肝功能检查实验设计报告.doc

广东医学院设计性实验报告二级学院：医学检验学院 教研室：临床生物化学课题名称肝功能检查套餐实验设计Experimental design of liver function tests专业：医学检验层次：本科年级：2012级小班：七班主要成员学号姓名性别分工12203070217吴文钦男查找肝功能检查相关文献，确定肝功能检查套餐项目12203070222刘创业男查找肝功能检查相关文献，确定肝功能检查套餐各个检查项目的检测方法12203070198符光转男查找相关文献，分析比较各个检查项目方法的优缺点，确定最合适测定方法12209070223陈晨女查找相关资料，确定各个检查项目所需的试剂，包括试剂价格、数量、购买途径等一、摘要目的: 分析多项肝功能指标的联合检测对肝病诊断的临床价值。方法: 选取在一定时间段内,住院治疗的肝病患者若干例(100例以上)作为实验组，另选取 同样例数体检健康受检人员作为对照组，对两组受检者进行同样项目肝功能指标临床检验，分析多指标联合检测对肝病诊断的临床价值。二、实验设计1. 肝功能检查套餐项目的选择项目：(1)丙氨酸氨基转移酶（ALT） (2)天门冬氨酸氨基转移酶（AST） (3)AST/ALT选择理由：ALT主要存在于胞液,而AST主要存在于线粒体内,正常人肝细胞浆的AST/ALT比值为0.6左右。当肝细胞虽有损伤,但线粒体基本保持完整,释放入血浆的主要是ALT。若肝细胞损伤严重,线粒体亦必然损伤严重,AST从线粒体和胞浆释出,AST/ALT比值升高,可反映肝脏的病变程度,并可以此估测患者预后。项目：(4)谷氨酰转肽酶(GGT)选择理由：GGT是最典型的肽转移酶成分，主要存在于人肝脏的毛细血管及肝细胞微粒体中，在评估发生胆汁淤积的情况及其病情的严重程度方面具有较高的灵敏度。项目：(5)胆碱酯酶(CHE)选择理由：CHE是由肝细胞释放到血液中的非特异性酯酶成分，在测定肝功能及评估肝病患者的预后方面具有一定的临床价值。项目：(6)白蛋白（ALB） (7)前白蛋白（PA）选择理由: 肝脏是合成白蛋白的唯一场所,肝脏损伤后血清白蛋白水平下降,但由于白蛋白的半衰期较长,为15一19 天，因此在部分急性肝病患者其浓度降低可不明显,同白蛋白一样,前白蛋白也由肝脏合成,但由于其半衰期很短仅为12小时，前白蛋白可以灵敏的反映急性肝损伤。项目：(8)总胆红素（TB） (9)直接胆红素（DB） (10)间接胆红素（IB）选择理由：总胆红素是结合（直接）胆红素与非结合（间接）胆红素的总称。总胆红素增加的原因，通常是胆道阻塞、肝炎、肝硬化、溶血性综合症和某些遗传原因的酶缺乏。间接胆红素增加则常见于溶血性综合症或肝内原因，如肝脏在胆红素摄取运输或结合方面有缺陷。胆红素代谢实验对于了解肝炎病人临床上有无黄疸、黄疸深度及动态变化对于反映肝细胞的损害程度及判断预后都有十分重要的意义。项目：(11)凝血酶原时间（PT）选择理由：肝脏是产生纤维蛋白原、凝血因子酶原子 V、VII、IX、X、XI、XII、XIII 的场所。肝脏损伤时，上述凝血因子水平下降，临床上常测定的是凝血酶原时间（PT），而造成PT 值下降。一般说来只有肝实质损伤时才有 PT 值的异常。项目：(12)乙肝两对半选择理由：乙肝两对半即为乙型肝炎五项测定，乙型肝炎病毒为嗜肝性病毒，对肝脏有损害，当机体感染了乙肝，会对肝脏功能造成不同程度的损伤。2. 肝功能检查套餐项目的实验检测 项目:(1)丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定方法：速率法选择理由：谷丙转氨酶催化L-丙氨酸的氨基转移，生成丙酮酸。丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD+。NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中ALT的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出ALT活性。项目:(2)天门冬氨酸氨基转移酶（AST）测定方法:速率法选择理由: 谷草转氨酶催化L-天冬氨酸的氨基转移与MDH催化的反应偶联，使NADH氧化成NAD+。NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中的AST的活性成正比，在340nm处测定NADH下降速率，即可测出AST活性。项目:(3)谷氨酰转肽酶(GGT)测定方法:速率法选择理由:r-谷氨酰对硝基苯胺和双甘肽在r-谷氨酰转肽酶作用下，生成对硝基苯胺及r-谷氨酰双甘肽，所释放出的对硝基苯胺与r-谷氨酰转肽酶活力成正比，通过在405nm处测定对硝基苯胺的变化，可求出r-谷氨酰转肽酶活力。