（法医学专业论文）苯巴比妥的法医毒物动力学研究.pdf

山西医科大学硕士学位论文 苯巴比妥的法医毒物动力学研究 摘要 目的 1 建立生物检材中苯巴比妥的气相色谱和气相色谱质谱检测方法； 2 建立苯巴比妥的毒物动力学、动态分布、死后分布、死后再分布动物模型； 3 研究苯巴比妥在大鼠体内的毒物动力学、动态分布、死后分布、死后再分布规律， 为苯巴比妥中毒( 死) 案件的法医学鉴定提供实验依据。 方法 1 样品的处理和气相色谱、气相色谱质谱检测：血、组织样品中加入内标物丙烯巴 比妥，经盐酸酸化后( p h = l - - 2 ) ，乙醚萃取，气相色谱质谱联用法定性，气相色谱内标 法定量检测苯巴比妥。 2 苯巴比妥在急性中毒大鼠体内的毒物动力学及动态分布的研究：雄性w i s t a r 大鼠 5 4 只，经灌胃匀速注入1 2 l d s o 苯巴比妥( 3 3 0 m g k g d ) ，给药后观察大鼠的中毒症状，分 别于给药后1 、5 、1 0 、1 5 、2 0 、3 0 、4 8 、7 2 、9 6 h 各处死6 只，迅速解剖动物，取心血、 心、肝、脾、肺、肾、脑等冷冻保存，酸性乙醚提取，气相色谱质谱法定性、气相色谱定 量检测其中苯巴比妥。 3 苯巴比妥在大鼠体内的死后分布研究：雄性w i s t a r 大鼠1 2 只，随机分l d 5 0 组和 2 l d s o 组，经灌胃匀速注入l d s o ( 0 6 6m g k g - 1 ) 和2 l d s o ( 1 3 2m g k 9 1 ) 苯巴比妥。观察 给药到死亡时的生命体征的变化以及中毒症状，待呼吸和心跳全部消失时，迅速解剖动物， 取心血、心、肝、脾、肺、肾、脑、胃等冷冻保存，酸性乙醚提取，气相色谱质谱法定性、 气相色谱定量检测苯巴比妥。 4 苯巴比妥在大鼠体内的死后再分布研究：雄性w i s t a r 大鼠5 4 只，以1 2 l d 5 0 ( 3 3 0 m g - k g 1 ) 灌胃，1 0 小时后处死，室温( 2 0 。c ) 条件下，于死后0 、2 、4 、8 、1 2 、2 4 、4 8 、 7 2 、9 6 小时取心血、心、肝、脾、肺、肾、大脑、肌肉，酸性乙醚提取，气相色谱质谱法 定性、气相色谱定量检测其中苯巴比妥。 5 统计学方法：采用s p s s l l 5 统计软件处理数据，结果以均数4 - 标准差( 石s ) 表 示，t 检验。 争士申 ：口木 1 气相色谱和气相色谱质谱检测：气相色谱质谱分析苯巴比妥的特征离子m z 为 2 0 4 、2 3 2 。心血中苯巴比妥气相色谱检测的回归方程、线性检测范围、相关系数、回收率、 最低检出浓度分别为y = 4 3 4 7 6 x + 0 8 1 6 8 ( ! x g m l 一) 、o 5 2 8 0 p g m l q 、0 9 9 5 5 、9 7 5 0 - 士2 o 、 0 5 1 t g m l ：肝组织中苯巴比妥气相色谱检测的回归方程、线性检测范围、相关系数、回 收率、最低检出浓度分别为y = 4 6 8 6 7 x + 0 0 8 8 4 ( “g g 1 ) 、0 5 2 8 0 9 9 g - i0 9 9 4 、9 8 5 士3 5 、 o 5 1 x g g 。 山西医科大学硕士学位论文 2 毒物动力学和动态分布：1 2 l d 5 0 剂量苯巴比妥在大鼠体内的毒物动力学符合口 服给药级动力学一室开放模型过程，各脏器中苯巴比妥的毒物动力学符合血管外 给药一级动力学一室开放模型。心血中达峰时间和消除半衰期除为7 3 9 h 和2 6 0 2 h ； 各脏器中达峰时间和消除半衰期为2 4 1 h 4 7 3 h 和8 5 9 h 2 0 9 1 h ；经口染毒后不同时间 大鼠体内苯巴比妥含量顺序为肝、心血、心和肺、其他组织，各脏器内苯巴比妥含量在5 h 左右达高峰，之后呈下降趋势。 3 死后分布：大鼠在苯巴比妥灌胃后活动明显减少，出现嗜睡症状，l d 5 0 灌胃组大 鼠7 2 4 - 4 - 3 1 7 h 死亡，2 l d 5 0 灌胃组大鼠1 3 3 + 0 2 5 h 死亡。各脏器组织苯巴比妥含量由高到 低分别为：o l d 5 0 组：胃( 1 2 6 1 3 4 士5 9 1 8 3 ) 心( 3 3 2 1 2 土7 0 8 7 ) 、脑( 2 8 9 8 1 士7 1 4 3 ) 、 肝( 2 8 4 6 8 - + 7 9 4 4 ) 、肺( 2 8 4 4 1 士6 7 4 7 ) 、脾( 2 7 2 5 6 士3 1 5 3 ) 、心血( 2 6 9 5 2 士4 4 6 2 ) 肾 ( 1 6 7 7 6 士4 3 7 2 ) ；( 至) 2 l d 5 0 组：胃( 1 6 4 9 2 1 士1 2 1 2 8 2 ) 肝( 3 5 7 8 3 - t - 1 3 8 6 7 ) 、脑 ( 3 2 3 1 9 士1 5 9 9 2 ) 、心( 3 1 0 9 5 + 1 3 0 7 3 ) 、心血( 3 0 9 9 3 士1 3 5 6 0 ) 、肺( 3 0 8 2 8 士1 3 4 4 8 ) 、脾 ( 2 9 9 7 7 - 4 - 1 0 4 5 8 ) 肾( 2 3 3 2 4 - 4 - 9 1 9 2 ) 。 