（水产养殖专业论文）军曹鱼（rachycentron+canadum）性腺发育和血清促卵泡激素性类固醇激素的研究.pdf

军曹鱼( r a c h y c e n t r o nc a n a d u m ) 性腺发育 和血清促卵泡激素，性类固醇激素的研究 摘要 以密鳞牡蛎( o s t r e ad e n s e 胁聊e f f o 阳l i s c h k e ) 和杂鱼( 以青鳞鱼( h a r e n g u l az u n a s i b l e e k e r ) ，蓝圆鳕( d e c a p t e r u sm a r u a d s i ) 等为主) 两种不同饵料投喂军曹鱼( r a c h y c e n t r o n 一一d u m ) ，研究饵料对第一个性周期内的军曹鱼的生长及性腺发育的影响，同时研究了第 一个性周期内及已达性成熟年龄军营鱼血清中与生殖有关的激素的周年变化。 对军曹鱼的生长及性腺发育的研究结果表明，精巢的发育经历了从i 期到期的完整 的发育过程，精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞、精子等性细胞也依次 出现：5 月份( 1 0 月龄) 有1 0 0 的个体发育到了第v 期，7 月后衰退期第期的个体出现： 在雌鱼卵巢中观察到卵原细胞、i i 时相卵母细胞、i i i 时相卵母细胞，但雌鱼的性腺发育直 到0 5 年1 1 月( 1 6 月龄) 却还停留在第1 i 期。对性腺系数周年变化的观察，发现雌鱼的性 腺系数在1 月份已达到最高峰，尽管在3 月份下降，仍有随时间推移逐步上升的趋势；雄 鱼的性腺系数变化较为平稳，仅在5 月份略出现一个峰值。雄鱼的性腺系数和肝体系数的 曲线变化基本相同，仅在5 月份例外；0 5 年1 1 月次年3 月，雌性军曹幼鱼性腺系数和 肝体指数呈现较显著的负相关关系，然而至3 月份后这种负相关关系不再明显两者甚至转 而出现一定的正相关关系。 采用牡蛎作饵料喂养的军曹鱼，0 5 年9 月起其体重明显要比以杂鱼作饵料喂养的军曹 鱼重。到1 1 月这种差异更是到了极显著的水平；相比之下两组的体长在1 1 月才出现显著 性差异。7 月份，牡蛎喂养的军曹鱼存活率为6 3 ；而杂鱼组存活率仅2 9 。以牡蛎喂养 的鱼增重率和特定生长率均优于杂鱼组鱼，但它们的性腺发育水平却没有明显的不同。 利用放射免疫分析法( r a d i oi m m u n o a s s a y ，r i a ) 测定了处于第一次性周期内和已达性 成熟年龄两组军曹鱼血清中促卵泡激素( f o l l i c l es t i m u l a t i n gh o r m o n e ，f s h ) 和三种性类固 醇激素雌二醇( 1 7 1 3 e s t r a d i o l ，e 2 ) 、睾酮( t e s t o s t e r o n e ，t ) 、孕酮( p r o g e s t e r o n e ，p ) 】 的水平，并对它们的周年变化规律进行了研究。对于军曹幼鱼，睾酮的变化规律：雌雄鱼 的t 周年变化相似，3 4 月份浓度开始升高，5 月份达到峰值，到9 月份急剧下降接近0 ， 以后始有缓慢的回升。雌二醇的变化规律：雄鱼e 2 量在7 月有一个突兀的峰值，然后急剧 下降至极低水平；雌鱼的雌二醇相对比较平稳，总体分泌量也较雄鱼的少。孕酮的变化规 律：雌雄鱼孕酮从1 1 月次年7 月变化都比较平稳，在9 月份后，两者的分泌量开始明显 上升，雄鱼在1 1 月份达到峰值，雌鱼的峰值比雄鱼晚出现了两个月。促卵泡激素的变化规 律：两者变化大致相同，都是在5 月份水温上升时达到峰值，而雄性军曹鱼在1 1 月份还出 现了一个小的峰值，然后浓度急剧下降。对雄鱼促卵泡激素( f s h ) 和睾酮( t ) 水平的线 性回归分析表明两者的分泌存在着一定的相关关系。 对于军曹亲鱼，睾酮的变化规律：具有明显的季节性变化，5 - - 7 月t 浓度明显高于其 他月份，冬季1 1 月份下降到极微量的水平，到次年3 月再略为上升。孕酮的变化规律：含 量较为稳定，到0 6 年1 月份才出现明显的上升趋势，到3 月份达到全年的最高值。雌二 醇的变化规律：其季节性变化非常明显，在7 月份e 2 陡升至全年最高的的水平，1 1 月后 却下降至几乎检测不出地步。而促卵泡激素，从0 5 年1 1 月到次年3 月，其分泌量在1 月 份达到顶峰。 