（内科学专业论文）慢性肾脏病患者甲状旁腺激素水平对肾性贫血的影响.pdfVIP

目录 中文摘要1 英文摘要一4 研究论文慢性。肾脏病患者甲状旁腺激素水平对肾性贫血的影响 前言7日| j 舌 材料与方法一7 结果1 2二：日；1 c l 二 附图1 4 附表1 8 讨论2 2 结论2 3 参考文献2 3 综述慢性肾脏病高甲状旁腺激素血症对肾性贫血的影响2 5 致谢3 5 个人简历3 6 中文摘要 慢性肾脏病患者甲状旁腺激素水平 对肾性贫血的影响 摘要 目的：通过对慢性肾脏病( c h r o n i ck i d n e yd i s e a s e ，c k d ) 患者甲状 旁腺激素( p a r a t h y r o i dh o r m o n ep t h ) 水平和红细胞内钙离子浓度 ( i n t r a c e l l u l a rc a l c i u m c a 2 + i ) 及膜表面磷脂酰丝氨酸 ( p h o s p h a t i d y l s e r i n ep s ) 外露水平的检测，探讨c k d 患者p t h 水平升 高致红细胞p s 外翻的影响的机制。以期为慢性肾脏病患者肾性贫血的发 生机制和防治提供新的视点。 方法：实验组：2 0 0 9 ，1 1 2 0 1 0 ，5 月间在河北医科大学第二医院肾内 科住院的初治c k d 患者7 5 例，其中男4 0 例，女3 5 例，平均年龄4 5 5 岁( 2 3 6 8 岁) ，根据c k d e p i 公式评估的肾小球滤过率( e g r f ) 将其分为c k d 卜2 期组， c k d 3 4 期组和c k d 5 期组。病因：c k d 卜2 期患者2 5 例( 男1 3 例，女1 2 例) 为 经肾活检证实初治的轻度系膜增生性肾炎或肾小球轻微病变，平均年龄 4 1 6 岁( 3 5 5 3 岁) ，c k d 3 4 期和c k d 5 期患者各2 5 例( 男2 7 例，女2 3 例) 为 初治的慢性肾衰竭，平均年龄4 3 9 岁( 2 3 6 8 岁) ，慢性肾衰竭的基础病因 为慢性肾小球肾炎( 4 1 例) 和高血压肾损害( 9 例) 。对照组：河北医科大 学第二医院同期体检证实血、尿常规，肝、肾功能，电解质，血脂均正常 的健康成人3 0 例( 男、女各1 5 例) ，平均年龄4 0 3 5 岁( 2 5 6 1 岁) 。入组标 准：2 个月内饮食结构稳定、使用钙离子通道拮抗剂种类和剂量稳定：无 感染、应激；3 个月内未使用过促红细胞生成素、糖皮质激素、维生素d 及其类似物、静脉铁剂或血管紧张素转换酶抑制剂类药物；半年内无输血 史或出血史。除外急性肾损伤、原发性甲状旁腺功能亢进、血液病及其它 慢性疾病贫血者。免疫发光法检测全段甲状旁腺激素( i p t h ) ；流式细胞 术检测红细胞膜表面磷脂酰丝氨酸( p s ) 外翻水平及红细胞内钙离子浓度 ( c a 2 + ；) 。并收集血红蛋白、血肌酐、血清白蛋白、血脂、血尿酸等临 床资料。采用s p s s l 3 0 软件进行数据处理及分析。计量数据用均数标准 差( z s ) 表示，组间比较根据资料是否正态分布及各组间是否方差齐 中文摘要 性分别选用o n e w a ya n o v a 检验和非参数检验，方差齐组间差异采用s n k 法。相关性分析按数据类型采用p e r s o n 相关分析。回归分析采用直线相关 分析及多元线性回归分析。尺o 0 5 为差异有统计学意义。 结果： 1 c k d 各期患者和对照组年龄、性别、体重指数( b o d ym a s si n d e xb m i ) 、 血胆固醇( t o t a lc h 0 1 e s t e r 0 1t c ) 、血甘油三酯( t r i g l y c e r i d et g ) 之间的差异无统计学意义( 尸均 0 0 5 ) 。c k d 3 5 期患者收缩压和舒张 压高于c k d 卜2 期和对照组。c k d 各期患者血浆白蛋白( a l b u m i na l b ) 略低于对照组，血尿酸( u r i ca c i du a ) 及2 4 小时尿蛋白排泄量高于 对照组，差异具有统计学意义( 尸均 0 0 5 ) 。 2 随着肾功能的减退p t h 、 c a 2 + ；及红细胞表面p s 外翻水平逐渐升高、 贫血逐渐加重，c k d 卜2 期h b 和h c t 分别由1 3 9 8 5 1 9 1 9 9 l 及 4 2 8 3 1 3 8 9 降至c k d 5 期8 1 5 9 1 8 7 4 9 l 及2 3 2 6 5 1 5 ，然而， p t h 、 c a 2 + ；和红细胞表面p s 外翻水平分别由c k d 卜2 期4 7 1 3 1 3 2 0 p g m 1 、3 3 4 o 7 0 及o 4 4 o 3 6 升至c k d 5 期4 1 1 1 l 1 1 5 o o p g m 1 、3 5 9 0 7 0 及1 2 4 0 2 9 。