（外科学专业论文）cycling1、p53蛋白在肾癌中的表达及其相关性研究.pdf

目录 中文摘要1 英文摘要3 研究论文c y c l i n g l 、p 5 3 蛋白在肾癌中的表达及其相关性研究 前言? 4 日i j 舌 材料与方法5 结果7多口才 0 0 5 ，因此还不能认为它们有差别，癌组织与正常组织 中c y c l i n g l 表达比较，p = 0 0 0 1 o 0 5 ，两者表达情况不同，癌组织较正 常高表达。癌旁组织与正常组织中c y c l i n g l 表达比较，p = 0 0 0 o 0 5 ，因此还不能认为它们有差别，癌组织与正常组织中p 5 3 表达比较，p = 0 0 0 0 0 5 ，两者表达情况不同，癌组织较正常高表达。癌 旁组织与正常组织中p 5 3 表达比较，p = 0 0 4 1 0 0 5 。年龄 7 0 岁相比 研究论文 p - - 0 0 3 9 0 0 5 ，i 与期比 较p = 0 7 9 1 0 0 5 ；i i 与i i i 期比较p = 0 3 7 6 0 0 5 ；i i 与期比较p = 0 6 1 5 o 0 5 ；i i i 期与期比较p = 0 8 1 7 0 0 5 。 1 5p 5 3 与c y c l i n g l 表达在肾癌癌旁正常肾组织中相关性。 如t a b l e1 5 ，经等级相关分析，可发现在肾癌组织中p 5 3 与c y c l i n g l 相关系数为0 4 0 0 ，p 值为o 5 0 5 ，在癌旁组织中p 5 3 与c y c l i n g l 相关系 数为0 3 0 0 ，p 值为0 6 2 4 ，在正常肾组织中p 5 3 与c y c l i n g l 相关系数为 0 9 0 0 ，p 值为o 0 3 7 ，因此推断两者间为线性相关。 2 卡方检验 2 1c y c l i n g l 在肾组织中的表达。 如附表t a b l e2 1 ，经卡方检验癌组织与癌旁组织中c y c l i n g i 表达比 较p = 0 6 7 6 0 0 5 ，因此还不能认为它们有差别，癌组织与正常组织中 c y c l i n g l 表达比较，p = 0 0 0 5 7 0 岁中c y c l i n g l 表达 比较，p = 0 6 0 1 o 0 5 ，i 期与i i 期比较p = 0 5 51 o 0 5 ，i 期与i 期比较 p = 0 8 3 8 0 0 5 ，i 期与期比较p = 0 4 2 5 o 0 5 ；i i 期与i i i 期比较p = 0 3 8 5 o 0 5 ，i i 期与期比较p = o 5 3 0 0 0 5 , i i i 期与期比较p = 0 3 8 3 o 0 5 。 据结果推断年龄性别分期不影响c y c l i n g l 的表达。 2 3p 5 3 在不同肾组织中的表达。 如附表t a b l e2 3 ，经卡方检验比较癌组织与癌旁组织中p 5 3 表达 p = 0 2 0 2 o 0 5 ，因此还不能认为它们有差别，癌组织与正常组织中p 5 3 表达比较，p = 0 0 0 1 0 0 5 ， 癌组织中5 0 7 0 岁与 7 0 岁中p 5 3 表达比较，p = 0 1 3 3 o 0 5 ；i 期与i i 期 比较p = 0 4 7 3 o 0 5 ，i 期与i i i 期比较p = 0 4 6 2 0 0 5 ，i 期与期比较p = l o 0 5 ；i i 期与i i i 期比较p = 0 1 9 1 2 0 0 5 ，i i 期与期比较p = 0 7 2 7 0 0 5 。 i 期与期比较p = 0 5 8 8 0 0 5 ；i i i 期与期比较p = 0 6 9 6 0 0 5 。据结果 推断年龄性别分期不影响瘤组织中p 5 3 的表达。 3 2 5p 5 3 与c y c l i n g l 表达在肾癌癌旁正常肾组织中相关性。 如附表t a b l e2 5 ，在肾癌组织中p 5 3 与c y c l i n g l 相关系数为0 5 2 6 ， p 值为0 3 6 3 ，在癌旁组织中p 5 3 与c y c l i n g l 相关系数为一0 1 9 9 ，p 值为 0 7 4 9 ，在正常肾组织中p 5 3 与c y c l i n g l 相关系数为o 6 18 ，p 值为0 2 6 7 ， 因此推断两者间为线性相关。 