（营养与食品卫生学专业论文）乳中主要共轭亚油酸异构体的分析.pdfVIP

j一_， 一、，p 0 ， 摘要 摘要 共轭亚油酸( c o n j u g a t e dl i n o l e i ca c i d ，c l a ) 是一类含共轭双键亚油酸的位 置( 6 8 ，7 - 9 ，9 1 l ，l l 1 3 ，1 3 1 5 ) 和几何( c 纽c i s ；c i s , t r a n s ；l t a n s , c i s ；t r a n s , t r a n s ) 异构体的总称，是反刍动物乳、肉中存在的天然脂肪酸。c l a 具有多种有益的 生理活性。研究证实了不同的c l a 有不同的生理活性，已经公认的如9 c ，1l t - c l a 具有抗癌活性，抗粥样动脉硬化，免疫调节的功能；1 0 t ，1 2 c c l a 可抑制脂肪的 合成，具有减肥的作用。因而建立可靠的分析方法确定食品中共轭亚油酸异构 体组成，分析c l a 异构体的种类，对于研究c l a 结构与生理活性的关系以及 共扼亚油酸在食品中的应用，都有着十分重要的意义。乳脂肪是丰富的天然c l a 的来源，全乳平均lg 脂肪含c l a 约有1 0m g ，牛奶中c l a 的主要异构体是生 理活性很强的9 c ，ll t - c l a ，约占9 0 。为分析不同乳中c l a 的准确含量和类型， 了解各种因素对乳及乳制品中c l a 含量的影响，建立快速准确的分析方法是非 常必要的。 本研究采用银离子高效液相色谱法( a 矿h p l c ) 法和胶束电动色谱法 ( m e k c ) 对几种奶样中主要的c l a 异构体的含量进行了分析测定，研究中对 乳脂的提取，样品的处理方法以及仪器分析条件进行了优化，较好地提高了分 析水平，主要结果如下： 1 对不同的乳脂提取方法进行比较。结果表明，在提取试剂为正己烷：异 丙醇= l ：l ( v v ) 时，采用超声波辅助提取乳脂，提取乳脂的效果最佳。 2 比较不同的甲酯化方法对对乳脂中c l a 的酯化效果的影响，确定 n a o c h 3 c h 3 0 h 进行酯化的效果较好，甲酯化较完全，并以响应面法对其进行 优化，其最优条件为n a o c h 3 c h 3 0 h 添加量为8 5 6m l ，反应温度为2 4 4 ， 反应时间为1 2 8m i n 。 3 采用一根银离子柱的a g + - h p l c 对c l a 异构体进行分离，可实现对两 种生理活性较强的c l a 异构体9 g1l t - c l a 和l o t , 1 2 c c l a 的初步分离。在 7 8 1 2 - - - , 5 0 0p g m l 范围内，h p l c 分析的峰面积与9 c ，1i t c l a 的进样量呈现良 好的线性关系，可用于对样品中的9 c ，1l t - c l a 进行定量分析。 4 优化了m e k c 的分离条件：分离电压2 5k v ，柱温2 0 ，进样时间 摘要 1 0s 。在优化的条件下( 分离电压2 5k v ，柱温2 0 ，进样时间1 0s ) ，m e k c 可达到对9 c ，l l t - c l a 与1 0 t , 1 2 c c l a 标品的良好分离。以m e k c 法对鲜奶、 巴氏奶、超高温瞬时灭菌奶( u h t ) 中c l a 含量及组成进行分析，c l a 总含量 ( 9 c ，1 l t - c l a 与1 0 t , 1 2 c c l a 含量的总和) ：鲜奶为9 2 8 1m g g 乳脂、巴氏奶为 9 1 2 9m g g 乳脂、u h t 为8 6 3lm g g 乳脂，各奶样间9 厶1l t - c l a 与1 0 t , 1 2 c - c l a 比例无显著差异；牛奶、水牛奶、羊奶中c l a 总含量( 9 c ，1 i t - c l a 与1 0 t ，1 2 c c l a 含量的总和) 分别为9 2 2 0m g g 乳脂、2 9 7 2m g g 乳脂、6 0 5 4m g g 乳脂，各奶 样间9 厶1 l t - c l a 与1 0 t ，1 2 c c l a 比例差异显著。 5 采用a 矿h p l c 对不同处理和条件的奶样进行分析，发现热处理( 巴氏 杀菌、超高温瞬时灭菌) 对奶中9 c ，ll t - c l a 的含量均有影响，超高温瞬时灭菌 可降低c l a 的含量，影响最大；保存时间也可影响奶中的9 c ，ll t - c l a 含量， 随保存时间增加，各奶样中的9 c ，1l t - c l a 含量均下降，下降幅度从大到小依次 为乳脂，巴氏杀菌奶，鲜奶，u h t 奶：不同季节也可影响奶样中c l a 含量，夏 季奶中c l a 含量明显高于其他季节的奶：对不同公司生产的品牌牛奶的c l a 含量进行了考察，发现不同品牌牛奶c l a 含量存在显著差异；检测结果也表明 不同动物奶样中的9 g1l t - c l a 的含量也有显著差异。 