（茶学专业论文）荷叶黄酮类化合物的分离鉴定及药理作用研究.pdf

摘要 人类 “ 健康” 是当今世界研究的主题之一， 而肥胖病己成为全球首要的健康 障 碍。 随着人们对 化学减肥药物认 识的 不断加深。 天然 减肥药 物越来越受到中 外 科研学者所关注。荷叶是睡 莲属植物莲 ( n e t u m b o n u c if e r a g a e r m ) 的叶片， 在 全世界有着广泛的分布， 是一种既 是食品又是药品 的天然植物原料， 含有多 种药 理活性物质。 多 年的 临床经验表明: 荷叶具有很强的 降脂、 减肥功能， 其功效 因 子主要是 黄酮类物质。 目 前对荷叶 黄酮类化合物的 组分、 结构鉴定 和检测方 法方 面的研究很少， 荷叶降脂减肥的功效因子也还不十分清楚。 本论文旨在进一步探 明 荷叶黄酮 类化合物的组分， 并寻找 荷叶降脂减肥的 功效因 子。 其 研究结果为系 统、 合理、 全面的 开发和利用荷叶 黄酮类化 合物提供了 科学依 据， 对于全面开 发、 综合利用这一独特的天然植物资源具有非常重要的理论意义和实际应用价值。 实 验研究结果归纳如下: ( 1 ) 黄 酮类化合物的分离 鉴定 采用 d - 1 0 1 树脂和聚酞胺层析法、半制备液相色谱对荷叶的z醇一 水提取物 进行分离纯化， 从中 得到4 个化 合物， 通过u v , i r , m s , n m r( 包括h - n m r , c - n m r , d e p t 、 二 维) 等 光 谱 解 析 ， 鉴 定 为 : 金 丝 桃 昔 ( h y p e - i ) 、 异 榭 皮普 ( i s o q u e r c e t i n , i i ) 、 紫云英普( a s tr a g a g n , ii i ) , v a 皮素 ( q u e r c e t i n , i v ) , 其中紫云英昔为首次从荷叶中分离获得。 ( 2 ) 主要化学成分的研究 采用 hp l c - ms测得荷叶黄酮粗提物中含有 1 3种主要的化合物，并测得其 分子量，依次为 5 0 7 , 6 1 0 , 5 7 8 , 5 2 0 , 4 4 4 , 4 7 8 , 5 4 6 . 4 6 4 , 4 6 4 , 4 4 8 , 4 4 8 , 4 7 8 , 3 0 2 道尔顿。 其中 第8 , ， 、 1 1 和1 3 号物质为该 研究 分离得到的化 合物i 、 i i 、 i ii , n。 色谱条件: 美国 沃特斯 k r o m a s il c , : 柱 ( 2 5 0 m m * 4 .6 m m ) ; 流 动相: 水一 乙睛:用前经。 .4 5 u m微孔滤膜抽滤，超声脱气;流速为 1 . 0 ml/ mi n ;进样量 为2 0 u l ;柱 温3 0 c ;检测 波长3 6 0 m:梯 度洗脱. ( 3 )黄酮类物质降脂减肥作用的研究 采用体外酶 抑制法测定 荷叶 黄酮类物质对 淀粉酶、脂肪酶 活性的 抑制作 用， 结果表明: 荷叶黄酮粗提物对脂肪酶、 淀粉酶活性的抑制率随浓度的增大而增强， 当 浓度大于 。 . 7 m g / m l 后抑 制率的增强 变缓，组分 a和化合物i( 金丝 m m , h y p e r o n s ) 对 脂肪酶、 淀粉 酶活性的抑 制作用均不 如荷叶 黄酮粗提物的强， 这说 明荷叶具有降脂减肥功能可能并非是单一的化合物在起作用， 而是物质间的协同 作用 。 关键词:荷叶黄酮类化合物结构鉴定药理作用 ab s t r a c t h u m a n h e a l t h i s b e c o m i n g t h e m o s t i m p o rt a n t r e s e a r c h c e n t e r i n t h e w o r l d , h o w e v e r , c o r p u l e n c e i s t h e b ig g e s t t h re a t o f h u n m a n h e a lt h . w i t h b e i n g a w a r e o f t h e h a r m o f c h e m i c i a l d r u g , m o r e a n d m o r e p e o p l e s e a r c h f o r t h e n a t u r a l d r u g w h i c h h a s n o t s i d e e ff e c t s . t h e l e a f o f n e l u m b o n u c if e r a g a e r t n w h i c h i s c a l l e d l o t u s l e a f i s w i d e s p r e a d i n t h e w o r l d . l o t u s l e a f i s a k in d o f n a t u r a l p l a n t m a t e r i a l u s e d b o t h i n f o o d a n d m e d i c i n e f i e l d . t h e e x p e r