（分析化学专业论文）加替沙星和磺胺嘧啶检测方法研究.pdf

扭f 要 摘要 药品质量的优劣，直接关系到患者的身体健康乃至生命安全。因此，为了确 保人们用药的安全、合理和有效，必须对药品质量进行全面控制。能够简便、快 速地从复杂样品中可靠、灵敏地检测出痕量药物成分是当前药物分析的发展趋势。 适应这一要求，光谱法因其设备简单、操作方便、准确度好、灵敏度高以及适用 范围广等优点成了药物分析中最基本和最主要的研究手段之一。 本文以光谱法作为检测手段，探寻检测加替沙星、磺胺嘧啶更简单、更灵敏 的方法，主要研究内容包括： 一、综述了加替沙星和磺胺嘧啶测定方法研究现状。 二、建立了利用荧光光度法测定加替沙星新方法：在p h 6 0 的b r 缓冲溶液 中，刚果红能与钙黄绿素生成配合物，使钙黄绿素荧光猝灭，加入加替沙星后， 加替沙星与刚果红可生成比钙黄绿素- 冈0 果红更稳定的配合物，使钙黄绿素游离重 现荧光。将该方法用于片剂、粉针剂和尿液中加替沙星的测定，结果与文献报道 的紫外法一致。 三、用紫外光谱和同原射线计量分析法同时测定加替沙星和左氧氟沙星：铝 离子和十二烷基硫酸钠( s d s ) 与加替沙星( g f l x ) 、左氧氟沙星( l v f x ) 均能 反应形成离子缔合物，两者最大吸收波长均在2 9 2 n m 处，其差异仅在于两吸光强 度随浓度线性增幅不同，据此建立了双组分信号响应的两条同原射线计量分析法。 四、研究了在不同酸度条件下茜素红a l ”磺胺嘧啶体系：磺胺嘧啶能使茜素 红紫外吸收峰增强，加入舢”后，吸光度进一步增强。在p h 4 5 0 的b r 缓冲溶 液体系中，体系的最大吸收波长为2 6 1 r i m ，在定浓度范围内，吸光度与磺胺嘧 啶浓度成线性关系，据此建立了在p h 4 5 0 的体系中测定磺胺嘧啶的新方法；在 p i l l 0 0 0 的b r 缓冲溶液体系中，体系的最大吸收波长为2 6 1 r i m ，在一定浓度范 围内，吸光度与磺胺嘧啶浓度成线性关系，据此建立了在p i l l 0 0 0 体系中测定磺 胺嘧啶的方法。实际工作中，可根据样品测定的实际需要选择酸性或碱性条件下 测定。将此两种方法用于片剂和尿液中磺胺嘧啶含量的测定，结果与文献报道的 荧光法一致。 五、建立了表面活性剂增敏二甲酚橙显色测定磺胺嘧啶的方法：研究了多种 表面活性剂对二甲酚橙磺胺嘧啶显色反应体系的影响。实验表明，氯代十六烷基 吡啶( c p c ) 和十六烷基三甲基溴化铵( c t a b ) 对该体系有显著的增敏作用；据此 分别建立了氯代十六烷基吡啶( c p c ) 、十六烷基三甲基溴化铵( c t a b ) 增敏二甲 酚橙显色测定磺胺嘧啶的方法。将这两种方法用于片剂中磺胺嘧啶含量测定，结 果满意。 关键词：光谱法；检测；加替沙星；磺胺嘧啶 i i a b s t r a c t a b s t r a c t p h a r m a c e u t c i a l q u a l i t yd i r e c t l y a f f e c t st h e s u f f e r e r s l i f eh e a l t ha n ds a f e t y t h e r e f o r e ，p h a r m a c e u t c i a lq u a l i t ym u s tb ec o n t r o l l e dc o m p r e h e n s i v e l yi no r d e rt o e n s u r ei t ss a l t y , r e a s o n a b l e n e s s ，v a l i d i t yw h e ni ti su s e d n o w a d a y s ，t h e t r e n do fp h a r m a c e u t c i a l a n a l y s i s i st od e t e r m i n et h et r a c e p h a m a a c e u t c i a li n g r e d i e n to ft h ec o m p l e xs a m p l e ss i m p l ya n dr e l i a b l y t h e r e f o r e ， s p e c t r o g r a p h i cm e t h o dh a sb e c o m eo n eo ft h em o s te s s e n t i a la n di m p o r t a n tm e t h o d si n t h ed e t e r m i n a t i o no fp h a r r n i cp r o d u c t sd u et oi t se a s ya p p a r a t u s ，s i m p l ep r o c e d u r e ， l l i g l ls e l e c t i v i t ya n ds e n s i t i v i t y t h ea i mo ft h i sd i s s e r t a t i o ni st oe x p l o r