（植物学专业论文）丫蕊花的化学成分研究.pdf

。hu76h1411 西南林学院学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人郑重声明。所呈交的硕士学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立 进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为除文中已经注明引用的内容外， 本论文不包含任何其他人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本论文的研究 做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明本人完全意识到本声 明的法律结果由本人承担。 赌 靴敝储签夕 撇蝴躲怛 日期函少年月年日 关于论文使用授权的说明 本人同意西南林学院有权保留使用本人学位论文同意学院向国家有关部门 送交学位论文的复印件和电子版。允许论文被查阅和借阅同一学校及国家有关 机构可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复印手段保存 论文 ( 保密的论文在解密后应遵循此规定) 学位论文作者签名穗 力年f日 辄 挣 猁 佰 秘 导 年 文 黼吵 位 期 掌 日 摘 要 丫蕊花的化学成分研究 摘要 本论文详述对丫蕊花( y p s i l a n d r at h i b e t i c af r a n e h ) 的化学成分的深入研究。 应用硅胶、大孔树脂、聚酰胺、半制备h p l c 等多种分离材料和分离手段，结合 现代波谱技术，从该植物中分离了2 5 个单体化合物，从中鉴定了2 0 个化合物， 其中新化合物l o 个，化合物类型涉及螺甾烷型甾体皂苷、呋甾烷型甾体皂苷、 胆甾烷型甾体皂苷、c 2 1 甾苷、c 2 2 甾苷、糖脂等。 丫蕊花( y p s i l a n d r at h i b e t i c af r a n e h ) 是百合科( l i l i a e e a e ) 胡麻花族 ( h e l o n i e a e ) 丫蕊花属植物，多年生草本，分布于我国华中、西南等省的海拔 1 3 0 0 2 8 0 0 m 林下。丫蕊花在民间以全草入药，主要用于止血。为寻找新的活 性成分并系统阐明该植物的化学成分，我们对采自四川的丫蕊花全草乙醇提取物 的大极性部分继续进行化学成分的研究，运用多种分离材料、分离技术以及各种 光谱分析仪器，从中分离了2 5 个单体化合物，从中鉴定了2 0 个单体化合物，包 括1 3 个c 2 7 甾体皂苷、两个罕见的6 5 6 - 5 5 6 稠环螺甾烷皂苷( 1 ，2 ) ，2 个c 2 1 甾体皂苷( 8 ，9 ) ，1 个c 2 2 甾体皂苷( 7 ) ，2 个糖脂类化合物( 1 3 ，1 4 ) ，其中 1 0 个为新化合物( 1 4 ，6 7 ，9 - 1 2 ) 。化合物结构见图a 。 论文由四部分组成。第一部分详细论述了丫蕊花( y p s i l a n d r a t h i b e t i c af r a n e h ) 的植物学特征以及研究状况，第二部分详述了实验中所用到的仪器、材料、试剂 植物的来源并详述了化合物的提取分离过程，第三部分详述了化合物结构的鉴定 过程以及在鉴定过程中所用到的多种现代波谱分析方法和化学方法。第四部分总 结整个研究所得出的结论并加以讨论。 关键词：丫蕊花，化学成分，甾体皂苷 丫蕊花的化学成分研究 s t u d y o nt h ec h e m i c a lc o n s t i t u e n t sf r o my p s i l a n d r at h i b e t i c a a b s t r a c t t h i sd i s s e r t a t i o nd e a l tw i t l lt h ec h e m i c a ls t u d yo nc o n s t i t u e n t so fy p s i l a n d r a t h i b e t i c a f r o mt h ep l a n t s ，at o t a lo f2 5c o m p o u n d sw e r ei s o l a t e db yt h ev a r i o u s c h r o m a t o g r a p h i e so v e rs i l i c ag e lc o l a n m , r e v e r s ep h a s ec o h m m ( r p 18 ) ，s e p h a d e x l h 一2 0a n ds e m i - p r e p a r a t i v eh p l c ，o