关键词：奶；共轭亚油酸；异构体：银离子高效液相色谱法；胶束电动色谱法； 甲酯化 i i a b s t r a c t a b s t r a c t c o n j u g a t e dl i n o l e i ca c i d ( c l a ) i sat e c h n i c a lt e r mf o ram i x t u r eo fp o s i t i o n a l ( 6 8 ，7 9 ，9 一1 1 ，1 1 一1 3 ，1 3 - 1 5 ) a n dg e o m e t r i c ( f 趣c i s ；c i s , t r a n s ；t r a n s , c i s ；t r a n s , t r a n s ) i s o m e r so fl i n o l e i ca c i dt h a tc o n t a i nc o n j u g a t e dd o u b l eb o n d s t h em a j o rs o u r c eo f n a t u r e lc l ai sm i l ka n dm e a tf r o mr u m i n a n t m i l kf a ti sav e r yc o m m o na n dg o o d s o u r c ef o rn a t u r a lc l a o na v e r a g e ，p e rg r a mo fm i l kf a tc o n t a i n s10 m gc l a ，m o s t o fw h i c hi sb i o l o g i c a l a c t i v i t yi s o m e r9 c ，llt - c l a c l ah a v em a n yp o s i t i v e b i o l o g i c a la c t i v i t i e s ，a n dt h ed i f f e r e n ti s o m e r ss h o wd i f f e r e n tb i o a c t i v i t i e s f o r i n s t a n c e ，b a s e do nt e s t i n gi na n i m a lm o d e l s ，9 c ，llt - c l as h o w e dt h ef u n c t i o no f a n t i - c a r c i n o g e n e s i s ，a n t i a t h e r o s c l e r o s i sa n di m m u n o m o d u l a t i o n 10 t , 12 c - c l ac o u l d r e d u c et h eb o d yf a t ，a n di ta l s oi sap o t e n ti n h i b i t o ro fm i l k f a ts y n t h e s i s c o n s i d e r i n g t h eu s eo fc l af o rm e d i c i n a la n dn u t r a c e u t i c a lp u r p o s e s ，as a f ei s o m e r - s e l e c t i v e p r o c e s si sr e q u i r e d t h e r e f o r e ，i ti sn e c e s s a r yt oe s t a b l i s ht h er e l i a b l em e t h o d sf o r a n a l y s i so fc l a i s o m e r i nt h ep r e s e n ts t u d y , c o n d i t i o n so fm i l kf a te x t r a c t i o n ，s a m p l ep r e t r e a t m e n ta n d h p l ca n dm e k ca n a l y s i sw e r eo p t i m i z e d t h em a j o rc l ai s o m e r sf r o mm i l k s a m p l e s w e r e s e p a r a t e d a n dt e s