9 研究论文 附图 f i g 1w e l ld i f f e r e n t i a t e dk i d n e ym e d u l l a ( h e10 x 2 0 ) f i g 2w e l ld i f f e r e n t i a t e dk i d n e ym e d u l l a ( h elox 4 0 ) f i g 3w e l ld i f f e r e n t i a t e dr e n a lc o r t e x ( r m 10 2 0 ) f i g 4w e l ld i f f e r e n t i a t e dr e n a lc o r t e x ( h e 10 4 0 ) f i g 5r e n a lc e l lc a n c e r ( h e10 2 0 ) f i g 6r e n a l c e l lc a n c e r ( h elox 4 0 ) 一 1 2 研究论文 f i g 7t h ee x p r e s s i o no f c y c l i n g l i nr e n a lc e l lc a n c e r ( 1 0 x 2 0 ) f i g 8t h ee x p r e s s i o no fc y c l i n g li nr e n a lc e l lc a n c e r ( 1o x 4 0 ) f 喀9t h ee x p r e s s i o no f c y c l i n g l i nn o m a lr e n a lo r g a n i z e ( 1 0 x 2 0 ) f i g 10t h ee x p r e s s i o no fc y c l i n g1i nn o m a lr e n a lo r g a n i z e ( 10 x 4 0 了 研究论文 f i g 11t h ee x p r e s s i o no fp 5 3i nr e n a lc e l lc a n c e r ( 10 x 2 0 ) 、! 刍? 。4j j i ? jl ：| | ? j + j i l 。麓j ? 。ji 。：。j 爹o 需一”一f f 。一。o “气。| 譬， o 船 ”，”。 。 铲 静 癣 静 ， ；二。兰，。一，：， ，争 - ? 7 ，” ：? 壤。5 ，。帮? ，黟毋毋。争心一7 聋 簪 ，二， t ? 臻8 ，“e 。： 。争矿 l s ，。t # ；：。77 ”瓮 ：”“ 簪7 。7 。露二；，名，i ； 隆i 一一每 。77 _ “；参* 薹。47 镌：。“，i+ 二二。+ ，：，j ，一；i 尊 8 ： 转 舞 ：审 学黼+ ， 矿： 黪i f 。_ 毒：4 ，二，一i ：。缸j ：。：7 | ? 4 ：，刍，镑! 。f 霉 懿r 女：9 “，j，| ，罗一。：，二，! ? 。孽 弘。二，j 一冀4 。| j ? i ? 沁7 一、”移? ，一， ，一 一： 一。 f i g 1 2t h ee x p r e s s i o no f p 5 3i nr e n a lc e l lc a n c e r ( 1o x 4 0 ) o f p 5 3 i nn o m a lr e n a lo r g a n i z e ( 1 0 x 2 0 ) f i g 1 4t h ee x p r e s s i o no f p 5 3 i n n o m a lr e n a lo r g a n i z e ( 1 0 4 0 ) 研究论文 附表 t a b l el 一1t h ee x p r e s s i o no fc y c l i n gli nr e n a l t a b l e1 - 2t h e e x p r e s s i o no fc y c l i n g li nr e n a lc a n c e ra n di t sc o r r e l a t i v ew i t h g e n d e r , a g ea n dd e g r a d e t a b l e1 - 3t h e e x p r e s s i o no fp 5 3i nr e n a lo r g a n i z e 研究论文 t a b l e1 - 4t h ee x p r e s s i o no fp 5 3i nr e n a lc a n c e ra n d i t sc o r r e l a t i v ew i t hg e n d e r a g ea n dd e l l r a d e - - - _ - - = ：= 一一 s o n t h e e + x p r e s s i o n + + o f p 5 3i n r e h n a l i c a n c e r hh s u mp 一 十+ +卅b h i _ - _ 一一_ g e n d e r 3 2 ：2 0 。 