es i m p l e r , m o r es e n s i t i v ed e t e r m i n a t i o n m e t h o d so fg a t i f l o x a c i n ( g f l x ) a n ds u r f a e t a n t s a ( s d ) ，w i mu s i n gs p e c t r o p h o t o m e t r y a sr e s e a r c hm e a n s t h e m a j o rc o n t e n t sa r ed e s c r i b e da sf o l l o w s ： 1 as o m e w h a tt h r o u g ha n da l l - a r o u n dr e v i e wo ft h ea p p l i c a t i o no fm e t h o d si nt h e a n a l y s i so fg a t i f l o x a c i na n ds u r f a c t a n t s ai sg i v e ni n t h i sp a r t 2 e s t a b l i s h e daf l u o r o m e t r yf o rt h ed e t e r m i n a t i o no fg f l x ：t h ei n t e r a c t i o n b e t w e e nc o n g or e d ( c r ) a n dc a l c e i ni np h6 0 0 b r i t t o n - r o b i n s o nb u f f e rs o l u t i o n r e s u l t e di naf u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo fc a l c e i nd e c r e a s e m e n t a d d i t i o no fg f l xi n t o t h ec a l c e i n c rs y s t e m ，t h ef l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yw a se n h a n c e d t h i sm e t h o dh a s b e e na p p l i e df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fg f l xi nt a b l e t ，i n j e c t i o na n du r i n e ，a n dt h e r e s u l t sw e r ev e r yc l o s et ot h o s eo b t a i n e db yt h eu vm e t h o dr e p o r t e d 3 s i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no fg a t i f l o x a c i na n dl e v o f l o x a c i n b y s p e c t r o p h o t o m e t r ya n dm e a s u r e m e n ta n a l y s i so ft w ol i n e sw i t hs a m eo n ep o i n t t h e a 1 3 + a n ds o d i u md o d e c y l s u l f a t e ( s d s ) c o u l dr e a c t w i t hg a t i f l o x a c i na n d l e v o f l o x a c i nt of o r mi o n a s s o c i a t i o nc o m p l e x e s ，t h e i ru va b s o r p t i o ns p e c t r aw e r e l o c a t e da t2 9 2n ma n dt h ed i f f e r e n c ew a st h e i rl i n e a ra m p l i f i c a t i o nd i f f e r e n ta st h e i r l c o n c e n t r a t i o n i ti sb a s e d0 1 1t h ed i f f e r e n c eah o v e lm e t h o df o rs i m u l t a n e o u s d e t e r m i n a t i o no fg a t i f l o x a c i na n dl e v o f l o x a c i nh a db e e n d e v e l o p e d w i t h “m e a s u r e m e n ta n a l y s i so ft w ol i n e sw i