t e d b y s i l v e r - i o n h i g hp e r f o r m a n c el i q u i d c h r o m a t o g r a p h y ( a g + - h p l c ) a n dm i c e l l a re l e c t r o k i n e t i cc h r o m a t o g r a p h y ( m e k c ) t h em a i nr e s u l t sw e r ea sf o l l o w s ： 1 d i f f e r e n ts o l v e n tc o m b i n a t i o n sw e r ee v a l u a t e df o rt h ee x t r a c t i o no fm i l kf a t i nc o m p a r i s o n 试t ho t h e r s ，h e x a n e i s o p r o p a n o l “mt h ea s s i s t a n c eo fu l t r a s o u n d d i s p l a y e db e t t e re x t r a c t i o na b i l i t y 2 m e t h y l a t i o no fc l a 、) l ，i t hn a o c h 3 - c h 3 0 hi nm i l dc o n d i t i o n ss h o w e d f a v o r a b l ee f f e c t b o x - b e h n k e nd e s i g nw a sa p p l i e dt of i n dt h eo p t i m u mm e t h y l a t i o n c o n d i t i o n s 1 1 1 er e s u l t ss h o w e dt h a tt h eo p t i m u mc o n d i t i o n sf o rt h em e t h y l a t i o no f c l aw e r ea sf o l l o w s ：8 5 6m lo f0 5ms o d i u mm e t h o x i d e m e t h a n o l ，r e a c t i o n t e m p e r a t u r e2 4 4 ，r e a c t i o nt i m e1 2 8m i n 3 a 矿- h p l ch a sb e e ns h o w nt ob ee f f e c t i v ei nt h er e s o l u t i o no ft h em a j o rc l a i s o m e r s9 c ，lit - c l aa n d10 t ，12 c c l a ，w h i c hw e r ek n o w na st h e i rb e n e f i c i a l a b s t r a c t b i o l o g i c a la c t i v i t i e s i nt h ec o n c e n t r a t i o no fs t a n d a r di s o m e r sf r o m7 8 1 2 “g m lt o 5 0 0p g m l ，t h e r ew a sag o o dl i n e a rr e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h ep e a ka r e aa n di n j e c t i o n c o n c e n t r a t i o n 4 。刀 em i l kt r e a t e dw i t hi i e a i n c l u d i n g p a s t e u r i z a t i o na n du l t r a - h i g h t e m p e r a t u r ei n s t a n t a n e o u ss t e r i l i z a t i o n h d ，c o u l dr e d u c et h ec o n t e n to fc l a s i g n i f i c a n t l y t h ev a r a t i o n so fc l a c o n t e n ti nm i l kw a si n v e s t i g a t e dd u r i n gs t o r a g e b yu s i n ga g + - h p l c w