i e n c e o f m a n y y e a r s s h o w s t h a t l o t u s l e a f h a s t h e f u n c t i o n o f w e i g h t r e d u c t i o n a n d d e c o m p r e s s i o n , a n d i t i s a k i n d o f n a t u r a l p l a n t w h i c h h a s b e tt e r d e v e l o p m e n t p o t e n t i a l . a t p r e s e n t , o n l y f e w r e s e a r c h e s a r e a b o u t t h e i s o la t i o n , p u r i f i c a t i o n a n d s t r u c t u r a l i d e n t i f i c a t i o n o f t h e fl a v o n o i d s i n l o t u s l e a f , a n d t h e f u n c t i o n a l i n g r e d i e n t s o f w e i g h t r e d u c t i o n a n d d e c o m p r e s s i o n w e r e n o t c l e a r . s o , m y r e s e a r c h f o c u s o n t h e s e a r e a s , a n d t h e r e s u l t s h a v e t h e v a l u e o f t h e o ry a n d p r a c t i s e i n a l l - a r o u n d d e v e l o p m e n t o f l o t u s l e a f . t h e m a i n re s u l t s w e r e a s f o l l o w s : 1 . s t u d i e s o n t h e s t r u c t u r a l i d e n t i fi c a t i o n o f fl a v o n o i d s i n l o t u s l e a f f o u r c o m p o u n d s i s o l a t e d fr o m w a t e r a n d e t h a n o l e x t r a c t s o f l o t u s l e a f b y c o l u m n c h r o m a t o g r a p h y w e re c h a r a c t e r i z e d a s h y p e r o n s ( i ) ， i s o q u e r c e t i n ( i i ) ， a s t r a g a li n ( i i i ) , q u e r c e t i n ( n ) b y u v , i r , m s , n m r ( i n c l u d e h - n m r , 1 3 c - n m r , d e p t , 2 d - n m r ) . a m o n g t h e s e c o m p o u n d s , i ii i s o l a t e d fr o m t h i s p l a n t i s t h e f i r s t t i me . 2 . s t u d i e s o n t h e ma i n c h e mi c a l c o n s t i t u e n t s wi t h h p l c - ms , i t w a s f o u n d t h a t t h e : w a t e r a n d e t h a n o l e x t r a c t s o f l o t u s l e a f h as t h i rt e e n m a i n c h e m i c a l c o n s t it u e n t s , a n d t h e m o l e c u l a r w e i g h t s o f t h e s e t h i rt e e n c o n s t i t u e n t s w e r e 5 0 7 , 6 1 0 ,5 7 8 , 5 2 0 ,4 9 4 ,4 7 8 ,5 9 6 , 4 6 4 ,4 6 4 , 4 4 8 , 4 4 8 ,4 7 8 ,3 0 2 . a m o n g t h e s e , t h e e i g h t h ,t h e n i n t h ,t h e e l e v e n t h a n d t h e t h i rt e e n t h c o m p o u n d s w e r e t h e c o m p o u n d i ， i i ,i ii , n w h i c h h a d b e e n i s o la t e d i n t h i s r e s e a r c h . 