n lo n es a m ep o i n t ” 4 r e s e a r c h e dt h ea l i z a r i nr e d a 1 3 + s ds y s t e mi nd i f f e r e n ta c i d i t y s dc a ne n h a n c e au va b s o r b a n c eo fa r s ，a d d i t i o no fa 1 ”i n t ot h ea r s - ( 泳l xs y s t e m ，t h ea b s o r b a n c e w a sm u c hs t r o n g e r t h e nm a x i m u ma b s o r b a n c ea t2 6 1 n mi np h4 5 0b r i t t o n r o b i n s o n b u f f e rs o l u t i o na n da t2 5 9 n mi np h10 0 0 s ot h ec o n t e n t sw e r ec a l c u l a t e da c c o r d i n gt o t h es t a n d a r dc u r v e s i np r a c t i c a lw o r k ，w ec a nd e t e r m i n es du s ea p p r o p r i a t em e t h o d i np h4 5 0o ri np h10 0 0b yr e q u 打e d b o t ho fm e t h o d sh a v eb e e na p p l i e df o rt h e d e t e r m i n a t i o no fs di nt a b l e ta n da l i n e ，a n dt h er e s u l t sw e r ev e r yc l o s et ot h o s e o b t a i n e db yt h ef l u o r i m e t r ym e t h o dr e p o r t e d 5 i n v e s t i g a t e ds db yi t sr e a c t i o n 、析mx od e v e l o pt h ec o l o rs y s t e mi n t h e p r e s e n c eo fs u r f a c ea c t i v ea g e n tc p co rc t a b s t u d ym o s to fs u r f a c ea c t i v ea g e n t s ， s u c ha sp o s i t i v ei o n s ，n e g a t i v ei o n sa n dn o ni o n s t h es t u d ys h o w st h a tc p ca n d c t a bh a v et h em o s te n h a n c ef u n c t i o n s oe s t a b l i s h e dt w om e t h o d so fd e t e r m i n e s d x o - s d - c p ca n dx o s d - c t a bc o l o rs y s t e m sh a v et h es p e c i a lf e a t u r eo fg o o d i n r a p i d i l ys e a s i e i v i t ya n ds t a b i l i t y u s e di nt h es u r v e yo ft h ec o n t e n to fs di nt h e t a b l e t 1 1 1 er e s u l t sa l es a t i s t i e d k e yw o r d s ：s p e c t r o g r a p h i cm e t h o d ；d e t e c t i o n ；g a t i f l o x a c i n ；s u r f a c t a n t s a i v 关于学位论文独立完成和内容创新的声明 本人向河南大学提出硕士学位中请。本人郑重声明：所呈交酌学位论文是 本人在导师的指导下独立完成的，对所研究的课题有新的见解。据栽所知，除 文中特别加以说明、标注乖致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰 写过的研究成果，也不包括其他人为获得任何教育、科研机构的学位或证书而 使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示了谢意。 v ，矽 学位申请人( 学住论交作者) 签名：。差迭二蔓 矾l o 年芎a 矽a 关于学位论文著作权使用授权书 本人经河南大学审核批准授子硕士学位。作为学住论文的作者，本人完全 了解并同意河南大学有关保留、使用学位论文的要求，即河南大学有权向国家 图书馆、科研信息机构、数据收集机构和本校图书馆等提供学住论文( 纸质文 本和电子文本) 以供公众检索、查阅。