（法医学专业论文）利多卡因在硬膜外麻醉犬体内的死后弥散研究.pdf

利多卡因在硬膜外麻醉犬体内的死后弥散研究 摘要 目的 ( 1 ) 建立犬的利多卡因硬膜外麻醉死后弥散模型： ( 2 ) 研究利多卡因在犬体内死后弥散的特点和规律： ( 3 ) 比较处死方式和给药时间对利多卡因弥散的影响，探讨死后弥散的影响因素； ( 4 ) 为利多卡因硬膜外麻醉意外致死案件的法医学鉴定提供科学依据。 方法 i 动物模型 1 1 空气栓塞处死犬死后弥散模型犬3 0 只，随机分为处死后即刻给药组( 1 8 只) 和 处死后不同时间给药组( 1 2 只) 。 处死后即刻给药组：于生命体征消失后，立刻匀速注入一倍极量盐酸利多卡因 ( 1 3 m g k g ，按犬、人体型系数推算) ，5m i n 内注完，置于室温下( 1 7 2 1 1 2 ) ，按3 样品 采集方法在给药后0 、1 2 、2 4 、4 8 、7 2 、9 6 小时解剖动物取材。 处死后不同时间给药组：于生命体征消失后0 ，l 、3 、6 、1 2 小时匀速注入一倍极量 盐酸利多卡因( 1 3 m g k g ，按犬、人体型系数推算) ，5 m i n 内注完，置于室温下( 1 7 2 1 ) ， 按3 样品采集方法在给药后即刻解剖动物取材。 1 2 二氧化碳处死犬死后弥散模型犬1 8 只，于生命体征消失后，立刻匀速注入一倍 极量盐酸利多卡因( 1 3 m g k g ，按犬、人体型系数推算) ，5m i n 内注完，置于室温下 ( 1 7 2 1 ) ，按3 样品采集方法在给药后0 、1 2 、2 4 、4 8 、7 2 、9 6 小时解剖动物取材。 2 生命体征记录方法 用b l 一生物机能实验系统( 成都泰盟有限公司) ，全程记录实验犬死亡过程中的心电、 血压和呼吸等生命体征的变化。 3 样品的采集与处理 硬膜外给药后，置于室温下( 1 7 2 l ) ，不同时间点解剖动物，采集脑、不同脊髓节 段( 颈段脊髓、胸段脊髓、腰段脊髓、骶段脊髓) 、心、肺、肝、脾、肾、胆汁、尿、右 心室血、左心室血、上腔静脉血、下腔静脉血、玻璃体液、注射部位肌肉和颞肌( 对照肌 肉) 等组织脏器和体液，即刻检测，每只犬的检材在4 8 小时内检测完毕。 检测样品经酸，碱化处理后，乙醚萃取，根据保留时间和特征离子峰气相色谱一质谱联 用定性，内标法、工作曲线法气相色谱质谱联用定量。 结果 i 利多卡因在空气栓塞致死犬体内的死后弥散 ( 1 ) 处死后即刻给药组的实验显示：利多卡因在注入机体的即刻就由硬膜外弥散入 脊髓、脑和椎管内外静脉丛，并且由椎管内外静脉丛迅速进入上下腔静脉、心血和肺组织。 山西医科大学碰士学位论文 左心室血中利多卡因含量变化明显，由开始的4 7 + 3 8 9 9 m l 上升到7 2 小时解剖时的 2 1 0 士9 4 嵋m l ，而肺中利多卡因的含量在2 4 小时后有所下降，提示肺组织在给药后的早 期可能成为利多卡因的一个蓄积库，左心室血中利多卡因含量的增高可能为肺中利多卡因 随着死亡时间的延长逐渐弥散入左心血液中引起的。给药1 2 小时后，心、肝、肾、注射 部位肌肉和尿液均受到利多卡因死后弥散的影响。脾、颞肌、胆汁、玻璃体液不受死后弥 散的影响，此特点可区别生前给药还是死后给药。 ( 2 ) 处死后不同时间给药组的实验显示：分别在0 、1 、3 、6 、1 2 小时给药即刻解剖 时，利多卡因在各组织脏器和血液中的含量变化无统计学差异，说明死后不同时间给药不 会对利多卡因的死后弥散造成影响。 2 利多卡因在二氧化碳致死犬体内死后弥散的实验显示：除了脑和各脊髓段在各时间点均 检出利多卡因外，在其它组织中，仅于给药后4 8 、7 2 、9 6 小时在下腔静脉血中检出利多 卡因，利多卡因的弥散很局限，说明二氧化碳处死方式对利多卡因的死后弥散影响较大。 小结 l 本文建立了利多卡因硬膜外麻醉意外的死后弥散动物模型，结果显示：利多卡因可 发生死后弥散，所建模型可应用于硬膜外麻醉意外死亡和中毒案件的法医学研究。 2 利多卡因在空气栓塞致死犬体内的死后弥散表明：由硬膜外给药后利多卡因在数分 钟内迅速分布于上下腔静脉血、心血和肺组织中，这与利多卡因本身的理化性质和给药途 径有很大关系。肺组织在给药后的早期可能成为利多卡因的一个蓄积库，随着死亡时间的 延长逐渐的影响到心血中利多卡因含量。脾、颞肌、胆汁和玻璃体液不受死后弥散的影响， 此特点可区别生前给药还是死后给药。 3 利多卡因在死后不同时间给药犬体内的死后弥散表明：在死后的一段时间内，机体 的内环境( 如：p h 值变化、腐败的产生等) 还没有发生大的变化之前，给药时间不会对利 多卡因的死后弥散造成影响。 4 利多卡因在二氧化碳致死犬体内的死后弥散表明：二氧化碳窒息处死方法可对利多 卡因的死后弥散造成很大影响。提示在建立死后弥散模型时，应该注意到处死方式对毒物 在体内死后弥散造成的影响。 5 在进行硬膜外麻醉意外死亡和中毒案件的法医学鉴定中，应综合考虑死后不同时间 对体内利多卡因含量的影响；利多卡因的死后弥散与其理化特性、在体内的电离状态和弥 散距离有关系；随着腐败的发生，生物屏障的破坏使其通透性增加也可能会促进盐酸利多 卡因的弥散。