3 . s t u d i e s o n t h e w e i g h t r e d u c t i o n a n d d e c o m p r e s s i o n o f t h e fl a v o n i o d s i n l o t u s l e a f d i ff e r e n t i a l s p e c t r o p h o t o m e t ry w as u s e d t o s t u d y t h e i n h i b i t i n g e ff e c t s o f t h e fl a v o n o i d s i n l o t u s l e a f o n a m y l a s e a n d l i p a s e . t h e r e s u l t s s h o w : t h e i n h i b it i n g e ff e c t 1 1 o f t h e fl a v o n o i d s i n l o t u s l e a f o n a m y l a s i s m o rel i p a s e ; t h e i n h i b i t i n g e ff e c t o f t h e w a t e r a n d e t h a n o l e x t r a c t s o f l o t u s l e a f i s m o r e p r o m i n e n t t h a n p a r t a a n d c o m p o u n d i ( h y p e r o n s ) , a n d t h e i n h ib i t i n g e ff e c t i s m o r e p r o t h e i n c r e a s in g o f c o n c e n t r a t i o n . t h a t i s t o s a y t h a t t h e f u n c t io n a l i n g r e d i e n t s o f i s n o t o n l y o n e c o m p o u n d , a n d t h e e ff e c t i s t h e s y n e r g i s t i c e ff e c t o f a l l , rod s k e y w o r d s : l o t u s l e a 此s t r u c t u r a l i d e n t i f i c a t i o n ; p h a r m a c o l o g y i i i 缩略词 uvirms f ab - ms h - n mr b c - n mr 紫外可见吸收光谱 红外吸收光谱 质谱 快速原子轰击质谱 氢核磁共振光谱 碳核磁共振光谱 无畸变极化转移增益法 二维核磁共振谱 dms o c d 3 c d hp l c hp t l c t r i s 2 d- h- cos y c. h- cos y h s q c u l t r a v i o l e t a n d v i s i b l e s p e c t r a i n f r a r e d s p e c t r a ma s s s p e c t r a f a s t a t o m b o m b a r d m e n t m a s s s p e c t r a ; 1 1 1 n u c l e a r m a g n e t i c r e s o n a n c e s p e c t r a 1 3 c n u c l e a r m a g n e t i c r e s o n a n c e s p e c t r a d i s t o r t i o n l e s s e n h a n c e me n t b y p o l a r i z a t i o n t r a n s f e r t w o - d im e n s i o n a l n u c l e a r m a g n e t i c r e s o n a n c e s p e c t r o s c o p y d e u t e r o d i m e t h y l s u l f o x id e m e t h y l a l c o h o l h i g h p r e s s u re l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y h i g h p r e s s u r e t h i n l a y e r c h r o m a t o g r a p h y t r i s ( h y d r o x y m e t h y l ) a m i n o m e t h a n e 2 d- h o mo n u c l e a r s h i ft c o r r e l a t e d s 伴c 仃 