（分析化学专业论文）流动注射化学发光法在药物分析和环境分析中的应用研究.pdf

摘要 流动注射化学发光法在药物分析和环境分析中的应用研究 摘要 化学发光( c h e m i l u m i n e s c e n c e ，简称c l ) 是化学反应的反应物或生成物吸收了 反应释放的化学能电子由基态跃迁至激发态，再由激发态返回基态时所产生的光 辐射。此法具有灵敏度高、线性范围宽、仪器设备简单、分析快速容易实现自动 化等优点。作为一种有效的痕量分析方法在环境科学以及生命科学等领域中具有 广泛的应用前景本。本文研究了c e o v ) 一盐酸异丙嗪体系、k s f e ( c n ) 6 】_ l u m i n o l 一 吩嗪类药物体系、c e ( i v ) 一头孢类卢内酰胺抗生素r h 6 g 体系，n b s ( n 一溴代琥珀 酰亚胺) 肼荧光素体系、n b s 一铵荧光素体系等5 种体系的化学发光行为、影 响因素、分析化学特性及其在环境分析及药物分析中的应用研究。 c e ( i g ) - 盐酸异丙嗪体系 在0 0 1 5m o l l 的硫酸介质中，硫酸铈氧化盐酸异丙嗪产生化学发光，详细 研究了反应的影响因素，在优化的实验条件下盐酸异丙嗪测定的线性范围为 1 o 1 0 g m l 一1 5 1 0j g m l ，检出限为4 o 1 0 g m l ，对5 0 x 1 0 “g m l 的盐酸异 丙嗪进行1 1 次测定，其r s d 为2 6 。将本法于盐酸异丙嗪药片的分析，并与药 典规定的方法进行对照，结果令人满意： 2 1 【3 f e ( c n ) 6 l t m i n o l - 吩噻嗪类药物体系 在强碱性条件下，两个吩噻嗪类药物盐酸异丙嗪和盐酸氯丙嗪对 k 3 f e ( c n ) 6 一l u 体系的发光有强烈的增强作用，用荧光分光光度计分别测定了下列 体系的化学发光光谱：1 ) 鲁米诺+ 铁氰化钾+ n a o h ：2 ) 鲁米诺+ 铁氰化钾+ n a o h + 盐酸异丙嗪；3 ) 鲁米诺+ 铁氰化钾+ n a o h + 盐酸氯丙嗪。结果表明，对鲁米诺铁 氰化钾n a o h 体系而占，所研究的两个药物仅仅起增敏作用，因为并没有新的发 光体产生。在优化的实验条件下，化学发光强度在一定的范围内与上述药物浓度 成正比，方法具有很高的灵敏度，对盐酸异丙嗪的检出限为3 0n g m l ，对盐酸 摘要 氯丙嗪的检出限为5 0n g m l ，将方法用于药片中上述药物的测定，结果令人满 意。 3 c e ( ) 头孢类卢内酰胺抗生素- r h 6 6 体系 除了在极强的碱性条件下水解外，无论在酸、碱或中性条件下水解，卢内酰 胺抗生素最后都有含毓基( 一s h ) 的化合物生成，研究发现c e ( i v ) 氧化含巯 基( 一s h ) 的化合物能产生弱发光，且r h 6 g 能大大增强此弱发光，由此建立了 测定头孢拉定、头孢呋辛、头孢噻肟钠、头孢曲松钠、头孢哌酮钠等5 种头孢类 伊内酰胺类抗生素的f i a c l 分析法。用荧光分光光度计分别测定了下列体系 的化学发光光谱：1 ) 1 0m m o l l 硫酸铈+ 5 1 0 。m o l lr h 6 g + 0 2m o l lh 2 s 0 4 ； 2 ) 1 0m m o l l 硫酸铈+ 5 x 1 0 4m o l lr h 6 g + 0 2m o l lh 2 8 0 4 + 3 0m g l 的头孢 哌酮的降解产物：3 ) 1 0m m o l l 硫酸铈+ 5 1 0 5m o l lr h 6 g + o 2m o l lh 2 s 0 4 + 3 0m g l 的头孢拉定的降解产物。结果表明，酸性条件下硫酸铈氧化r h 6 g 产生 很弱的化学发光，但是加入两个头孢的降解产物后均在5 6 0n n l 附近出现一个强 的发光峰，所在的峰位置正好对应于r h 6 g 的荧光峰。在选定的最佳条件下，经 测试5 个头孢类抗生素浓度在1 0 x1 0 g m l - 1 5 x1 0 。g m l 范围内与化学发光 强度呈良好的线性关系。对5 0 1 0 “g m l 的头孢试样进行1 1 次平行测定，得 到相对标准偏差r s d 对头孢拉定、头孢呋辛、头孢噻肟钠、头孢曲松钠、头孢 哌酮钠分别为2 2 、2 5 、2 7 、2 8 、2 8 。其检出限( 3 0 ) 对头孢拉定、 头孢呋辛、头孢噻肟钠、头孢曲松钠、头孢哌酮钠分别为3 0 x1 0 一g m l 、3 5 1 0 g m l 、3 8 1 0 g m l 、3 9 1 0 g m l 、4 0 x1 0 8 9 m l 、4 o 】0 - s g m l 。 考察了制剂中常见共存物质的影响，并用于头孢合成样品的分析，结果令人满意。 4 n b s 肼荧光素体系 在o 0 5m o l l 的碱性条件下，n b s 在荧光素的增敏作用下氧化硫酸肼，产 生强的化学发光。基于此本文详细研究了其反应的特性和影响因素，在优化的实 验条件下硫酸肼的测定范围为0 1 0 x1 0 一g m l ，检出限为3 0 1 0 一g m l ，对 5 0 1 0 8g m l 硫酸肼进行1 1 次平行测定，其r s d 为2 7 。