本人授权河南大学出于宣扬、展览学校 学术发展和进行学术交流等目的，可暖采取影印、缩印、扫描和拷贝等复制手 段保存、汇编学住论文( 纸质文本和电子文本) 。 ( 涉及保密内容的学位论文在解密后适用本授权书) bi ，哕 学位获得者( 学位论文作者) 签名：缢绣 2 0p 年r 月 1 日 学位捌揪孵名：荔碰。 月l j吾 药物是用来预防、治疗、诊断疾病和帮助机体恢复正常机能的物质。药品质 量的好坏，不但直接影响着治疗和预防的成效，而且密切关系到病患的健康与安 全。药物分析的目的是保证药物的质量和用药的安全有效。药物分析大致可分为 两大部分：一是对原料定量分析、不纯物测定、药剂分析等以药物质量管理为目 的的理化分析；二是对进入人体的药物或代谢物的吸收、分布、代谢等体内过程 的研究，即临床药物分析【。 自1 9 4 0 年青霉素g 被应用于医治细菌感染以来，抗生素在人类对于治疗由细菌 等微生物引发的疾病中发挥着越来越大的作用。但随着抗生素在临床上的广泛应 用，有些人把抗生素当成包治百病的药盲目使用，人们对抗生素的不合理使用也 愈发严重【2 ，3 1 。滥用抗生素导致人体出现抗药性和不良反应，导致人体残留量超标。 目前全球至少有7 0 左右的抗生素被用于畜牧业和水产养殖业，这些抗生素 大多不能被动物完全吸收，少部分经过羟基化、裂解和葡萄糖苷酸化等代谢反应 生成无活性的产物，而很大一部分以母体或代谢物的形式排出动物体外，约占用 药量的4 0 9 0 ，排出体外的抗生素大多随粪便等进入环境尤其是土壤和水环境中 并在其中累积，造成土壤和水环境污染，威胁人类的生命健康【4 ，5 1 。 同时，假冒伪劣抗生素药品也正逐渐成为危害人类身体安全健康的一大隐患。 据统计，无论在发展中国家还是在发达国家，假药总计占到药品市场的1 0 。世 界卫生组织估计在发展中国家，假冒伪劣药品甚至占到药品市场的2 5 。 为了避免滥用药和不当使用假冒伪劣抗生素药品，对抗生素的检测越来越受 到人们的重视，成为药物检测研究领域的一个重要热点，本课题就是为了寻求抗 生素快速、简便、灵敏的检测方法。 河南大学分期_ 一七学专业2 0 0 7 级硕士掌位论文张蕾 第一章绪论 第一节加替沙星检测方法研究进展 加替沙星是第四代喹诺酮类药物，由日本杏林制药株式会社研制开发，1 9 9 9 年1 2 月其口服和静注制剂首次在美国、墨西哥和波多黎各获得许可并上市。在美 国其商品名为t e q u i n 6 1 。 加替沙星化学结构( 图1 ) 为1 环丙基6 氟1 ，4 二氢8 甲氧基7 ( 3 甲基 1 哌嗪基) - 4 羟基喹啉甲酸，分子式c 1 9 h 2 2 f n 3 0 4 。由于其结构上7 位上的3 甲基哌嗪基能改善对革兰阴性菌的抗菌活性，提高口服吸收率和延长血浆清除半 衰期，而其8 位上甲氧基的引入，不仅增强了对革兰阳性菌及厌氧菌的抗菌作用， 同时也降低了光毒性【7 ，v - 。 q e 嚆 图1 加替沙星化学结构 c h 与其它氟喹诺酮类抗菌药一样，加替沙星通过抑制细菌d n a 复制、转录和 修复所必需的i i 型拓扑异构酶中的d n a 旋转酶和拓扑异构酶，发挥抗菌作用 【9 j 。细菌和人类细胞中均含有i i 型拓扑异构酶，使得氟喹诺酮药物在抑菌的同时 也抑制了人体细胞的正常生长，造成药物在人体内的毒副反应。加替沙星与大多 数氟喹诺酮抗菌药的不同之处在于其对细菌i i 型拓扑异构酶的选择性更高。对大 肠埃希氏菌的d n a 旋转酶的i c 5 0 为o 1 0 9m g l ，对金黄色葡萄球菌的拓扑异构 2 酶的i c 5 0 为1 3 8 m g l 一，而对人类h e l a 细胞的拓扑异构酶i i 的i c s o 则高达 2 6 5 m g l 一，从而表现出杀菌力强、选择性高的特点【l o l 。 加替沙星可用于治疗以下敏感菌株引起的感染：( 1 ) 由肺炎链球菌，流感嗜 血杆菌，副流感嗜血杆菌，卡他莫拉菌，金黄色葡萄球菌引起的急性支气管炎， 慢性支气管炎急性发作。( 2 ) 由肺炎链球菌及流感嗜血杆菌，葡萄球菌，肺炎支 原体、衣原体引起的急性鼻窦炎。( 3 ) 由肺炎链球菌，流感嗜血杆菌，葡萄球菌， 肺炎支原体，衣原体引起的社区获得性肺炎。( 4 ) 由大肠埃希菌，肺炎克氏菌， 奇异变形杆菌引起的尿道感染。( 5 ) 由大肠埃希菌引起的肾盂肾炎。( 6 ) 由淋病 奈瑟菌引起并发性尿道感染及妇女的宫颈感染和急性并发性直肠感染【l l 】。 但是随着喹诺酮类抗菌药广泛应用，耐药菌株日益增加，欧美多见于铜绿假 单胞菌、沙雷氏菌、不动杆菌与m r s a 1 2 】，东南亚诸国处上述细菌外还有大肠埃 希氏菌与痢疾志贺氏菌【1 3 】。我国喹诺酮耐药性发展尤为严重。针对这一现象， w h o 和世界粮农组织、国际动物健康组织共同合作，分别于2 0 0 3 年1 2 月在瑞 士日内瓦、2 0 0 4 年3 月在挪威奥斯陆召开了两次关于人类医学领域之抗生素使用 和细菌耐药性研讨会，呼吁全世界共同遏制抗生素的滥用。 