n s c o p y 2 d- h e t e r o n u c l e a r s h i ft c o r r e l a t e d s p e c t r o s c o p y n h e t e r o n u c l e a r s i n g le - q u a n t u m c o h e r e n c e s p e c t r u m h e t e r o n u c l e a r m u lt i p l - b o n d c o r r e l a t i o n noes yov e r h a u s e r e ff e c t s p e c t r o s c o p y amy l p s a m y l a s e l i p a s e 二甲基亚讽 全氖代甲醇 高效液相色谱 高效薄层色谱 三 ( 经甲 基) 氨基甲 烷 二维同核化学位移 相关谱 二维异核化学位移 相关谱 异核近程化学位移 相关谱 1 h检测的 异 核远 程化学 位移相关谱 二维核o v e r h a u s e r 效应谱 淀粉酶 月 旨 肪酶 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在指导老师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。 尽我所知， 除了文中特别加以标注和致谢的地方外， 论文中不包含 其他人已 发表或撰写过的研究成果， 也不包含为获得湖南农业大学或其它教育机 构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献 均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 关于论文使用授权的说明 本人完全了解湖南农业大学有关保留、 使用学位论文的规定， 即: 学校有权 保留 送交论文的复印件和磁盘， 允许论文被查阅 和借阅， 可以 采用影印、 缩放或 扫描等复制手段保存、 汇编学位论文。 同意湖南农业大学可以用不同方式在不同 媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 ( 保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研 究 生 签 名 : _ 。寸 间 : 114 年 二月 兰日 导 师 签 名: 时间 : - 2 ov s, 年 一 g 月f 6 日 第一章绪论 1研究的目的和意义 进入2 1 世纪， 健康成为了当今世界研究的主 题， 人们回归自 然、 崇尚自 然， 利 用现有的自 然资源来预防、防治疾病，追求生命的自 然健康已 成为2 1 世纪的 潮流， 医疗模式也由 单纯的治疗型向 预防、保健康复相结合的模式转变，因 此植物药便成 为了 人类防治疾病的天然药物。目 前，世界植物制品的销售额近3 0 0 亿美元， 其中 天然药物的销售额己 达 1 6 0 亿美元，并以 每年1 0 %的速度递增。为此世界各国竟相 采用现代技术研究开发传统医药，抢占国际天然药物市场。目 前国际上发现的一些 热点 药 物大 部分 都是 从民 间、民 族药中 发 现的 ii 。 我国 的 天 然产 物资 源 十分 丰富 ， 在临床应用方面更有丰富的经验积累，这些都使得我国 在天然药物的 研究上具有得 天独厚的基础。 肥胖是指体类脂肪储积过多，能量摄取大于消耗的代谢性疾病，是当今常见和 多发性疾病，也是世界卫生组织确定的疑难性疾病之一，它不仅会导致体态臃肿、 行动笨拙，并且与高血压、1 1 型糖尿病、高脂血症、心脑血管病等疾病密切相关， 并 严 重危 害 人们的 身心 健 康2 - 1 11 。 大多 数西 方国 家和 一些 不 太发 达的 国 家中 ， 肥 胖 症患 者( 体 质量 人数( b m i ) 3 0 k g l. z ) 人 数 正 在以 令 人吃 惊的 速 度不 断 增加。 我国城市肥胖病的发病率大约为1 5 % 2 0 %， 而在美国 有超过一半的成年人， 以 及四 分之一的小孩体重都偏重，英国也有1 5 % 人口过于肥胖、 超半数的人体重偏重。 虽 然不断有化学减肥药物问世，但因明显的毒副作用，长期服用对身体害处较大， 如 厌食、失眠、下泻等而影响临床的使用，因此越来越多的学者将目 光瞄准了天然药 物，期望能够找到作用效果强、无副作用、并可降低肥胖症患者的病死率、并发症 和发病率的天然药物。 天然药物之所以能够防治疾病，其物质基础在于所含的有效成分。黄酮类化合 物( f l a v o n o i d s ) 广泛存在于植物界， 是目 前倍受关注的 天然活性产物之一。 以 前黄 酮类化合物是指基本母核为 2 一 苯 基色原酮 ( 2 - p h e n y l c h r o m o n e ) 类化合物， 现在主 要是泛指两个苯环( a - 与b 一 环) 通过中间三碳链相互联结而成的有c 6 - c 3 - e 6 结构的 一 系列化合物n 2 l 。 黄酮类化合物根据其结构的 不同 可分为 1 0余个 类别， 如黄 酮、 黄酮醇、 二氢黄酮 ( 醇) 、 异黄酮、 双黄酮、 查尔酮、 黄烷醇等。 