本法用于大气环境 中肼的分析，并与常规的方法进行对照，结果令人满意。 摘要 5 n b s 铵荧光素体系 在o 0 5 m 的碱性条件下，n b s 在荧光素的增敏作用下氧化氯化铵，产生强 的化学发光。基于此本文详细研究了其反应的特性和影响因素，在优化的实验条 件下体系对氯化铵的测定范围为1 o 1 0 g m l 1 5 1 0 5 m l ，检出限为3 6 1 0 g m e ，对5 o 1 0 6 9 m e 氯化铵进行1 1 次平行测定，其r s d 为2 8 。将本 法用于环境水样q un h 4 + 的分析，并与常规的方法进行对照，获得了满意的结果x a s t u d y o nt h ep h a r m a c e u t i c a la n a l y s i sa n d e n v i r o n m e n t a l a n a l y s i s b yf l o w - i n j e c t i o na n a l y s i s w i t hc h e m i l u m i n e s c e n c ed e t e c t i o n a b s t r a c t c h e m i l u m i n e s c e n c e ( c l ) i s d e f i n e da st h ee m i s s i o no f l i g h t f r o ma n e l e c t r o n i c a l l ye x c i t e ds t a t es p e c i e sw h i c hi sp r o d u c e dd u r i n gt h ec o u r s eo f ac h e m i c a l r e a c t i o n ，a n d i so b s e r v e dw h e na ne l e c t r o n i c a l l ye x c i t e dp r o d u c to ri n t e r m e d i a t e f o r m e dd u r i n gac h e m i c a lr e a c t i o nd e c a y st ot h eg r o u n ds t a t eb ye m i r i n gap h o t o n c lo f f e r st h r e e i m p o r t a n ta d v a n t a g e s f o rc h e m i c a l a n a l y s i s ：( a ) ，b e c a u s e o fi t s i n h e r e n ts e n s i t i v i t y , l o wd e t e c t i o nl i m i t sa l ep o s s i b l e ，o f t e ni nt h ef e m t o a t t o m o l e r a n g e ；( b ) ，f o rm o s ta n a l y t e s ，t h el i n e a ld y n a m i cr a n g e i ss e v e r a lo r d e r so f m a g n i t u d e ； ( c ) ，i n s t r u m e n t a t i o ni sr e l a t i v e l ys i m p l e ，w h i c ha l l o w st e c h n i q u e st ob ed e v e l o p e df o r o n s i t e a n a l y s i sw h e nm o r ee x p e n s i v eo rc u m b e r s o m ei n s t r u m e n t a t i o nm i g h tn o tb e s u i t a b l e n o w a d a y sc la n a l y s i s h a sb e e nw i d e l yu s e da p p l i e di ne n v i r o n m e n t a l s c i e n c ea n dl i f es c i e n c ea n dh a sb e c o m eo n eo f t h em o s tp o w e r f u lt e c h n i q u e sf o ru s e i n a n a l y t i c a lc h e m i s t r y t h i sp a p e r d e a l sw i t ht h e f o l l o w i n g f i v e s y s t e m s a s e x a m p l e st oi n v e s t i g a t et h ea p p l i c a t i o no fc la n a l y s i si n e n v i r o n m e n t a lf i e l