fw h i c h2 0c o m p o u n d sh a db e e ni d e n t i f i e db y t h ev a r i o u sc h e m i c a lm e t h o d sa n ds p e c t r o s c o p i ct e c h n o l o g y a m o n gt h e m , 10 c o m p o u n d sw e r ee l u c i d a t e dt ob en e wo n e s ，i n c l u d i n gs p i r o s t a n o ls a p o n i n s ，f u r o s t a n o l s a p o n i n s ，c h o l e s t a n o ls a p o n i n s ，c 2 1s t e r o i d a ls a p o n i n s ，c 2 2s t e r o i d a ls a p o n i na n ds u g a r e s t e r s y p s i l a n d r at h i b e t i c af r a n c hb e l o n g st ot h eg e n u so fy p s i l a n d r aa n dt h e f a - m i l yo fl i l i a e e a e ，w h i c hi s ap e r e n n i a lh e r ba n dd i s t r i b u t e si nt h em i d d l ea n d s o u t h w e s to fc h i n a , l3 0 0 2 8 0 0 ma l t i t u d e i th a sb e e nu s e df o rh e m o s t a s i sa s f o l km e d i c i n e a sa p a r to fo u rc o n t i n u a t i o nw o r kt oc h a r a c t e r i z et h ec o n s f i m e n t so ft h es p e c i e s ，w ec o n t i n u e dt oi n v e s t i g a t et h ec h e m i c a lc o n s t i t u e n t so fz ， h i b e t i c af r o ms i c h u a np r o v i n c eo nt h ep a r to fh i g hp o l a r i t yo fe t o hc r u d ee x t r a c t a sar e s u l t , 2 0s t e r o i d a ls a p o n i n sw e r ei d e n t i f i e d ，w h i c hi n c l u d e dt h i r t e e n c 2 7s t e r o i d a ls a p o n i n s ，t w on o v e l5 ( 6 - * 7 ) a b e o - s t e r o i d a ls a p o n i m ( 1 - 2 ) ，t w oc 2 1s t e r o i d a ls a p o n i n s ( 8 9 ) ，o n ec 2 2s t e r o i d a ls a p o n i n ( 7 ) a n dt w os u g a re s t e r s ( 1 3 - 1 4 ) a m o n gt h e m ，1 0c o m p o u n d sw e r ee l u c i d a t e dt ob en e wo n e s ( 1 4 ，6 7 ，9 1 2 ) t h e i rs t r u c t u r e sa r ei l l u s t r a t e di nf i g a t h i sd i s s e r t a t i o nc o n s i s t so ff o u rc h a p t e r s t h ef i r s td e a l t 、i 也t h eb o t a n i c c h a r a c t e ra n dt h es t a t u so fi n v e s t i g a t i o no fy p s i l a n d r at h i b e t i c a t h es e c o n dc h a p t e r d i s s e r t a t e dt h em e t h o d s ，i n s t r u m e n t s ，c h e m i c a lm a t e r i a l ，r e a g e n t , t h es o u i c 圮o fb o t a n i c m a t e r i a lh a v eb e e nu s e di nt h ei n v e s t i g a t i o na n dt h ep r o c e s so fw o r k t h et h i r d c h a p t e rd e a l tw i t ht h ei d e n t i f i c a t i o no ft h ec h e m i c a lc o m p o u n d so nt h eb a s i so ft h e v a r i o u sc h e m i c a lm e t h o d sa n d s p e c t r o s c o p i ct e c h n o l o g y 1 1 地f o u r t hc h a p t e r e x p a t i a t e dt h ec o n c l u s i o no ft h ew h o l ei n v e s t i g a t i o n k e yw o r d s ：y p s i l a n d r at h i b e t i c a , c h e m i c a lc o n s t i t u e n t s ，s t e r o i d a ls a p o n i n s f i g a t h es t r u c t u r e so fc o m p o u n d si s o l a t e df r o my p s i l a n d r at h i b e t i c a 1 r i = hr 2 = 2 hr 3 = o hr i = s 2 r i ：o hr 2 = o r 3 2 h氏= s r 3 = s r a 2 s 1 3r = h 1 4r 气a c m 3 。r i = h 4 。r i = a - o h s 1 5r i = h r 2 f f i hr 3 = o 只0 = s 1 8r 1 = a - o hr 2 = o hr 3 = 2 h 心= s 1 7r i = hr = = o hr 3 。= 2 hk = s s s 譬暑 触触 删o = t 向砌 2 0 r = s ( 标记为新化合物) ! ! ：坚：里! 型竺 塑墨 一 _ _ _ _ _ - _ l - _ _ - _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ - _ - _ _ - _ - - _ _ - _ _ _ _ _ _ _ _ - _ _ _ _ _ _ _ - _ _ - - _ _ l _ _ - _ _ _ - _ _ _ - 。_ - 。一一 t 3 cn m r ： t h n m r ： a b b r e a t i o n s c a r b o nn u c l e a rm a g n e t i cr e s o n a n c e p r o t o nn u c l e a rm a g n e t i cl s o d _ a n c e l h 1 hc o s y ：p r o t o n - p r o t o nh o m o n u c l e a rc o r r e l a t e ds p e c t r o s c o p y d e p t ： e i m s ： l i ：a b - m s ： h m b c ： h m q c ： h rf a b - m s ： h s q c ： n o e ： i r ： r o e s y t l c ： i t h a ： g l e ： d i s t o r t i o n l e s se n h a n c e m e n tb yp o l a r i z a t i o nt r a n s f e r e l e c t r o n - i m p a c tm a s ss p e c t r u m f a s ta t o mb o m b a r d m e n tm a s ss p e c t r u m 1 h - d i r e c t e dh e t e r o n u c l e a rm u l t i p l e - b o n dc o r r e l a t i o n l h - d i r e c t e dh e t e r o n u c l e a rm u l t i p l e - q u a n t u mc o h e r e n c e h i g hr e s o l u t i o nf a s ta t o mb o m b a r d m e n t m a s ss p e c