关键词：军曹鱼，性腺发育，性类固醇激素，促卵泡激素，放射免疫分析法 i i s t u d i e so ng o n a d d e v e l o p m e n t ，s e r u mf o l l i c l e s t i m u l a t i n gh o r m o n ea n d s e xs t e r o i dh o r m o n e s o f r a c h y c e n t r o nc a n a d u m a b s t r a c t t oi n v e s t i g a t et h ei n f l u e n c eo f d i e t st ot h eg r o w t ha n dg o n a d a ld e v e l o p m e n to f r a c h y c e n t r o n c a n a d u mw h i c ha tt h ea g eo ft h ef i r s ts e x u a lc y c l e ，t h ef i s hw a sf e db yt w ok i n d so fd i f f e r e n t d i e t s o n ew a so s t r e ad e n s e l a m e l l o s al i s c h k e a n o t h e rd i e tw a s 也et r a s hf i s h e sm a i n l yc o m p o s e d o fh a r e n g u l az u n a s ib l e e k e ra n dd e c a p t e r u sm a r u a d s i m e a n w h i l et h ea n n u a lc y c l eo f s e x - r e l a t e dh o r m o n e sp r o d u c t i o nf o rr a c h y c e n t r o nc a n a d u mw a ss t u d i e d ，i n c l u d i n gt h es a m p l e s a tt h ea g e sw h i c hh a v eb e e nm e n t i o n e da b o v ea n dt h a th a v ea c h i e y e do re x c e e d e dt h es e x u a l m a t u r ea g ea sw e l l t 1 1 cr e s u l ta b o u tt h eg r o w t ha n dt h eg o n a d a ld e v e l o p m e n ts t u d yo fr a c h y c e n t r o nc a n a d u m s h o w st h a tt h et e s t i c u l a rd e v e l o p m e n tu n d e r w e n tt h ei n t e g r a t e dd e v e l o p m e n t a ls t a g ea c c o m p a n y w i t i la l lk i n d so fg e r mc e l l sc a m eo u t s a m p l e so fl o o d e v e l o p e dt ot h es t a g evi nm a yw h e n t h e ya r et e nm o n t h so l d t h ci n d i v i d u a lm a l ep o s s e s s i n gt h er e g r e s s i n gs t a g ev ia p p e a r e da f t e r j u l y o o g o n i u m ，o o c y t eo ft h ep h a s ei i ，o o c y t eo ft h ep h a s ei i tw e r eo b s e r v e di nt h ef e m a l e r a c h y c e n t r o nc a n a d u mb u tt h e i ro v a r yd e v e l o p m e n tw a ss t i l lb l o c k i n gi nt h es t a g ei i u n t i l n o v e m b e ro f2 0 0 5w h e nt h e ya r es i x t e e nm o n t h so l d f u r t h e r m o r e g o n a d o s o m a t i ci n d e xr g s d d u r i n gt h ea n n u a lr e p r o d u c t i v ec y c l eo fr a c h y c e n t r o nc a n a d u mw a sm e a s u r e d t h er e s u l t s s h o w e dt h a tg s ir e a c h e dt h eh i g h e s tl e v e li nj a n u a r yi nt h ef e m a l ea n di ts e e m st h a tg s lw a s r i s i n gs l o w l ya l o n gw i t ht h et i m ep a s s i n ga l t h o u g h ti td r o p p e di nm a r c h v a r i e t yo fg s ii nm a l e w a ss t e a d yt h a tt h e r ei so n l yas m a l lp c a ki i lm a y a