c k d 3 4 期及5 期患者明显高于 c k d 卜2 期和对照组，差异具有统计学意义( 尸均 o 0 5 ) ， c k d 5 期患者c a 水平明显低于其它各组，而p 水平及c a p 则明显高 于其它各组，差异具有统计学意义( 尸均 o 0 5 ) ，c a 水平由c k d 卜2 期2 3 6 o 1 7 姗o l l 降至c k d 5 期2 0 4 o 3 7m m 0 1 l ，p 水平及c a p 乘积则分别由c k d 卜2 期1 2 5 o 3 1 姗o l l 及2 8 6 o 7 6 升至 c k d 5 期2 1 8 0 5 3m m o l l 及4 4 9 1 1 6 。 4 c k d 3 4 期或5 期患者h b 与p t h 和红细胞表面p s 外翻水平负相关( ， = 一o 8 3 0 和一o 7 9 1 ，尸均 0 0 1 ) ；p t h 与 c a 2 + ：和红细胞表面p s 外翻 水平正相关( r = 0 8 8 2 和0 9 2 4 ，尸均 o 0 1 ) ，与血钙浓度负相关( ， = 一0 5 4 4 ，尺0 0 1 ) ；红细胞表面p s 外翻水平与 c a 2 + 。正相关( ， = 0 9 2 3 ，尺o 0 1 ) ，与血钙浓度无相关( ，= 一o 1 3 8 ，卢o 3 6 5 ) 。 5 c a 2 + ；( y ) 对p t h ( x ) 的直线回归方程为：y = 3 3 2 7 + 0 2 1 3 x ( f = 2 1 5 2 9 ， 尺0 0 5 ) ：红细胞表面p s 外翻水平( y ) 对p t h ( x ，) 及 c a 2 + ；( x ：) 的 2 中文摘要 结论：c k d 患者随着肾功能减退引起甲状旁腺激素水平升高致红细胞 内钙离子浓度增多，引起红细胞表面磷脂酰丝氨酸外露水平增加，红细胞 寿命缩短，加重肾性贫血。 关键词：慢性肾脏病；甲状旁腺激素；红细胞内钙离子；磷脂酰丝氨 酸；肾性贫血；流式细胞术 英文摘要 e f k c t so f p a r a t h y r o i dh o r m o n e o nr e n a la n e m i ai nt h ep a t i e n t s w i t hc h r o n i c “d n e yd i s e a s e a b s t r a c t o b j e c t i v e ：t i od e t e c tp 础y r o i dh o m o n e ( p 1 h ) ，e r y t h r o c y t e si n t r a c e l l u l a r c a l c i u m ( 【c 一十】i ) a n dp h o s p h a t i d y l s e r i n e ( p s ) e x p o s u r el e v e li 1 1t h ep a t i e n t s w i t hc h r o n i ck i d n e yd i s e a s e ( c k d ) ，t h u st o f i n do u tm em e c h a n i s mo f e l e v a t i n gp t h t oe r y t h r o c y t e sp h o s p h a t i d y l s e r i n ee x p o s u r e t h ep u 印o s eo f t h es t u d yi st op r o v i d en e wb a s i sf o rm e p a t h o g e n e s i sa n dp r e v e n t i o no fr e n a l a n e m i ai nt h ep a t i e n t sw i t hc k d m e t h o d s ：t h ee x p e r i m e n t a lg r o u p ：f r o mn o v2 0 0 9t om a y2 01o ，7 5c a s e s o fc h r o n i ck i d n e yd i s e a s e ( 4 0w o m e n ，35m e n ，m e a n a g e ，4 5 5y e a r s ，r a n g e ， 2 3 6 8 ) w e r er e c m i t e d b a s e do nc k d e p if o m l u l a ，a l lp a t i e n t sw e r ed i v i d e d i n t o3g r o u p ：s t a