t r u m 1 h - d i r e c t e dh e t e r o n u c l e a rs i n g l e q u a n t u mc o h e r e n c e n u c l e a ro v e r h a u s c re f f e c t i n 盎a 脚s p e c t r o s c o p y r o t a t i n gf r a m eo v e r h a u s e re f f e c ts p e c t r o s c o p y t h i n - l a y e rc h r o m a t o g r a p h y a - l - r h a m n o p y r a n o s y l p d - g l u c o p y r a n o s y l v 目录 摘要”“一”“”i a b s t r a c t 0 0oo o o ”“”一”n 化合物结构图i i i a b b i 迮v r i o n s 一”o o oooo ”一”v l 弓l 言一”“”“”一一”1 1 1 丫蕊花的植物学特征l 1 2 丫蕊花研究概况及研究意义l 2 实验部分2 2 1 实验仪器，材料，及试剂2 2 2 植物来源2 2 3 提取分离流程3 2 4 分离流程图4 3 结构鉴定与理化数据5 3 1 化合物结构鉴定5 3 2 理化数据3 7 4 结果与讨论4 4 4 1 化学成分4 4 4 2 结论”“”“”4 6 参考文献4 7 致谢一”“”“”一”4 9 附录”一”一”“5 0 l 引言 1 引言 1 1 丫蕊花的植物学特征 具粗根状茎的多年生草本，高1 5 - 5 0 厘米。基生叶匙形至倒披针形，长5 - 1 5 厘米，宽8 4 0 毫米，花葶上的叶似鞘状。总状花序具5 - 2 0 余朵花，花梗长5 1 7 毫米；花被片6 ，白色至粉红色，倒卵状矩圆形，长8 - 1 2 毫米，宿存；雄蕊6 ， 花丝长约为花被片的l 倍半，花药马蹄形，背着，会合成1 室；子房近球形，顶 端3 裂，直径约2 5 毫米，花柱长1 2 - 1 8 毫米，柱头小头状。蒴果倒卵形，顶端 3 裂，直径约5 毫米，室背开裂；种子细棱形，两端有翅，长约4 毫米。产四 川、广西、湖南。生于林下、灌丛、草坡或悬岩上n 1 。 1 2 丫蕊花研究概况及研究意义 丫蕊花( y p s i l a n d r at h i b e t i c af r a n c e ) 为百合科( l i l i a c e a e ) 丫蕊花属 ( y p s i l a n d r af r a n c e ) 植物，多年生草本，分布于四川，湖南，广西等省【l 】，在 四川等地民间用于止血，叫峨嵋石风丹【2 】。文献报道丫蕊花中所含的呋甾烷型皂 苷成分具有显著的抗肿瘤活性【3 1 。同时，经过活性筛选，本人所在实验组发现了 丫蕊花全草的乙醇提取物具有显著的止血活性，并对其活性部位的化学成分进行 了研究，分离鉴定了4 6 个甾体及其苷，其中2 9 个为新化合物【4 ，5 】。对以上研究工 作，我们已发表论文一篇嘲，同时对止血活性成分进行了新药研究，并且申请获 得授权专利一项【7 】。但非活性部位的化学成分研究不够深入，为了充分利用该资 源并系统掌握该植物中含有的化学成分，本论文在前期的研究基础上，对采自四 川的丫蕊花全草乙醇提取物的大极性部位开展了进一步的化学成分研究，从中分 离得到2 5 个单体化合物，并已经鉴定2 0 个，其中1 0 个为新化合物，相关活性 筛选工作正在进行当中，期待有良好活性的化合物出现，为该植物的充分利用打 下坚实基础。 丫蕊花的化学成分研究 2 实验部分 2 1 实验仪器，材料，及试剂 2 1 1 仪器：旋光通过j a s c od i p 3 7 0 型数字式旋光仪测定；i r 在b i o r a d r t s 1 3 5 红外光谱仪上测定；紫外光谱( u v ) 在s h i m a d z uu v - 2 4 0 1p c 紫外光 谱仪上测定；m s 用a u t o s p e c 3 0 0 型测定；1 h 、1 3 c c n m r 谱用b r u c k e r a m - 4 0 0 和d r x 5 0 0 超导核磁共振仪测定( t m s 为内标) ；色谱用b r u c k e r - 6 8 1 制备型中 压液相色谱；分析半制备用h p l l 0 0 型高效液相色谱仪，半制备色谱柱为 a g i l e n t 公司的z o r b a xs b c 18 反相柱；各种型号的层析柱；紫外光观测仪； 旋转薄膜蒸发仪等。 2 1 2 材料：薄层层析硅胶板用市售的g f 2 5 4 板；柱层析硅胶( 8 0 - 1 0 0 目， 2 0 0 3 0 0 目，3 0 0 - 4 0 0 目及硅胶h ) 为青岛海洋化工厂产品；反相填充材料l 岫1 8 为4 0 6 0 1 a n ，m e r c k 产品；凝胶s e p a d e x l h 一2 0 为a m e r s h a m 生科公司产品。 