w e m m a n a i l7 6 51 3 4 7 0 423。23 3 o 4 5 w e m a n7 7o2 0 。u 叶) a g e 1 5 ：3 0 ：7 s 5 0 2 2 830 1 5 5 0 - 7 07 5 684 3 0 一 7 04 12 0 07 d e g r a d e 1 2 ：2 4 ：1 4 ：2 i4 25 1 01 2 i i 544 8 32 4 i4 1 62 11 4 一 i v0 11 00 2 f a b l e1 - 5t h ee x p r e s s i o no fp 53a n d c y c l i n g li nr e n a lc a n c e r , t h es i d eo fc a n c e r a n dn o m a lr e n a lo r g a m z e the e x p r e s s i o no fp 5 3a n dc y c l i n g l o r l l z a n l z e 一 一= + + + 十h + 卅r p 篙署 1 38 1 61 14 。c 舞，t 。2 ，6 4 n 4 0 0n 5 0 5 s i d ( p 5 3 ) e c a n c 钉 1 6 81 35 3 s。cidye兰。c；nan害c。e，r 。8 t6，8 3 。3 。6 2 4 n 0 裟2 r 、e n a l 3 0 i k a - - i j i 1 0 87 o 翟涮4 t 5 - 3。 2 n 9 0 0 0 。0 3 7 _ - - - _ _ 一一 1 8 研究论文 t a b l e2 1t h ee x p r e s s i o no fc y c l i n g1i nr e n a l t a b l e2 - 2t h e e x p r e s s i o no fc y c l i n g 1i nr e n a lc a n c e ra n di t sc o r r e l a t i v ew i t h g e n d e r ，a g ea n dd e g r a d e t a b l e2 - 3t h ee x p r e s s i o no f p 5 3i nr e n a lc a n c e r 研究论文 t a b l e2 - 4t h ee x p r e s s i o no fp 5 3i nr e n a lc a n c e ra n di t sc o r r e l a t i v ew i t hg e n d e r , a g ea n dd e g r a d e + dercentthe e x p r e s s i o no fp 5 3 g e n d e r 3 2 - 2 0 m a l l 651 3 44 6 5 6 w o m a n 7337 0 5 0 o a g e 1 5 ：3 0 ：7 7 0 412002 8 5 d e g r a d e 1 2 ：2 4 ：1 4 ：2 i425 105 0 o i i54 4836 2 5 4 16 216 4 3 i v011 005 0 o t a b l e2 - 5t h e e x p r e s s i o no fp 5 3a n dc y c l i n gli nr e n a lc a n c e r , t h es i d eo f c a n c e ra n dn o m a lr e n a lo r g a n i z e t h ee x p r e s s i o no fp 5 3a n dc y c l i n g l o r g a n i z e 斗+ + 一一 h 斗r p c a n c e r ( p 5 3 ) 2131 o 5 2 60 3 6 3 c a n c e r ( c y c l i n g l ) 114 1 s i d ec a n c e r ( p 5 3 ) 2 42 1 - o 19 90 7 4 9 s i d ec a n c e r ( c y c l i n g l ) 8 3 7 n o m a lr e n a l ( p 5 3 ) 4 015 o 6180 2 6 7 n o m a lr e n a l ( c y c l i n g l ) 2 92 6 2 0 研究论文 t a b l e2 - 6t h e e x p r e s s i o no fp 5 3a n dc y c l i n gli nr e n a l 阳 性 例 数 p 5 3c y c h g l c y c l i n gi 与p 5 3 在肾组织中的表达 组织 肾癌 肾癌妻 正常隹 2 l 研究论文 讨论 肾癌是近年来泌尿系统常见的疾病，它的形成周期长，发病机制不清， 已知致癌因素多种多样。