4 死后再分布：大鼠在处死后9 6 小时内，在室温( 2 0 ) 条件下，死后2 4 小时的 心血、心、肺、肾、脑、肌的苯巴比妥含量与死亡当时含量相比明显升高( 卿0 5 ) ，而后 逐渐降低；死后2 小时肝、脾的苯巴比妥含量与死亡当时含量相比明显升高( p k i d n e y ( 1 5 6 6 1 + 4 3 7 2 ) ( 2 ) 2 l d s og r o u p ：s t o m a c h ( 1 6 4 9 2 1 + 1 2 1 2 8 2 ) l i v e r ( 3 5 7 8 3 + 1 3 8 6 7 ) ， b r a i n ( 3 2 3 1 9 4 - 1 5 9 9 2 ) ，h e a r t ( 3 1 0 9 5 4 - 1 3 0 7 3 ) ，b l o o d ( 3 0 9 9 3 + 1 3 5 6 0 ) ，l u n g ( 3 0 8 2 8 + 1 3 4 4 8 ) ， s p l e e n ( 2 9 9 7 7 4 - 1 0 4 5 8 ) k i d n e y ( 2 3 3 2 4 4 - 9 1 9 2 ) 4 p o s t m o r t e mr e d i s t r i b u t i o n ：a t2 0 。c ，t h ep h e n o b a r b i t a lc o n c e n t r a t i o n sd e t e c t e di nt h e h e a r t b l o o d ，h e a r t ，l i v e r , l u n g ，k i d n e y ，s p l e e n ，m u s c l e ，b r a i no fd i e dr a ta t2 4 0 u ra f t e rt h ed e a t h i ss i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a na t0h o u r ( f 0 0 5 ) ；t h ep h e n o b a r b i t a lc o n c e n t r a t i o nd e t e c t e di nt h e s p l e e n so fd i e dr a t sa t2h o u ra f t e rt h ed e a t hi ss i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a na t0h o u r ( 胙0 0 5 ) c o n c l u s i o n 1 t h eg c m sa n dg cm e t h o di sm o r es e l e c t i v e ，m o r es e n s i t i v e ，s i m p l e r , m o r ea c c u r a t e ， a n dc a nb ea p p l i e dn o to n l yt ot h ec l i n i c a ld i a g n o s i so fp h e n o b a r b i t a lp o i s o n i n g ，b u ta l s ot o f o r e n s i ci d e n t i f i c a t i o no f p h e n o b a r b i t a lp o i s o n i n gd e a t h 2 t od e v e l o pat o x i c o k i n e t i c s ，d y n a m i c d i s t r i b u t i o n ，p o s t m o r t e m d i s t r i b u t i o na n d p o s t m o r t e mr e d i s t r i b u t i o no fp h e n o b a r b i t a l ，w h i c ha p p l yt os t u d yo nt h ef o r e n s i ct o x i c o k i n e t i c s o f p h e n o b a r b i t a l 3 t h ef o r e n s i ct o x i c o k i n e t i c so fp h e n o b a r b i t a li nb l o o da n do r g a n sm e e ts i n g l e c o m p a r t m e n to p e nm o d e lw i t haf i r s to r d e rp r o c e s s e s t h eo r d e ro fp h e n o b a r b i t a li np o i s o n i n g r a t s ：l i v e