大量的 研究已 经表 明， 黄酮类化合物具有抗自 由 基、 抗氧化、 抗癌、 抗菌、 抗过敏、 抗炎症、 减肥等 多 种生理活性及药理作用， 且无毒副作用。目 前的药理研究表明， 黄酮类化合物的 抗衰老、 抗突变、抗动脉粥样硬化都与其抗氧化的作用有关。黄酮类化合物如儿茶 素、 懈皮素、芦丁、黄琴昔等都具有很强的抗氧化活性。 荷叶是睡莲属植物莲 ( n e l u m b o n u c if e r a g a e r t n ) 的叶片。 据报道 民间早就有 第一章绪论 1 研究的目的和意义 遴入2 l 毽纪，链康或为恣今毽赛臻炎憨主题，入弱弱妇鑫然、豢滗自然，裂 用现裔的謇然资源来预防、防治疾病，追求缴命的自然健康已成为2 1 饿纪的潮流， 医疗模式也由单纯的治疗型向预防、保健康复相结合的模溅转变，因此植物药便成 为了人类防治疾瘸的天然药物。强前，世界搬物制品的销髂额近3 0 0 亿荧元，其中 天然蕊兹静镑售籁汪这1 6 0 亿荚元，势蓉毒冬1 0 静速爱递增。菇垂乏毽器各国竞襁 采用现代技术研究开发传统医药，抢占国际天然药物市场。目前国际上发现的一些 热点药物大部分都是从民间、民族药中发现的l ”。我国的天然产物资源十分丰富， 奁妪窳应爱方酉鬟鸯李塞戆经验获累，这些整镬簿我嚣在天然药辏豹戮突上其毒霉 天独浮的基础。 肥胖是指体类脂肪储积过多，能量摄取大于消耗的代谢性疾病，怒当今常见和 多发性疾癍，也是墩界卫生组织确定的疑难憔疾病之一，窀不仅会导致体态臃肿、 厅麓笨箍，势虽鸯麓盔歪、i l 黧耱藤病、衰l 餮囊症、心麓斑管瘸等痰瘸密螺稳关， 并严熬危害人们的身心健康t 2 - h l 。大多数西方国家和一些不太发达的豳家中，肥胖 症患辫( 体质量人数( b m i ) 3 0k g m 2 ) 人数正在以令人吃惊的速度不断增加。 我国缓枣翌黪痰豹发瘫搴丈约为1 5 , - - 2 0 ，嚣在美国骞怒避半数瘦箨久，鞋及嚣 分之的小孩体黉都偏重，英国也有1 5 入鞠过于肥胖、趣半数的人体蘑偏重。虽 然不断有化学减肥麴物问世，能阂明显的毒剐作用，长期服用对身体害处较大，如 厌食、失眠、下灞簿两影响临床的使用，陵此越来越多的学耆将目光瞄准了天然药 物，期望麓够我捌僚嗣效采强、罴醚雩# 弼、游可降低l 薹黪痰患者静瘸弼攀、并发疫 和发瘸率的天然药物。 天然药物之所以能够防治痰瘸，其物质熬础在于所含的有效成分。黄酮类化合 憋( f l a v o n o i d s ) 广泛存在手疆躲赛，是妥裁绥受关注豹天然活瞧产甥之一。骧蔫黄 酮类化合物是指摹本母核为2 一苯基色原酮( 2 - p h e n y l c h r o m o n e ) 类化合物，现在主 要是泛指两个苯环( a _ 与b 一环) 通过中间三碳链相互联结1 诃成的有c 6 + c 3 c 6 结构的 一系列怯合物f 1 2 。茨酮类化合物棂据其结构的不同可分为l o 余个类别，如黄酮、 黄繇蘸、二氢黄戮( 薛) 、巽黄瓣、双黄酝、凌尔繇、黄烷懿等。大量熬研究已经表 明，黼酮类化合物凝有抗自由撩、抗氧化、抗癌、抗菌、抗过敏、抗炎瘫、减肥等 多种生理活性及蓟理作用，且光毒副作用。嗣前的药理研究表明，黄酮炎化合物的 菝衰澎、撬突变、撬劫艨鬻榉磺亿嫠与其摭襞像戆终矮兹荧。黄酮类豫会耱蘩，l 茶 素、槲皮素、芦丁、黄芩苷等都具有狠强的抗氧化活性。 简叶是睡莲属植物莲( n e l u m b on u c i f e r ag a e r m ) 的叶片。据报道，民间早就有 用荷叶治疗肥胖症的记载。在1 9 9 1 年1 1 月中华人民共和园卫生部的卫监发( 1 9 9 1 ) 第4 5 号文件中，荷叶被列入第2 批“既是食品又是药品”的名单之中【l ”。现代医 学研究发现，荷叶中的黄酮具有调血脂活性的作用，i 临床用荷叶水煎剂口服有一定 的降脂作用1 4 - i s 。喻泽兰 1 6 1 在观察荷叶水提物对小鼠的急性毒性反应时发现荷叶水 提物的毒性极小。我国的荷叶资源丰富，极大部分的都做为废弃物处理而没能得到 合理的利用，这是很大的资源浪费。因此，对荷叶进行开发，变废为宝，是顺应时 代的需要。首先荷叶是天然植物，这满足了人们追求自然的要求，另外，荷叶有着 历史悠久的民间应用，经历了漫长的历史考验，证明它是安全的，这些都是化学合 成药物无法比拟的。 前人对荷叶黄酮类化合物的研究中已经分离出了槲皮素、异槲皮菅、金丝桃苷、 荷叶苷等成分。通过药理实验追踪和化学实验发现仍有一些有效成分未分离得到， 其药理作用的目标成分仍不是很清楚，因此，本研究对荷叶中具有明显生物活性和 生理功能的黄酮类化合进行提取、分离、和纯化，以期得到高纯度的黄酮类化合物 单体，确定其结构，并对其进行初步的药理实验，以进一步探明荷叶主要功效的物 质基础，这不仅可为合理、有效、全面的综合开发荷叶提供坚实的应用理论基础和 为荷叶药理作用的研究提供优质、有效的原材料，还可以为睡莲属植物的研究提供 理论参考。 2 国内外研究动态 2 1荷叶资源概况 荷叶是莲的叶子，莲( n e l u m b on u c 如mg a e r t n ) ，睡莲属，又名芙蕖、芙蓉、 荷、藕、水芝、水华、水芸、水旦、泽：芝、玉环、君子花、六月春等，是具有膨大 根茎的多年生水生植物”l 。