sf a ra sh e p a t o s o m a t i ci n d e x ( h s i ) i s c o n c e m e d ，t h e r ea r eb a s i c a l l ys i m i l a rw i t ht h ec h a n g eo fg s ii nm a l ee x c e d ti nm a yw h e r e a si n f e m a l e ，t h en e g a t i v ea s s o c i a t i o no fg s ia n dh i sw a sa p p a r e n t l yi nn o v e m b e rt om a r c h ，b u ta f t e r t h a tt h i sa s s o c i a t i o nw a st r a n s i t i n gt op o s i t i v ea s p e c tt os o m ee x t e n t n 他b o d vw e i g h to fr a c h y c e n t r o nc a n a d u mw h i c hf e db yo s t r e ad e n s e l a m e l l o s al i s c h k ei s o b v i o u s l yh e a v i e rt h a nt h a tf e db yt h et r a s hf i s h e ss i n c es e p t e m b e r , 2 0 0 5 t w om o n t h sl a t e rt h e d i 威r e n ti sm o r em a r k e d c o m p a r a t i v e l yt h e i rb o “l e n g t h sa r en o td i s t i n c t l yd i f f e r e n tu n t i l n o v e m b e r i nj u l yt h es u r v i v a lr a t eo fr a c h y c e n t r o nc a n a d u mw h i c hf e db yo s t r e a d e n s e l a m e l l o s al 括c h k ei s6 3 w h i l et h el a t t e ri so n l y2 9 ：m o r e o v e r , t h ew e i g h ti n c r e a s i n gr a t e a n ds p e c i f i cg r o w t hr a t eo f t h ef o r m e ra r es u p e r i o rt h a nt h el a f t e rt h o u l g hi ti ss i m i l a ra tt h es t a g e o f g o n a d a ld e v e l o p m e n ta m o n g t h i st w o g r o u po f r a c h y c e n t r o nc a n a d u m b yd i v i d i n gr a c h y c e n t r o nc a n a d u mi n t ot w og r o u p so fd i f f e r e n t i a la g e ，t h a ti s ，o n eg r o u pi s a tt h ea g eo ft h ef i r s ts e x u a lc y c l e a n o t h e ra r et h es a m p l e st h a th a v ea c h i e v e do re x c e e d e dt h e s e x u a lm a t u r ea g e t h e i rs e r u mc o n c e n t r a t i o no fs e x r e l a t e dh o r m o n e sw a sm e a s u r e dr e s p e c t i v e l y u s i n gt h et e c h n o l o g yo fr a d i oi m m u n o a s s a yf r i a 、t h eh o r m o n e st h a th a v eb e e nm e a s u r e d i n c l u d e 1 7 1 3 一e s t r a d i o l ( e 2 ) ，t e s t o s t e r o n e ( t ) ，p r o g e s t e r o n e ( p ) a n d f o l l i c l e s t i m u l a t i n g h o r m o n e ( f s h ) o nt h i s b a s i ct h e i ra n n u a lc y c l eo fs e x - r e l a t e dh o r m o n e sp r o