随着医疗技术水平的提高，肾癌病人的生存状况 有了很大改善，i 期。肾癌术后5 年生存率达9 0 以上，i i 期在7 4 9 6 ， 对于早期肾癌，手术治疗仍然是可能治愈肾癌的最佳选择8 。但是对于 i i i b i i i c i v 期患者肿瘤往往彻底切除困难，目前常用方法为介入治疗或 手术切除局部病灶及单发转移灶，术后常规生物反应调节剂治疗。但干扰 素总体反应率仅1 0 1 5 ；白介素2 总体反应率也不超过1 5 ( 个别有 反应的患者受益很大，治疗5 1 0 年仍有1 0 2 0 生存率) 8 。最近在我国 兴起的肿瘤靶向治疗，使晚期癌症患者看到了希望，但远期疗效还缺乏多 中心大样本的l 临床资料，且治疗费用昂贵，使它为广大患者受益的目的 受到限制。 lc y c l i n g l 与肾癌 1 9 8 3 年e v a n s ，e ta l 等在海胆卵细胞中发现细胞周期蛋白质，随后他 们分离并证明这些周期蛋白广泛存在于各种真核生物中5 。还证明细胞周 期蛋白为诱导细胞进入m 期所必需，各种生物之间的周期蛋白在功能上 有着广泛互补性。目前已知的周期蛋白达数十种之多。这些周期蛋白有的 只在g 1 期表达并只在g 1 期到s 期转化过程执行调节功能，称为g 1 期 蛋白；有的在间期表达和积累，到m 期表现出调节功能称为m 期周期蛋 白5 。各种周期蛋白之间均含有一段相当保守的周期蛋白框。m 期周期蛋 白分子的n 端含有一段由9 个氨基酸组成的特殊序列称为破坏框。g 1 期 周期蛋白分子中不含破坏框，其c 端含有一段与g 1 期周期蛋白更新有关 的特殊的p e s t 序列。破坏框主要参与由泛素介导的周期蛋白a 和b 的 降解。 1 9 9 3 年，t a m u r a 等人筛选大鼠成纤维细胞c d n a 文库时，发现一种 细胞周期蛋白样物质，其n 末端包含一个细胞周期蛋白盒，但无明显的 破坏框，因此将它命名为c y c l i n g n ，1 9 9 6 年，h o m e 等人对c y c l i n g 进 行研究中发现了与其同源的另一种细胞周期蛋白命名为c y c l i n g 2 ，原来 的c y c l i n g 则称为c y c l i n g l l 2 。c y c l i n g l 基因c 端有一段与人表皮生长因 子受体( e g f r ) 的酪氨酸磷酸化位点同源的序列，可能存在磷酸化位点， 研究论文 通过磷酸化或去磷酸化调节c y c l i n g l 的功能。人的c y c l i n g l 第6 个氨基 酸残基位置上多了一个苏氨酸残基1 3 ，第一个内含子中含有一个p 5 3 蛋白 的结合位点。 既往有研究表明c y c l i ng 1 在胰头癌骨髓瘤白血病乳癌等恶性肿瘤 中高表达，r e x i n g 是一种从莫洛尼( 氏) 鼠白血病病毒( m o m l v ) 中提取的 亲病灶性逆转录病毒载体，该病毒可以编码人类突变的c y c l i n g l ，并对 c y c l i n g l 进行负性调控。在它的双向性4 0 7 0 a 包膜蛋白中表达一种血管 假性血友病因子( v o nw i l l e b r a n df a c t o r ) 衍生出的胶原复合物。这种胶原 复合物可以指引r e x i n g 病毒载体到特定区域引起胶原重组，这种胶原重 组也发生在肿瘤基质中2 1 。它通过导入反义的或突变的c y c l i n g l ，使 c y c l i n g l c d k 结合区域消失，从而使正常的c y c l i ng l 活化受阻。晚期 胰腺癌中位生存期不超过6 个月，以往对晚期胰腺癌经典的的治疗方法吉 西他滨化疗，一旦出现吉西他滨无效，也意味着病人将无药可救。菲律宾 人曾尝试用r e x i n g 对晚期胰腺癌进行治疗，发现可以有效延长胰腺癌肝 转移病人的生存期。r e x i n g 在胰腺癌细胞株中表现为抗癌活性，向胰腺 癌肝转移的动物模型门静脉注射r e x i n g 后出现了转移瘤体的缩小。