d sa n d p h a r m a c e u t i c a l a n a l y s i s 1 )c e ( i v ) 一p m m a z i n eh y d r o c h l o r i d es y s t e m ；2 ) k 3 f e ( c n ) 6 一l u m i n o l - p h e n o t h i a z i n e ss y s t e m s ；3 ) c e ( i v ) - c e p h b a s e d f l - l a c t a l n a n t i b i o t i c s r h 6 0 s y s t e m s ； 4 )n b s h y d r a z i n e f l u o r e s c e i ns y s t e m ；5 ) n b s a m m o n i u m f l u o r e s c e i ns y s t e m 1 c e ( i v ) - p r o m a z i n e h y d r o c h l o r i d es y s t e m ac h e m i l u m i n e s c e n c e ( c l ) f l o ws y s t e mi sd e s c r i b e df o rt h ed e t e r m i n a t i o no f p r o m a z i n eh y d r o c h l o r i d eb a s e d o ni t sd i r e c to x i d a t i o nw i t hc e r i u m ( i v ) i na c i d i c m e d i a a c c o m p a n i e d w i t hc h e m i l u m i n e s c e n c e t h e s y s t e mr e s p o n d sl i n e a r l y t o 4 a b s t r a c t p r o m a z i n eh y d r o c h l o r i d ec o n c e n t r a t i o ni nt h er a n g e1 o x l o g m l 1 5 x 1 0 5 9 m lw i t h ad e t e c t i o nl i m i t ( 3 0 ) o f4 o xlo g m l r e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n ( r s d ) i s2 6 f o r 5 0 x l o 6 9 m lp r o m a z i n eh y d r o c h l o r i d e ( n = 1 1 ) t h es y s t e mh a sb e e ns u c c e s s f u l l y a p p l i e dt ot h ed e t e r m i n a t i o no f p r o m a z i n eh y d r o c h l o r i d ei nt a b l e t s ， 2 k 3 f e ( c n ) 6 一l u m i n o l p h e n o t h i a z i n e ss y s t e m s t w o p h e n o t h i a z i n ed r u g s ，n a m e l y , p r o m a z i n eh y d r o c h l o r i d ea n dc h l o r p r o m a z i n e h y d r o c h l o r i d es h o ws t r o n ge n h a n c e m e n te f f e c t so nt h el i g h te m i s s i o np r o d u c e db y l u m i n o lo x i d a t i o nw i t hp o t a s s i u mf e r r i c y a n i d ei nt h e s t r o n g b a s i cc o n d i t i o n t h e c h e m i l u m i n e s c e n c e s p e c t r a o ff o l l o w i n g s y s t e m sw e r es t u d i e db yt h em o d i f i e d r f 一5 4 0f l u o r i m e t r y ：a ) l u r n i n o l + p o t a s s i u m f e r r i c y a n i d e + s o d i u r nh y d r o x i d e ；b ) l u m i n o l + p o t a s s i u mf e r r i c y a n i d e + s o d i u mh y d r o x i d e + p