r , h e a r tb l o o d ，h e a r t ，l u n g ，o t h e rt i s s u e t h ec o n c e n t r a t i o n so fp h e n o b a r b i t a lr e a c hp e a ka t 山西医科大学硕士学位论文 5 hi no r g a n s ，t h e nt h ec o n c e n t r a t i o nd e s c e n t 4 t h ec o n c e n t r a t i o no fp h e n o b a r b i t a li nb l o o dw a sl o w e rt h a ni no t h e ro r g a n se x c e p tf o r s p l e e na n dk i d n e y s o ，b e s i d e st h eb l o o d ，m o r eo r g a n so fp o i s o n i n gr a t ss h o u l db ec o l l e c t e df o r s a m p l e si nf o r e n s i ci d e n t i f i c a t i o no fp h e n o b a r b i t a lp o i s o n i n gd e a t h 5 p o s t m o r t e mr e d i s t r i b u t i o nt o o kp l a c e t h ec o n c e n 仃a t i o no fp h e n o b a r b i t a lt a k eo nt h e t e n d e n c yo fh i g hi no r g a n s k e y w o r d sp h e n o b a r b i t a l ，f o r e n s i ct o x i c o k i n e t i c s ，g c ，g c m s ，t o x i c o k i n e t i c s ，d y n a m i c d i s t r i b u t i o n ，p o s t m o r t e md i s t r i b u t i o n ，p o s t m o r t e mr e d i s t r i b u t i o n v 学位论文独仓i i ，住卢h 月 本人王勇声明，所呈交的学位论文系在导师负克明教授指导下本人独立完成的研究成 果。文中任何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义 上已属于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。 与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果： 1 、交回学校授予的学位证书； 2 、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报； 3 、本文按照学校规定的方式，对因不当取得学位给学校造成的名誉损害，进行公开 道歉。 4 、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。 论文作者签名： 学位论文版权使用授权书 本人完全了解山西医科大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家 有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山西医科 大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印 或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。 本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，署名单位 仍然为山西医科大学。 ( 保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者躲逸 指导教师签名：一一 日期：立盟年么也日 日期：涉雯年月日 ( 本声明的版权归山西医科大学所有，未经许可，任何单位及任何个人不得擅自使用) 山西医科大学硕士学位论文 - l j l - j 。 日l j吾 苯巴比妥( p h e n o b a r b i t a l ) 属于巴比妥类镇静催眠药，具有抗焦虑、镇静、催眠、抗 惊厥、抗癫痫及中枢性肌肉松驰作用。少量服用无明显中毒症状，但长期服用或过量服用 会出现极大毒副作用，主要是药物依赖性等。长期服用苯巴比妥还会形成精神依赖性，严 重的会出现戒断综合征【1 j 。 近年来，巴比妥类药物在治疗中的滥用现象越来越受到人们的关注。