我国药典委在2 0 0 8 年9 月修订了加替沙星的检测方法为高效液相色谱法【1 4 】， 而关于它的分析方法研究报道主要有高效液相色谱法、分光光度法、荧光光度法 盘譬 守0 1 高效液相色谱法 高效液相色谱法( h p l c ) 是2 0 世纪7 0 年代急剧发展起来的一项高效、高 速、高灵敏的分离分析技术。i - i p l c 采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填 充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各 成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由记录仪，积分仪或数据处理系统记录 色谱信号。h p l c 可用来做液固吸附、液液分配、离子交换和凝胶渗透色谱分析， 应用非常广泛【1 5 4 9 。表1 1 列举出了高效液相色谱法在加替沙星分析中的一些具 体应用。 河南大学分析化掌专业2 0 0 7 级硕士掌位论文张蕾 2 分光光度法 分子的价电子在吸收辐射并跃迁到高能级后，产生吸收光谱( 通常称电子光 谱) ，由于其波长范围在光谱的紫外和可见区，所以电子光谱又叫紫外可见光谱。 分光光度法是根据某些药物的官能团或水解还原产物、还原产物与特殊的显色剂 或在特定的条件下发生氧化、磺酸化、酯化、配合等化学反应，产生特定波长的 颜色反应等来进行定性或定量分析。定量分析的依据是郎伯比尔( l a m b e r t b e e r ) 定律： a = i gi o i = c b c 式中a 是吸光度，是摩尔吸光系数，b 是吸光物质的厚度，c 为吸光物质的物质 的量浓度。郎伯比尔定律是分光光度法和比色法的理论基础，该定律不仅适用于 4 可见光，也可适用于红外光和紫外光；不仅适用于均匀非散射液体，也适用于固 体和气体。分光光度法仪器简单，操作方便，在药物分析中已经得到普遍应用侈9 - 9 0 。 加替沙星在紫外区有吸收，据此可建立检测加替沙星的紫外分光光度法，或 者利用加替沙星与其它物质作用显色，建立相应的分光光度法。表1 2 列举出了 紫外可见分光光法在加替沙星分析中的一些具体应用。 表1 2 紫外可见分光光度法在加替沙星分析中的应用 3 荧光光度法 荧光是光致发光的结果，光致发光就是当特定波长的光子( 单色激发光) 被 所照射的分子吸收后，分子的电子能级发生跃迁，也就产生了分子的吸收光谱( 紫 外、可见和红外) ，但是处于激发态的分子是不稳定的，在适当的条件下，这部分 被吸收的能量又以辐射的形式( 荧光) 释放出去而分子重新回到基态。荧光定量 分析是基于一定条件下荧光强度与物质的浓度在定范围内呈线性关系。荧光光 度法仪器价格低廉，操作方便，分析速度快，灵敏度高，广泛应用于多种物质的 河南大掌分析化掌专业2 0 0 7 级硕士掌位论文张蕾 定量分析9 8 。1 2 3 1 。表1 3 列举出了荧光光度法在加替沙星分析中的一些具体应用。 表1 3 荧光光度法在加替沙星分析中的应用 4 其它方法 对于加替沙星的检测，除了以上方法之外，还有循环伏安法、线性扫描伏安 法【1 3 们，近红外透射光谱法【1 3 1 1 ，反相离子对色谱法【1 3 2 1 ，铽敏化化学发光法【1 3 3 1 ， 高效毛细管电泳法【1 3 4 】等。 目前，国家的标准方法是高效液相色谱法，灵敏度高、分离效率高、准确度 高，但仪器较为昂贵，且需要有机溶剂，对环境造成一定程度的污染。因此开发 检测成本低、分析速度快且不造成环境污染的加替沙星检测方法是一个很有意义 的课题。 6 第二节磺胺嘧啶检测方法研究进展 磺胺类药物指具有对氨基苯磺酞胺结构的类药物的总称，用于预防和治疗 细菌感染疾病的化学治疗药物。磺胺类药物能抑制革兰氏阳性菌及一些阴性菌。 对其高度敏感的细菌有：链球菌、肺炎球菌、沙门氏菌、化脓棒状杆菌、大肠杆 菌。对葡萄球菌、肺炎杆菌、巴氏杆菌、炭疽杆菌、志贺氏杆菌、亚利桑那菌等 有抑制作用，对危害家禽的某些原虫也有作用。自1 9 3 6 年英国学者c o l e b r o o k 等 证明了百浪多息中的有效抗菌成分是对位氨苯磺胺以来，衍生出一系列化合物， 统称为磺胺药。 磺胺类药物( s u l p h o n a m i d e s ，s a s ) 有共同的对氨基苯磺酰胺母核结构，磺酰 胺基团上的氮为n 1 ，芳香氨基上的氮是n 4 ，在n 1 端被不同的r 基取代。磺胺 类药物一般为白色或淡黄色结晶粉末，遇强光颜色逐渐变深，易变质，除磺胺醋 酞外多数难溶于水，但其钠盐均易溶于水，水溶液呈强碱性磺胺类药物属于广谱 抗菌药，血液中最低有效浓度为0 0 5m g m l ，严重感染时需0 1 0 1 5m g m l ， 对大多数由革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌引起的疾病均有良好的防治效果，对某 些衣原体和某些原生动物也有抑制作用。磺胺类药物是通过干扰敏感菌的叶酸代 谢而抑制其生长繁殖的。对磺胺药物敏感的细菌在生长繁殖过程中，不能直接从 生长环境中利用外源叶酸，而是利用对氮基苯甲酸、喋啶和谷氨酸，在二氢叶酸 合成酶的催化下合成二氢叶酸，再经二氢叶酸还原酶还原为四氢叶酸。四氢叶酸 是一碳基团转移酶的辅酶，参与嘌呤、嘧啶、氨基酸的合成。