r o m a z i n eh y d r o c h l o r i d e ；c ) l u m i n o l + p o t a s s i u mf e r r i c y a n i d e + s o d i u mh y d r o x i d e + c h l o r p r o m a z i n e h y d r o c h l o r i d e t h er e s u l t ss h o wt h a ta l lt h ea b o v es y s t e m sg i v eo n ep e a ks i t u a t i n ga t a b o u t4 2 5 n l n ，i n d i c a t i n g t h a tt h ef u n c t i o no ft w os t u d i e d d r u g sw a so n l y a s e n h a n c e m e n tr e a g e n t sb e c a u s et h e r ei sn on e w e m i t t i n gs u b s t a n c ep r o d u c e d i nt h e o p t i m u mc o n d i t i o n s ，c li n t e n s i t i e sa r ep r o p o r t i o n a lt oc o n c e n t r a t i o n so ft h es t u d i e d d r u g si nt h ec e r t a i nr a n g e 。t h ep r o p o s e dm e t h o di sv e r ys e n s i t i v et ot h es t u d i e dd r u g s a n dt h el i m i t so f d e t e c t i o na r e3 0n g m la n d5 0n g m lf o r p r o m a z i n eh y d r o c h l o r i d e a n df o rc h l o r p r o m a z i n eh y d r o c h l o r i d e ，r e s p e c t i v e l y t h em e t h o dh a sb e e na p p l i e dt o t h ed e t e l m i n a t i o no fs t u d i e dd r u g si nt a b l e t sw i t hs a t i s f a c t o r yr e s u l t s 3 c e ( i v ) - c e p hb a s e d 口l a c t a ma n t i b i o t i c s - r h 6 gs y s t e m s a p a r tf r o mh y d r o l y s i si nv e r ys t r o n gb a s i cc o n d i t i o n ，h y d r o l y s i so ff l - l a c t a m a n t i b i o t i c s p r o d u c e sm e r c a p t o c o n t a i n i n gc o m p o u n d si na c i d i c ，b a s i c ，a n dn e u t r a l c o n d i t i o n i tw a sf o u n dt h a tm i x i n go f c e ( i v ) a n dm e r c a p t o c o n t a i n i n gc o m p o u n di n t h ea c i d i cc o n d i t i o np r o d u c e sw e a kc h e m i l u m i n e s c e n c eg r e a t l ys e n s i t i z e db yr h 6 g b a s e do nt h ea b o v ed i s c o v e r y , af i a c lw a sd e v e l o p e dt od e t e r m i n a t i o no ft h e a b s t r a c t f o l l o w i n g f i v e c e f o t a x i m e c e p h - b a s e df l - l a c t a ma n t i b i o t i c s ， s o d i u m ， c e f t n a x o n e s o d i u m ， n a m e l y , c e f r a d i n e ，c e f u r o x i m e ， c e f o p e r a z o n e s o d i u m t h e c h e m i l u m i n e s c e n c e s p e c t r a o f f o l l o w i n gs y s t e m s w e r es t u d i e d b y t h em o d i f i e d r f 5 4 0f l u o r i m e t r y ：a 110m m o l lc e r i u ms u l f a t e + 5 x10 5m o l lr h 6 g + 0 2m o l l h 2 s 0 4 ；2 、1 0m m o l lc e r i u ms u l f a t e + 5 x 1 0 。