，1 0 3 ( s z e l l o t r o p h o # 7 0 n a sm a l t o p h i l i a ) 。属于g 一， 是黄单胞菌属的一个种，能产生碱性蛋白酶、脂肪酶等代谢 物】，但它又是医院感染的常见致病菌之一d 2 。l9 7 7 年， r i c h e r t 等报道嗜麦芽黄单胞菌中也存在类似哺乳类h c g 受 体的c g 样受体( c g l i k er e c e p t o r ) 或h c g 结合蛋白f 1 3 j ( c o b i n d i n gp r o t e i n ) ，这是原核生物具有真核生物激素受 体( h c g 受体) 类似蛋白的首次报道。八十年代以来，我们 实验室也开展了jm a t o p h i l i ac g 样受体的研究工作，包 括从该菌中分离纯化了h c g 结合蛋白u 4 ，h c g 结合蛋白的单 克隆抗体和多克隆抗体的制备i ”16 1 ，建立了嗜麦芽黄单胞菌 放射受体分析( r a d io l i g a n db i n d i n ga s s a y ，r b a ) 、酶受体 分析( e n z y m er e c e p t o ra s s a y ，e r a ) 和c g 结合蛋白配体印迹 分析【1 7 ，18 1 等方法。 g r o v e r 等最早报道了jm a t o p h i l i ac g 样受体3 4 2 b p 编码4 a a 开放阈读框( o r f ) 的部分基因序列【旧1 。该研究 认为其克隆的c g 祥受体部分基因与人l h c g 受体基因有7 3 的同源性，所编码的1 1 4a a 序列与人l h c g 受体有5 2 的同 源性。但g e n b a n k 对其比对认为人l h c g 受体与该蔼c g 样受 体及其基因序歹u 均无明显同源性( g e n b a n k 编号：g i ：5 8 4 9 1 5 ， p 3 7 1 2 5 ) ，二者结论不一致。 随后，g r o v e r 等发现爿r e a l t o p h i i a 还产生与h c g8 亚基有一定同源性的c g 类蛋自1 2 0 ，即4 8 5 k d 的x c g ( j 1 4 博士掌位论文 前r 历a l t o p h i l i ac h o r i o n i cg o n a d o t r o p i n ，x c g ) 蛋白，该蛋白 可能是c g 样受体的内源性配基( 2 1 1 o 编码x c g 蛋白的基因x c g 长1 3 6 2 b p 。x c g 与h c g 蛋白同源性比较发现，x c g 蛋白有两 个相对保守的氨基酸残基域，一个是x c g9 1 1 9 3 a a 部分， 与h c g0 亚基2 6 1 4 0 a a 部分有4 6 同源性，另一同源区域 对应h c gc 末端的2 5 个氨基酸残基部分。 c a r r e l l 等报道j r e a l t o p h i l i a 有两个h c g 结合位点( 2 2 】， 其一是k d 值为2 3 x 1 0 、并能与h c g 和h l h 呈相同的低亲 和力结合，亦即r ic h e r t 首次报道该菌具有的h c g 结合位点： 另一高亲和力位点k d 值为1 3x 1 0 _ 1o 、能与h c g 及内源性配 基x c g 结合，但不能结合h l h 。该菌在生长稳定期，h c g 和 x c g 能引起细菌生长周期模式的剂量依赖性改变和形态变 化。天然配基x c g 具有旁分泌或自分泌效应。嗜麦芽黄单胞 菌也是第一个被发现具有内源性配基和受体的原核生物。 此外，研究还发现母牛分枝杆菌( m y c o b a c t e r i u m v a c c a e ) 、白色假丝酵母( c a n d i d aa l b i c a n s ) 及啤酒糖酵母 ( s a c c h a r o m y c e sc e r e v i s i a e ) 等微生物也具有h c g 样蛋白 和c g 样受体蛋白。白色假丝酵母的c g 样蛋白c a c g l p 分子量 为6 8 k d 23 1 。白色假丝酵母中还存在一个能结合h c g 、h l h 和 x c g 的h c g 结合蛋白，该结合蛋白是一类疏水性蛋白，其分子 量为6 4 k d 2 ”。c a c g l p 可能是该结合蛋白的天然配基，该配 基受体系统可能控制白色假丝酵母形态转化和致病能力。 啤酒糖酵母的c g 样蛋白s c c g l p 能与其c g 结合位点结合( 2 5 】。 博士掌位e e - 文 前言 母牛分枝杆菌亦有能特异结合h c g 和h l h 的高亲和力位点 【26 1 ，呈双相高亲和力结合模式( k d 值为4 5 xl o 一1o 和5 2 1 0 。1 ) 。由此可见，c g 样受体和c g 样蛋白存在于微生物中 并不罕见，但目前普遍对它们的基因序列、结构与功能都不 清楚。 由于微生物具有结构相对简单、