i t ht h ei n c r e a s ei np r e s e r v a t i o nt i m e ，t h e r ew a ss h a r p d e c l i n ei nc l al e v e l si na l lt h es a m p l e s d u r i n gs h e l fl i f e ，9 c ，1it - c l ac o n t e n ti n r o wm i l kd e c r e a s e db y9 ，9 c ，lit - c l ai np a s t e u r i z e dm i l kd e c r e a s e db y16 ，a n d i nu h tm i l kd e c r e a s e db y8 s e a s o nw a sa n o t h e ri m p o r t a n ti n f l u e n c i n gf a c t o r t h er e s u l ts h o w e dt h a tt h ec l ac o n t e n ti ns u m m e rm i l kw a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e r t h a no t h e rs e a s o n s a d d i t i o n a l l y ，t h e r ew a sas i g n i f i c a n t l yd i f f e r e n c ei nt h e9 c ， 1lt - c l ac o n t e n ta m o n gt h ec o w m i l k ，g o a tm i l ka n db u f f a l om i l k 伊 o 0 01 ) t h e c l ac o n t e n to f m i l kf r o md i f f e r e n tc o m p a n i e ss h o w e ds t a t i s t i c a l l yd i f f e r e n c e ( 尸 0 0 0 1 ) 5 u n d e rt h eo p t i m u mc o n d i t i o n s ，8 0m mb o r a t e ( p h9 o ) ，5 4m ms o d i u m d o d e c y ls u l p h a t e ，4 ( w v ) i b - c y c l o d e x t r i n ，8 mu r e a , 4 ( v v ) e t h a n o l ，2 5k va n d2 0 ，t h em a j o rc l ai s o m e r s9 c ，1l t - c l aa n d1 0 t , 1 2 c - c l ai nm i l kc o u l db e s e p a r a t e db ym e k ce f f e c t i v e l yw i t h i n15m i n t h er e s u l ti n d i c a t e dt h a tt h e r ew a sa s i g n i f i c a n td i f f e r e n c ei nt h et o t a lc l ac o n t e n ta m o n gr a wm i l k s ，p a s t e u r i z e dm i l k ， u h t m i l k ( p o 0 0 1 ) h o w e v e r , t h ec o n t e n to f1 0 t ，1 2 c - c l af r o ma l ls a m p l e sw a s a l m o s ts i m i l a r ( a b o u t3 ) t h er e s u l ta l s os h o w e dt h e r ew a sas i g n i f i c a n td i f f e r e n c e i nt h et o t a lc l ac o n t e n ta n d10 t , 12 c - c l ac o n t e n ta m o n gt h ec o wm i l k ，g o a tm i l k a n db u f f a l om i l k 妒 0 0 5 ) t h et o t a lc o n t e n to fc l ai nt h e s es a m p l e sw a s 9 2 2 0 m g gm i l kf a ti nt h ec o wm