g ec k d l 2 ，s t a g ec k d 3 4a n ds t a g ec k d 5 t 1 1 ep a t i e n t si n s t a g ec k d l 2w e r e2 5c a s e so fm i l dm e s a n g i a lp r o l i f e r a t i v ea n d9 1 0 m e r u l 2 u r m i n o rl e s i o n s ( 1 2w o m e n ，1 3m e n ，m e a na g e ，4 1 6 y e a r s ，r a n g e ，3 5 5 3 ) d i a g n o s e db yr e n a lb i 叩s y ：t h ee t i o l o g yo fp a t i e n t so fs t a g ec k d 3 5 ( 2 3 w o m e n ， 3 7 m e n ， m e a n a g e ， 4 3 9 y e a r s ， r a n g e ， 2 3 6 8 ) w a sc h r o n i c g l o m e r u l o n 印h r i t i s ( 4 1 c a s e s ) ，h y p e r t e n s i v en e p h r o s c l e r o s i s t h ec o n t r o l 铲o u p ：n l eh e a l 哪v o l u n t e e r sa r ed e m o n s t r a t e db yp h y s i c a le x 锄i n a t i o n3o c a s e s ( 15w o m e n ，15m e n ) ，m e a na g e4 0 3 5y e a r s ，( r a n g e2 5 61 ) i n c l u s i o n c r i t e r i a ：d i e t a ：巧s t r u c t u r es 乞a b i l i t yi n2m o n m s ，够p e sa n dd o s e so fc a l c i u m c h a i u l e l a n t a g o n i s t ss t 乏l b i l i 劬 w i t h o u ti n f e c t i o na n d s 仃e s s ，吼u s e d e r ”h r o p o i e t i n ，g l u c o c o r t i c o i d ，v i t 锄i nd a n dm e i ra n a l o g u e s ，i r i t r a v e n o u si r o n s u p p l e m e 鹏 a n da n g i o t e n s i nc o n v e n i n ge n z y m ei n h i b i t o r si n3m o n t h s w i t h o u tb l o o dt r a n s 如s i o no rb l e e d i n gi n6m o n t h s a c u t ek i d n e y i n j u 吼 p r i m a d ，h y p e 印a r a t h ) ，r o i d i s m ，h e m o p a m ya n do m e rc h r o n i cd i s e a s e sa n e m i a p e r s o na r e e x c l u d e d i n t a c tp a r a 血y r o i dh o r m o n e ( i p t h ) w a sd e t e c t e db y i m m u n o c h e m i l u m i l l o m e t l y t h e e 巧t h r o c y t e s p h o s p h a t i d y l s e r i n e( p s ) 4 英文摘要 t r a c e u u l a rc a l c i u mc o n c e n t r a t i o n t h ec l i n i c a ld a t aw e r ec o l l e c t e d ( c a 2 + i ) w e r em e a s u r e db y s u c ha sh e m o g l o b i n ，s e r u m c r e a t i n i e ，s e r u ma l b u m i n ，b l o o dl i p i d ，s e m mu r i ca c i d b ys p s s13 os o r w a r e t op r o c e s sa