在疑为利多卡因麻醉致死案件取材时，要考虑死后弥散对检材中利多卡因含 量造成的影响，心血和周围血的提取应防止相互污染，先结扎采血部位主要脉管系统通路， 防止取材时血液流动造成的影响。 关键词：利多卡因，死后弥散，死后再分布，硬膜外麻醉 i i 山西医科丈学硕士学位论文 s t u d yo nt h ep o s t m o r t e md i f f u s i o no fl i d o c a i n e i nd o g sa f t e ra ne p i d u r a la d m l n l s t r a t i o n a b s t r a c t o b j e c t i v e ：1 t od e v e l o pap o s t m o r t e md i f f u s i o nm o d e lo fl i d o c a i n ei nd o g sa f t e r a l l e p i d u r a la d m i n i s t r a t i o n 2 t oi n v e s t i g a t et h ep o s t m o r t e md i f f u s i o no fl i d o c a i n ei nd o g s 3 t o c o m p a r ep o s t m o r t e md i f f u s i o no fl i d o c a i n ei nd o g sw i t hd i f f e r e n tw a yo fe x e c u t e sa n d a d m i n i s t r a t i o nt i m e s 4 t op r o v i d eas c i e n t i f i ce v i d e n c ef o rt h ef o r e n s i ci d e n t i f i c a t i o no ft h e a n e s t h e s i aa c c i d e n tc a u s e db yl i d o c a i n e m e t h o d s ：1 a n i m a lm o d e l s ：1 1 g r o u pe x e c u t e db ya na e r o e m b o l i s m ：3 0 d o g sw e r e e x e c u t e db ya na e r o e m b o l i s m w h e nt h ev i t a ls i g n so fd o g sd i s a p p e a r e d ，1 8 d o g sw e r eg i v e na n e p i d u r a la n e s t h e s i aa ta ne v e ns p e e di nf i v em i n u t e sw i t h1 3 m g k gw e i g h to fl i d o c a i n e h y d r o c h l o r i d e ，t h e ns a m p l e di n0 ，1 2 ，2 4 , 4 8 ，7 2 ，9 6h o u r sa f t e rt h ea d m i n i s t r a t i o n ( n = 3p e r t i m e p o i n t ) t h eo t h e r1 2 d o g sw e r eg i v e na l le p i d u r a la n e s t h e s i aw i t ha ne v e ns p e e di nf i v e m i n u t e sw i t h1 3 m g k gw e i g h to fl i d o c a i n eh y d r o c h l o r i d er e s p e c t i v e l ya t1 , 3 ，6 ，1 2 h o u r sa f t e rt h e v i t a ls i g n so fd o g sh a dd i s a p p e a r e d ( n = 3p e rt i m e p o i n t ) ，t h e nc o l l e c t e ds a m p l e sa to n c 跫1 2 g r o u pe x e c u t e db yc a r b o nd i o x i d e ( 1 8 d o g s ) ：1 8 d o g sw e r eg i v e na ne p i d u r a la n e s t h e s i aw i t ha n e v e ns p e e di nf i v em i n u t e sw i t h1 3 m g k gw e i g h to fl i d o c a i n eh y d r o c h l o r i d e ，t h e nr e s p e c t i v e l y c o