i l k ，2 9 7 2m g gm i l kf a ti nt h eb u f f a l om i l ka n d 6 0 5 4m e g gm i l kf a ti nt h eg o a tm i l k k e y w o r d s ：m i l k ；c o n j u g a t e dl i n o l e i ca c i d s ；i s o m e r ；s i l v e r - i o nh i g hp e r f o r m a n c e l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ；m i c e l l a re l e c t r o k i n e t i cc h r o m a t o g r a p h y ；m e t h y l a t i o n i v a b s t r a c t 缩略语 c l a c f b b d h p l c a g + h p l c m e k c h p c e g c g c f i d g c m s f t i r t l c f f a f a m e t a g s d s u h t l o d r s d 1 3 - c d 英文缩略语 英文 c o n j u g a t e dl i n o l e i ca c i d c i s t r a n s b o x b e h n k e nd e s i g n h i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y s i l v e r i o n h i g h p e r f o r m a n c el i q u i d c h r o m a t o g r a p h y m i c e l l a re l e c t r o k i n e t i cc h r o m a t o g r a p h y h i g h p e r f o r m a n c ec a p i l l a r ye l e c t r o p h o r e s i s g a sc h r o m a t o g r a p h y g a sc h r o m a t o g r a p h y - f l a m ei o n i z a t i o nd e t e c t o r g a sc h r o m a t o g r a p h y m a s ss p e c t r o m e t r y f o u r i e rt r a n s f o r mi n f r a r e d t h i nl a y e rc h r o m a t o g r a p h y f r e ef a ta c i d f a t t ya c i dm e t h y le s t e r s t r i a c y l g l y c e r o l s s o d i u md o d e c y ls u l f a t e u l t r a - h i g ht e m p e r a t u r e i n s t a n t a n e o u s s t e r i l i z a t i o n l i m i t so fd e t e c t i o n r e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n 1 3 - c y e l o d e x t f i n v 中文 共轭亚油酸 顺式 反式 高效液相色谱法 银离子高效液相色谱法 胶束电动色谱 高效毛细管电泳一 气相色谱法 气相色谱离子检测器 气相色谱质谱联用 傅立叶变换红外光谱法 薄层色谱 游离脂肪酸 脂肪酸甲酯化物 三酰甘油酯 十二烷基硫酸钠 超高温瞬时灭菌 最低检出限 相对标准偏差 b 环状糊精 _io_-_-_-。一 目录 目录 第一章前言1 1 1 共轭亚油酸的结构和来源l 1 2 共轭亚油酸的氧化稳定性2 1 3 食品中的共轭亚油酸3 1 4 共轭亚油酸的分析方法5 1 4 1 共轭亚油酸标品5 1 4 2 样品预处理方法6 1 4 3 高效液相色谱法7 1 4 4 气相色谱法9 1 4 5 气质联用法1 1 1 4 6 气相色谱一傅里叶变换红外光谱法1 1 1 4 7 高效毛细管电泳法1 2 1 5 展望及研究设想1 3 第二章奶样中乳脂的提取1 5 2 1 前言1 5 2 2 材料与仪器1 5 2 2 1 材料与试剂1 5 2 2 2 仪器设备1 6 2 3 方法1 6 2 3 1 氯仿一甲醇法( c m 法) 