d u c t i o nw a s i n v e s t i g a t e d a sf a ra st h ea d o l e s c e n tr a c h y c e n t r o nc a n a d u ma r ec o n c e r n e d ，t h ea n n u a lc h a n g eo f t e s t o s t e r o n ei nb o t l ls e xi ss i m i l a r , t h el e v e lo ft u p r i s i n gi nm a r c ha n da p r i lt h e nr e a c h e da d e a l 【 i l i i nm a y , a n dt h e nd r o p p e dc l o s et oz e r oi ns e p t e m b e rt h o u g hr e c o v e r e dt e n d e r l ya f t e rt h a t ；t ot l l e v a r i e t yo f17 b e s t r a d i o l ，t h e r ei sap r o m i n e n ta p e xi nm a l ei nj u l yt h e ns u d d e n l yd e c r e a s e dt oa v e r y1 0 wc o n c e n t r a t i o na f t e rt h a tw h e r e a si nf e m a l et h ee 2t e n d e dt om o r es t a b i l i z a t i o na n dt h e i r c o n c e n t r a t i o na r el o w e rc o m p a r e dw i t ht h em a l e f o rp r o 印s t e r o n et h a tt h e r ei sas t a b l es e c r e t i o n i nb o t hs e x e ss i n c en o v e m b e rt oj u l yo fn e x ty e a r , b u ta f t e rs e p t e m b e rt h e i rs e c r e t i o na r e s i g n i f i c a n t l yi n c r e a s i n ga n dt h em a l ea p p r o a c h e dt h eh i g h e s t1 e v e li nn o v e m b e rw h i l et h es a l t l e s i t u a t i o nh a p p e n d e di nf e m a l et w om o n t h sl a t e r f o rf o l l i c l es t i m u l a t i n gh o r m o n ei st h a tt h e r ei s as i m i l a rv a r i e t yi nb o t hg e n d e r s t h a ti s a p p r o a c h e dt ot h ep e a kw h e nt h ew a t e rt e m p e r a t u r e u p r i s i n gi nm a y h o w e v e ri nt h em a l er a c h y c e n t r o nc a n a d u m t h ec o n c e n t r a t i o no ff s hr e a c h e d as m a l lp e a ki nn o v e m b e rb e f o r ei t ss h a r p l yd e c r e a s i n g t h e1 i n e a rr e g r e s s i o na n a l y s i st o w a r d t h er e l a t i o no ff s ha n dti ni n a l es h o w st h e r ei sac e r t a i ne x t e n to fa s s o c i a t i o ni np r o d u c t i o n b e t w e e nt h e s et w os e x r e l a t e dh o r m o n e s a sf h ra st h em a t u r er a c h y c e n t r o nc a n a d u ma r ec o n c e r n e d ，t h ec o n c e n t r a t i o no ftp o s s e s s e s ad i s t i n c ts e a s o n a lv a r i e t y t h ep r o d u c t i o no f ta r eo b v i o u s l yh i g h e rt h a no t h