l l e c t e ds a m p l e si n0 ，1 2 ，2 4 , 4 8 ，7 2 ，9 6h o u r sa f t e ra d m i n i s t r a t i o n ( n = 3p e rt i m e p o i n t ) 2 r e c o r do fv i t a ls i g n s ：b yab i o l o g i c a lf u n c t i o ns y s t e m ，t h ev i t a ls i g n ss u c ha se l e c t r o c a r d i a , b l o o dp r e s s u r ea n dr e s p i r a t i o nf r o mb e g i n n i n go ft h ee x e c u t et ot h ed e a t ho fd o g sw e r e r e c o r d e d 3 c o l l e c t i o no f s a m p l e s ：a f t e ra d m i n i s t r a t i o n ，t h ed o g s w e r e p l a c e d a tr o o m t e m p e r a t u r e ( 1 7 2 1 c ) ，t h eb r a i l l ，s p i n a lc o r d ( c e r v i c a ls p i n a lc o r d ，t h o r a c i cs p i n a lc o r d ，l u m b a r s p i n a lc o r d ，s a c r u ms p i n a lc o r d ) ，h e a r t ，l u n g ，l i v e r , s p l e e n ，k i d n e y , b i l e ，u r i n e ，h u m o r v i t r e o u s , b l o o do fr i g h tv e n t r i c l e ，b l o o do fl e f tv e n t r i c l e ，b l o o do fs u p e r i o rv e n a ，b l o o do f i n f e r i o rv e n a m u s c l ei ni n j e c t i o nl o c a t i o na n dt e m p o r a l i s ( m u s c l ei nn oi n j e c t i o nl o c a t i o n ) - - w e r ec o l l e c t e da n dd e t e c t e di m m e d i a t e l y 4 a n a l y s i s ：t h es a m p l e sw e r ee x t r a c t e dw i t he t h e r a n a l y s i sw a sp e r f o r m e db yag c e q u i p p e dw i t han p d a n dag c m s t h eq u a l i t a t i v ea n a l y s i sw a sb a s e do nr e t e n t i o nt i m ei nt h e c h r o m a t o g r a p h i cs y s t e mc o u p l e dw i t ht h ei o nf r a g m e n t a t i o ns p e c t r u mi nt h em a s ss p e c t r o m e t e r t h eq u a n t i t a t i v ea n a l y s i sw a sb a s e do na ni n t e r n a ls t a n d a r d m e t h o d r e s u l t s ：1 g r o u po fe x e c u t e db ya e r o e m b o l i s m ：t h es e r i e so fa d m i n i s t r a t i o nw h e nt h ev i t a l s i g n so fd o g sd i s a p p e a r e d ：i nd o g sd i s s e c t e di m m e d i a t e l y ，l i d o c a i n ew e r ed e t e c t e di nb l o o do f i n f e r i o rv e n a ，b l o o do fs u p e r i o rv e n a b l o o do fr i g h tv e n t r i c l e ，b l o o do fl e f tv e n t r i c l ea n d i i i 山西医科大学颂上学位论文 l u n g t