对此，药学专家 表示，巴比妥类与抗精神病药物应用超过“临界点”会造成严重药物不良反应【2 1 ，国内外都 有关于滥用苯巴比妥引起死亡的个案报道 3 - 9 1 。由此可见对苯巴比妥的法医毒物动力学研究 是非常必要的。 法医毒物动力学【l m l l l ( f o r e n s i ct o x i c o k i n e t i c s ) 是用法医毒理学和毒物动力学的理论和 技术研究机体、尸体、检材或自然环境中法医毒物的动力学变化过程的学科。其研究内容 包括法医毒物的毒物动力学、死后分布、动态分布、死后再分布、死后弥散、尸体、检材 和自然环境中分解动力学、检材和尸体中毒物产生情况等。研究可以全面的解决法医毒物 的毒物动力学、死后分布、动态分布、死后再分布、死后弥散、尸体、检材和自然环境中 分解动力学、检材和尸体中毒物产生情况等。目的为：提供法医毒物的毒物动力学模型、 方程和参数；提供法医毒物的死后分布、死后再分布、死后弥散、分解动力学、动态分 布、检材和尸体中毒物产生情况的资料和数据。其任务是为中毒案件的法医学鉴定提供毒 物动力学证据。其主要作用有：推断中毒死亡当时尸体内毒物浓度；推断肇事或中毒 当时机体内毒物浓度；死后腐败产生毒物与生前服毒的区别；生前服毒与死后染毒的 鉴别；毒物进入机体的时间、途径和方式的确定。高发率中毒毒物法医毒物动力学研究 已成为法医毒理学的热点和难点课题。在前期研究的基础上，本课题组主持了“十一五” 国家科技支撑计划课题“高发率中毒毒物动力学及其在死因判定中的应用研究 ( 2 0 0 7 b a k 2 6 8 0 5 ) ，对我国高发率中毒毒物法医毒物动力学进行研究。本研究属于该项 目的一部分。 目前国内外对苯巴比妥的研究多集中于药效学及药物动力学、作用机制及机体内苯巴 比妥的测定【1 2 。3 ，但有关苯巴比妥法医毒物动力学的研究报告较少【2 8 3 ，需进一步系统研 究。 本实验以大鼠建立动物模型，系统研究苯巴比妥的毒物动力学、动态分布、死后分布、 死后再分布规律，为苯巴比妥中毒( 死) 案件的法医学鉴定提供实验依据。 山西医科大学硬= 鹋啦论文 本研究主要目的： 1 建立生物检材中苯巴比妥的气相色谱和气质检测方法； 2 建立苯巴比妥的毒物动力学和动态分布、死后分布、死后再分布的动物模型； 3 研究苯巴比妥在大鼠体内的毒物动力学和动态分布、死后分布、死后再分布规律， 为苯巴比妥中毒和死亡案件的法医学鉴定提供实验资料。 本研究分四部分： 第一部分生物检材中苯巴比妥的气相色谱和气质检测研究； 第二部分苯巴比妥在大鼠体内的毒物动力学及动态分布研究； 第三部分苯巴比妥在大鼠体内的死后分布研究； 第四部分苯巴比妥在大鼠体内的死后再分布研究。 山西医科大学硕士学位论文 第一部分生物检材中苯巴比妥的气相色谱和气质检测研究 苯巴比妥( p h e n o b a r b i t a l ) 又称鲁米那( 1 u m i n a l ) ，属于长效巴比妥类镇静催眠药，具 有抗焦虑、镇静、催眠、抗惊厥、抗癫痫及中枢性肌肉松弛作用，临床应用较广，用量超 过t c 临界点，会造成严重药物不良反应或死亡，也有自杀和他杀的报道脚，临床和法医工作 中常需快速定性、定量检测血和其他生物检材中苯巴比妥。已报告的苯巴比妥的检测方法 有h p l c 法、h p l c m s l 3 2 l 、电位双点滴定澍3 3 1 、二次微分简易示波伏安法【3 4 1 和g c 法【3 5 】， 但生物组织中苯巴比妥的检测方法报道较少【3 6 1 。本文建立生物检材中苯巴比妥的气相色谱 和气相色谱质谱检测方法【3 7 1 可应用于临床苯巴比妥中毒检验诊断和苯巴比妥中毒( 死) 的法医学鉴定。 1材料与方法 1 1材料 1 1 1 实验动物 w i s t a r 大鼠，6 只，雄性，2 0 0 士1 0 9 ，河北省实验动物中心提供，实验前隔夜禁食。 1 1 2 试剂 苯巴比妥对照品购于公安部，苯巴比妥片( 上海金山制药有限公司，【批准文字】国药 准字h 3 1 0 2 1 6 1 0 ) ；1 0 盐酸溶液；丙烯巴比妥( 内标液) 配制成1 0m g m l 1 的乙醇储备 液，置冰箱保存；其它试剂均为分析纯。 1 1 3 仪器 t r a c e g c & d s q 气相色谱质谱联用仪，美匡i t h e r m of i n n i g a n 公司；t r a c e2 0 0 0g c 气相色谱仪，美国t h e r m of i n n i g a n 公司。 气相色谱质谱联用( f i n n i g a n ) 条件：d b 5 毛细管柱( 3 0 m x 0 2 5 m x 0 2 5 p m ) ，e i 源 7 0 e v ；质量范围：5 0 - 4 5 5 0 ，柱温1 3 0 。c ，l m i n ，叶1 0 。c m i n - - , 2 4 0 。c ，2 m i r a 离子源温度： 2 0 0 。c ，传输线温度：2 5 0 。c ，载气：h e1 5m l m i n 1 。 气相色谱( f i n n i g a n ) 条件：d b 一5 毛细管柱( 3 0 m x 0 2 5 m m x 0 2 5 9 i n ) ，柱温1 3 0 。