e rm o n t h si nm a yt o j u l y , t h e nd r o p p e dt oav e r yl o wl e v e li nn o v e m b e rw h e n i ti sc o l da n dw o u l dn o ti n c r e a s eu n t i l m a r c ho fn e x ty e a r t h e 】e v e l so fpa r ev e r ys t e a d ya n dd on o ti n c r e a s eu n t i lj a n u a r yo f2 0 0 6 b e f o r ei ta p p r o a c h e st h eh i g h e s tc o n c e n t r a t i o ni nm a r c h w h a ti sm o r et h ec h a n g i n go fe 2w a s a l s oc o i n c i d e dw i t ht h es e a s o n a lc h a n g i n g i nj u l yt h ec o n c e n t r a t i o no fe 2s h a r p l yu p r i s e dt ot h e d e 呔o ft h ey e a rb u ti ta l m o s t l yc a nn o tb ed e t e c t e di nn o v e m b e r f o rf s h ，t h ec o n c e n t r a t i o n r e a c h e dt h ep e a ki nj u l yd u r i n gt h et i m en o v e m b e ro f2 0 0 5t om a r c ho fn e x ty e a r k e yw o r d s ：r a c h y c e n t r o nc a f l a d l 2 m ，g o n a d a ld e v e l o p m e n t ，f o l l i c l es t i m u l a t i n gh o r m o n e ，s e x s t e r o i d ，r a d i oi m m u n o a s s a y ( r i a ) 广东海洋大学 学位论文独创性及知识产权声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或 撰写过的研究成果，也不包含为获得本校或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢 意。 本学位论文成果归广东海洋大学所有。 r 7- 指导教师签名：f 年月臼 研究生签名 ，玲内6 年 许录导、 ( 月f7 日 i 扩z 广东海洋大学硕士学位论文 绪论 1 军曹鱼的分类地位及研究意义 1 1 军曹鱼的分类地位与特征 1 1 1 军曹鱼的分类地位 军曹鱼( r a c h y c e n t r o nc a n a d u m ) ，隶属于硬骨鱼纲( o s t e i c h t h y e s ) 、辐鳍亚纲 ( a c t i n o p t e r y g i i ) 、鲈形( p e r e i f o r m e s ) 、鲈亚目( p e r c o i d e i ) 、军曹鱼科( r a c h y c e n t r i d a e ) 1 。全世界仅一属一种。 1 1 2 军曹鱼的特征 军曹鱼体延长，近圆筒形，稍侧偏。头扁平，宽大于高。眼较小，位于头的两侧，其 上缘几达背部，无脂膜。口大，前位，下颌稍长于上颌。体、颊部、鳃盖上缘、头顶部及 各鳍均被小圆鳞，侧线稍呈波纹状。鳃耙粗短。无鳔。体背部黑褐色，腹部狄白色。体侧 沿背鳍基部有一黑色纵带，自吻端至尾鳍基部有一条与之平行的黑色纵带，自胸鳍基与臀 鳍基另有一条浅褐色纵带，各带之间为灰白色纵带所夹。( 图1 ) 1 2 1 。 图1 军曹鱼 f i g 1c o b i a ( r a c h y c e n t r o nc a n a d u m ) 1 2 军曹鱼的生活习性与繁殖习性 军曹鱼分布于大西洋、印度洋和太平洋( 东太平洋除外) 等热带海域( 图2 ) 。在我国 东海、南海海区亦有分布，不集群活动，所以产量不高。为生活在大洋中的活动能力极强 的鱼类。自然条件下军曹鱼可以生存至少十年，一般生存年龄可达1 5 年1 3 1 。1 9 8 5 年在澳 军曹鱼( r a c h y c e n t r o nc a n a d u m ) 性腺发育和血清性激素的研究 大利亚钓到的一尾军曹鱼，为有汜录以来钓到的最大的军曹鱼。体重达到4 7 k g ，体长达 到两米。 图2 军曹鱼在世界范围内的分布( 红色区域) f i g ，2t h er e dz o n es h o w st h ed i s t r i b u t i o no f c o b i a w o r l d w i d e 军曹鱼为热带海水鱼类，不耐低温，不耐低溶氧5 1 。