h ec o n c e n t r a t i o n so fl i d o c a i n ei nb l o o do fl e f tv e n t r i c l ew e r ec h a n g e do b v i o u s l y - i n c r e a s e d f r o m4 7 士3 8 9 9 m lt o2 1 0 - a ：9 4 1 t g m li n7 2h o u r s t h ec o n c e n t r a t i o n si nl u n g t h e r ew a sal i t t l e d e c r e a s i n ga f t e r2 4h o u r s ，i ti n d i c a t e dt h a tt h el i d o c a i n ec o n c e n t r a t i o n si n c r e a s e di nb l o o do fl e f t v e n t r i c l em a ya s c r i b et ot h ed i f f u s i o nf r o ml u n g h e a r t ，l i v e r k i d n e y ，u r i n ea n dm u s c l ei n i n j e c t i o nl o c a t i o nw e r ea l la f f e c t e db yt h ep o s t m o r t e md i f f u s i o n s p l e e n ，t e m p o t a lm u s c l e ，b i l e a n dh u m o rv i t r e o u sh a dn o tb e e na f f e c t e d b yt h ep o s t m o r t e md i f f u s i o n t h e s e r i e so f a d m i n i s t r a t i o na t1 , 3 ，6 ，1 2h o u r sa f t e rt h ev i t a ls i g n so fd o g sd i s a p p e a r e d ：n ep o s t m o r t e m d i f f u s i o nw e r es i m i l a rw i t hd o g sa d m i n i s t r a t i o nw h e nt h ev i t a ls i g n so fd o g sd i s a p p e a r e d 2 g r o u po fe x e c u t e db yc a r b o nd i o x i d e ：l i d o c a i n ew e r ed e t e c t e di nb l o o do fi n f e r i o rv e n aa t4 8 ，7 2 ， 9 6h o u r sa f t e ra d m i n i s t r a t i o n ，i ti n d i c a t e dt h a tt h ep o s t m o r t e md i f f u s i o no fl i d o c a i n es h o u l db e i n f t u e n c e db yt h em e t h o do fs a c r i f i c e c o n c l u s i o n ：1 t h es t u d yh a se s t a b l i s h e dt h ep o s t m o r t e md i f f u s i o nm o d e l so fe p i d u r a l a d m i n i s t r a t i o nw i t hl i d o c a i n e ，i tc a nb ea p p l i e dt ot h ef o r e n s i ci d e n t i f i c a t i o no ft h ee p i d u r a l a n e s t h e s i aa c c i d e n t 2 n er e s u l t so fl i d o c a i n es a c r i f i c e db ya e r o e m b o l i s ms h o w e dt h a t 1 i d o e a i n e d e t e c t e di nh e a r tb l o o d ，l u n ga n db l o o di ni n f e r i o rc a v a lv e i ni naf e wm i n u t e sa f t e re p i d u r a l a n e s t h e s i a , w h i c hw a sr e l a t e dt ot h ep h y s i c o - c h e m i c a lp r o p e r t