磺胺类药物的化学 结构与p a b a 的结构极为相似，能与p a b a 竞争二氢叶酸合成酶，抑制二氢叶酸 的合成，或者形成以磺胺替代p a b a 的伪叶酸，最终使核酸合成受阻，结果细菌 生长繁殖被阻断【1 3 5 1 。 磺胺类药物在体内能够被迅速吸收，作用时间和代谢时间较长，通过任何途 径摄入的磺胺类药物都有可能在体内蓄积，由于磺胺类药物存在严重的副作用， 人体中长期存在磺胺类药物会导致许多细菌对磺胺类药物产生耐药性，且有潜在 7 河南大学分帮h 七掌专业2 0 0 7 级硕士掌位论文张蕾 的致癌性，因此磺胺类药物残留问题日益受到国际社会的重视【1 3 6 1 。 目前，磺胺类药物在畜牧生产中的应用十分广泛，在降低动物发病率、死亡 率和改善水产动物品质方面的作用非常显著。磺胺类药物经各种给药途径进入动 物体内后，可转移到肉、蛋和乳等动物性食品中，如果使用不合理很容易在动物 组织中造成磺胺类药物残斟1 3 7 - 1 3 9 1 。 磺胺嘧啶( s u l f m i a z i n e ，s d ) 是常见的磺胺类药物，结构式见图2 。它对大 多数革兰氏阳性菌和阴性菌均有抑制作用，对脑膜炎双球菌、肺炎链球菌、淋球 菌、溶血性链球菌的抑制作用较强，能通过血脑屏障渗入脑脊液，在临床治疗方 面占据着十分重要的地位。 n i t 2 图2 磺胺嘧啶结构式 我国药典中规定了磺胺嘧啶的检测方法为永停滴定法【1 4 0 】，该方法准确度高， 但灵敏度较低。目前，对磺胺嘧啶检测方法的研究主要有高效液相色谱法、紫外 可见分光光度法、荧光法、电化学法、流动注射化学发光法等。 1 高效液相色谱法 刘恒等【1 4 1 1 采用高效液相色谱法测定了复方磺胺嘧啶片的含量。同时武晋孝等 1 4 2 1 也建立了高效液相色谱法测定复方磺胺嘧啶各组分含量的方法。用o d s ( 十 六烷基键合硅胶) 为填充剂，水一乙腈。三乙胺( 3 0 0 ：1 5 0 ：2 0 ，用磷酸调p h 值为3 0 ) 为流动相。该方法分离效果好，准确可靠，适用该产品质量控制。黄滔敏等【1 4 3 】 建立了一种同时测定磺胺嘧啶麻黄碱滴鼻液中磺胺嘧啶和盐酸麻黄碱含量的方 8 n 、nn弋n hn0 法。测得样品中磺胺嘧啶含量在9 0 1 1 0 之间。刘宏英【】建立了测定联磺甲氧 苄啶片中磺胺嘧啶的高效液相色谱法。该法操作简便、快速，测定结果准确。 黎月玲等【1 4 5 】建立了测定磺胺嘧啶银凝胶中磺胺嘧啶银及其有关物质的方法。 采用n o v a - p a k c l 8 色谱柱( 5 0 r n m x 3 0 0 m m ，4 p r o ) ；柱温：3 0 c ；以o 1 磷酸溶液 乙腈( 9 2 ：8 ) 为流动相，流速1 0m l 面n 一1 ；检测波长2 6 5 n m 。s d a g 与多种降解产 物分离良好。标准曲线的线性范围为1 0 1 0 0 0m g l ，r = 0 9 9 9 5 ；重复性试验r s d 为0 9 3 ( n 6 ) ；平均回收率为1 0 0 3 ( n _ 5 ) ，r s d 为1 1 。该方法简单、快速、 准确地测定磺胺嘧啶银的含量及有关物质，满足磺胺嘧啶银凝胶稳定性要求。吴 洪文等【1 4 6 1 研究了用反相高效液相色谱法测定复方鼻用软膏中磺胺嘧啶含量的方 法。平均回收率为1 0 0 2 士1 5 ，该法可用于本制剂磺胺嘧啶的快速定量分析。伊 文等【1 4 7 】建立了测定鸡蛋中磺胺嘧啶的高效液相色谱法，方法准确，快速。 2 紫外一可见分光光度法 常雪君等【1 4 8 】建立磺胺嘧啶钠注射液含量测定的紫外分光光度法。以o 1 m o l l 。1 n a o h 溶液为溶剂，测定浓度的线性范围为2 - 1 0p , g - m l d ( 产o 9 9 9 9 ) ，平均 回收率为9 9 8 1 0 0 1 ，r s d 小于1 0 1 。本法简单、快速、准确，可用于磺胺 嘧啶钠注射液含量的测定。张从良等【1 4 9 用氢氧化钠溶液作提取液，采用紫外分光 光度法测定了土壤中磺胺嘧啶的含量。与永停滴定法比较，测定结果基本一致。 该方法具有操作简单、测定快速、结果准确等优点。 尚尔宁等【”0 1 建立分光光度法测定磺咳合剂中磺胺嘧啶含量的方法。宋玉芳等 i s l 】以十二烷基硫酸钠( s d s ) 为增敏剂，在2 4 1 n m 波长处测定吸光度，将此方法用 于磺胺嘧啶片剂和注射液的测定，结果与文献报道的荧光法一致。该方法简单、 快速、准确、灵敏。j a n e 妣曲j o h a n n e s s e n a 1 5 2 1 等研究了血浆中磺胺嘧啶的测定 方法，浓度线性范围为0 2 5 0i t g m l ，回收率为9 1 4 2 9 2 7 0 。 3 流动注射化学发光法 陈亚红等【1 5 3 】在盐酸介质中，利用磺胺嘧啶亚硝酸钠q 萘胺的重氮化偶合反 应，建立了流动注射光度法测定磺胺嘧啶的新方法利用控制加权形心单纯形优化 9 河南大掌分析化掌专业2 0 0 7 级硕士掌位论文张蕾 法选择最佳实验条件，测定的线性范围为0 2 - 2 0 烬m l ，检出限为o 0 6 腭m l ， 进样频率为1 3 0 次l l 。该法己用于药物中磺胺嘧啶含量的测定。 