m o l lr h 6 g + 0 2m o l lh 2 s 0 4 + h y d r o l y s i sp r o d u c t i o no f 3 0m g lc e f o p e r a z o n es o d i u m ；3 ) 1 0 m m o l l c e r i u ms u l f a t e + 5 1 0 m o l lr h 6 g + 0 2m o l l h 2 s 0 4 + h y d r o l y s i sp r o d u c t i o n o f3 0m g l c e f f a d i n e t h er e s u l t ss h o wt h a to x i d a t i o no fr h 6 g b ya c i d i cc e r i u ms u l f a t ep r o d u c e s w e a ke m i s s i o n h o w e v e r , a d d i t i o no fh y d r o l y s i s p r o d u c t i o n s o ft w o d r u g s p r o d u c e ss t r o n ge m i s s i o n t h ec h e m i l u m i n e s c e n c ep e a k sa r es i t u a t e da t5 6 0n l n f o rb o t hd r u g s ，w h i c hi sc o r r e s p o n d i n gt ot h ef l u o r e s c e n c ep e a ko fr h 6 g i nt h e o p t i m u mc o n d i t i o n s ，c li n t e n s i t i e sa r ep r o p o r t i o n a lt oc o n c e n t r a t i o n so f t h es t u d i e d d r u g s i nt h e r a n g e 1 0 x1 0 g m l - 1 5 x1 0 g m l r e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n s ( r s d ) a r e2 2 ，2 5 ，2 7 ，2 8 ，2 8 f o r5 0 x l0 g m lc e f r a d i n e ，c e f u r o x i m e ， c e f o t a x i m es o d i u m ，c e f t r i a x o n e s o d i u m ，c e f o p e r a z o n es o d i u m ，r e s p e c t i v e l y t h e l i m i t so f d e t e c t i o na r e3 0 x1 0 g m l 、3 5 x1 0 g m l 、3 8 1 0 g m l 、3 9 1 0 8 g m l 、4 0 x10 一g m l 、4 0 1 0 g m lf o rc e f r a d i n e ，c e f u r o x i m e ，c e f o t a x i m es o d i u m ， c e f l r i a x o n es o d i u m ，c e f o p e r a z o n es o d i u m ，r e s p e c t i v e l y t h ee f f e c t so fc o s u b s t a n c e s w e r ea l s oi n v e s t i g a t e d t h em e t h o dh a sb e e na p p l i e dt ot h ed e t e r m i n a t i o no fs t u d i e d d r u g si ns y n t h e t i c a ls a m p l e s w i t hs a t i s f a c t o r yr e s u l t s 4 n b s h y d r a z n q e f l u o r e s c e i ns y s t e m a c h e m i l u m i n e s c e n c e ( e l ) f l o ws y s t e mi sd e s c r i b e df o rt h ed e t e r m i n a t i o no f h y d r a z i n e b a s e do ni t so x i d a t i o nw i 也n b si nb a s em e d i a a c c o m p a n i e dw i t h c h e m i l u m i n e s c e n c e t h es y s t e mr e s p o n d sl i n e a r l yt oh y d r a z i n ec o n c e n t r a t i o ni nt h e r a n g e0 1 0 x1 0 。