yo fl i d o c a i n ea n dt h ep a t ho f a d m i n i s t r a t i o n l u n gm a y b ea n o t h e rr e s e r v o i ri nt h ee a r l ys t a g ea f t e rd e a t h ，t h e nw i t ht h et i m e l a s t i n g t h ec o n c e n t r a t i o no fl i d o c a i n ei nh e a r tb l o o dw e r ee f f e c t e d t h e r ew a sn op o s t m o r t e m d i f f u s i o ni ns p l e e n 。t e m p o t a lm u s c l e ，b i l ea n dh u m o rv i t r e o u s w h e t h e rl i d o c a i n ew a sd e t e c t e di n t h em a t r i xc o u l db er e g a r d e da st h ee v i d e n c ef o rt h ep o i s o n i n go rp o s t m o r t e mi n t r a g a s t r i c a d m i n i s t r a t i o n 3 t h ep o s t m o r t e md i f f u s i o no fl i d o c a i n ei nd i f f e r e n tt i m ea d m i n i s t r a t i o ng r o u p s s h o w e dt h a t ，i th a dn o ts i g n i f i c a n te f f e c to nt h ep o s t m o r t e md i f f u s i o ni nt h ee a r l ys t a g ea f t e r d e a t h 4 t h eg r o u po fs a c r i f i c e db yc a r b o nd i o x i d es h o w e dt h a t t h ec a u s eo fd e a t hw o u l dt a k ea l l e f f e c to nt h ep o s t m o r t e md i f f u s i o no fl i d o c a i n e 5 i ti si m p o r t a n tt oc o n s i d e rt h ep h e n o m e n o no f p o s t m o r t e md i f f u s i o n i nt h ef o r e n s i ci d e n t i f i c a t i o no fe p i d u r a la n e s t h e s i aa c c i d e n tc a s e t h e p o s t m o r t e md i f f u s i o no fl i d o c a i n ew a sr e l a t e dt ot h ep h y s i c o - c h e m i c a lp r o p e r t yo fl i d o c a i n e ，t h er a t e o fe l e c t r o i o n i z a t i o na n dt h ed i s t a n c et or e s e r v o i r w i t ht h ed e v e l o p m e n to fg a n g r e n o u s ， d e s t r u c t i o no fb i o l o g i c a lb a r r i e rc a na l s of a c i l i t a t et h ed i f f u s i o no fl i d o c a i n eh y d r o c h l o r i d e t h e b l o o di nh e a r ta n dp e r i p hs h o u l db ed i s c r i m i n a t e d ，f o rl e s tt op o l l u t ee a c ho t h e r k e yw o r d s ：i i d o c a i n e ，p o s t m o r t e md i f f u s i o n , p o s t m o r t e mr e d i s t r i b u s i o n , e p i d u r a l a n e s t h e s i a i v 刖百 硬膜外麻醉( e r i i d u r a la n e s t h e s i a ) 是l 临床上常用的局部麻醉方法之一。