2 1 3 试剂：氯仿( 工业纯重蒸) ；甲醇( 工业纯重蒸色谱纯) ；乙醇( 工业 纯重蒸) ；蒸馏水；乙腈( 色谱纯) ；盐酸( 分析纯) 。 2 1 4 显色剂：1 0 的硫酸乙醇溶液，喷雾后适当加热；开环苷显色剂( 对 二甲氨基苯甲醛1 9 ，浓盐酸5 0 毫升，无水乙醇5 0 毫升) ，喷雾后晾干。 2 2植物来源 丫蕊花( y p s i l a n d r at h i b e t i c af r a n c h ) 全草1 0 k g ( 干重) ，2 0 0 3 年1 0 月来自 四川，由中国科学院植物研究所陈心启研究员鉴定，标本保存在中国科学院昆明 植物研究所标本管。 2 2 实验部分 2 3提取分离流程 2 3 1 提取分离 丫蕊花干燥全草1 0 k g ，粉碎后用7 0 7 醇回流提取3 次，每次2 小时，合 并提取液，减压回收乙醇，得浸膏7 0 0 9 。 萃取物7 0 0 9 ，用乙醇水( 2 ：8 4 ：6 7 ：3 9 ：1 ) 经大孔树脂以及m c i g e l h p d 2 0 梯度洗脱，脱出叶绿素后，回收溶剂得4 0 7 , 醇部分3 5 0 9 ，7 0 乙醇部 分2 0 0 9 。 4 0 乙醇洗脱部分取2 0 0 9 ，用2 0 0 9 ( 8 0 - 1 0 0 目) 拌样，进行8 0 0 9 硅胶( 2 0 0 - 3 0 0 目) 湿法柱层析，用氯仿甲醇水( 9 ：1 ：0 开始) 梯度洗脱，t l c 检测后合并 得到3 个组份( 1 - 3 ) 。 组份1 经反复硅胶柱层析( 氯仿：甲醇= 7 ：3 洗脱) ，得化合物1 3 ( 结晶 析出3 5 3 m g ) ，1 4 ( 结晶析出3 2 3 m g ) ，配合r p - 1 8 ( 甲醇：水= 3 ：7 7 ：3 梯 度洗脱) 纯化得化合物1 0 ( 7 0 m g ) ，1 1 ( 5 8 r a g ) 组份2 经反复硅胶柱层析( 氯仿：甲醇= 7 - 3 6 ：4 5 ：5 梯度洗脱) 并 配合r p - 1 8 ( 甲醇：水梯度洗脱) 和s e p h a d e xl h 2 0 纯化( 甲醇洗脱) ，得化合 物1 5 ( 2 9 m g ) ，1 6 ( 2 6 m g ) 。 组份3 经反复硅胶柱层析( 氯仿：甲醇= 6 ：4 5 ：5 梯度洗脱) 并配合 r p - 1 8 ( 甲醇：水= 3 5 ：6 5 6 ：4 梯度洗脱) 和s e p h a d e xl h 2 0 纯化( 甲醇洗 脱) ，得化合物1 8 ( 3 7m g ) ，1 9 ( 4 3 m g ) ，2 0 ( 2 8r a g ) ，7 ( 5 4m g ) ，1 0 ( 6 7m g ) ， 1 2 ( 2 4m g ) ，1 4 ( 6 2m g ) ，1 7 ( 3 3m g ) 。分离过程中得到化合物3 与4 的混合物 2 0 0 r a g ，在正反相t l c 上均为单一斑点，无法用常规柱层析的方法分离，但在 h p l c 色谱上显示明显的双峰，因此采用半制备型h p l c 进行分离( 以甲醇：水 = 3 5 6 5 做为流动相) ，得到单体的化合物3 ( 6 8 m g ) ，4 ( 7 4m g ) 。同时得到化 合物5 与6 的混合物8 0 m g ，在正反相t l c 上均为单一斑点，无法用常规柱层析 的方法分离，但在h p l c 色谱上显示明显的双峰，因此采用半制备型h p l c 进行 分离( 以甲醇：水= 3 5 ：6 5 做为流动相) ，得到单体的化合物5 ( 4 4m g ) ，6 ( 1 1 m g ) 7 0 乙醇洗脱部分取l o g ，用1 0 9 ( 8 0 - - 1 0 0 目) 拌样，进行4 0 9 硅胶( 2 0 0 - 3 0 0 丫蕊花的化学成分研究 目) 湿法柱层析，用氯仿甲醇水( 9 ：l ：o 开始) 梯度洗脱，t l c 检测后合并 得到2 个组份( 4 5 ) 。 组份4 经反复硅胶柱层析( 氯仿：甲醇= 6 ：4 5 5 ：4 5 梯度洗脱) 并配 合r p 1 8 ( 甲醇：水= 4 ：6 6 5 ：3 5 梯度洗脱) 和s e p h a d e xl h 2 0 纯化( 甲醇 洗脱) 得到化合物9 ( 4 6 m g ) ，利用半制备型h p l c 进行分离( 以甲醇：水= 3 8 ： 6 2 做为流动相) ，得到单体的化合物2 ( 7 2 r a g ) 。 组份5 经反复正反相硅胶柱层析并配合s e p h a d e xl h - 2 0 纯化( 甲醇洗脱) 得到化合物8 ( 5 8 r a g ) ，利用半制备型h p l c 进行分离( 以甲醇：水= 3 7 ：6 3 做 为流动相) ，得到纯化合物1 ( 8 5 r a g ) 。 