n da n a l y s i st h ed a t a ( x士s ) m e a n sm e a s u r e m e n td a t a ，a c c o r d i n g t om en o m a l i 够a n dt h eh o m o g e n e i t yo fv a a n c ec h o o s eo n e w a ya n o v a t e s to rn o n p a r a m e t r i cs t a t i s t i c a lt e s t ，t h e 铲o u pd i 雎r e n c e sb ys n kt e s t t h e c o r r e l a t i o no fd a t eb yp e r s o nc o r r e l a t i o na n a l y s i sa c c o r d i n gt ot h ed a t at y p e t h e r e 铲e s s i o na n a l y s i sb yl i n e a rc o r r e l a t i o na n a l y s i sa n dm u l t i p l el i n e a r r e 舻e s s i o na n a l y s i s p o 0 5 ) t h es y s t 0 1 i cp r e s s u r ea n dd i a s t o l i cp r e s s u n ei ns t a g e s3 5 o fc k di sh i 曲e rt 1 1 a nm es t a g e s1 2o fc k da n dc o m r o l 铲o u p t h e s e r u ma 1 bi ns t a g e sl - 5o fc k di ss l i 曲t l y1 0 w e rt h a nc o n t r o lg r o u p ， h o w e v e r ，t h es e m mu aa n d2 4 - h o u ru r i n a r yp r o t e i l le x c r e t i o ni ns t a g e s l 一5o fc k di sh i g h e rt h a nc o n t r o lg r o u p ，t h ed i 艉r e n c ew a ss t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t ( p o 0 5 ) 2l e v e l so fs e m mp t h ， c 一十 ia n de r y t h r o c y t e sp se x p o s u r ei n c r e a s e d 铲a d u a l l yw i t hm ed e c l i n eo fr e n e l 缸1 c t i o ni ns t a g e s3 5 o fc k d ，w h o s e d i 凰r e n c e sw e r es i g n i f i c a j l tw 池c k d1 - 2 渤g e sa n dc o n t r o lg r o u p ，m e d i 髓r e n c ew a ss t a t i s t i c a l l ys i g n m c a n t ( p o 0 5 ) t h e1 e v e lo fs e l l j mc ai ns t a g eo f c k d5i ss i g n m c a n t1 0 w e rm a no t h e r 铲o u p s ，m e a n w h i l es e m mpa n d c a pp r o d u c ti ns 切瞎eo fc k d5i ss i g n i f i c a n th i 曲e rt h a no m e r 铲o u p s ， 5 英文摘要 t h ed i 舵r e n c ew a ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t 俨 o o1 ) t h e1 e v e l so fs e m m c ad e c r e a s e 行o m2 3 6 士o 1 7m m o l li ns t a g e so fc k dl - 2t o2 0 4 士o 3 7 m m o l li ns t a g eo fc k d5 h o w e v e r ，m el e v e l so fs e r u mpa n dc a p p r o d u c ti n c r e a s e 仔o m l 2 5 士o 31m m 0 1 la n