利多卡因 ( 1 i d o c a i n e ) 是椎管内麻醉常用的药物。由于椎管内结构的特殊、利多卡因特殊的理化性 质、药代动力学和毒副作用，以及麻醉医师的操作熟练程度和患者的个体因素等多种原因 2 1 ，由利多卡因硬膜外麻醉意外而引起人身伤亡案例d 。鄙和医疗纠纷n 6 1 时有发生。尤其从 2 0 0 3 年9 月1 日起我国实行新的医疗事故鉴定制度以后，此类纠纷更呈上升趋势【5 】。手术 中死亡是否由麻醉意外引起己成为麻醉学和法医学研究的一个热点课题。 利多卡因硬膜外麻醉意外的常见原因为导管误入蛛网膜下腔、导管误入硬膜下间隙、 导管误插入血管或硬膜外腔静脉丛、硬膜外间隙注入利多卡因剂量和容积过大i 2 】。硬膜外 阻滞时，刺破硬膜的发生率为l 一2 ，若导管误入蛛网膜下腔可导致阻滞平面异常或全脊 麻，发生率为o 2 4 ( 0 1 2 - 0 5 7 ) ：导管误入硬膜下间隙可导致异常高平面阻滞，发生率为 0 1 7 ( 0 1 0 8 2 ) ；导管误插入血管或硬膜外腔静脉丛可引起全身中毒反应，发生率在 o 2 一2 8 之间1 6 - 8 1 。利多卡因硬膜外麻醉意外死亡原因的判定也成为麻醉学和法医学研究 的一个重点课题。 目前对于利多卡因麻醉意外的研究，国内外学者大多集中在盐酸利多卡因和碳酸利多 卡因硬膜外麻醉药效学 2 0 - 2 2 1 、麻醉机理1 9 1 、药物动力学2 1 - 2 3 、临床应用 2 4 - 2 5 和其他药物对 利多卡因麻醉效果的影响等方面2 7 1 。利多卡因引起的麻醉意外仅见一些个案报道孓嘲和 检材中利多卡因的定性和定量分析方法研究【2 8 3 8 】。麻醉意外的认定和原因分析主要还是依 靠临床表现 吲和尸体解剖所见 8 1 6 1 ，是否麻醉意外和麻醉意外死因确定尚无明确的法医 毒理学判定依据。许多与麻醉意外和麻醉意外死因判定有关的毒物动力学研究尚为空白， 如硬膜外麻醉意外误入蛛网膜下腔或硬膜外注入剂量和体积过大死亡时利多卡因的分布 规律、血中利多卡因浓度是否可达中毒浓度或致死浓度、脑脊液中利多卡因浓度高于血中 含量多少即可确定麻醉意外、导管误插入血管而致麻醉意外时血和脑脊液中含量有无相关 性、死后利多卡因是否可能发生再分布、是否会发生死后弥散、不同方式麻醉意外时体内 利多卡因的动态分布和毒物动力学规律等，均需深入研究。 几年来，本实验室炱克明研究组从利多卡因麻醉意外的麻醉学和法医学鉴定实际出 发，开展了利多卡因硬膜外麻醉意外死因判定的系列研究，已建立了生物检材中利多卡因 的薄层扫描3 9 和气相色谱质谱联用检测方法【3 8 1 和利多卡因静脉注射致死、蛛网膜下腔麻 醉致死和硬膜外麻醉致死的动物模型1 4 0 ，犬利多卡因蛛网膜下腔麻醉、静脉注射麻醉和硬 膜外麻醉死后再分布动物模型：迸一步研究了利多卡因在蛛网膜下腔麻醉致死、静脉注射 致死和硬膜外麻醉致死犬体内的分布 3 9 1 。初步研究结果显示，犬经静脉注射、蛛网膜下腔 注入和硬膜外腔注入致死剂量利多卡因后主要生命体征( 心电、血压、呼吸) 和各脏器病 理改变均与临床上误入蛛网膜下腔麻醉意外时的表现相类似：尽管目前国内外尚未见直接 静脉注射大剂量利多卡因致死的报道，但静脉注射致死犬主要生命体征( 心电、血压和呼 吸) 、中毒症状和各脏器病理改变均与临床上大剂量利多卡因用于局麻时吸收入血致死的 表现相类似m 】：硬膜外麻醉大剂量致死犬主要生命体征( 心电、血压和呼吸) 、中毒症状 和各脏器病理改变均与负克明报道一致 4 0 l ；静脉注射致死、蛛网膜下腔麻醉致死和硬膜外 麻醉致死犬体内利多卡因均会发生死后再分布现象，且以心血变化最为显著；以上先期研 究的致死犬利多卡因体内分布规律和毒物动力学数据可望成为利多卡因麻醉意外的判定 依据，但还需进一步系统研究不同致死情况下利多卡因是否会随时间发生死后弥散现象， 并探讨其发生机理。 本研究为该系列研究的一部分，主要目的： ( 1 ) 建立犬的利多卡因硬膜外麻醉死后弥散模型； ( 2 ) 研究利多卡因在犬体内死后弥散的特点和规律： ( 3 ) 比较处死方式和给药时间对利多卡因弥散的影响r 探讨死后弥散影响因素； ( 4 ) 为利多卡因硬膜外麻醉意外致死案件的法医学鉴定提供科学依据。 山西医科大学硬上学位论文 材料和方法 1 材料 1 1 试剂和材料 利多卡因对照品1 0 3 4 2 0 0 0 1中国药品生物制品检定所 利多卡因注射液( 2 ，国药准字h 3 1 0 2 1 0 7 1 ) 上海复星朝晖药业有限公司 1 2 仪器与分析条件 气相色谱一质谱联用仪( f i n n i g a n ) 色谱条件d b 5 毛细管柱( 3 0 mx0 2 5 m mxo 2 5 1 a m ) ，e l 源7 0 e v ，质量范围：5 0 6 5 0 ， 柱温：1 5 0 ，1 m i n - * 1 0 c m i n - - , 2 8 0 * c ，2 m i n ；离子源温度：2 0 0 c ，传输线温：2 5 0 。 载气：h e1 5m l m i n 。 1 3 实验动物 实验动物本地杂种犬4 8 只( 雄性) ，1 5 2 0 k g ，山西医科大学实验动物中心提供。 