4 2 实验部分 - _ _ - - _ _ _ _ _ _ - - _ _ - _ _ - - - - _ _ 一一 2 3 2 分离流程图如下： 丫蕊花全簟租 化 化 合物1 9 ( 4 3 合物2 0 ( 2 8 5 m g ) m g ) 丫蕊花的化学成分研究 结构鉴定与理化数据 3 1 化合物结构鉴定 3 1 1 化合物1 结构鉴定 白色粉末。该化合物对l i e b e r m a n n - b u r c h a r d 反应呈阳性，提示可能为螺甾 烷型甾体皂苷。高分辨质谱( m 也s m s ) 给出分子式c 5 1 h s 0 0 2 2 ( m z1 0 4 3 5 0 2 9 m h 】，计算值：1 0 4 3 5 0 6 3 ) ，不饱和度1 2 。u v 光谱中最大吸收值出现在2 5 5 r i m ， 提示该化合物中可能存在共轭体系。瓜光谱分别出现吸收峰3 4 4 0 ，1 7 9 4 ，和 1 6 6 1c m ，提示可能存在羟基，a ，6 不饱和醛以及碳碳双键结构。 苷元部分，化合物i 的1 hn m r 谱( t a b l e1 ) 显示4 个典型的螺甾烷骨架 的甲基质子信号南0 8 3 ( 3 h ，s ) ，1 0 0 ( 3 h ，s ) ，晶0 6 9 ( 3 h ，d ，= 5 5h z ) 和1 2 1 ( 3 h ， d ，= 7 5h z ) o 此外，还出现1 个一个乙醛基质子信号霸1 0 2 ( i h ，s ) 。通过观 察1 3 cn v i r 谱得知化合物i 中共有5 1 个碳，苷元部分由2 7 个碳组成，其中包 括4 个甲基，9 个亚甲基( 包括1 个含氧亚甲基6 6 7 ) ，7 个次甲基( 包括2 个 含氧次甲基& 9 0 o ，7 8 0 ) ，4 个季碳( 包括2 个含氧季碳1 0 9 8 ，8 9 1 ) ，1 个 四取代的双键( 1 3 9 9 ，1 6 9 7 ) 和1 个乙醛基( & 1 8 9 4 ) 。通过仔细分析”c n m r 数据和已知化合物1 9 的糖基比较，剩余2 4 个碳由1 个p d 型葡萄糖和3 个a l 型鼠李糖构成。以上所有数据表明化合物1 的苷元为c 1 7 位连接羟基的螺甾烷。 与从重楼属( p a r i s ) 植物中所分离的偏诺皂苷类( p e r m o g e n i no l i g o s i d e s ) 化合 物的n m r 数据比较，化合物l 具有类似于偏诺皂苷元的a ，c ，d ，e ，f 环，差别 主要在于b 环部分【8 , 9 1 。通过分析化合物1 的二维核磁共振谱1 h ，1 h c o s y ，h m q c 和h m b c 其苷元部分存在以下四个片段：a ( c i - c 4 ) ，b ( c 8 - c 1 2 ，1 6 ) ，c ( c 2 0 c 2 1 ) 和d ( c 2 5 - c 一2 3 ，2 6 ，2 7 ) ( f i g u r e1 ) 。 6 3 结构鉴定与理化数据 一l 一 图1 化合物1 苷元部分主要的1 h 1 hc o s y 和h m b c 相关 f i g u r e1l h i hc o s y a n dk e yh m b cc o r r e l a t i o n so f t h ea g l y c o n em o i e t i e so fl 在h m b c 谱( t a b l e1 和f i g u r e1 ) 中，c 5 与h 3 ，h 2 - 4 ，h 8 以及m e 1 9 相关，c 7 与h 2 4 ，h 6 ，h 8 ，h - 9 以及h 1 4 相关，说明在b 环上存在a ，p 不饱和醛，且其位于c 5 与c 7 之间，这样的结构与已知化合物p a r g u e s t e r o l a t l o 】 相同。此外，通过h m b c 谱我们确定了a 司这四个片段的连接关系如图1 所示。 在r o e s y 谱( f i g u r e3 ) 中，h 8 与m e 1 8 ，m e 1 9 相关，m e 1 8 与h 2 0 相关， h 1 4 与h 9 ，h 1 6 相关，说明b c 环以及c d 环之间为顺式稠合，d e 环之间 为反式稠合，且c 1 7 位上的羟基和m e 2 1 为洳构型。此外，h 1 口与h - 3 ，h 9 相关，提示h 3 为a 构型。在瓜光谱中9 1 7c m - 1 处吸收峰强度小于8 9 5c m - 1 说明化合物1 具有2 5 r 螺甾烷骨架【1 2 1 。 糖链部分，在化合物l 的1 hn m r 谱低场区，出现四分子特征的糖基端基质 子信号：妇5 o o 他- 厂= 7 3 ) ，5 8 2 ( b r s ) ，6 2 8o r s ) 和6 4 3o r s ) ，对应地在 cn m r 谱低场区出现四分子糖基端基碳信号：1 0 0 9 ，1 0 2 3 ，1 0 3 3 ，1 0 1 9 ( t a b l e2 ) 。