荷叶原产于中国和印度，现全世界皆有分布。荷叶呈圆形 盾状，叶面绿色，蜡质，背面色淡；每：年3 月底4 月初开始萌芽，初发于水面的嫩 小荷叶称之为荷钱，6 、7 月间时最为茂盛，一直到晚秋( 1 1 月) 时节开始枯萎。中 2 国麓时资源丰察，全黧除毒海、薅溅荧，鑫逮均鑫分蠢，主要分毒槎长江、黄海巍 珠江等三大流域。荷叶自古以来就熄一种药食两用的植物，襁民间肖着非常广泛的 应用，戮代药璞研究诞明精汁其有多穆生理活毪，麸髓辱| 超了莓两步 学者帮产堑赛 人士的广泛关注。 2 2 荷叶的民间应用 荷叶在民间的应搿已有了悠久的历史，总结起来主要是在以下两个方面 2 2 。1 在食蔫孛戆瘦弱； 荷叶气味清香，结构致密，表蕊有蜡质层，用做包裹食物，不但不会渗漏汁液， 而强还会使食搦带上葡砰的浦香。所以荷时常用来包囊点心和佳肴。广东入常班平 旖叶包裹糯米、中间秘配以鸡肉、冬菇、咸蛋等糙辩，蒸熟，名日“糯米鸡”，其祷 香扑鼻，色泽盒黄，怒茶楼必备的上等点心。用荷叶垫底来蒸排骨、田鸡、水鱼祷 食物，蛩使食物宠分吸收荧跨鲍凌褥，缀受入裁豹喜欢。另矮，蕊时还霹巍接骰为 食品的配料，如用鲜荷叶与冬瓜、西瓜皮、冰糖等同熬糖水，可清热去暑、生津止 满，最适应南方久在爱歉季繁锾廷，鲜稽时与羲 雷、鸦肉，释配蔽慧米、菠实等熬 的汤，有清热去湿、利水消肿的功效。 2 , 2 2 在联药中的应用： 李惑珍鹣本孳绸嚣载“芬靖l 受之，令入瘦劣，荦暇叛消鞠东浮耱之气”。 另有李时珍参编的食物本萆中讲到荷叶味苦，平，凭毒，w 止渴，治落胞破搬， 产籍口干，心审躁颓。本革稃新谓其“清凉瓣署，止溻生浮，治泻痢，解火热”。 清代叶天士在i 豳痘搬南医察中指出治糟热、喾感、劳伤夹暑，畿用萄叶汁；浚 风头痛，署热头胀，以及暑邪闭窍，耳听失聪用鲜荷叶。孔伯华医集中记载9 8 9 医寨，饺用蓑时者裁达2 6 0 窳，使爆率迭2 6 t 3 。藏辕周医褰中记载1 2 0 医案。 使厢荷叶者1 7 案，使用率达1 4 2 。上海已故名老中医、上海中医药大学徐辉光教 授治疗慰心病，盘l 警避赛，体态怒耱者氇常霜到了蔫静。 2 。3 苟时的能学成分蟹 究 2 3 1 黄黧类 黄酮类物质是一类低分予天然植物成分，广泛存在予蔬菜、水果和药用檬物中， 毒裂终瘸小，燕霹蘸久稍都较为关淀豹一类纯舍戆。资糕表甓，黄辞串酶黄酮类纯 合物主要是荷叶苷，其次是槲皮素、异槲皮素等常见的黄酮类物质。a w a t i f 等人f 1 8 1 觚蒋时串分离密n y m p h o l i d ea 、n y m p h o l i d eb 和m y r i c e t i n - 3 一o 一( 6 ，- p - c o u m a r o y l ) g l u e o s i d e ( 见图1 ，图2 ，图3 ) - 种黄酮类物质。 3 国 荷叶资源丰富，全国除青海、西藏外， 各地均有分布，主要分布在长江、 黄河和 珠江等三大流域。荷叶自 古以 来就是一种药食两用的 植物， 在民间 有着非常广泛的 应用， 现代药理研究证明 荷叶具有多种生理活性，从而引起了国内外学者和产业界 人士的广泛关注。 2 .2 荷叶的民间应用 荷叶在民间的应用已 有了 悠久的历史，总结起来主要是在以 下两个方面: 2 . 2 . 1 在食用中的应用: 荷叶气味清香， 结构致密， 表面有蜡质层， 用做包裹食物， 不但不会渗漏汁液， 而且还会使食物带上荷叶的清香。 所以 荷叶常用来包裹点心和佳肴。广东人常以 干 荷叶包裹糯米、 中间再配以 鸡肉、 冬菇、 咸蛋等材料， 蒸熟， 名曰“ 糯米鸡” ， 其荷 香扑鼻，色泽金黄，是茶楼必备的上等点心。 用荷叶垫底来蒸排骨、田 鸡、水鱼等 食物，可使食物充分吸收荷叶的 清香， 很受人们的喜欢。另外， 荷叶 还可直接做为 食品的配料，如用鲜荷叶与冬瓜、西瓜皮、冰糖等同熬糖水，可清热去暑、生津止 渴，最适应南方人在夏秋季节饮用，鲜荷叶与排骨、鸭肉，再配以惹米、茨实等熬 的汤，有清热去湿、利水消肿的功效。 2 . 2 .2 在医药中的 应用: 李时珍的 本草纲目 载“ 荷叶服之， 令人瘦劣，单服可以 消阳水浮肿之气气 另有李时珍参编的 食物本草中讲到荷叶味苦， 平， 无毒， 可止渴， 治落胞破血， 产后口 千， 心肺躁烦。 本草再新谓其“ 清凉解暑， 止渴生津， 治泻痢， 解火热” 。 清代叶天士在 临症指南医案中指出治暑热、暑感、劳伤夹暑，皆用荷叶汁;治 风头痛，暑热头胀，以及暑邪闭窍， 耳听失聪用鲜荷叶。 孔伯华医集中记载9 8 9 医案， 使用荷叶者就达2 6 4 案，使用率达2 6 .3 % . 蒲辅周医案中记载 1 2 0医案， 使用荷叶者 1 7 案， 使用率达 1 4 .2 %。 上海已 故名老中医、上海中医药大学徐辉光教 授治疗冠心病，血脂过高，体态肥胖者也常用到了荷叶。 2 .3荷叶的化学成分研究 2 . 3 . 1 黄酮类 黄酮类物质是一类低分子天然植物成分， 广泛存在于蔬菜、 水果和药用植物中， 毒副作用小， 是目 前人们都较为关注的一类化合物。 资料表明， 荷叶中的黄酮类化 合 物主要是 荷叶 昔， 其次是 懈皮素、 异 棚皮素等常见的 黄酮类物质。 