2 方法 2 1 动物模型制备 2 1 1 空气栓塞处死犬死后弥散模型 犬3 0 只，随机分死为后即刻给药组( 1 8 只) 和处死后不同时间给药组( 1 2 只) 。具 体方法为，将犬侧卧位固定于犬台上，剪去背部胸椎至骶椎处毛，用脱毛剂脱毛，消毒皮 肤，切开背部肌肉和筋膜，沿腰椎( l i 一2 或l 2 3 ) 棘间韧带穿刺，穿刺针与脊椎平面成 4 5 。，感觉有突破感后马上停止进针，用玻璃注射器作负压试验无阻力，回抽无脑脊液流 出，证明穿刺入硬膜外腔，向头侧置管3 c r n ，然后对犬实施空气栓塞处死，整个处死过程 的生命体征变化由b l - 生物机能实验系统全程记录。 处死后即刻给药组，于心电、呼吸、血压等生命体征消失后，立刻匀速注入硬膜外麻 醉一倍极量盐酸利多卡因注射液( 1 3 m g k g ，按犬、人体型系数推算删) ，5m i n 内注完， 置于室温下( 1 7 2 l ) ，按2 3 样品采集方法在给药后o 、1 2 、2 4 、4 8 、7 2 、9 6 小时解剖 动物取材。 处死后不同时间给药组，分别于心电、呼吸、血压等生命体征消失后o 、l 、3 、6 、1 2 小时匀速注入硬膜外麻醉一倍极量盐酸利多卡因注射液( 1 3 m g k g ，按犬、人体型系数推 算) ，5m i n 内注完，置于室温下( 1 7 2 1 。c ) ，按2 3 样品采集方法在给药后即刻解剖动 物取材。 2 1 2 二氧化碳处死犬死后弥散模型 犬1 8 只，按2 1 1 方法穿刺置管后对犬实施二氧化碳窒息处死，整个处死过程的生命 体征变化由b l - 生物机能实验系统全程记录。于心电呼吸血压等生命体征消失后，立刻匀 速注入硬膜外麻醉一倍极量盐酸利多卡因注射液( 1 3 m g k g ，按犬、人体型系数推算删) ， 5 m i n 内注完，置于室温下( 1 7 2 1 ) ，按2 3 样品采集方法在给药后0 、1 2 、2 4 、4 8 、7 2 、 9 6 小时解剖动物取材。 2 2 生命体征监测 用b l 生物机能实验系统( 成都泰盟有限公司) ，全程记录实验犬死亡过程中的心电、 血压和呼吸等生命体征的变化。具体操作简述如下：二道联监测心电，将导线( 实验系统 配套提供) 一端的红色电极与犬的右上肢相连，白色电极与犬的左下季肋部相连，黑色电 极与犬的左上肢相连，导线另一端与电脑换能器相连，将心电监测置于实验系统的一通道。 左下肢股动脉插管与压力换能器( 实验系统配套提供) 相连监测血压，将血压监测置于实 验系统的二通道。张力换能器( 实验系统配套提供) 监测呼吸，将呼吸监测置于实验系统 的三通道。 2 3 样品的采集 硬膜外给药后，置于室温下( 1 7 2 1 ) ，分别于不同时间点解剖动物，采集脑，不同 脊髓节段( 颈段脊髓、胸段脊髓、腰段脊髓、骶段脊髓) 、心、肺、肝、脾、肾、胆汁、 尿、心血、周围血、注射部位肌肉和颞肌( 对照肌肉) 等组织、脏器和体液，每只犬的检 材在4 8 小时内检测完毕。 2 4 组织脏器、体液中利多卡因的检测 待测样品l m l 或l g ，加水2m l ，匀浆5r a i n ；取全部匀浆液，加入内标物s k f 5 棼a 1 2 1 t g ， 1 h c i 调p h = 2 3 ，振荡1 5 r a i n ，离心3 0 0 0r p m x l 5 m i n ，吸取酸层于另一干燥试管中， 加2 mn a o h 调p h = 1 4 ；5m l 乙醚萃取，振荡1 5m i n ，离心1 5r a i n x3 0 0 0r p m ：取上清液 4m l 置于干燥离心管中。乙醚重新萃取一次。合并两次乙醚萃取液，4 0 恒温水浴中挥去 乙醚。残渣加5 0 9 l 乙醇定容，取l l a l 迸样。气相色谱一质谱法检测，t r 结合特征离子峰定性， 内标法和标准曲线法定量。 2 5 统计学方法 采用s p s s l l 5 统计软件处理数据，结果以均数4 - 标准差( z 5 ) 表示，组问比较用 单因素方差分析，均数两两比较用s n k 法。 4 山西医辩大学曩士学位论文 结果 3 1 椎管解剖所见 即如何证实硬膜外导管在硬膜外腔( 图1 - - 4 ) 图1 实验犬脊柱穿刺部位 f i g lt h el o c a t i o no f p u n c t u r e 图3 实验犬硬膜外导管位置 f i 9 3t h el o c a t i o no f c a t h e 船r s 圈2 实验犬硬膜外导管位置 f i 9 2t h el o c a t i o no f c a t h e t e r 图4 实验犬硬膜外注射墨水位置 f i 9 4t h el o c a t i o no f i n j e c t i o n 山西医科大学磺士学位论文 3 2 利多卡因的检测 3 2 1 利多卡因气相色谱质谱联用图 见图l 、2 、3 、4 、5 t - 时 图l 利多卡因总离子流色谱图 f i g1 c - c m sc h r o m a t o g r a mo fl i d o c a i n e l i d o c a i n el = 8 1 8 m i n i n t e r n a ls t a n d a r ds k f 5 2 5 t , = 1 2 1 5 r a i n 嚣 芦 厂 i 石。