主要以虾、蟹和鱼类为食，嗜食蟹 类，其次为鱼类“。 1 2 i 生殖习性 1 2 1 1 雌雄特性及成熟最小体型 在生殖季节，军曹鱼雌鱼背部黑白相间的条纹会变得更为明显，腹部尤其突出，而成 熟雄鱼条纹不明显或消失，腹部较小。但完全从体色上判断雌雄有时不一定准确。网箱养 殖的军营鱼，性成熟年龄各地有所不同，湛江地区为2 龄，雄鱼体重7 于克以上，雌鱼 体重8 千克以上。相对怀卵量为1 千克体重约1 6 万粒，卵粒较小5 “1 。 1 2 1 2 产卵季节 在自然海区，军曹鱼为多次产卵鱼类，生殖期较长，在美国东海岸的北墨西哥湾海域， 4 1 0 月份均可发现成熟亲鱼嘲。在我国台湾南部，2 月底至5 月为产卵高峰，往后有零 星产卵，直至1 0 月。产卵适宜温度为2 4 2 9 。 1 3 课题研究背景和意义 由于捕捞业和工业的发展，我国海洋渔业资源受到了不同程度的破坏。为满足人们对 海洋动物蛋白摄取日益增长的需求，近十年来，我国兴起了海水鱼类养殖业。目前海水鱼 类养殖种类达到5 0 多种，产量和产值逐年提高，取得显著的经济效益和社会效益。继藻、 2 广东海洋大学硕士学位论文 虾、贝类养殖后，被誉为我国海水养殖“第四次浪潮”。但相比于世界沿海各国，我国的总 产量不高，年产量只有约3 0 万吨，创造的社会经济效益并不大。究其原因，除了经济发 展，技术水平等因素外，最主要的是，海水鱼养殖种类虽然多，但每种鱼的产量都不高， 没有选择出2 、3 种有产业化前景的种类。如挪威一条大西洋鲑，经过多年市场推广已树 立了品牌。年产量将近3 5 万吨，形成了一条完整的产业链，产值约1 5 亿美元，销售网络 遍布全球【鲥。 作为有产业化前景的鱼类应该是生长速度快、产量高、肉质好、市场销路大，能适应 不同层次消费者的需要。军曹鱼，又名海鲡，海龙。华南沿海群众俗称“罔鱼”，有“傻鱼” 之意。因其有时会浮于水面，追逐着渔船前进时推出的波浪，此时用手捞网就可轻易将之 捕获。军曹鱼突出的优点，一是生长速度极快，一般年生长体重可达6 - 8 k g ( 同样规格大 西洋鲑需耗时三年) 。鱼肉肥厚，可食部份可达体重的6 0 ；二是肉质细嫩，白肌，味道 非常鲜美。对于它的食用价值，渔民中素有“第一鲳( 银鲳1 ，第二罔，第三马鲛郎( 马鲛鱼) ” 之说【j 。“罔”就是指的军曹鱼。经深加工后制成的军曹鱼生鱼片，深受f i 本市场的欢迎， 单价比三文鱼、会枪鱼还要贵( 规格6 - 8 k g ，5 - 6 美元k g 。2 0 0 0 年【1 1 1 ) 。而且营养含量丰 富，不饱和脂肪酸含量高于许多名贵鱼类，具较强的降低血液胆固醇效果。其肌肉成分 a n s e r i n e ，具有抗氧化功能。是市售鸡精之重要成分。 尽管如此，野生的军曹鱼捕捞量十分有限，全球每年捕捞量不超过l 万吨。1 9 8 0 年台 湾研究者偶然发现军曹鱼生长速度快，在日本和台湾市场具有潜力，遂将其放养于海水网 箱中试养。几经摸索取得成功。从1 9 9 7 年至2 0 0 1 年的四年间，养殖年产量在从7 0 5 吨跃 升至3 7 1 0 吨，目前台湾每年可生产军曹鱼1 万吨。 从台湾的养殖经验来看，军曹鱼无疑是目前网箱养殖中生长最快，个体最大，最有养 殖前景的海水鱼类。除去以上提及的主要原因外，还有一，军曹鱼无鳔，需要不停游动， 正因为这种不知疲倦的特性，才使养殖军曹鱼具有与野生军曹鱼相媲美的肉质。事实上， 由于养殖军曹鱼含有更多的脂肪，因此味道比野生军曹鱼更胜一筹。二，人工培育的种苗 容易驯化摄食人工浮性或沉性饵料，适于近海网箱尤其是深海抗风浪养殖。三，对养殖技 术要求不高，但抗病能力比普通品种强。四，饵料系数高达l ：1 t 佗】。台湾海洋网箱养殖发 展协会认为军曹鱼是一种有望成为国际性的养殖经济鱼类，从2 0 0 1 年开始在全岛范围内 大力推广养殖，以使“北鲑鱼南海鲡”名符其实。目前台湾有8 0 的海水网箱饲养着军曹鱼 【l ”，个体6 8 公斤的鱼出口日本，8 1 0 公斤的鱼在台湾本地市场销售。军曹鱼按照市场的 需求被加工成鱼片、鱼柳和其它形式的产品，所有军曹鱼加工厂均建立了h a c c p 生产体 系。不仅如此，台湾更是将品尝军曹鱼美食作为特色旅游项目。每年1 1 月份举办的澎湖风 帆海鲡观光节，为台湾1 2 大节庆之一，极大地拉动了台湾经济的发展。 而在祖国大陆，军曹鱼散布于东海和南海，天然捕获量很少。对它的养殖而言，1 9 9 6 年广东湛江地区和海南省沿海群众开始在海上网箱试养。目前总体来说仍处于起步阶段。 军曹鱼( r a c h y c e n t r o nc a n a d u m ) 性腺发育和血清性激素的研究 要想实现军曹鱼的产业化，首先要解决的，也是最关键的问题就是大批量的种苗生产1 1 “。 台湾1 9 9 7 年种苗的大规模生产始获得成功，此后几年，产量翻了几翻。过去，我国养殖 军曹鱼一直依赖进口。广东省每年需进口军曹鱼苗4 0 0 多万尾，耗资3 0 0 0 多万元。要不 受制于人，必须突破苗种生产这道瓶颈。受国家高技术研究发展计划( 8 6 3 计划) 的委托， 广东海洋大学2 0 0 0 年开始进行军曹鱼人工育苗研究并获得初步成功，2 0 0 2 年在全国首次 实现规模化人工育苗。