c ， 1 m i n 一1 0 。c m i n - - * 2 4 0 。c ，2 m i r a 检测器：3 0 0 。c ，空气6 0 k p a ，氢气2 3k p a ，载气n 2 1 5 m l m i n ，n p d 检测器。 1 2 方法 1 2 1 染毒和样品采集 w i s t a r 大鼠，6 只，雄性，经灌胃匀速注入i 2 l d s o 苯巴比妥( 3 3 0 m g k g 。1 ) ，给药后观 察大鼠的中毒症状，5 d , 时立即处死，取，f i , 血、心、肝、脾、肺、肾、脑，按下述方法条 件提取，检测其中苯巴比妥含量。 1 2 2 样品的处理和检测 取固体检材1 9 或血l m l ，加蒸馏水l m l ，加入内标液2 0 9 l ，振荡，固性检材超声细 胞粉碎( j y d - 6 5 0 l 智能型) 匀浆3 r a i n ，1 0 h c i 调p h = l 2 ，振荡摇匀，加入5 m l 乙醚， 山西医科大学硕士学位论文 振荡1 5m i n ，1 8 0 0r r a i n 离心1 0r a i n ，将上清液移入另一干净且干燥试管中，重复萃取一 次。4 0 恒温水浴中挥干，2 0 皿无水乙醇定容，取1 皿进样检测，利用保留时间结合特 征离子峰( 气质联用) 定性，内标法和工作曲线法( 气相色谱) 定量【3 7 郴】。 1 3 统计方法 实验所得数据用均数标准差( x j ) 表示，各组数据用s p s s1 1 5 软件进行t 检验。 2 结果 2 1 气相色谱图、质谱图 气相色谱、气质联用检测，苯巴比妥和内标物可完全分离，峰形对称，溶剂和脏器提 取内源性杂质对苯巴比妥和丙烯巴比妥无干扰。气相色谱、气相色谱质谱图。见图1 l o 。 t l。1 。，。一一。 图1 空白肝脏气相色谱图 f i 9 1 g cc h r o m a t o g r a mo f b l a n kl i v e r 图3 染毒大鼠肝脏中苯巴比妥气相色谱图 f i 9 3 g cc h r o m a t o g r a mo fp h e n o b a r b i t a li n l i v e ro fp o i s o n e dr a t i a 珥 。- ，帕i ，。，_ ，。， 图2 空白肝脏添加苯巴比妥气相色谱图 f i 醇g cc h r o m a t o g r a mo fp h e n o b a r b i t a l a d d e di nb l a n kl i v e r 图4 染毒大鼠肝脏中苯巴比妥总离子流色谱图 f i 9 4 g c m sc h r o m a t o g r a mo fp h e n o b a r b i t a li n l i v e ro fp o i s o n e dr a t 4 山西医科大学硕士学位论文 图5 染毒大鼠肝脏中苯巴比妥质谱图 f i 9 5 f u l l - s c a nm a s ss p e c t r ao f p h e n o b a f b i m li nl i v e ro fp o i s o n e dm t 图6 染毒大鼠肝脏中添加内标物丙烯巴比妥质谱图 f i 9 6 f u l l - s c a nm a s ss p e c t r ao fa l l o b a r b i t a la d d e di n l i v e ro fp o i s o n e dr a t 图7 染毒大鼠心血中苯巴比妥的总离子流色谱图 f i 9 7 g c - m sc h r o m a t o g r a mo fp h e n o b a r b i t a li nh e a r t b l o o do f p o i s o n e dr a t 誊亨 l 、。一j - p 幽孔i “ 汀h 扎。ti ：f 小a _ 川i t h - 2 ，- h h - - m 图9 苯巴比妥的标准质谱图 f i 9 9 f u l l - s c a l lm a s ss p e c t r a a n dc h e m i c a lo fp h e n o b a r b i m l 5 ：二= = ：酱? “ 斗- 一 ；翱jj m ：工。 图8 染毒大鼠, 6 a nq b 苯巴比妥质谱图 f i 9 8 f u l l - s c a nm a s ss p e c t r ao fp h e n o b a r b i m l i nh e a r tb l o o do fp o i s o n e dr a t 抖c ，j _ i c i 图i o 丙烯巴比妥标准质谱图 f i g l0 f u l l s c a nm a s ss p e c t r a a n dc h e m i c a lo fa l l o b a r b i t a l 山西医科大学硕士学位论文 2 2 响应曲线和精密度 取苯巴比妥标准液( 1m g m l d ) ，用乙醇将母液稀释成4 0 0 、3 0 0 、2 0 0 、1 6 0 、8 0 、 4 0 、2 0 、1 0 t g m l “的标准溶液系列。