通 过核磁数据( 1 3 cn m r h s q c t o c s y , 1 h , 1 h - c o s y 和h m b c ) ，确定了化合物 1 中包含了一分子d 一葡萄糖和三分子l 一鼠李糖。葡萄糖基端基质子的偶合常数 户7 3 h z ，说明内侧葡萄糖基为伊构型，同时与文献报道【l l t1 2 】的碳谱数据对照 ( c 3 ，c 5 ，c - 3 ，c 5 ，c 3 和c 5 )确定了内侧鼠李糖为伽构型。 糖基的连接次序通过2 dn m r 来确定。在h m b c 谱中， h 1 ( 南5 0 0 ) 和 c - 3 ( ：7 8 o ) 相关，说明内侧葡萄糖基的c 1 连接在苷元的c 3 位；h 1 ( 翻6 4 3 ) 和内侧葡萄糖基的c 2 ( 7 7 8 ) 相关，说明内侧葡萄糖基的c 2 连接了一分子鼠 李糖基；h - l ( 南5 8 2 ) 和内侧葡萄糖基的c - 4 ( 龟7 7 9 ) 相关，说明内侧葡萄糖基 的c - 4 位连接了一分子鼠李糖基；h 1 ( 南6 2 8 ) 和内侧鼠李糖基的c _ 4 ( 8 0 4 ) 7 丫蕊花的化学成分研究 相关，说明内侧鼠李糖基的c 4 ”连接了一分子末端鼠李糖基。 综上所述，化合物1 的结构鉴定为( 2 5 r ) - b n o r ( 7 ) - 6 一c a r b o x a l d e h y d e s p i r o s t - 5 ( 7 ) - c n 一3 p ，17 a - d i o l3 一d 吨l r h a m n o p y r a n o s y l - ( 1 - * 2 ) - a - l - r h a m n o p y r a n o s y l 一( 1 4 ) 吨l r h a m n o p y r a n o s y l - ( 1 _ 4 ) 】- p - d g l u e o p y r a n o s i d e ( f i g u r e2 ) 这是一个新的螺 甾烷型甾体皂苷化合物。 3 1 2 化合物2 的结构鉴定 白色粉末。该化合物对l i e b e r m a n n b u r c h a r d 反应呈阳性，提示可能为螺甾 烷型甾体皂苷。高分辨质谱( m 也s 蹦s ) 给出分子式c 5 i h 7 8 0 2 3 。( m z1 0 9 3 4 6 3 4 【m + c 1 】，计算值：1 0 9 3 4 6 2 2 ) 。i r 光谱分别出现吸收峰1 7 1 3 和1 6 3 0c m 1 ，u v 光谱中最大吸收值出现在2 5 4 n m ，提示该化合物中可能同样存在a ，3 - 不饱和醛。 化合物2 在1 hn m r 谱上同样出现四分子糖端基质子信号霸5 0 4 ( d 卢7 5 ) 5 8 2 c o r s ) ，6 2 9 ( b r s ) ，和6 4 5 ( b r s ) ，以及四个螺甾烷骨架特征甲基质子信号南0 7 1 ( d ，5 o ) ，1 2 0 ( s ) ，1 2 3 ( s ) ，1 3 6 ( d ，7 o ) 。通过比较2 和l 的1 3 cn m r 数据，两者 具有相同的骨架，只是2 中少了一个含氧的季碳信号而多出个含氧次甲基信号 和一个羰基碳信号。在1 h 1 hc o s y 谱中( f i g u r e3 ) ，观察到h 9 与h 1 l 相关， 在h m b c 谱中，观察到h 1 1 与c 9 ，c 1 0 ，c 1 2 ，c 1 3 相关，证实了羟基连接在 c 1 l 上。此外，在h m b c 谱上，c 1 2 和h 9 ，h - i l ，c 1 7 ，m c 1 8 相关，证实了c 1 2 位上连有羰基。在n o e 实验中，h 1 l ( 钿4 8 9 ) 与h 8 ( a n3 3 0 ) ，m e - 1 8 ( 晶1 2 0 ) 相关，说明o h l l 为a 构型( f i g u r e3 ) 。2 的糖链n m r 数据和1 基本 一致，提示两者含有相同的四分子糖基，并且糖基连接顺序也相同。 综上所述，化合物2 的结构鉴定为：( 2 5 r ) b n o r ( 7 ) - 6 - c a r b o x a l d e h y d e s p i r o s t 一5 ( 7 ) 一e n - 3 1 3 ，ll a - d i o l 一1 2 - o n e 3 一o 洳l r h a m n o p y r a n o s y l - ( 1 - * 2 ) 陋一l r h a m n o p y r a n o s y l - ( 1 4 ) 吨l - r h a m n o p y r a n o s y l - ( 1 叶4 ) 】- b d g l u c o p y r a n o s i d e ( f i g u r e2 ) 这是一个 新的螺甾烷型甾体皂苷化合物。 