裴翠锦等【1 5 4 1 基于在酸性介质下磺胺嘧啶与碱性鲁米诺能产生化学发光，建立 了化学发光微流动注射芯片测定鸡肉中磺胺嘧啶的方法。该芯片上微通道由激光 雕刻机在聚甲基丙烯酸甲酯上雕刻而成，采用精确时间控制进样的方式检测，线 性范围为( 4 0 5 0 0 ) x 1 0 一g m l ，检出限l x l 0 一g m l ，对2 0 x 1 0 g m l 1 磺胺嘧啶 连续1 1 次测定的相对标准偏差r s d 为1 4 。 何云华等【1 5 5 】研究发现可溶性锰( ) 氧化磺胺类药物( 磺胺甲基异嗯唑、磺胺嘧 啶和磺胺脒) 可以产生弱的化学发光，甲醛对这一化学发光反应有较强的增敏作 用，据此建立了一种测定磺胺类药物的流动注射化学发光分析法。 4 电化学法 包晓玉等【1 5 6 1 研究了磺胺嘧啶在多壁碳纳米管修饰电极上的伏安行为，优化了 实验参数( 如介质的p h 值、修饰剂用量、扫描速度、富集电位和时间等) ，在此基 础上建立了一种直接测定磺胺嘧啶的电化学分析方法。氧化峰电流与磺胺嘧啶的 浓度在1 0 x 1 0 击- 1 2 x 1 0 4 m 0 1 l 1 范围内呈线性关系，检测限为5 x 1 0 m o l l 。 王桂芳等【1 5 7 】建立一种用毛细管区带电泳法测定复方磺胺嘧啶片中磺胺嘧啶 和甲氧苄啶含量的方法。用2 5m m o l l 。硼砂缓冲液来分离，以氯霉素为内标， 2 1 4 m n 为测定波长。样品中二组份完全分离且呈良好线性关系，其模拟样品回收 率分别为1 0 0 3 9 和1 0 0 7 7 ，r s d 分别为1 0 3 和0 8 1 ( n _ 5 ) 。方法简便、准 确。 唐祝兴等【1 5 8 1 采用毛细管电泳电化学检测法( c e e d ) 同时测定了滴鼻液中盐 酸麻黄碱和磺胺嘧啶的含量。在最佳试验条件下，工作电极为直径3 0 0 1 m a 的碳圆 盘电极，检测电位为0 9 5 v ( v s s c e ) ，缓冲液为5 0m m o l l 以硼砂一硼酸溶液( p h 8 o ) ， 分离电压为1 7 k v ，上述两组分在7 m i n 内即可实现分离。盐酸麻黄碱和磺胺嘧啶 在三个数量级的范围内呈线性，检出限( s n = 3 ) 分别为7 0 x 1 0 。5g l 。1 和3 0 x 1 0 巧 g l ，回收率在9 7 0 9 8 0 之间。 1 0 张正奇等【1 5 9 】采用循环伏安、脉冲极谱、计时库伦及计时电化学测试技术研究 了磺胺嘧啶的电分析化学特性。在p h 2 0 缓冲溶液中，磺胺嘧啶于0 6 6 v 处产生 一灵敏的示波极谱波，利用此波可测定微量磺胺嘧啶，检测下限为2 4 x 1 0 t o o l l 一。 5 其它方法 刘仙庄等【1 6 0 1 采用薄层扫描仪，以紫外反射吸收方式灵敏快速地测定了增效联 磺片中磺胺嘧啶的含量。波长2 7 0 n m ，散射参数为3 ，薄层厚度0 3 r a m ，展开剂 为氯仿：乙醇：庚烷( 1 ：1 ：1 ) 。平均回收率为9 8 0 1 ，检出限为o 0 5 肛g l 一。 汪媛等【1 6 1 】报告了应用表面增强技术将薄层色谱与f t - r a m a n 光谱联用获得磺 胺嘧啶和磺胺二甲基嘧啶光谱新方法的研究，研究表明：在薄层色谱原位3 9 9 样 品的f t - n i r s e r s 谱与固体r a r n a n 的光谱主要特征谱带频率基本一致，比银溶 胶一分子体系有更好的表面增强效果，灵敏度高并可靠地反映了分子的精细结构 信息。 郭喜红等【16 2 】采用1t o o l l 1 的h 2 s 0 4 作溶剂，建立了磺胺嘧啶银含量的一阶 导数光谱法。此法取样量小，测定准确、简便、快捷。用此法对样品进行含量测 定，并用重氮化法进行比较，其结果无显著性差异。王卫平等【2 5 】采用永停滴定法 建立了大胺甘草合剂的含量测定方法。方法的平均回收率为1 0 0 o ，r s d 为 0 2 6 。 王喜亮等1 1 6 3 1 建立了动物源性食品中磺胺嘧啶残留的免疫层析快速测定方法。 用胶体金标记磺胺嘧啶单克隆抗体作为显色剂，磺胺嘧啶竞争物包被于硝酸纤维 素层析膜上作为捕获试剂，采用竞争反应模式制成胶体金免疫层析试纸。该免疫 层析试纸可以在1 5 m i n 内完成对磺胺嘧啶残留的半定量检测。读条系统判定灵敏 度为5n g m l ，肉眼判定检测限灵敏度为1 0n g m l ，与其它磺胺类药物无交叉 反应。该方法在不同动物源性食品( 鸡肉、鸡蛋、鸡肝、猪肉、猪肝、牛奶、蜂蜜) 中添加磺胺嘧啶的回收率在6 8 1 1 1 8 8 范围内。动物试验样品检测结果表明， 该方法与e l i s a 及h p l c 具有好的符合率。有良好的开发应用前景。 刘百红等【1 6 4 】采用重氮化偶联法将磺胺嘧啶( s d ) 与人血清白蛋白( h s a ) 相连 河南大掌分析1 七掌专业2 0 0 7 级硕士掌位论文张蕾 制备了免疫抗原s d h s a ，与卵清白蛋白( o v a ) 相连制备了包被抗原s d o v a ，用 过碘酸钠法将s d o v a 与辣根过氧化物酶( h r p ) 连接制各了酶标抗原 ( s d o v a h r p l 。