d2 8 6 士o 7 6i ns t a g e so fc k d 1 2t o2 1 8 士o 5 3m m o l la n d4 4 9 士1 1 6m s t a g eo f c k d 5 4p e a r s o nc o r r e l a t i o na n a l y s i sr e v e a l e d ，d u r i n gc k d3 5s t a g e s ，h bw a s n e g a t i v e l yc o r r e l a t e dw i t hp t h a n de 巧t h r o c y t ep se x p o s u r er e s p e c t i v e l y ( 厂= o 8 3 0a n d o 7 9 1 ，pb o t h o 0 1 ) ；p t hw a s p o s i t i v e l yc o r r e l a t e dw i t l l c 一+ 】ia n de r y t h r o c y t ep se x p o s u r e ( 产o 8 8 2a n do 9 2 4 ，尸b o t h o o1 ) ， w h e r e a sn e g a t i v e l yc o r r e l a t e dw i mc ar e s p e c t i v e l y ( 厂= - o 5 4 4 ，p o o1 ) ； e r y t h r o c y t ep se x p o s u r ew a sp o s i t i v e l yc o r r e l a t e dw i t h c 一十】i ( ，= o 9 2 3 ， 尸 o 0 1 ) a n dn o tc o r r e l a t e dw i t hc a ( r = o 1 3 8 ，尸= o 3 6 5 ) 5t h el i n e a rr e g r e s s i o ne q u a t i o no f 【c 一十】i ( y ) f o rp t h ( x ) i sy = 3 3 2 7 + o 2l3 x ( f = 2 1 5 2 9 ，尸 0 0 5 ) ；t h em u l t i p l el i n e a rr e g r e s s i o ne q u a t i o no f e 拶d l r o c y t e sp se x p o s u r e ( y ) f o rp t h ( x 1 ) a n d c 一十 i ( x 2 ) i s y 。_ 一o 3 0 3 + o 2 8 3 x 2 + o 1 3 9 x 1 ( f = 6 5 9 ，尸 o 0 1 ) c o n c l u s i o n s ：t k o u 曲a d d i n gi n t r a c e l l u l a rc a l c i u m ，p t hc a nl e a dt oa n i n c r e a s eo fm ee r y t h r o c y t ep se x p o s u r e ，w h i c hw i l lc a u s et h eo c c u r r e n c eo f e r y t h r o c y t e sl i v e ss p a ns h o r t e n e d a sar e s u l t ，m er e n a la n e m i aw i l lb e c o m e m o r es e v e r e k e y w o r d s ：c h r o n i ck i 出1 e yd i s e a s e ；p a r a t h y r o i dh o m o n e ；i n t m c e l l u l a r c a l c i u m ；p h o s p h a t i d y l s e r i n e ；r e n a la n e m i a ；f l o wc y t o m e t 巧 6 研究论文 慢性肾脏病患者甲状旁腺激素水平 对肾性贫血的影响 _ l - j 一 刖舌 慢性肾脏病( c h r o n i ck i d n e yd is e a s ec k d ) 患者贫血的发生率为 4 0 一6 0 ，是影响患者住院率及死亡率的重要危险因素n 屯3 ，是c k d 患者 发生心血管并发症的独立预测因子3 。已知肾性贫血的主要原因是体内促 红细胞生成素( e p 0 ) 产生减少；然而，红细胞表面磷脂酰丝氨酸 ( p h o s p h a t i d y l s e r i n ep s ) 外翻增多导致红细胞寿命缩短而加重肾性贫 血的作用亦不容忽视h 1 。