分别取1 p l 标准溶液，依上述气相色谱条件下进样。 以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作线性回归，得其回归方程为y = 7 5 1 7 5 x 1 5 9 1 8 7 ( f o 9 9 7 9 ) ，两者之间线性关系良好，经t 检验有统计学意义( 尸 3 ) 。 取浓度为o 5 、1 o 、0 0 “g p l 。1 的三种标准溶液在上述气相色谱条件下每样品每日测定5 次，连续测定3 日，其日内、日间保留时间为( 1 0 4 5 士0 0 1 3 ) m i n 、 ( 1 0 4 5 + 0 2 7 ) m i n 。 2 3 标准曲线 取空白大鼠肝脏1 9 和血液1m l 分别加入苯巴比妥标准溶液及丙烯巴比妥溶液，配制 成含有苯巴比妥0 5 、l 、2 、4 、8 、1 0 、1 2 、1 6 、1 8 、2 0 、2 4 、3 2 烬g - l ( l g m l d ) 和丙 烯巴比妥2 0 g g - 1 的系列样品，按1 2 2 项下方法提取并检测。以苯巴比妥浓度( 1 , t g g ， p g m l 。1 ) 为横坐标( x ) ，苯巴比妥与内标丙烯巴比妥的峰面积之比为纵坐标( y ) 进行 线性回归，所得肝脏线性回归方程y = o 0 2 1 2 x 0 0 0 0 4 ，r 2 = 0 9 9 4 ；血液线性回归方程 y = 4 3 4 7 6 x + 0 8 1 7 ，r 2 = 0 9 9 5 5 ；结果表明，肝和血液中苯巴比妥在o 1 3 2 p g g _ 范围内线 性关系良好。工作曲线见图1 1 1 2 。 图11 肝脏中苯巴比妥检测工作曲线 f i g l1 w o r k i n gc l l r v eo fp h e n o b a r b i t a l d e t e c t e di nl i v e r 图1 2 血液中苯巴比妥检测工作曲线 f i g l 2 w o r k i n gc u r v eo f p h e n o b a r b i t a l d e t e c t e di nb l o o d 2 4 提取回收率 取肝组织1 9 或，6 , 1 f 1 1 m l ，各9 份，分别加入标准品4 p g ( 3 份) 、8 p g ( 3 份) 、2 0 嵋( 3 份) ，按上述方法提取检测，标准曲线计算回收率。回收率和变异系数分别为： 9 7 6 + 0 6 5 - 1 0 3 1 + 1 2 4 ( ) 和4 6 5 6 5 3 ( ) 。 2 5 染毒大鼠体内苯巴比妥检测 染毒大鼠心血和各脏器中均检出苯巴比妥( 图3 1 0 ) 。大鼠心血、心、肝、脾、肺、 肾、脑的含量依次为：2 4 6 3 9 2 6 4 3 、2 0 4 9 6 1 3 0 3 、2 5 3 8 2 7 7 3 、1 7 5 7 4 8 0 7 、 2 2 1 6 4 - 1 - - 1 1 3 8 、1 5 5 9 4 4 - 1 2 8 7 、1 7 0 1 5 1 7 0 5 ( “g g - i 或“g r n l 叫) 。 6 山西医科大学硕士学位论文 第二部分苯巴比妥在大鼠体内的毒物动力学和动态分布研究 近年来，巴比妥类药物因治疗疾病而导致的滥用现象越来越受到人们的关注。对此， 研究人员认为，巴比妥类药与抗精神病药物应用超过“临界点 会造成严重药物不良反应 引起死亡【2 3 1 ，国内外也有自杀或他杀的报道 4 - 5 1 ，目前对苯巴比妥的研究主要是其临床 治疗浓度的监测【1 3 j 4 1 ，未见其毒物动力学和动态分布研究。本实验建立苯巴比妥在大鼠体 内的毒物动力学及动态分布动物模型，研究苯巴比妥在大鼠体内的毒物动力学和动态分布 规律，为苯巴比妥中毒( 死) 案件法医学鉴定提供实验依据。 1 材料与方法 1 1 实验动物 w i s t a r 大鼠，5 4 只，雄性，2 0 0 - a ：1 0 9 ，体重2 0 0 + 2 0 9 ，随机分为9 组，每组6 只，实验前 隔夜禁食。 1 2 试剂同第一部分1 1 2 。 1 3 仪器同第一部分1 1 3 。 1 4 大鼠分组、染毒与检材采取 w i s t a r 大鼠，5 4 只，雄性，1 2 l d s o ( 3 3 0m g k g 以) 苯m , l t , 妥灌胃，分别于给药后1 、 5 、1 0 、1 5 、2 0 、3 0 、4 8 、7 2 、9 6 h 各处死大鼠6 只，并迅速解剖，取心、肝、肺、脾、肾、 脑，- - 2 0 4 c 保存待检。 1 5 样品的处理和检测同第一部分1 2 2 。 1 6 统计方法 同第一部分1 3 。 2 结果 2 1 中毒症状 1 2 l d 5 0 剂量苯巴比妥灌胃大鼠2 0 m i n 后出现中毒症状，主要表现为呼吸变浅变慢，心 跳缓慢，脉搏细弱，甚至出现深昏迷和反射消失，4 8 h 左右大鼠开始慢慢苏醒，逐渐恢复 正常。 