用s d h s a 免疫b a l b 恐小鼠，经融合、筛选和克隆化制备了 单克隆抗体，利用单抗建立了直接竞争e l i s a 方法。该方法具有好的特异性，i c 5 0 为4 1 7n g m l ，在猪肉、鸡肉、鸡肝、鸡蛋、牛奶中的检测限分别为2 0 、2 0 、 2 0 、5 、5 嵋k g 一。在2 0 峙k g 1 和1 0 0p g k g 。水平猪肉、鸡肉、鸡肝、牛奶、鸡 蛋样品中添加，回收率为8 2 7 8 1 0 4 6 。 陆坤宏等【1 6 5 】建立了示波滴定法测定磺胺嘧啶银的新方法，样品用硝酸溶解后 加入四苯硼钠t p b ) 沉淀银，过量的t p b 在p h i l 2 的n a o h 姚c 介质中，用 四乙基氯化铵标准溶液返滴定，以示波滴定荧光屏上n a - t p b 的示波图切口突然 消失指示滴定终点。 目前对磺胺嘧啶的检测方法，所用仪器和试剂大都成本较高，不能得到普及。 因此开发检测成本低、分析速度快且灵敏度高的磺胺嘧啶检测方法是一个很有意 义的课题。 1 2 第一章绪论 课题的提出 综上所述，在药物分析测定中，光谱分析法具有设备简单、操作方便、灵敏 度高、准确度好、适用范围广等许多与其它方法无法比拟的优越性。因此，本文 以光谱分析作为检测手段，在查阅大量文献的基础上，通过系列实验，建立了测 定抗生素加替沙星、磺胺嘧啶含量的新方法。论文的主要内容如下： 1 利用刚果红、加替沙星与钙黄绿素的竞争反应，建立了荧光光度法测定加 替沙星的方法。 2 利用紫外光谱法和同原射线计量分析法，建立了同时测定加替沙星和左氧 氟沙星的方法。 3 研究了在两种酸度条件下茜素红础3 + 磺胺嘧啶体系，建立了测定磺胺嘧啶 的方法。 4 利用二甲酚橙与磺胺嘧啶的显色和两种表面活性剂的增敏作用，建立了测 定磺胺嘧啶的方法。 河南大学分析化学专业2 0 0 7 级硕士掌位论文张蕾 参考文献 【1 】柴逸峰，吴玉田，李翔药物分析( i i ) 【j 】分析实验室，2 0 0 4 ，2 3 ( 7 ) ：7 2 9 2 【2 】权建昌抗生素不合理应用分析 j 】中国社区医师，2 0 0 6 ，8 ( 1 4 3 ) ：4 【3 】周国民认识抗生素叨中国保健影响，2 0 0 4 ，8 ：2 2 - 2 3 【4 】刘小云，舒为群水中抗生素污染现状及检测技术研究进展阴中国卫生检验杂 志，2 0 0 5 ，1 5 ：1 0 11 1 0 1 4 5 】李兆君，姚志鹏，张杰，等兽用抗生素在土壤环境中的行为及其生态毒理效应研究进展 j 】生 态毒理学报，2 0 0 8 。3 ( 1 ) ：1 5 2 0 【6 6 几m o r a la n di vf o r m u l a t i o n so fg a t i f o x a c i nc l e a r e df o ru s j m a r k e t a mjh e a l t h s y s t p h a r m ，2 0 0 0 ，5 7 ：2 0 4 【7 】h o s a k am ，k i n o s h i t as , t o y a m aa ，e ta 1 a n t i b a c t e r i a lp r o p e r t i e so fa m 1 15 5 ，an e w8 - m e t h o x y q u i n o l o n e j ja m i m i c r o bc h e m t h e r , 1 9 9 5 3 6 ：2 9 3 【8 】t o m i o k ah ，s a i t oh ，s a t ok c o m p a r a t i v ea n t i m yc o b a c t e r i a la c t i v i t i e so ft h en e w l ys y n t h e s i z e d q u i n o l o n ea m l1 5 5 【j s p a r f l o x a c i na n do f l o x a c i n a n t i m i c r o ba g e n t sc h e m o t h e r , 1 9 9 3 3 7 ： 1 2 5 9 9 】潘志平氟喹诺酮类抗菌剂g a t i f l o x a c i n j 苍i 学进展，2 0 0 0 ，2 4 ：5 1 【1 0 】t a k e im ，f u k u d ah ，y a s u et , e ta 1 i n h i b i t o r ya c t i v i t i e so fg a t i f l o x a c i n ( a m 一11 5 5 ) ，an e w l y d e v e l o p e df l u o r o q u i n o l o n e ，a g a i n s t b a c t e r i a la n dm a m m a l i a n t y p ei it o p o i s o m e r a s e j a n t i m i c r oa g e n t sc h e m o t h e r , 19 9 8 ，4 2 ：2 6