当年育出单批商品种苗( 体长5 c m 以上) 3 6 万尾；2 0 0 3 年育出鱼 苗1 0 9 万尾，其中体长3 c m 的鱼苗2 5 4 万尾；体长8 c m 以上的鱼苗3 2 6 万尾；2 0 0 4 年育 出体长3 c m 以上鱼苗1 8 0 万尾，其中体长1 0 c m 以上的超过4 0 万尾，解决了军营鱼全人工 繁育生产中的一些关键技术问题，获得较高的孵化率和种苗成活率，结束了大陆地区一直 依赖进口鱼苗的历史，为规模化商品种苗供应提供了必要的技术支持【1 “。 在此基础上，本实验拟继续深入地调查军曹鱼在不同条件下性腺发育的情况，以及其 血清中促卵泡激素和性类固醇激素的周年变化情况，以期掌握军曹鱼的生殖内分泌特点和 繁殖特点，提高鱼体的繁殖能力，进一步充实完善全人工规模化育苗技术，促进军曹鱼产 业化的发展。同时也为鱼类性腺组织学和生殖生理学等方面的研究提供新的资料。 1 4 国内外对军曹鱼繁殖生理学的研究历史及现状 最早有关军曹鱼繁殖生理的研究，应该是d a w s o n ，c e ( 1 9 7 1 ) 6 j 的报道。当时作者在 六月和七月于美国墨西哥湾近海域捕捉到为数众多的全长为1 2 6 5 5 0m m 的军曹鱼仔鱼， 因此推断军曹鱼的产卵盛期在四至五月。目前对于军曹鱼繁殖方面的研究主要是集中在美 国墨西哥湾沿岸的各个水产研究所和大学实验室。自1 9 8 9 年起，几组自野外捕到的性未 成熟军曹鱼被运到德克萨斯州立大学海洋科学研究所水泥池进行长期的系统的军曹鱼人 工繁殖的研究。军曹鱼受精卵圆形，平均1 2 4 毫米。水温2 9 * ( 2 时2 4 内受精卵孵化。仅使 用水温和光周期调控技术，军曹鱼已可于水泥池自然产卵( 2 0 0 1 ) 1 1 7 1 。只要水温维持在 2 3 2 7 ，在台湾南部，军曹鱼一年到头都可以产卵。军曹鱼的产卵时机和月亮的周期变化 没有必然的联系，甚至在雨天及热带低压影响下都有产卵行为发生【1 “。军曹鱼的批次产卵 力( b a t e hf e c u n d i t y l 为2 6 x 1 0 6 1 9 1 1 0 8 个卵子。含处于卵黄发生期的卵母细胞的雌鱼的 最小体长( 叉长) 为8 3 4 m m 。含大量精子的雄鱼的最小体长( 叉长) 为6 4 0 m m i l 。使用 人绒毛膜促性腺激素( h c g ) ，或埋植激素硅胶小丸，可诱导军曹鱼产卵【2 0 1 。军曹鱼也可 在网箱中自然产卵1 2 1 1 。 总体而言，关于军曹鱼的研究，无论在亲鱼的培育，幼鱼的养成，还是病害防治方面， 我国台湾省研究的范围最广，程度最深，且技术最为成熟。在美国，原本多进行的是军曹 鱼的分布，产量等基础问题的研究。基于军曹鱼的诸多优点，同时捕捞产量偏低，该鱼的 繁殖生物学研究开始受到人们重视1 2 2 1 。2 0 0 2 年美国弗罗里达群岛( f l o r i d ak e y s ) 的一家 孵化场顺利解决了军曹鱼的大规模人工育苗问题，育出的幼鱼除满足美国本土需求外，还 广东海洋大学硕士学位论文 远销马提尼克岛，波多黎各等拉美地区。 在祖国大陆，军曹鱼的研究历史非常短， 2 性腺发育的研究 2 1 生殖细胞的发生 目前军曹鱼的海上网箱养殖正在美国逐渐兴起。 养殖业彳刚起步。 原始生殖细胞迁入生殖嵴并与之共同构成性腺，然后开始分裂分化，雄性分化成精原 细胞，雌性分化成卵原细胞，精原细胞与卵原细胞进一步分裂分化分别达到成熟。 精细胞的发生经历以下几个发育阶段：精原细胞( s p e r m a t o g o n i u m ) 、初级精母细胞 ( s p e r m a t o c y t ei ) 、次级精母细胞( s p e r m a t o c y t e i i ) 、精子细胞( s p e r m a t i d ) 、精子( s p e r m ) 。 精原细胞是精细小管中最大的生殖细胞，细胞核大，分裂旺盛，经过分裂分化为初级精母 细胞，初级精母细胞体积比精原细胞稍小，核质染色很深，初级精母细胞经过减数分裂形 成次级精母细胞，次级精母细胞经过第二次减数分裂产生精子细胞，在鱼类精巢中次级精 母细胞一般不常见，因为由第一次减数分裂过渡到第二次减数分裂经历的时间很短，所以 次级精母细胞存在的时间很短，很快就分化为精子细胞，次级精母细胞的体积要比初级精 母细胞小，但比精子细胞大，精子细胞经过变态成为精子1 2 l 】口”。 而卵母细胞的生长发育过程可以明显的分为三个时期：卵母细胞的增殖期、卵母细胞的 生长期、卵母细胞的成熟期。在增殖期，卵原细胞通过有丝分裂增加未来卵母细胞的数量。 卵原细胞停止有丝分裂后过渡到细胞质和细胞核的增长，进入卵母细胞的小生长期，然后 转入卵黄形成的大生长阶段，至成熟期时卵母细胞的体积增长到最大，细胞质内充满粗大 的卵黄颗粒，接着细胞核丌始移向动物极向受精孑l 的位置靠近，之后核膜消失，核仁分解。 卵母细胞进入第一次成熟分裂，排出极体，完成由初级卵母细胞向次级卵母细胞的过渡， 次级卵母细胞进入卵巢腔内，达到成熟【1 92 ”。目前许多学者将鱼类卵子的发生分为六个时 相，各时相主要特征如下 2 1 1 ： i 时相卵原细胞，它们最大的特点是进行有丝分裂，呈嗜弱酸性。 时相卵母细胞，其主要特征包括细胞质中出现卵黄核，细胞质呈嗜碱性，细胞膜外 开始出现一层滤泡细胞。 