甲状旁腺激素( p a r a t h y r o i dh o r m o n ep t h ) 是c k d 重要的内源性毒素之一，其参与了肾性贫血的发生哺1 。目前尚不清楚c k d 患者高甲状旁腺激素血症在升高血清钙的同时是否也通过增加红细胞内 钙离子( c a 2 + ；) 浓度引起红细胞膜表面p s 外翻增多，致红细胞寿命缩短 而加重肾性贫血。本文探讨c k d 患者p t h 、红细胞内 c a 2 + ；浓度及红细胞 表面p s 外翻程度间的关系，旨为肾性贫血的发生机制和防治提供新的视 点。 材料与方法 l 研究对象 1 1 实验组 7 5 例均为2 0 0 9 ，1 1 至2 0 1 0 ，5 在河北医科大学第二医院肾内科住院 确诊的c k d 患者。根据c k d e p i 公式哺3 评估肾小球滤过率( e g f r ) ，顺序 入组c k d 卜2 期、3 4 期和非透析5 期患者各2 5 例。其中男4 0 例，女3 5 例，平均年龄4 5 5 岁( 2 3 6 8 岁) 。c l ( d l 二2 期患者为经肾活检证实初治的 轻度系膜增生性肾炎或肾小球轻微病变，c i 3 4 期和c i ( d5 期患者为初 治的慢性肾衰竭患者，其基础疾病为慢性肾小球肾炎( 4 1 例) 和高血压 肾损害( 9 例) 。 入组标准：2 个月内饮食结构稳定、使用钙离子通道拮抗剂种类和 研究论文 剂量稳定；无感染或应激；3 个月内未使用过促红细胞生成素、糖皮质 激素、维生素d 及其类似物、静脉铁剂或血管紧张素转换酶抑制剂类药物； 半年内无输血史或出血史。除外急性肾损伤、原发性甲状旁腺功能亢进、 血液病及其它慢性疾病贫血者。 1 2 对照组 河北医科大学第二医院同期体检证实血、尿常规，肝、肾功能，电解 质，血脂等均正常的健康成人3 0 例( 男、女各1 5 例) ，平均年龄4 0 3 5 岁( 2 5 6 1 岁) 。 2 实验方法 2 1 专人负责询问病史、查体及收集资料 包括年龄、性别、身高、体重、体重指数( b m 工：k g m 2 ) 、高血压病 程和程度、既往疾病史和化验指标。专人负责抽取受试者静脉血液样本( 入 院后第二天晨起8 ：o o 前，空腹) 化验血：h b 、h c t 、a 1 b 、c a 、p 、s c r 、 u a 、i p t h ，并在抽血后的4 0 m i n 内完成对 c a 2 + ；及红细胞表面p s 外翻水 平检测。 2 2 红细胞表面p s 外露水平检测 2 2 1 仪器设备 a n n e x i nv f i t c 凋亡检测试剂盒( 北京宝赛生物技术有限公司) 流式细胞仪( b d 公司) 。 2 2 2 原理 a n n e x i nv 具有易于结合到磷脂类如p s 的特性，可充当一敏感的探 针检测暴露在细胞膜表面的p s ，所以用标记了f i t c 的a n n e x i nv 作为荧 光探针，利用流式细胞仪检测细胞凋亡的发生；p i 是一种核酸染料，它 不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，p i 能透过细 胞膜而使细胞核红染。将a n n e x i nv 与p i 匹配使用，可以将凋亡早期的 细胞和晚期的细胞及死细胞区分开来。 2 2 3 操作步骤： 乙二胺四乙酸( e d t a ) 真空管内静脉血1 m l ，离心分离红细胞，并用 生理盐水悬浮清洗后将红细胞悬浮于合适的缓冲液中( 1 0 i i l m h e p e s n a ，p h 7 4 ，1 4 0 姗o l ln a c l 和5 舳0 1 lc a c l 2 ) ，调整待测细胞的浓 研究论文 度为5 1 0 5 1 1 0 6 个m l 。 取1 m l 细胞，1 0 0 0 r p m ，4 离心1 0 分钟，弃上清。 加入1 m l 冷的p b s ，轻轻震荡使细胞悬浮。 l o o o r p m ，4 离心1 0 分钟，弃上清。 重复步骤3 、4 两次。 对于贴壁细胞，先用胰酶消化，再用p b s 洗涤。 将细胞重悬于2 0 0 u 1 b i n d i n gb u f f e r 。 加入1 0 u l a n n e x i nv f i t c 和5 u 1 p i ，轻轻混匀，避光室温反应1 5 分钟。加入3 0 0 u l b i n d i n gb u f f e r ，在1 小时内上机检测。 流式细胞仪分析：流式细胞仪激发光波长用4 8 8 n i i l ，用一波长为 5 1 5 n m 的通带滤器检测f i t c 荧光，另一波长大于5 6 0 n m 的滤器检测p i 。 结果判断：凋亡细胞对所有用于细胞活性鉴定的染料如p i 有抗染 性，坏死细胞则不能。细胞膜有损伤的细胞的d n a 可被p i 着染产生红色 荧光，而细胞膜保持完好的细胞则不会有红色荧光产生。