项目:(4)胆碱酯酶(CHE)测定方法:比色法选择理由: 血液及组织中CHE使乙酰胆碱水解成胆碱和乙酸，未被分解的剩余乙酰胆碱与羟胺作用生成乙酰羟胺，再与铁离子在酸性溶液中形成棕色复合物，根据颜色深浅推算出酶的活力。项目:(5)白蛋白（ALB）测定方法：溴甲酚绿法选择理由：白蛋白具有与阴离子染料结合的特性，在pH4.0左右,溴甲酚绿与白蛋白结合后,由黄色变成绿色，绿色的深浅与白蛋白浓度成正比。项目:(6)前白蛋白（PA）测定方法: 免疫浊度法选择理由：血清中前白蛋白与其相应抗体在血液中相遇，立即形成抗原-抗体复合物，形成一定浊度，该浊度的高低在一定量抗体存在时与抗原的含量成正比。此法测定血清前白蛋白操作简单,线性范围宽,重复性好,准确性高,适用于全自动分析仪在常规实验室测定。项目：(7)总胆红素（TB）测定方法:钒酸盐氧化法选择理由:PH值接近于3时，在钒酸盐及表面活性剂的作用下，总胆红素被氧化成胆绿素。此时，胆红素特有的黄色减少，通过测定钒酸作用前后的的吸光度的差可求得样品中总胆红素的浓度。项目:(8)直接胆红素（DB）测定方法：重氮法选择理由：加入重氮化对氨基苯磺酸,结合的胆红素会转化成重氮基胆红素,它是一种在540nm处吸光的红色发色团,用双波长 (540、700nm) 终点技术测定直接胆红素 (DBIL)。该法DBIL在342mol/L范围内线性良好，准确性和精密度均符合临床要求。项目:(9)凝血酶原时间(PT)测定方法: 凝固法选择理由:在待测血浆中加入过量的组织凝血酶浸出液和Ca2+,使凝血酶原转变为凝血酶,后者是纤维蛋白原转变为纤维蛋白,血浆凝固的所需时间为PT。项目：（10）乙肝两对半测定方法：胶体金法选择理由：目前实验室普遍采用的ELISA检测, 虽然其性能得到公认,但需要相应设备, 检测时问长,操作较繁琐,不便单样本快速检测 。胶体金测试卡检测单个标本的时间明显比 ELISA时间短，因为高浓度的抗体或抗原集中固在纤维素的微孔中，待测抗原或抗体流经微孔与固定的抗体或抗原接触，很快完成反应，通 过目测胶体金标记 物得到直观的显色效果，胶体金测试卡不需要仪器设备和洗涤，易于操作，大大减少了污染机会。三、参考文献1黄志强.梗阻性黄疸临床诊断进展J中国实用外科杂志，2001,21(8):497-4992元海成，秦鸣放，邹富胜，等.急性胆道梗阻肝脏损伤的实验研究 J.中国普通外科杂志，2012，21（2）：178-182.3王蕾 , 尹素秀 . 血脂、血糖和肝功能指标与脂肪肝的相关性分析 J. 大家健康（中旬版）,2014,(2):48-48.4何菊芳 , 董梅 , 佟爱华等 . 肾移植术后受者血清中肝肾功能指标动态监测的临床意义 J. 武警医学 ,2013,24(10):884-886.5谢丽洁 . 血脂、血糖和肝功能指标对脂肪肝患者的意义分析 J.当代医学 ,2011,17(31)6刘翛，王伟，刘宓，等 . 常规肝功能指标在转移性肝癌临床诊断中的价值探讨J 实验与检验医学，2010，28( 4) : 368-3707朱同林 . 乙型肝炎患者血清 HBeAg 与肝功能指标相关性研究J.检验医学与临床，2012，16( 20) : 2548 25498徐军，刘佳，郭静霞，等 . 乙型肝炎肝硬化患者血清 CA-125 表达水平临床研究J 中华实验和临床病毒学杂志，2010，24( 5) : 334-3369江智基,姚光弼,巫协宁.临床肝胆疾病学M.上海:上海科技出版社,1998:23-305.10邓岩,刘少平.血清胆碱醋酶活力测定对慢性肝炎诊治的临床意义J.重庆医学,1997,26(l):16-1711迟宝荣,任秀宝,刘阳,等.检测血清胆碱醋酶对肝病诊断的临床意义分析J.临床肝脏病杂志,1996,12(2):108-109.12王锦支,赵兰.血清前白蛋白在肝病检测中的临床意义J.右江民族医学院学报.1999,(5):730-731.13朱化刚.术前肝脏储备功能的判断与安全肝切除量J.肝胆外科杂志,2005,13(6):406-409.14元云飞,张亚奇,陈敏山,等.肝癌术中肝硬化分级的临床意义J.癌症,1997,16(l):58-59.15周国明,刘旗,徐笑红等.血清白蛋白对原发性肝癌肝储备功能的预测,浙江医学,2006,28(10):852-853.四、经费预算（按400人计算）试剂价格数量购买途径谷丙转氨酶(ALT)测定试剂盒80元/盒两盒淘宝天门冬氨酸氨基转移酶（AST）测定试剂盒28元/盒两盒淘宝-谷氨酰胺转移酶（GGT）测定试剂盒85元/盒一盒淘宝胆碱酯酶（CHE）测定试剂盒 （比色法） 96元/盒一盒淘宝白蛋白（