时相卵母细胞，细胞质中开始出现液泡，卵周开始出现卵黄颗粒。滤泡细胞发展为 二层，开始出现放射膜。 时相卵母细胞，细胞质中开始充满卵黄颗粒。 v 时相卵母细胞，为成熟卵时相，核膜穿孔溶解，细胞核失去原形开始出现染色体， 分散在卵黄间隙和卵周的细胞质向动物极集中，形成胚基。 时相卵母细胞，为退化期的卵母细胞。 军曹鱼( r a c h y c e n t r o nc a n a d u m ) 性腺发育和血清性激素的研究 2 2 性腺发育的判定方法 性腺的发育和成熟是伴随着性细胞的分化和成熟同时进行的。这种发育往往表现出明 显的阶段性，且具有周期性。判断硬骨鱼类性腺发育程度的手段一一般包括生物学方法( 组 织学结构等) 、目测法( 如性腺的体积、色泽等) 和计算生殖腺指数等方法。 2 2 1 目测法 目测法主要是通过解剖学的方法将鱼进行解剖，取其性腺进行肉眼的观察，通过不同 性腺发育时期性腺的一些不同的外部特征来区分性腺的发育时期，目测法比较简单，但是 需要研究者有比较丰富的经验，其准确性因人而异。 2 2 2 性腺成熟系数 成熟系数也是一个衡量性腺发育的标志，性腺重量是表示性腺发育程度的重要指标， 性腺重量与体重的百分比就是成熟系数，目前其计算公式因为不同的种类而异，主要采用 如下两种： 成熟系数= 性腺重去内脏体重10 0 成熟系数= 性腺重体重1 0 0 般来说，成熟系数越高，性腺发育越好。此方法也比较易行，但是需要有足够的数 据，并且成熟系数在每种鱼类中各不相同，例如在繁殖季节高峰期雌性卵巢的成熟系数在 鲢、鳙是2 0 2 5 ，青鱼是l o - 1 2 ，鲤鱼是2 0 2 5 ，尼罗罗非鱼则是3 5 4 o 2 1j 。 2 , 2 3 卵径测定法 处于不同的性腺发育阶段，卵径显著不同，所以，通过对卵径的测量和对照有关资料 就可以知道鱼类卵巢的成熟度。在实际工作中，通常测量i 期卵巢中已经积累卵黄的卵 径，用来判断卵巢成熟度和产卵时问。 2 3 组织切片技术 性腺发育的组织学研究一般采用组织切片技术，组织切片技术是组织学、胚胎学、生 理学、动物学等生物科学及病理解剖学等医学科学研究细胞、组织的生理、病理形态变化 的一种主要方法，用以补充直接观察的不足。因直接观察不仅不易看清细胞、组织的微细 结构，且操作复杂，但是经过固定、脱水、包埋等手续后就可把材料切成极薄的片子，再 用不同的染色方法以显示不同细胞和组织的形态，以及细胞和组织中某些化学成分含量的 变化。切片也便于保存，所以是教学和科研中常用的方法1 2 ”。本文对军曹鱼性腺发育的观 察就是采用了这种方法。同时，对制片方法进行了改良。 6 广东海洋大学硕士学位论文 从动物体取下材料开始，到制成切片标本为止，其问必须经过以下各个步骤： ( 1 ) 取材与固定：取出动物体内部分组织，用化学药品固定，这种化学药品称为固 定剂，有杀死兼固定和硬化细胞组织的作用。 ( 2 ) 洗涤：组织经过固定剂作用以后，内部渗入很多固定剂，一定要及时地把渗入 罩面的固定剂洗去，否则固定剂作用过久会产生一些不良后果，如影响染色、产生结晶等。 ( 3 ) 脱水：组织在水洗后会含有大量水分，必须用一些有机溶剂，称为脱水剂的以 驱除里面的水分，以利组织的保存和下一步的透明、透蜡诸步骤的进行。 ( 4 ) 透明：组织在脱水以后方能进行透明，它的目的是便于透蜡包埋。因为透蜡的 溶剂( 如石蜡) 一般多不能与脱水剂混合，只能和透明剂混合。 ( 5 ) 透入：组织块在完全透明后，支持剂如石蜡、火棉胶等就容易透入，它的目的 一方面使组织变硬有利于切片，另外也使组织块间的相互位置保持一定，基本上保持生活 时的状况。石蜡切片法的透入一定要保持在一定的温度下才能进行。 ( 6 ) 包埋：把透足石蜡或火棉胶的组织包埋在石蜡或火棉胶里，成为一定的形状以 便切片。 ( 7 ) 切片：把包埋好的组织块用切片机进行切片，根据观察的要求可以切取所需要 的厚度。 ( 8 ) 贴片：用粘贴剂使切出的片子平铺粘贴在载玻片上以利于染色的进行。一般用 甘油蛋白粘贴较多。 ( 9 ) 染色：切片贴好烘干后进行染色，其目的是使细胞或组织的一部分染上与其他 部分不同的颜色，产生不同的折射率以显示它不同的构造。 ( 9 ) 封藏：切片染好以后用一种胶类物质称封藏剂的封好，以利于长期保存。 3 国内外关于鱼类性腺发育的研究状况 f l s o 年代以来，国内外许多学者先后对多种鱼类的性腺发育及其周年变化作了大量的 工作。段中华等【2 9 】对瓦氏黄颡鱼研究得出雌鱼性腺成熟系数4 b 份开始增大，5 7 月份较高， 6 月份达到最大值，雄鱼性腺成熟系数3 月份开始增大，7 月份达到最大值，而在9 - l o 月份又 出现一个较小的峰值；何德奎等 3 0 2 , 1 】对纳木错裸鲤、色林错裸鲤的精巢、卵巢的发育周期 及各个周期的形态特征进行了详细的描述；刘文彬等【3 2 j 对黄颡鱼的卵巢发育进行了研究， 并得出性腺成熟系数和性腺发育的周年变化呈现一致性；王汉平【3 3 】等对养殖鲥鱼性腺发育 的组织学特征和性腺发育的周期变化进行了研究，并得出养殖鲥鱼的卵母细胞不能自发成 熟，需要通过外源药物和生态学的调控、启动和诱导卵母细胞发育成熟；魏刚等1 3 4 】对鲶的 性腺发育进行了详细的描述，并得出性