a w a t i f 等人0 $ 1 从荷叶中分离出n y m p h o l i d e a , n y m p h o l i d e b和 m y r i c e t i n - 3 一 。 一 ( 6 p - c o u m a r o y i ) g l u c o s i d e ( 见图1 ，图2 ，图3 ) 三种黄酮 类物质。 h o _ h o oh o 图1 n y m p h o l i d e a图 2 n y m p h o l i d e b 1 1 3 m y ri c e t i n - 3 ， 一 。 一 ( 6 = p - c o u m a r o y l ) g l u c o s i d e 2 .3 . 2 生物碱类 生物碱是存在于植物中的碱性含氮化合物， 大多数具有含氮杂环， 有旋光性和 明 显的生理效应 19 1 。 生物碱的 发 现起始于 1 9世纪 初， 是研究 得最早也是 最多的 一 类天然有机化合物， 迄今己 知的生物碱多达1 0 0 0 多种。 植物碱是一类极有药用价值 的化合物。日 本人富田 真雄l2 o l 等从荷叶中分离出 荷叶碱( n u c i f e r in e ) ,莲碱 ( r o e m e r i n e ) , o 一 去甲 荷叶碱( o - n o m u c i f e r i n e ) 三个单体成分。 此外 荷叶中 还含有 n 一 去甲荷叶碱( n - n o m u c i f e r i n e ) 、牛心果碱 ( a n o n o c i n e ) 、斑点亚美髻粟碱 ( r o e m e r i n e ) 、 亚 美 尼 亚 9 粟 碱( a r m e p a c in e ) 、 原 荷 叶 碱 ( n o m u c i f e r i n e ) 、 前 荷 叶 碱 ( p r o n u c i f e r i n e ) 、番荔枝碱 ( a n o n a i n e ) ,鹅掌揪碱 ( l i r i o d e n i n e ) 等。 2 .3 . 3 荷叶的香气物质 刘密新等2 1 用色谱法、 色谱 一 质谱法 和标准品 核对， 对荷叶 精油 进行分析， 从中 鉴 定了4 8 种精 油成 分。 傅水 玉 等2 2 用x a d - 2 型 树脂 采 集荷 叶 天 然 香 气， 一 双 柱 毛 细管g c / ms / d s 联用法和三柱毛细管保留指数法分离鉴定了8 7 种组分，占 总峰面 积的9 3 .2 6 %。 其中5 0 种组分是用上述两种方法共同确证的， 占总峰面积的8 1 .3 1 % , 含量较大的组分有顺一 3 一 己 烯醇 ( 4 0 .4 1 %) 、 二苯胺 ( 8 . 3 5 %) 、 长叶烯 ( 5 .6 %) 、正己 醇( 3 .6 5 % ) 、 苯( 3 . 1 2 % ) 。 另 傅 水 玉 等 12 3 用同 时 蒸 馏 萃 取 法( s d e ) 提 取 荷 叶 精 油 ， 用毛细管g c / m s / d s 联用法分离鉴定了9 1 种组分，占 总峰面积的9 5 . 6 4 %， 再用双 柱g c标样程升保留指数确证了其中的3 8 种组分，占峰面积的6 4 .2 0 %，主要成分 是顺- 3 一 己烯醇 ( 2 7 .4 9 01 0 ) 、反一 2 - 戊烯醇 ( 1 1 .0 7 0j n ) e 2 .3 .4 其它成分 荷叶 中尚 含 有维 生 素c , 拘 椽酸、 酒 石酸、 苹 果 酸、 草 酸、 唬拍 酸 等 (2 4 1 。 除了 棚 皮素( q u e r c e t i n ) 、 荷叶 碱( n u c i f e r i n e ) 外， 李 志诚 等 2 5 对荷 叶的 化学 成 分 进 行系统研究时还得到了另外9 种化合物，分别为:正二十八烷 ( o c t a c o s a n e ) 、 正二 十 八 烷 酸 ( s t e a ri c a c i d ) 、 苯甲 酸 ( b e n z o i c a c i d ) 、 邻 经 基 苯甲 酸 ( o 御d ro x y b e n z o i c a c i d ) 、 没食子酸( g a l l i c a c i d ) , 0 一 谷m 醉( 0 - s i t o s t e r o l ) 、 胡 萝卜 昔( d a u c o s t e ro l ) , 2 - 经基一 1 一 甲氧基阿朴菲 ( 2 - h y d r o x y - l - m e t h o x y a p o r p h i n e ) 、杏黄婴粟碱 ( a r m e p a v i n e ) 2 .4荷叶的药理研究 近年来对荷叶药理作用的研究主要集中在以下的几个方面， 2 .4 . 1降脂、降血压作用 研 究发 现， 荷叶中的 黄酮具 有 调 血脂 活 性的 作 用。 杜力 军 等 2 6 1 以 急 性高 脂 血 症 小鼠为整体模型观察荷叶水提物对血清胆固醇及甘油三酷的影响，结果表明荷叶水 提物有明 显的降 脂作用， 其活性部位主要是荷叶黄酮，其次是荷叶生物碱， 其作用 特点 主 要 是促 进 胆固 醇的 代谢。 关 章 顺2 1 1等 发 现 荷叶 提取 物 对人 体具 有 较 好的 降 脂 作 用， 且 无 毒。 