因此，在细胞凋 亡的早期p i 不会着染而没有红色荧光信号。正常活细胞与此相似。在双 变量流式细胞仪的散点图上，左下象限显示活细胞，为( f i t c 一p i 一) ：右 上象限是非活细胞，即坏死细胞，为( f i t c + p i + ) ；而右下象限为凋亡细 胞，显现( f i t c + p i 一) 。用流式细胞仪软件来计算a n n e x i n v 阳性的红细 胞比例及平均荧光强度。方法的变异系数是5 。 2 3 红细胞内 c a 2 + ；浓度检测 2 3 1 仪器设备 f u l o 一3 a m 免疫荧光检测试剂盒( 购自美国s ig i i l a 公司) ； e p i c s x li i 型流式细胞仪( 美国b e c k m a nc o u l t e r 公司) 。 2 3 2 原理 f 1 u o 一3 a m 是一种可以穿透细胞膜的荧光染料，是最常用的检测细 胞内钙离子浓度的荧光探针之一。分子式为c 。，h 。c ，：n 。0 。，分子量为 1 1 2 9 8 5 。f 1 u o 一3 a m 的荧光非常弱，其荧光不会随钙离子浓度升高而增 强。f l u o 一3a m 进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成f 1 u o 一3 ，从而被 滞留在细胞内。f l u o 一3 可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强 研究论文 的荧光，最大激发波长为5 0 6 n m ，最大发射波长为5 2 6 n m ，实际检测时推 荐使用的激发波长为4 8 8 n m 左右，发射波长为5 2 5 5 3 0 n m 。利用流式细胞 仪检测红细胞内钙离子浓度。 2 3 3 操作步骤： 红细胞提取：乙二胺四乙酸( e d t a ) 真空管内静脉血1 m 1 ，室温下 3 0 0 0 r m i n 离心5 m i n 后，弃血浆和白细胞层，红细胞1 0 倍容积的冷o 9 n a c l 溶液洗涤3 次，每次洗后均以3 0 0 0 r m i n 离心5 m i n ，弃上清液，吸取洗过的 沉积红细胞o 5 m l 。 负载f 1 u o 一3 a m ：将f 1 u o 一3 a m 溶于d m s 0 ，配成终浓度为2 衄0 1 l 的 储存液，分装，一7 0 冻存待用。取收获的红细胞置1 0i i l l 的离心管中，10 0 0 r m i n ，离心5m i n ，弃去培养液，p b s 洗涤2 次，使用无血清培养基重悬细 胞，加入5ulf 1 u o 一3 a m 储存液使其终浓度为5um 0 1 l ，3 7 避光孵育3 0 m i n ，后用p b s 洗涤3 遍，离心5m i n ，然后p b s 重悬细胞，并调整细胞浓度 至5 1 0 8l ，4 0 分钟内上流式细胞仪检测。 流式细胞仪检测：将负载f l u o 一3 a m 并调整好浓度的红细胞用流式 细胞仪前散射和侧散射光设置细胞二维点图，取数之点图x 轴取前向散射 ( f s c ) ，y 轴取侧向散射( s s c ) ：以组方图检测荧光强度，荧光f l u o 一3 强度为 x 轴，y 轴为细胞数，获取红细胞，激发波长用4 8 8n m ，发射波长用5 2 5n m 采集静息期荧光强度值3 0 s ，以荧光强度代表细胞内c a 2 + 浓度。最后通过 f a c s 软件分析得出反映c a 2 + 浓度变化的图谱。 红细胞内钙离子测定：荧光指数( f i ) = l o g h 刊“3 4 表示红细胞内钙 离子相对含量，其中x - m o d e 表示均值荧光强度。 2 4 全段甲状旁腺激素( i p t h ) 检测 2 4 1 仪器设备 西门子i 姗u l i t e l o o o 化学发光免疫分析仪及原厂配套试剂盒( 均有 西门子公司提供) 。 2 4 2 原理 双位点夹心免疫法，它采用两个抗人p t h 抗体，第一抗体是抗人p t h n 端( 卜3 4 氨基酸) 抗体，标记吖啶酯。第二抗体是一个生物素化的抗p t h c 端( 3 9 8 4 氨基酸) 抗体，链霉亲合素被共价偶联到顺磁乳胶颗粒上。当第 研究论文 一抗体与i p t h 的n 端结合后，通过第二抗体俘获，一起被固定在乳胶颗粒 上，依据结合在第一抗体上发光剂的量，测定i p t h 浓度。 2 4 3 操作步骤 标本采集：取受试者清晨空腹肘静脉血2 m l 于e d t a 抗凝管中( 由于 夜间i p t h 水平会升高，所以在早晨7 点以后采血，并且受试者禁食一夜 后) ，2 5 0 0 r m i n ，离心l o m i n ，收集血浆后测定。 