冬。- j 。f p 图2 利多卡因质谱图 f i g2 f u l l s c a nm a s ss p e c t r ao fl i d o c a i n e 6 献 轺 札 _ - i _ 17 i ?石：竺 一- h 图3 利多卡因的标准质谱图 f i g3 f u l l s c a nm a s ss p e c t r aa n dc h e m i c a l s t r u c t u r eo fs t a n d a r dl i d o c a i n e 山西医辩大学硬士学位i e 文 * j | i ，k磊：p 图4 内标物( s k f 5 2 5 ) 的质谱图 f i g4 f u l l - s c a nm a s ss p e c t r ao fs k f s 2 s wi 9 1 芦由。飞 7 ， y弼 ：沌。! ：。 _ 图5 内标物( s k f 5 2 5 ) 的标准质谱图 f i 9 5 f u l l - s c a nm a s ss p e c t r aa n dc h e m i c a l s t r u c t u r eo fs i 心5 2 5 3 2 2 精密度试验 取含利多卡因o 1 ，0 2 ，0 5 1 t g 的利多卡因标准乙醇溶液各l m 迸样，每个样品每日测 定5 次，连续测定2 日，由峰面积计算日内，日间变异系数( c v - - s x x l 0 0 ) 结果见表 l 。 表1 精密度测定结果( n = 5 ) t a b l ei r e s u l t so fp r e c i s i o nt e s t ( n = 5 ) 3 2 3 工作曲线 取空白检材( s t 、大脑和肝) 分别添加利多卡因0 ，o 0 5 ，o 1 ，o 2 5 ，o 5 ，1 ，2 5 ，5 ， 1 0 ，2 0 ，3 0 ，5 0 ，1 0 0 ，2 0 0 i _ t g 。按前述2 4 方法提取，测定结果见表2 。 山两医科大学颤 学位砭文 表2 组织脏器的利多卡因工作曲线 t a b l e2 w o r k i n gc u r v e so fl i d o c a i n ei nd i f f e r e n tt i s s u e s x 为利多卡因和内标物峰面积比值；y 为利多卡因含量( p g ，训或p g g ) 3 2 4 回收率试验 取空白检材l m l 份，分别加入不同浓度的利多卡因标准溶液，按前述2 4 方法处理， 检测，计算回收率，结果见表1 。 表3 回收率实验结果( n ：3 ，i ) t a b l e3 r e c o v e r yo fl i d o c a i n ei nb l o o d ，c e r e b r u ma n dl i v e r 3 3 利多卡因在空气栓塞致死犬体内的死后弥散 杈糖素盘螺忙羞霉鲁、，o圩noov盘，。是 ocl冀品n 卜一。一州n寸口寸 一寸n州n西一 ohn卅tn一 口剞n，卜 o *oq0午口一o o ”o一*口卜一 n n 一制t 寸n 吨一一hn n，卅卜口一 三n千ot o * 一。千q 一西卅t一 o * m 0 干c 一*n，一刊盘一 一8n“n06n no一干in口” 一荨*q n口n卅n，nn o 卜州c 卜 o * h 9 0 干口9 0 o 乜o i 千h c n 口车nlz * 冀爿9 l z i*t葛 * n n 书t n o *n一种a一 吨一一制t n n o * o h n 一* a o 计n ，一 n口nn一nn o n 州t l n冀卜n一爿小nnn 叶西斟tn一一 c n * n 口 o -20午一no o no甭一h _1窀吨h * 嚏啦2 一o一州一西一 * t l 平吨h o * n o 耐= n卜纠寸nn o *n曰_6o *毫景叶一 ono一舯n一”o，nn一卅寸n寸心一，o口【州口西n t n - 卅n a = 1 n 卅n ooo 宅nh口iz t苦on no一计叶n n ，n i 千n h * n 一_ 奇n o -o卅母一 on一州n一 o * q h 1 n * t o 升西o 一 n卜一州n卜otm甭n一口i_卜。一州口，an n!hn n 口h t oo o 卜n一州口nn n小一计口t，n 一9午口 吨一一州t n n * n 金- c 一 o *o刊小o 节c i * t 寸n o *口q习o*托帚口o ci；叶t一02种n寸n口qnh_nno = 卅c n n n i，哂= _o_*n葛mo；吩h c 材t 寸 toi千n葛 ooo c n l 羊叶n n ooo 盛鹾酃墼碰蟊碰赋 銎 娶母罄铎 嗜 口 目萱锰垡q目垂锰鐾卜 目删o ，心 崮蜊o 、摆 墨量肇髓杂爱 一宦妄匪靛v妄舔 韭 量婪士【f o ：