2 2g c 和g c m s 检测 同第一部分2 1 。 2 3 动态分布 染毒后不同时间大鼠体内苯巴比妥的含量见表1 。 山西医科大学硕士学位论文 表11 2 l d 5 0 剂量苯巴比妥灌胃大鼠的体内苯巴比妥( a g g 。1 或l a g m l ，n = 6 ) t a b l e1 t h ed y n a m i cd i s t r i b u t i o no f p h e n o b a r b i t a li nr a t s 染毒大鼠体内各脏器中苯巴比妥浓度变化见图1 3 1 9 。 图1 3 染毒大鼠心血中苯巴比妥浓度变化 f i g l3 t h ec o n c e n t r a t i o nc h a n g e so f p h e n o b a r b i t a li nt h eh e a r tb l o o do fp o i s o n e dr a t s 8 图1 4 染毒大鼠心脏中苯巴比妥浓度变化 f i g l4 t h ec o n c e n t r a t i o nc h a n g e so f p h e n o b a r b i t a li nt h eh e a r to fp o i s o n e dr a t s 山西医科大学硕士学位论文 图1 5 染毒大鼠肝脏中苯巴比妥浓度变化 f i g l 5 t h ec o n c e n t r a t i o nc h a n g e so f p h e n o b a r b i m li nt h el i v e ro fp o i s o n e dr a t s 图1 7 染毒大鼠肺脏中苯巴比妥浓度变化 f i g l7 t h ec o n c e n t r a t i o nc h a n g e so f p h e n o b a r b i t a li nt h el u n go fp o i s o n e dr a t s 图1 9 染毒大鼠脑中苯巴比妥浓度变化 f i g l9 t h ec o n c e n t r a t i o nc h a n g e so f p h e n o b a r b i t a li nt h eb r a i no fp o i s o n e dr a t s 9 图1 6 染毒大鼠脾脏中苯巴比妥浓度变化 f i g l6 t h ec o n c e n t r m i o nc h a n g e so f p h e n o b a r b i m li nt h es p l e e no f p o i s o n e dr a t s 图1 8 染毒大鼠肾脏中苯巴比妥浓度变化 f i g l8 t h ec o n c e n t r a t i o nc h a n g e so f p h e n o b a r b i t a li nt h ek i d n e yo fp o i s o n e dr a t s 染毒后不同时间大鼠体内各脏器中苯巴比妥的分布见图2 0 。2 8 。 图2 0 染毒后l h 大鼠体内苯巴比妥的含量 f i 9 2 0 t h ec o n c e n t r a t i o no fp h e n o b a r b i t a li n o r g a n sa f t e rt h ea d m i n i s t r a t i o nf o rlh 图2 2 染毒后1 0 h 大鼠体内苯巴比妥的含量 f i 薛2 t h ec o n c e n t r a t i o no fp h e n o b a r b i t a li n o r g a n sa f t e rt h ea d m i n i s t r a t i o nf o rlo h 图2 4 染毒后2 0 h 大鼠体内苯巴比妥的含量 f i 9 2 4 t h ec o n c e n t r a t i o no fp h e n o b a r b i t a li n o r g a n sa f t e rt h ea d m i n i s t r a t i o nf o r2 0 h 1 0 图2 1 染毒后5 h 大鼠体内苯巴比妥的含量 f i 蛇1 t h ec o n c e n t r a t i o no fp h e n o b a r b i t a li n o r g a n sa f t e rt h ea d m i n i s t r a t i o nf o r5 h 图2 3 染毒后1 5 h 大鼠体内苯巴比妥的含量 f i 9 2 3 t h ec o n c e n t r a t i o no fp h e n o b a r b i t a li n o r g a n sa f t e rt h ea d m i n i s t r a t i o nf o r15 h 图2 5 染毒后3 0 h 大鼠体内苯巴比妥的含量 f i 9 2 5 t h