上机检测：用西门子i 姗u l i t e l 0 0 0 全自动电化学发光免疫分析仪 定量检测血清i p t h 水平，试剂盒来自与仪器配套生产的公司，所有操作均 严格按照操作规程文件操作，机器直接自动测出定量结果。 2 5 血常规及生化指标检测 2 5 1 仪器设备 s y s m e xx s 一8 0 0i 全自动血液分析仪及原厂配套试剂盒； 日立7 6 0 0 全自动生化仪及原厂配套试剂盒。 2 5 2 操作步骤 。 标本采集：取受试者清晨空腹肘静脉血4 m l 于e d t a 抗凝管 中，1 5 0 0 r m i n ，离心1 0 m i n ，收集血浆后测定。 上机检测：s y s m e xx s 一8 0 0 i 全自动血液分析仪测定h b 、h c t ，日立 7 6 0 0 全自动生化仪检测c a 、p 、s c r 、u a 、a l b 等。试剂盒来自与仪器配 套生产的公司，所有操作均严格按照操作规程文件操作，机器直接自动测 出定量结果。 2 6 血压检测方法 测量安静平卧位右上臂血压，测量前至少休息5 分钟，排空小便。 袖带的气囊应环绕上臂的8 0 ，袖带下缘应在肘弯上2 5 厘米。将 听诊器胸件置于袖带下肘窝处肱动脉上，轻按使听诊器和皮肤全面接触。 测量时快速充气，气囊内压力达到使手腕桡动脉脉搏消失后再升高 3 0 毫米水银柱( 姗h g ) 然后缓慢放气，使水银柱以恒定的速度下降 ( 2 5 i n n 】h g 秒) 。以听到第1 个响声时水银柱凸面高度的刻度数值作为收 缩压；以声音消失时的读数为舒张压。若严重贫血等情况下，听诊声音不 消失，此时改定为以变音为舒张压。取得舒张压读数后，快速放气至零( o ) 水平。 研究论文 重复测2 次，每次相隔2 分钟。取2 次读数的平均值记录。如果2 次读数的收缩压或舒张压读数相差大于5 m m h g ，应再隔2 分钟，测第3 次， 然后取3 次读数的平均值。 3 诊断标准 3 1c k d 分期 1 期：其它肾损伤指针阳性，g f r 正常或9 0 m 1 m i n 1 7 3 m 2 ；2 期：其 它肾损伤指针阳性，g f r 轻度6 0 、8 9m 1 m i n 1 7 3 m 2 ；3 期：g f r3 0 5 9 m 1 m i n 1 7 3 m 2 ；4 期：g f r1 5 2 9m 1 m i n 1 7 3 m 2 ；5 期：肾衰竭g f r 1 5 m l m i n 1 7 3 m 2 或透析治疗。 肾小球滤过率( e g r f ) c k d e p i 公式3 ，( 见表1 ) 。e g f r 单位为 m 1 m i n 1 7 3 m 2 3 2 肾性贫血判定标准 绝经前女性和青春期前患者的血红蛋白( h b ) 1 1 0 9 l ( h c t 3 3 ) ； 成年男性和绝经后女性患者的h b 1 2 0 9 l ( h c t 3 7 ) h 3 。 4 统计分析 采用s p s s l 3 o 软件进行数据处理及分析。计量数据用均数标准差 ( x s ) 表示，组间比较根据资料是否正态分布及各组间是否方差齐性 分别选用o n e w a ya n o v a 检验和非参数检验，方差齐组间差异采用s n k 法， 方差不齐时使用t a m h a n e 法。相关性分析按数据类型采用p e r s o n 相关分析。 回归分析采用直线相关分析及多元线性回归分析。尺0 0 5 为差异有统计学 立、， 恩义。 结果 1 研究对象一般情况比较 c k d 各期患者和对照组年龄、性别、体重指数( b o d ym a s si n d e xb m 工) 、 血胆固醇( t o t a lc h 0 1 e s t e r o lt c ) 、血甘油三酯( t r i 9 1 y c e r i d et g ) 之 间的差异无统计学意义( 乃o 0 5 ) 。c k d 3 5 期患者收缩压和舒张压高于 c k d 卜2 期和对照组。c i ( d 各期患者血浆白蛋白( a 1 b u m i na 1 b ) 略低于对 照组，2 4 小时尿蛋白排泄量高于对照组( 尸均 o 0 5 ) ；而c k d 各期之间 研究论文 的差异均无统计学意义( 乃o 0 5 ) 。c k d 各期患者血尿酸( u r i ca c i du a ) 均高于对照组，并且随着肾功能逐渐减退而升高( 尺o 0 1 ) 。( 见表2 ) 。 2 检测结果 c k d 患者随着肾功能减退血红蛋白( h b ) 和红细胞压积( h c t ) 进 行性降低，贫血发生率明显增加( 4 3 5 8 一9 8 8 9 ) ，p t h 、 c a 2 + ；及红细 胞表面p s 外翻水平进行性升高，且各组间差异均有统计学意义( 尸均 8 0g f r = 1 4 1 ( s c r 0 9 ) 一1 2 0 9 ( o 9 9 3 ) 年龄 1 8 研究论文 t a b l e2g e