1 6 2 3 2 碱性乙醚法( 哥特里一罗紫法) 1 7 2 3 3 氨法改良法1 7 2 3 4 正己烷一异丙醇法( h i p 法) 1 7 2 3 5 样品甲酯化处理1 8 2 3 6h p l c 法分析各方法所提乳脂的9 c ，l i t c l a 1 8 2 3 7 数据分析及处理1 8 v i 目录 2 4 结果与讨论1 8 2 5 小结2 0 第三章银离子高效液相色谱法分析共轭亚油酸2 1 3 1 前言2 1 3 2 实验材料与仪器2 2 3 2 1 材料2 2 3 2 2 仪器2 2 3 3 方法2 3 3 3 1 牛奶中乳脂的提取2 3 3 3 2 乳脂甲酯化处理2 3 3 3 3 紫外光谱分析2 3 3 3 4h p l c 法分析共轭亚油酸条件2 4 3 3 5 标准曲线的绘制2 4 3 3 6 最低检出限2 4 3 3 7 数据分析及处理2 4 3 4 结果与讨论2 5 3 4 1 紫外光谱分析2 5 3 4 2h p l c 法分析2 5 3 4 3 不同甲酯化方法的比较2 9 3 5 小结3 9 第四章胶束电动色谱法分析共轭亚油酸4 0 4 1 前言4 0 4 2 实验材料与仪器4 1 4 2 1 实验材料4 1 4 2 2 仪器4 l 4 3 方法4 2 4 3 1 奶样的采集4 2 4 3 2 奶样中乳脂的提取4 2 4 3 3 乳脂皂化处理4 3 v l i 目录 4 3 4 电解液配制4 3 4 3 5 胶束电动色谱法分析共轭亚油酸条件4 3 4 3 6 标准曲线的绘制4 3 4 3 7 最低检出限4 4 4 3 8 数据分析及处理4 4 4 4 结果与讨论4 4 4 4 1 电泳条件的优化4 4 4 4 2 标准曲线绘制4 5 4 4 3 方法精密度4 6 4 4 4 方法回收率4 6 ，4 4 5 最低检出限4 7 4 4 6 共轭亚油酸两种异构体标品的分离4 7 4 4 7 奶样中共轭亚油酸异构体的分离4 8 4 4 8 奶样中共轭亚油酸异构体含量的测定4 9 4 5 小结5 1 第五章奶样中共轭亚油酸的分析测定5 2 5 1 前言5 2 5 2 实验材料与仪器5 2 5 2 1 实验材料5 2 5 2 2 仪器一5 3 5 3 方法5 3 5 3 1 各牛奶样的采集5 3 5 3 2 牛奶样品的处理5 4 5 3 3 乳脂甲酯化处理5 4 5 3 4h p l c 法分析共轭亚油酸条件5 4 5 3 5 数据分析及处理5 5 5 4 结果与讨论5 5 5 4 1h p l c 方法的准确性5 5 5 4 2 加工方式对牛奶样中9 c ，1l t - c l a 含量的影响5 5 v i i i 目录 5 4 3 储存时间对奶样中9 c ，1 1 t - c l a 含量的影响5 6 5 4 4 不同季节对奶样中9 c ，1 l t - c l a 含量的影响5 9 5 4 5 不同品牌牛奶中9 c ，1 l t - c l a 含量的比较6 0 5 4 6 不同品种奶样中9 c ，1 l t - c l a 含量测定6 1 5 5 小结6 l 第六章结论与展望6 3 6 1 结论6 3 6 2 创新之处及建议6 4 6 2 1 创新之处6 4 6 2 2 建议6 4 致谢6 5 参考文献6 6 攻读学位期间的研究成果7 1 i x 第一章前言 第一章前言 共轭亚油酸( c o n j u g a t e dl i n o l e i ca c i d ，c l a ) 是一类含共轭双键的亚油酸的位 置( 6 8 ，7 - 9 ，9 1 1 ，1 1 1 3 ，1 3 1 5 ) 和几何( c i s , c i s ；c 趣t r a n s ；咖a n s , c i $ ；t r a n s , t r a n s ) 异构体的总称。1 9 8 3 年w i s c o n s i n 大学的p a r i z a 等在烤牛肉中发现有一种抗癌物 质，1 9 8 7 年h a 等【i 】确认这种抗癌物质就是c l a 。c l a 具有抗癌【2 1 ，抗动脉粥 样硬化【4 】，增强机体免疫力，抑制脂肪积累和减肥1 5 j ，降低胆固醇，促进生长发 育等生理功能1 6 j 。 c l a 目前已作为一种食品添加剂应用于保健食品和功能食品中，美国国家 研究委员会( n r c ，1 9 9 6 ) 已把c l a 列为唯一一种具有抗癌作用的动物源脂肪酸。 美国已生产出了由c l a 制成的保健食品并在运动员及健身人员中广泛使用。尽 管动物试验中表明c l a 对健康有积极影响，但c l a 因含有多种异构体，其中 一些异构体的安全性以及确切的生理活性尚不清楚。 