许 腊 英等 2 8 1 以 荷叶 提 取物中 的 生 物碱为 指 标， 通过 对小白 鼠 的 喂 养 实 验发 现荷叶中 的 生物碱具有降 脂作 用。 涂长 春等 12 9 1 采用肥胖高 脂 血症大鼠 模型， 观察荷叶生物总碱对大鼠 体重、 体脂及血脂的影响，结果表明 荷叶生物总碱明显抑 制肥胖大鼠的体重增长， 影响其肥胖程度且可使肥胖高脂血症大鼠 总胆固醇( t c ) , 甘油三醋 ( t g ) 、及a l 下降。 2 . 4 . 2 清除自由 基的作用 余以 刚、 陈 海光 等 。 0- 3 1 1采用电 子自 旋共 振 法自 旋 捕 集 技 术 研究 发 现 荷叶 提 取 物 对 轻基自 由 基 ( o h ) 超 氧阴 离子自 由 基 ( 0 2) 有很强的 清除能力， 2 6 .9 5 u g h n l 的荷叶提取物对次黄漂吟一 黄嗦吟氧化体系产生的 0 2 一 的清除率达 6 5 .6 %， 大约 4 0 u g / m l的 荷叶 提取物就可以 全部 清除。 2 - - ，当 浓 度大于流动相:水: 乙 睛= 0 . 0 1 m i n ( 9 0 : 1 0 ) - - 3 0 m i n ( 8 0 : 2 0 ) - - 6 0 m i n ( 6 0 :4 0 ) - - 9 0 m i n ( 9 0 : 1 0 ) : 应用前经过。 .4 5 u m微 孔滤 膜抽滤， 超声脱 气: 流速为1 .0 m l / m i n ; 进样量为2 0 11 1 ;柱温3 0: 检测波长3 6 0 nn : 梯度洗脱。 2 .4化合物的分离、纯化 聚酞胺是分离黄酮类化合物较为理想的吸附剂， 其吸附强 度主要取决于黄酮类 化合物分子中 轻基的数目 和位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酞胺之间 形成氢键缔 合能力的大小。聚酞胺层析可用于分离各种类型的 黄酮类化合物，包括昔和昔元、 查耳酮与二氢黄酮等，大体上有以下的规律: ( 1 )昔元相同， 洗脱的 先后顺序一 般是: 叁 糖普双糖 昔 单糖昔 昔元。 ( 2 )母核上增加经基， 洗脱速度相应减缓。当 经基的数目 相同时， 经基位置 对吸附也有影响，聚酞胺对处于拨基间位或对位的轻基吸附力大于邻位 轻基，故洗脱顺序为:邻位处基黄酮对位或间 位经基黄酮。 ( 3 ) 不同类型黄酮化合物， 先后流出 顺序一般是:异黄酮二氢黄酮 黄酮 黄酮醇。 ( 4 ) 分子中芳香核、 共辘双键多者则吸附力强，故查耳酮往往比 相应的 二氢 黄酮难于洗脱 上述的规律也适合于黄酮类化合物在聚酞胺薄层上的行为。 取荷叶黄酮粗提物，最大浓度水溶解， 缓慢倒入已 处理好的 ( 1 0 0 - 1 2 0目 ) 聚 酞胺柱， 充分吸附3 0 m i n 后， 以 水一 乙醇( 8 5 : 1 5 , 7 0 :3 0 , 5 5 : 4 5 , 4 0 : 6 0 , 2 5 : 7 5 , 1 0 :9 0 ) 梯度洗脱， 流出液用高效液相色谱仪检测， 合并相同组分， 得组分a和组分b ， 组 分a经半制备液相色谱仪后得3 个单体化合物 ( i 、i i , m) ，组分b 经甲 醇反复 结晶得单体化合物i v . 组分a的 半 制备 液 相 色 谱条 件: 美国 沃 特斯s y m m e t ry p r e p c is 柱( 3 0 0 m m * 7 . 8 m m ) ; 流动相: 水: 乙睛= 0 .0 1 m i n ( 8 6 : 1 4 ) - - 3 7 m i n ( 7 6 :2 4 ) - - 4 2 m i n ( 7 6 : 2 4 ) - - 4 7 m i n ( 8 6 : 1 4 ) - - 5 2 m i n ( 8 6 : 1 4 ) - - 6 0 m i n ( s t o p ) ; 应用前经0 .4 5 u m微孔滤膜抽滤， 超声脱 气:流速为4 .0 m l / m i n ;进样量为1 5 0 11 1 ;柱温3 0;检测波长3 6 0 ri m e 化合物i 、i i 、 i i i , n分别经h p t l c与h p l c检测， h p t l c的检测条件为: 聚酸胺薄膜， 展开剂为乙 醇: 水 = 3 :5 . 1 % a i c i 3. t 7 v显色; h p l c的检测条件为: 大 连依利特 k r o m a s i l c , : 柱 ( 1 5 0 m m * 4 . 6 m m ) ; 流动相:水: 乙 睛= 8 4 : 1 6( 化合物i 、 i i 、 i i i ) 和水: 乙睛= 5 5 : 4 5( 化合 物n ) ; 应用前经。 .4 5 u m微孔滤膜抽滤， 超声脱 气:流速为1 . 0 m u m i n ，进样量为2 0 p 1 ;柱温3 0;检测波长3 6 0 n me 2 .5 化合物的提取、分离与纯化工艺流程图 半制备h p l c 重结晶 图2 - 1 荷叶黄酮的提取、分离与纯化工艺流程示意图 f i g 2 - 1 t h e s k e t c h m a p o f e x t r a c t i n g a n d i s o l a t i n g p ro c e s s o f