5 9 m l w i t had e t e c t i o nl i m i t ( 3 0 ) o f3 0 x 1 0 。8 9 m la n dr e l a t i v e s t a n d a r dd e v i a t i o n ( r s d ) o f 2 7 f o r 5 0 x 1 0 “g m lh y d r a z i n e ( n = l1 ) t h es y s t e mh a s b e e n s u c c e s s f u l l ya p p l i e d t ot h ed e t e r m i n a t i o n o f h y d r a z i n e i na i r 6 a b s t r a c t 5 n b s a m m o n i u m - f l u o r e s c e i ns y s t e m ac h e m i l u m i n e s c e n c e ( c l ) f l o ws y s t e mi sd e s c r i b e df o rt h ed e t e r m i n a t i o no f a m m o n i u mc h l o r i d eb a s e do ni t so x i d a t i o nw i t hn b si nt h em e d i ao fo 0 5m o l l a l k a l i n em e d i aa c c o m p a n i e dw i t hc h e m i l u m i n e s c e n c e t h es y s t e mr e s p o n d sl i n e a r l y t oa m m o n i u mc h l o r i d ec o n c e n t r a t i o ni nt h er a n g e1 0 1 0 g m l 1 5 10 。5 9 m lw i t h ad e t e c t i o nl i m i t ( 3 g ) o f 3 6 x 1 0 。8 9 m la n dr e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n ( r s d ) o f 2 8 f o r 5 0 x 1 0 6 9 m la m m o n i u mc h l o r i d e ( n = 1 1 ) t h es y s t e mh a sb e e ns u c c e s s f u l l y a p p l i e d t ot h ed e t e r m i n a t i o no f a m m o n i u mc h l o r i d ei nt h r e ew a t e r s a m p l e s 7 综述 第一部分综述 化学发光( c h e m i l u m i n e s c e n c e ，简称c l ) 是化学反应的反应物或生成物分子 吸收了反应释放的化学能电子由基态跃迁至激发态，再由激发态返回基态时所产 生的光辐射。根据化学发光反应的发光强度或辐射总量来确定反应中相应组分含 量的分析方法叫化学发光分析法。此方法突出的优点是灵敏度高，不需要外来光 源，从而避免了瑞利散射和拉曼散射等噪音，大大提高了信噪比，若与酶法反应 相结合其检测限可达1 2 0 个分子；其次是线性范围宽，可达6 个数量级：此外还 有设备仪器简单、分析快速容易实现自动化等优点。作为一种有效的痕量分析方 法，这种方法在环境科学以及生命科学等领域中具有广泛的应用前景( 1 6 】。 近年来，化学发光的发展主要表现在新体系的不断建立完善，新发光试剂的 研制，与其它技术如流动注射技术( f i a ) 、高效液相色谱( h p l c ) 、固定化试 剂技术、传感器技术以及生化免疫技术等联合运用，日渐拓宽了化学发光分析的 应用范围1 2 j 。本文研究流动注射化学发光方法( f i a c l ) 在环境分析和药物分 析上的应用。 1 、常见化学发光反应体系 1 1 鲁米诺类( 1 u m i n 0 1 ) 化学发光反应体系 鲁米诺( 5 - 氨基一邻苯二甲酰肼) 是使用最早应用最广泛的化学发光试剂之 一。它在碱性溶液中可以被强氧化剂氧化而处于激发态，激发态发射蓝光同时回 到基态，如图1 所示。 