使胰 腺癌生长受到抑制2 2 * 因此，菲律宾的一些工作者将该药应用于临床被证 明可以延长晚期胰腺癌患者的生存期。曾有研究认为c y c l i n g l 在肾组织 中高表达，对于是否在肾癌组织比肾组织更高表达，是否可以通过抑制 c y c l i n g l 表达来治疗晚期肾癌? 未见相关报道。因此本试验首先研究了 p 5 3 与c y c l i n g l 在肾癌中的表达情况。 c y c l i n g l 在癌组织中的表达与恶性肿瘤的侵袭性有关。s k o t z k om 等 用逆转录病毒载体介导的反义c y c l i n g l ，诱导了癌细胞的凋亡，抑制人的 成骨肉瘤细胞的生长，首次证明c y c l i n g l 在成骨肉瘤细胞的生长中起重 要作用3 1 3 2 。后来，他们在裸鼠致瘤实验中也证实了这一观点。s m i t hm l 等研究发现在人的结肠癌细胞系r k o 中c y c l i n g l 的异位过度表达促进肿 瘤生长，用c y c l i n g l 的表达载体转染人的正常成纤维细胞，促进其克隆 性增生3 3 。j e n s e n m r 等发现在部分肝切除后短期内即有c y c l i n g l 蛋白的 中等程度稳步增加，延续到增殖高峰结束后c y c l i n g l 水平才逐渐下降。 由此他们推测在相同级别病变中c y c l i n g l 的表达强度越强，提示细胞的 增殖力越旺盛，侵袭力越强，预后越差，而c y c l i n g l 未表达的区域可能 研究论文 己经越过了增殖高峰期，处于缓慢增殖甚至是停滞阶段，其预后相对较好 9 。e n d o y 等克隆并分析了编码人c y c l i n g l 的c d n a 和基因组d n a ，并 在4 例血液系统肿瘤中检测到c y c l i n g l 基因定位附近有染色体易位，引 起c y c l i n g l 的表达异常，这可能与白血病的发生有关1 1 。此外，s m i t h 等 通过转染实验将c y c l i n g l 基因导入人大肠癌细胞和正常人成纤维细胞， 发现c y c l i n g l 基因表达可以促进细胞增殖，表现为体外培养形成集落变 大变多。s m i t h 等的研究还提示c y c l i n g l 表达可部分补救p 21 脚1 蛋白对 细胞增殖的抑制作用，说明c y c l i n g l 可能起到缓解或对抗p 5 3 蛋白介导 的生长抑制作用。上述报道均提示c y c l i n g l 的表达与肿瘤的发生有关。 本实验应用免疫组化法对5 0 余例肾癌手术标本进行染色，对p 5 3 与 c y c l i n g l 在肾肾透明细胞癌癌旁组织中表达情况及其相互关系进行研 究。实验发现c y c l i n g l 在肾组织中主要为细胞核表达，在正常肾组织癌 组织癌旁组织都有表达。癌组织及癌旁组织较正常组织高表达，差异有 统计学意义。用s p s s l 3 0 进行相关分析并做散点图发现p 5 3 与c y c l i n g l 在正常肾组织肾癌组织呈直线趋势，相关系数为正，因此推断二者呈正 相关；在癌旁组织两者相关系数为负数与以往研究结果不同，可能与样本 例数有关，另外取材方法可能在一定程度上影响检验结果。在正常肾组织 出现p 5 3 阳性表达与已往报道不尽相同，可能与试验试剂抗体纯度不够， 效价不高有关。我们的研究结果还显示p 5 3 与c y c l i n g l 蛋白在肾透明细 胞癌中表达与性别年龄分期无明显关系，这可能与样本构成比有关，由 于留取标本中男女比例相差较大，女病人较少，i i i 期肿瘤占的比例偏 低部分影响了统计结果的可靠性，因此与以往的结果存在差距。p 5 3 与 c y c l i n g l 呈线性相关，与既往报道的关于c y c l i n g l 为p 5 3 的下游效应器 的观点相一致。或许可以用其它方法，同时采用扩大样本例数的方法，能 够更进一步验证这一结果。上面已经提到，有人正寻求应用导入反义 c y c l i n g l r e x i n g 对晚期转移性胰腺癌或肝癌进行探索性治疗，虽然这一 方案存在很大争议，但是它毕竟使肿瘤患者看到了新的希望。如果 c y c l i n g l 在肾组织中高表达的结果得到其它方面的支持，那么我们期望 对它的研究能够为我们开启晚期肾癌治疗的新途径。目前有人已经对 c y c l i n g l 在肝脏肿瘤表达与预后关系方面进行了研究。在肾癌预后缺乏 组化方面