ec o n c e n t r a t i o no fp h e n o b a r b i t a li n o r g a n sa f t e rt h ea d m i n i s t r a t i o nf o r3 0 h 山西医科大学硕士学位论文 图2 6 染毒后4 8 h 大鼠体内苯巴比妥的含量 f i 9 2 6 t h ec o n c e n t r a t i o no fp h e n o b a r b i t a li n o r g a n sa f t e rt h ea d m i n i s t r a t i o nf o r4 8 h 图2 8 染毒后9 6 h 大鼠体内苯巴比妥的含量 f i 薛8 t h ec o n c e n t r a t i o no fp h e n o b a r b i t a li n o r g a n sa f t e rt h ea d m i n i s t r a t i o nf o r9 6 h 图2 7 染毒后7 2 h 大鼠体内苯巴比妥的含量 f i 醇7 t h ec o n c e n t r a t i o n o fp h e n o b a r b i t a li n o r g a n sa f t e rt h ea d m i n i s t r a t i o nf o r7 2 h 2 4 毒物代谢动力学参数及c t 曲线 将心血平均药物浓度时间数据采用w i n o n l i n 软件处理，苯巴比妥毒代动力学过程符合 一级动力学一室开放模型。动力学方程为c t = 2 1 7 5 2 e 0 4 4 2 5 t ；消除速率常数( k l o ) ：0 4 4 2 5 ； 表观分布容积( v ) ：0 8 l k g 一；峰浓度( c r n a x ) ：2 1 7 5 2 p g m l 。达峰时间( t m a x ) ： 7 3 9h 。参数见表2 ，模拟的毒代动力学c t 曲线见图2 9 3 5 。 山西医科大学硬士学位论文 表2 毒物动力学参数 t a b2t o x i c o k i n e t i c sp a r a m e t e r s 注：t 。一达峰时间；g 。一达峰浓度；t i ，。广吸收半衰期；t j 。l o _ 由中央室消除半衰期 2 5 0 2 5 0 l 1 o u 广 。 ， 卜、 01 02 0 4 05 0 6 07 0 自m o b s e r v p ，删 图2 9 心血中平均苯比妥浓度时间曲线 f i 9 2 9 c o n c e n t r a t i o n - t i m ec b d g eo f p h e n o b a r b i m li nh e a r tb l o o d 1 2 蜘 撕 1 5 0 i 1 0 0 0 i o 气 v 、 o 01 02 0 4 05 0 7 08 0 g o t 0 0 h m o b 一p r l l d l e l 图3 0 心脏中平均苯巴比妥浓度时间曲线 f i 9 3 0 c o n c e n t r a t i o n t i m ec u l n eo f p h e n o b a r b i t a li nh e a r t l 4 口 、 01 0 卸3 04 0 5 0 7 0 帅 o b s e r v p r d h 图3 1 肝中平均苯巴比妥浓度时间曲线 f i 9 31 c o n c e n t r a t i o n - t i m ec h i v eo f p h e n o b a r b i t a li nl i v e r 1 5 0 1 5 0 o 、 | 5 v 。 o 、 01 0 卸柏7 0 9 01 曲m 4 1 - o b m p 嘲 图3 3 肺中平均苯巴比妥浓度时间曲线 f i 醪3 c o n c e n t r a t i o n - t i m e c u r v eo f p h e n o b a r b i t a li nl u n g 1 | o | 、 o 、 o 1 0 2 03 0 4 05 0 6 07 0 0 0l o o l i m e 争o b e 一 一p 州h 图3 5 脑中平均苯巴比妥浓度时间曲线 f i 9 3 5 c o n c e n t r a t i o n t i m ec u r v eo f p h e n o b a r b i t a li nb r a i n 1 3 、 | 、 j 、 。 、 止 0 1 0 加柏的7 0 的9 01 劬 t l - o h h t v p 怕西吐 图3 2 脾中平均苯巴比妥浓度时间曲线 f i 9 3 2 c o n c e n t r a t i o n - t i m e c u r v eo f p h e n o b a r b i t a li ns p l e e n ；j 、 j 、 o o 、 1 ot 02 0 7 0 幻1 帅 4 1 - o t n 1 n p 喇