1 1 共轭亚油酸的结构和来源 c l a 的主要位置异构体包括8 ，1 0 、9 ，1 1 、1 0 ，1 2 和1 l ，1 3 四种，每个位 置上的空间异构体有四种( f ，r 、c ，、毛c 和c ，c ) ，从而使得c l a 的异构体多达 几十种【7 1 。 国外大量研究表明，在c l a 的多种异构体中，9 c ，1l t - c l a 和1 0 t , 1 2 c - c l a 两种异构体生物活性作用最强【引，其结构见图1 1 o h l ，、 气一 1 曩l l l c i ，i q 争f 辩、八 广m l 饥1 2 扣a 搏心律 图1 1c l a 的结构简图 f i g 1 1t h es t r u c t u r eo f c l a 第一章前言 一些研究认为，c l a 是反刍动物饲粮中不饱和脂肪酸在瘤胃中经微生物不 完全氢化的结果。p a r i z a 研究发现，亚油酸和亚麻酸在瘤胃微生物的氢化作用下， 能发生位置异构化而形成c l a ，氢化不完全时，部分可通过瘤胃直接进入肠道 而被吸收，进而可被吸收进入乳腺并整合到乳脂中，如图1 2 所示。 近年来研究发现，被反刍动物吸收进入体内的反式油酸在肝脏及乳腺细胞 中被a 9 脱氢酶脱氢生成9 c ，1l t - c l a ，这种方式被认为是反刍动物脂肪中c l a 形成的主要途径。k a y 等的研究表明乳脂中的c l a 主要由内源合成，在泌乳奶 牛中，9 c ，ll t - c l a 的内源合成是奶中9 c ，ll t - c l a 的主要来源。并且牛奶中的 c l a 含量近9 0 为9 c ll t - c l a t 9 l 。 囊镩f l l c 一玩e 1 2 c 1 5c 1 8 ：3 f 受l l 簟) c - 9 c - 1 2 p 懒 c - 9 , t - l l ，c - t 5c1 8 ：3 c - 9 t - t - - l l 馋i l j 麓 1 8 ：0 ( 聪缓 夸弱嚣痰组织内 簪舞缝拨比较多) 图1 2 瘤胃及组织内c l a 的合成途径m l f i g 1 2b i o s y n t h e s i so f c l ai nl u m e na n dt i s s u e 1 2 共轭亚油酸的氧化稳定性 双键含具有较大流动性的兀电子，他们较容易受到氧化剂的攻击。因此， 存储过程中常发生共轭二烯结构的进一步氧化，从而生成少量共轭三烯及极少 量的共轭四烯和次级氧化代谢产物【1 1 1 。次级氧化产物所产生的吸收峰在2 6 8 姗 处，共轭三烯烃所产生的吸收峰主要在2 6 7n n l 处，叠加导致了2 7 8n i 1 处的吸 收【i 引，从而干扰c l a 的测定。 c l a 的稳定性受到其所处环境影响。y u r a w e c z 等【1 3 】的研究表明c l a 在空 气中很快氧化分解成吠哺脂肪酸，但c l a 在甲醇中稳定性很好【1 4 】。同时，c l a 2 懒 ，sl _ cll _ i 第一章前言 的形式也会影响到它的氧化稳定性。c h e n 等对不同形式c l a ( 游离形式、甘油 三酯形式、甲酯形式) 的稳定性进行了研究，结果表明，游离c l a 最不稳定。 刘美玉f 1 5 】等也证明共轭亚油酸甘油三酯的氧化稳定性优于共轭亚油酸乙酯；脂 溶性抗氧化剂v e 可提高共轭亚油酸甘油三酯、共轭亚油酸乙酯的氧化稳定性。 沈继红【1 6 】用环糊精包埋可有效防止c l a 的氧化。此外，不同构型的异构体的稳 定性也不相同。t ，异构体最为稳定，斫异构体次之，g c 异构体最不稳定1 1 7 j 。 1 3 食品中的共轭亚油酸 天然c l a 主要存在于瘤胃动物乳制品、肉制品中，以9 c ，1 l t - c l a 为主， 约占总c l a 的7 5 - - - 9 0 t 1 引。植物组织也含少量c l a ( 0 1 - - - - 0 7 ) ，但是主要 以1 0 t , 1 2 t - c l a 异构体存在。表l 中列举了不同食品中c l a 的含量。 表1 1 不同食品中c l a 含量f 1 9 1 t a b l elc o n t e n to f c l ai nd i f f e r e n tf o o d j 第一章前言 f r i t s c h e 2 0 1 对德国市场的包括乳制品( 发酵、非发酵) 、肉制品、鱼、植物 油、蛋糕等在内的1 3 9 中食品中的c l a 含量进行了测定，结果显示：牛乳及其 制品c l a 含量在0 4 - - - 1 7 ( 可测定的总脂肪酸含量) ，肉制品为o 1 1 2 ， 鱼肉中为0 0 1 0 0 9 ，植物油和人造黄油中的c l a 含量极低小于0 0 1 ，而油 炸薯片、蛋糕等食品中几乎检测不到c l a 。