8 3 结构鉴定与理化数据 。二二- 一一 - ) - 一毛仲 r 1 r 2r 3 1hho h 2o h - - - oh 图2 化合物1 和2 的化学结构 f i g u r e2s t r u c t u r e so f c o m p o u n d s l - 2 图3 化合物2 苷元部分主要的1 h i hc o s y 和蝴旧c 相关 f i g u r e31 h - 1 hc o s ya n dk e yh m b cc o r r e l a t i o n so f t h ea g l y c o n em o i e t i e s0 f 2 斗o 图4 化合物2 苷元部分主要的r o e s y 相关 f i g u r e4 k e yr o e s yc o r r e l a t i o n so f t h ea g l y c o n em o i e t yo f 2 9 、t 。疆 表l 化合物1 和2 苷元1 h 和1 3 cn m r 数据以及舳c 相关( 偶合常数j ，单位：h z ) t a b l e11 ha n d 3 cn m rd a t aa n dh m b co f t h ea g l y c o n em o i e t i e so f 1a n d2w i t hj v a l u e s ( i nh z ) 一一 1 z 丝2 ：五 盘墅堡g 五 一一鱼旦堕匦l l 1 0 6 ( m ) 1 6 5 ( m ) 3 6 3t c 2 ，3 ，9 ，1 0 , 1 9 1 4 4 ( m ) ，2 3 9 ( m ) 3 8 0tc 1 0 ，1 9 2 1 8 7 ( m ) 2 1 4 ( m ) 2 9 9 t c - 3 ，4 1 0 1 9 6 ( m ) ，2 1 8 ( m ) 2 9 9 tc - 4 3 4 0 0 ( m ) 7 8 0d c 4 , 5 ，1 0 ，1 4 2 2 ( 神 7 7 9dc - l _ , l 4 2 4 6 ( m ) 3 9 7 ( m ) 3 0 8t c - 3 , 5 ，7 ，1 0 2 5 5 ( m ) 4 0 5 ( m ) 3 0 9t c 2 ，3 ，5 ，7 ，l o 5 1 6 9 7s 1 7 0 4s 61 0 2 ( s ) 1 8 9 4 dc 7 ，8 1 0 2 ( s ) 1 8 8 9 dc - 7 ，8 71 3 9 9s 1 3 7 4s 8 2 7 2 ( n n 4 6 4d c 5 ，7 ，9 ，1 1 ，1 3 ，1 4 3 3 0 ( m ) 4 3 8 d c - 5 ，7 , 9 , 11 ，1 3 ，1 4 9 1 1 1 ( m ) 6 0 2d c 7 , 1 0 , 11 , 1 2 ，1 4 ，1 9 1 6 2 ( m ) 6 6 1d c - 1 ，5 ，8 ，1 0 , 1 2 ，1 4 ，1 9 1 0 4 6 6s 4 7 3s l l 1 4 1 ( 2 h m ) 2 0 4t c 8 ，9 ，1 0 , 1 2 , 1 3 4 8 9 ( m ) 7 3 8d c - 9 , 1 0 , 1 2 ，1 3 1 2 1 5 0 ( m ) ，2 1 4 ( m ) 3 2 6t c - 9 ，l ，1 3 ，1 4 ，1 7 ，1 8 2 1 3 0 s 1 3 4 7 9s 5 6 5s 1 4 2 3 9 ( m ) 5 0 5d c 7 ，9 ，1 2 , 1 3 ，1 5 ，1 8 1 8 4 ( m ) 5 4 1d c 8 ，9 ，1 5 ，1 8 1 5 2 0 6 ( m ) 2 8 3 ( m ) 3 4 5t c 8 ，1 3 ，1 4 ，1 6 , 1 7 2 2 l ( m ) 2 6 8 ( m ) 3 4 5t c - 8 ，1 3 ，1 4 ，1 6 , 1 7 ，2 0 1 6 4 4 4 ( m ) 9 0 0d c - 1 3 ，1 7 4 5 6 ( m ) 8 0 4d c c - 1 1 2 3 , 。1 1 4 3 ，, 1 1 7 5 ，1 6 ，1 8 ，2 0 。 1 78 9 1s 2 7 2 ( m ) 5 4 6 d 2 1 1 8 0 8 3 ( s ) 1 7 6qc - 1 2 ，1 3 ，1 4 , 1 7 1 2 0 ( s ) 1 6 1q c 1 2 ，1 3 ，1 4 , 1 7 1 9 1 0 0 ( s ) 1 5 5q c i ，5 ，9 ，1 0 1 2 3 ( s ) 1 4 8qc - l ，5 。9 ，1