o 厂鼍丫j l n h 。h ； l儿山h。t n h 0 0 a - h y d r o x 冲e r o x y d n o h o h 瞬一瞬 图1l u m i n o l 的发光机理( o x 代表氧化剂) 综述 许多化合物的分析都是采用鲁米诺发光体系。通常情况下，所采用的氧化 剂是过氧化氢，鲁米诺与过氧化氢的化学发光反应相当缓慢，但当有某些催化剂 存在时，反应非常迅速。最常用的催化剂是金属离子，在很宽浓度范围内，金属 离子浓度与发光强度成正比，从而可进行某些金属离子的化学发光分析，利用这 一反应可以分析那些含有金属离子的有机化合物，达到很高的灵敏感度。例如利 用水溶液性的阳离子卟啉m e s o 一四( 4 一n 一甲基吡啶) 锰衍生物与d n a 的相互作 用对鲁米诺一h 2 0 2 化学发光反应的催化可检测到0 2p l 的d n a 【7 】。根据硅钼杂 多酸氧化鲁米诺产生化学发光，并采用停留技术在硅、磷共存时不经分离实现对 水样、钢样中硅进行选择性测定【8 】及痕量磷的测定1 9 1 。利用j o n e s 柱产生的铀( i i i ) 与鲁米诺之间的化学发光反应可检测铀1 1 0 l 。在亚铁氰化钾存在下，鲁米诺体系可 以测定环境水样中的c r ( v i ) 川、矿石中的铌、监测工业废水中的微量铜、 矿石中的钽、水样中的微量钒等。在药物分析中，也可利用金属离子对鲁 米诺化学发光反应的催化作用对某些物质进行直接或问接的测定。如利用抗坏血 酸将f e ( i i i ) 还原为f e ( i i ) ，f e ( 1 i ) 对鲁米诺化学发光反应的催化作用从而对抗坏 血酸进行检测。庞志功等用鲁米诺一h 2 0 2 一c o ( i i ) 体系测定了天麻素、穿心莲 内酯1 8 - 1 9 、厚朴酚1 2 0 】、芦丁、丹皮酚 2 2 - 2 3 l 、儿茶酚胺类化合物1 2 4 】。 其次是利用某些化合物对鲁米诺化学发光反应的增强或抑制作用来对其进 行测定，如利用白蛋白对金属卟啉一鲁米诺一过氧化氢体系的增强作用来测定血清 中的白蛋白【2 5 】。庞志功等f 2 6 - 2 7 1 基于r 对l u m i n 0 1 h 2 0 2 - a u c l 4 - 体系化学发光的抑 制作用测定了药物和兔血浆中含碘药物盐酸胺碘酮。利用含硫醇的药物对次氯酸 盐的还原抑制鲁米诺一次氯酸盐体系的化学发光来检测这些药物，汪宝琪等2 9 】 利用丹皮酚对鲁米诺。0 2 一c o ( 1 1 ) 发光体系的猝灭研究了丹皮酚的药动力学等。 其三是通过偶合反应间接测定无机或有机化合物。所谓偶合反应就是将能 产生或消耗化学发光反应物的一个( 或一系列) 反应与另一个化学发光反应结合 起来，实现某些物质的间接化学发光测定。如利用vk 增敏乙醇的光氧化反应， 产生的过氧化氢再与鲁米诺反应产生化学发光( 以氯化血红素作此反应的催化 剂) ，可测定维生素k 。线性范围为1 0 1 0 - 7 5 0 1 0 _ 4m o l l 。利用f e ( i i ) 催 化鲁米诺化学发光反应，无需氧化剂，可实现对饮料及药物s t j n 中的柠檬酸酯的 检测( 2 0 1 0 - 7 1 0 1 0 4 m o l l ) p o 。a l a p o n t 等利用异烟肼一二氧化锰反应产 综述 生的m n ( i i ) 抑制l u m i n o l - h ：0 ：体系的化学发光，由此可测异烟肼 3 1 j 。 其四是将鲁米诺的衍生物如异鲁米诺( a b e l ) 标记到羧酸和氨类化合物上， 经过高效液相色谱( h p l c ) 或液相色谱( l c ) 分离后，再在碱性条件下与过氧 化氢一铁氰化钾反应进行化学发光检测。也可以采用其它分离方法，如张帆等p 纠 将新合成的化学发光试剂异硫氰酸鲁米诺标记到酵母r n a 后，通过离心和透析 分离，然后进行化学发光检测。庄惠生等【3 3 】研究了异硫氰酸异鲁米诺的电致化学 发光性质及其反应机理。在k o h k c l h 2 0 2 ( p h l l 8 ) 体系中，施加三角波脉冲 电压使异硫氰酸异鲁米诺产生较强的电致化学发光，其浓度在2 5 1 0 - “1 0 1 0 _ 7 m o l l 范围与发光强度成线性关系，检出限为6 2 1 0 “2 m o l l ，用于测定抗 甲胎蛋( a n t i a f p ) ，取得满意结果。此外他们还合成了n 一( 卢羧基丙酰基) 异 鲁米诺，并研究其电致化学发光的行为及其机理。 1 2 光泽精化学发光反应体系 光泽精( 1 u c i g e n i n ) 是使用较早的一种发光试剂，在碱性介质中如被过氧化 氢等氧化剂氧化后的产物吸收了反应放出的热量而处于激发态，激发态发射蓝绿 光并回到基态。光泽精广泛应用于化学发光分析，例如，用光泽精发光体系测定 金属离子【3 4 】、抗坏血酸1 3 5 】以及碱性磷酸酶等f 3 6 】。