j a h r e i s 等【2 1 1 的研究显示，乳中c l a 含量由低到高的顺序为马、猪、人、山羊、奶牛、羊。 瘤胃动物体内c l a 的含量受多种因素的影响，除基因型的不同外，日粮中 油料作物的添加、日常牧草的种类及生长期、季节等因素均可产生影响。 在对爱尔兰荷斯坦牛、荷兰荷斯坦牛、m o n t b l i a r d 牛和n o r m a n d e 牛在放牧 情况下乳脂中c l a 含量差异进行比较中，l a w l e s s 2 2 】发现m o n t b l i a r d 牛的乳脂中 c l a 含量显著高于其他品种，而其他三个品种之间的c l a 含量无显著性差异。 四个品种牛乳脂中的c l a 含量为1 4 7 1 8 6m g g 乳脂，而各品种内部个体之间 的c l a 含量在4 8 3 5 6m g g 乳脂之间，同时，同一奶牛在不同取样时间时其 c l a 含量变化也很大。即个体差异对c l a 含量的影响要大于品种的影响。同一 头奶牛所产乳脂c l a 含量变异系数为2 5 0 o - - - 3 5 ，在同一种群的c l a 含量变异 系数仅为1 5 。 c h o u i n a r d 等f 2 3 j 通过真胃灌注c l a 使乳脂c l a 含量达到6 3 6m e d g 脂肪， 而普通牛乳c l a 含量在3 - - 6m e d g 乳脂。m a r i u sc o l l o m b 等【2 4 j 的实验显示饲喂 富含油酸( 油菜籽) 、亚麻酸( 亚麻籽) 、a 亚油酸( 向日葵籽) 的日粮可显著提 高乳脂中c l a 的含量：饲粮中油酸的摄入量与7 厶9 c c l a 的含量显著相关；饲 粮中亚油酸的摄入量与1 0 t , 1 2 t - c l a 、9 t , 1 1 t - c l a 、s t , 1 0 t - c l a 等异构体的含量 显著相关；饲粮中亚麻酸的摄入量与1 2 t ，1 4 t - c l a 、l l t ，1 3 t - c l a 等异构体的含 量显著相关：尤其是富含向日葵籽的饲粮，令乳脂中c l a 含量提高了三倍以上， 达1 7 6 3m e d g 乳脂。同时他也对放牧于不同海拔( 低海拔地区、山区、高海拔 地区) 的泌乳奶牛的乳脂c l a 含量进行了研究，结果显示生长于高海拔地区 ( 1 2 7 5 - 2 1 2 0m ) 牧场的泌乳奶牛乳脂中c l a 含量为2 5 0 5m g 乳脂，而低海拔地 区( 6 0 0 6 5 0m ) 的奶牛乳脂中仅含c l a 9 5 7m g g 乳脂。 4 第一章前言 影响食品中c l a 含量的因素也很多，包括温度、蛋白质品质、储存期、加 工方法等。 p i l a fl u n a 等【2 5 】以g c 和a 矿h p l c 法对来自西班牙不同地区奶酪中的c l a 进行了分析测定，结果显示，在所测样品中c l a 总含量为3 9m g g 脂肪酸， 并且其中7 5 为9 c ，l l t - c l a ，另几种主要异构体分别为7 ，9 - c l a ( c t ) 、1 l ， 1 3 t - c l a 和1i t , 1 3 c c l a 。并且，在奶酪的储藏过程中，总c l a 含量以及各异 构体的含量不会发生显著变化。 b o y l s t o n 等【2 6 j 等的研究发现，奶酪等乳制品中c l a 的含量远高于原料乳， 且受加工过程的影响，提高乳清蛋白的添加浓度可提高产品中的c l a 含量。并 且，烧烤过的牛肉中c l a 含量与之前相比有显著增加【2 。 1 4 共轭亚油酸的分析方法 由于食品中的c l a 和市售c l a 产品存在很多种几何和位置异构体，其中 大多数异构体的活性至今尚不清楚，因而对其进行分离和精确的分析是非常必 要的。随着科学技术的发展，先进的仪器设备给c l a 的分析提供了很好的基础。 c l a 的测定方法有很多种，常用的有紫外分光光度法( u l t r a v i o l e t s p e c t r o p h o t o m e t r y ，u v ) ，高效液相色谱法( h i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ， h p l c ) ，气相色谱法( g a sc h r o m a t o g r a p h y ，g c ) ，气质联用法( g a sc h r o m a t o g r a p h y - m a s ss p e c t r o m e t r y ，g c m s ) 。近年来又出现了1 3 c 核磁光谱法( n u c l e a rm a g n e t i c r