利用胆固醇胆固醇氧化酶反应 产生过氧化氢来间接测定血清中的胆固醇【3 7 ) ：利用光氧化抗坏血酸产生过氧化 氢，过氧化氢在碱性条件下与光泽精反应，以甲苯胺蓝( t o l u i d i n eb l u e ) 作增 敏剂，间接测定药物制剂、果汁及血清中的抗坏血酸，线性范围为1 0 1 0 9 3 0 x1 0 4 m o l l ，宽达5 个数量级1 3 s , 3 9 。s a t o l 4 0 】利用抗坏血酸氧化酶与l 一抗坏血酸 反应产生的脱氢抗坏血酸对光泽精化学发光反应具有增敏作用，对药物、果汁中 的抗坏血酸进行检测。6 0 年代以半个光泽精分子独自合成了一组吖啶酯 ( a c r i i d i n u me s t e r ) 。它亦是一种很好的发光试剂，其量子产率高( 1 ) ，反应非 常快，9 0 的发光在l 1 0s 内完成。例如k a c i a n 等【4 1 堋9 ，1 0 一二甲基吖啶酸盐 测定一硫酸盐、过二硫酸盐等。 1 , 3 过氧化草酸醑化学发光反应体系 过氧化草酸酯( p e m x a l a t e ) 化学发光反应( p 0 c l ) 是在合适的荧光化合物( 增 综述 敏剂) 的存在下，过氧化氢诱导氧化芳香基草酸酯而发光的过程。发光的情况与 增敏剂特性有关而与化学发光试剂种类、性质无关。典型的过氧化草酸酯化合物 有双f 2 ，4 一二硝基苯基j 草酸酯( d n p o ) 、双 2 , 4 ，6 一三氯苯基】草酸酯( t c p o ) a k w a k m a n 等对液相色谱过氧草酯化学发光检测进行研究。并对1 ，1 一草酰二 咪畔作为发光剂在p o c l 中的应用作了评述。j o n s s o n 等【4 3 】研究了杂环化合物在 p o c l 中的催化作用。最近b a m e t t 等【4 4 】设计合成了草酰双三氟甲基磺酰基亚胺 基一双苯基一4 4 二磺酸及2 ，2 一草酰双三氟甲基磺酰基亚胺基双乙苯基4 ” 一4 ”二磺酸两种新的草酰胺用于水溶性过氧草酸酯发光体系；它们具有较强的反 应活性，几乎没有背景发光，具有较好的水溶性：采用罗丹明b 对其分析性能 进行了评价，其检出限可达1 1 0 - 7 5 1 0 m o l l 。他们对浚化合物的非磺酸 化物也进行了研究，其检出限可达9 1 0 - 8 5 1 0 - 7m o l l 。 1 4 商锰酸钾化学发光反应体系 高锰酸钾是化学发光反应中常用的强氧化剂，能与某些生物碱直接发生化学 发光反应。t o w n s h e n d 首先将高锰酸钾一吗啡化学发光反应体系成功地用于血液、 尿液及麻醉镇痛药物中吗啡的化学发光测定，并讨论了该反应的机理【4 5 4 6 1 。利 用高锰酸钟连二亚硫酸钠体系可测定维生素b 6 【4 7 1 、利血平【4 8 】、延胡索乙素1 4 9 1 、 核黄素【5 0 】。以高锰酸钾为氧化剂，在酸性溶液中测定了叔丁啡、对氨基苯甲 酸酯类麻醉剂【5 2 】、可待因【5 3 】、肾上腺素【5 4 】、抗坏血酸 5 5 4 6 】、吗啡【5 7 】、5 一羟色胺 1 5 8 。此外t o w n s h e n d 等人在酸性高锰酸钾溶液中以甲酸罗丹明b 为载流研究了 可作为辅助还原剂的一些含氮亲核试剂【5 9 l 。 1 5c e ( ) 化学发光反应体系 c e ( i v ) 如同高锰酸盐、重铬酸盐或溴酸盐等氧化剂一样在氧化亚硫酸盐等 还原性物质时可产生弱的化学发光反应，因此可以利用此体系直接测定这些物 质。如药物制剂及食物中的抗氧化剂亚硫酸盐【鲫、胆酸汁、环已烷氨基磺酸 钠【6 2 j 、色氨酸【6 3 1 、可的松、氢化可的松、地塞米松洲、盐酸环丙沙星1 6 5 】等一系 列药物对上述反应具有增敏作用可对其进行检测，并建立了一种可的松、氢化可 综述 的松、脱氢皮质醇、孕体酮、皮质酮等药物的全自动分析方法。此外c e ( i v ) 与一些含有巯基或含硫的药物反应，用一些荧光物质如奎宁、罗丹明b 或罗丹 明6 g 等) 增敏测定了如抗高血压药物卡托普利( 巯甲丙脯酸) 6 6 1 、青霉胺【6 7 1 、 巯基酰甘氨酸6 8 1 、双氢克尿噻【6 9 1 、吩噻嗪【7 0 】等药物，用氢化可的松增敏测定了 谷胱甘肽、半胱胺酸。 1 6 1 ，2 - 二氧杂环丁烷化学发光反应体系 1 ，2 - 二氧杂环丁烷类的化学发光也研究得比较多，这类化合物经单分子转变后 成两个含羰基的产物，产物之一可生成激发态。由于许多化学发光和生物发光的 中间体都可能生成这种过渡态而早已受到人们的注意。k a m t e k a r 等【7 2 】利用碱性 磷酸酶( a l p ) 催化l ，2 一二氧杂环丁烷的磷酸盐衍生物的水解产生化学发光来测定 z n ( i ) 、b e ( 1 i ) 、b i ( 1 1 1 ) 。 1 7 钉( i i ) 的联毗啶( b i p y ) 配合物化学发光反应体系 r u ( b i p y ) 3 2 + 是一种广泛研究的化合物1 7 3 】， 其化学发光及电致化学发光应 用逐渐增多；r u ( p h e n ) 3 2 + 也可用作化学发光试剂。何治柯等用r u ( b i p y ) 3 ”及 r u ( p h e n ) 3 2 + 化学发光法在酸性介质中测定草酸、酒石酸及5 种羟基酸等。 在稀硫酸溶液中，吡啶钌配阳离子