（基础兽医学专业论文）泰乐菌素阿莫西林联合应用在猪体内的药物动力学研究.pdf

目 j 录 目录 中文摘要i 英文摘要i i i 1 引言1 1 1 阿莫西林应用现状及研究进展1 1 1 1 阿莫西林应用现状1 1 1 2 阿莫西林的理化性质及作用机理1 1 1 3 阿莫西林检测方法研究进展2 1 1 4 阿莫西林的药物动力学研究进展3 1 2 酒石酸泰乐菌素的应用现状及研究进展一4 1 2 1 酒石酸泰乐菌素应用现状一4 1 2 2 酒石酸泰乐菌素理化性质及作用机理4 1 2 3 泰乐菌素检测方法研究进展5 1 2 4 酒石酸泰乐菌素药物动力学研究7 1 3 药物动力学研究的意义、目的、方法及内容7 1 3 1 药物动力学研究的意义一7 1 3 2 药物动力学研究的目的8 1 3 3 药物动力学研究的方法8 1 3 4 药物动力学研究的内容9 1 4 串联质谱技术在现代药物动力学中的应用1 0 1 4 1 串联质谱技术的原理与优势1 0 1 4 2u p l c m s m s 方法在药物动力学中的应用1 0 1 5 研究背景和目的1 1 2 实验材料与方法1 3 2 1 材料1 3 2 1 1 药品与试剂1 3 2 1 2 主要溶剂配制1 3 2 1 3 仪器设备1 4 2 1 4 实验动物1 4 2 2 方法。1 5 2 2 1 口服阿莫西林钠、酒石酸泰乐菌素及其联合应用的药动学研究1 5 2 2 2 血清中阿莫西林钠的超高效液相色谱串联质谱法的确定1 5 2 2 3 分析方法确证1 7 2 2 4 血清中酒石酸泰乐菌素超高效液相色谱串联质谱法的确定1 7 2 2 5 分析方法确证l9 3 实验结果与分析2 0 3 1 阿莫西林检测方法的方法学验证2 0 舢7舢9 哪47删8舢7ii01删y 东北农业大学农学硕士学位论文 3 1 1 质谱分析2 0 3 1 2 方法的专一性2 l 3 1 3 标准曲线和线性范围2 2 3 1 4 方法精密度和准确度2 3 3 1 5 灵敏度的测定2 4 3 2 酒石酸泰乐菌素检测方法的方法学验证2 4 3 2 1 质谱分析2 4 3 2 2 方法的专一性2 5 3 2 3 标准曲线和线性范围2 6 3 2 4 方法精密度和准确度2 7 3 2 5 灵敏度的测定2 8 3 3 口服阿莫西林钠与酒石酸泰乐菌素联合应用的药动学研究2 8 3 3 1 口服阿莫西林钠猪体内血药浓度结果2 8 3 3 2 口服阿莫西林钠猪体内药动学参数3 0 3 4 口服酒石酸泰乐菌素与阿莫西林钠联合应用的药动学研究3 2 3 4 1 口服酒石酸泰乐菌素猪体内血药浓度结果3 2 3 4 2 口服酒石酸泰乐菌素猪体内药动学参数3 4 4 讨论3 6 4 1u p l c m s m s 测定猪血清中阿莫西林钠的分析方法讨论3 6 4 1 1 质谱条件的选择3 6 4 1 2 色谱条件的选择3 6 4 1 3 阿莫西林在血清中的分离与提取3 7 4 2 阿莫西林钠在猪体内药物动力学特征3 8 4 2 1 阿莫西林钠口服给药的药动学特征3 8 4 2 2 酒石酸泰乐菌素邛可莫西林钠合用时口服给药的药动学特征3 8 4 3u p l c m s m s 测定猪血清中酒石酸泰乐菌素的分析方法讨论3 9 4 3 1 质谱条件的选择3 9 4 3 2 色谱条件的选择3 9 4 3 3 酒石酸泰乐菌素在血清中的分离与提取4 0 4 4 酒石酸泰乐菌素在猪体内药物动力学特征4 1 4 4 1 酒石酸泰乐菌素口服给药的药动学特征4 2 4 4 2 酒石酸泰乐菌素阿莫西林钠合用时口服给药的药动学特征4 2 结论4 3 j s 【 谢4 4 参考文献4 5 附录5 2 攻读硕士学位期间发表的学术论文5 2 c o n t e n t s c o n t e n ts c h i n e s ea b s t r a c t 1 e n g l i s ha b s t r a c t i i i 1i n t r o d u c t i o n i 1 1 1c u r r e n ts i t u a t i o na n dp r o g r e s so na m o x i c i l l i n 1 1 1 1c u r r e n ts i t u a t i o no f a m o x i c i l l i n 1 1 1 2p h y s i c a la n dc h e m i c a lp r o p e r t i e so f a m o x i c i l l i n l 1 1 3p r o g r e s so nt h et e s tm e t h o do fa m o x i c i l l i n 2 1 1 4p r o g r e s so nt h ep h a m a c o k i n e t i co fa m o x i c i l l i n 3 1 2c u r r e n ts i t u a t i o na n dp r o g r e s so nt y l o s i n 4 1 2 1c u r r e n ts i t u a t i o no f t y l o s i n 4 1 2 2p h y s i c a la n dc h e m i c a lp r o p e r t i e so f t y l o s i n 4 1 2 3p r o g r e s so nt h et e s tm e t h o do f t y l o s i n 5 1 2 4p r o g r e s so nt h ep h a m a c o k i n e t i co ft y l o s i n 7 1 3t h em e a n i n g 、p u r p o s e 、m e t h o da n dc o n t e n to f p h a r m o k i n e t i c 7 1 3 1t h em e a n i n go f p h a r m o k i n e t i c 7 1 3 2t h e p u r p o s eo f p h a r m o k i n e t i c 8 1 3 31 1 l em e t h o do f p h a r m o l d n e t i c 8 1 3 4t i l ：c o n t e n to f p h a r m o k i n e t i c 9 1 4a p p l i c a t i o no f u p l c m s m si nm o d e r np h a r m a c o k i n e t i c 10 1 4 1p r i n c i p l ea n da p p l i c a t i o no f u p l c - m s m s 10 1 4 2a p p l i c a t i o no f u p l c - m s m si np h a r m a c o k i n e t i c 1 0 1 5i n v e s t i g a t i v eb a c k g r o u n da n dp u r p o s e 11 2e x p e r i m e n t a lm a t e r i a l sa n dm e t h o d s 13 2 1m a t e r i a l s 1 3 2 1 1d r u g sa n dr e a g e n t s 1 3 2 1 2p r e p a r a t i o no f t e s ts o l u t i o n s 1 3 2 1 3e x p e r i m e n t a li n s t r u m e n t s 1 4 2 1 4a n i m a l s 1 4 2 2m e t h o d s 1 5 2 2 1p h a r m a c o k i n e t i cr e s a r c ho f t y l o s i nt a r t r a t e a m o x i c i l l i ns o d i u m - 1 5 2 2 2u p l c m s m so fa m o x i c i l l i ns o d i u mi nt h es a u l n 15 2 2 3i d e n t i f i c a t i o no f a n a l y t i c a lm e t h o d 1 7 2 2 4u p l c m s m so f t y l o s i nt a r t r a t ei nt h es e r u t n 1 7 2 2 5i d e n t i f i c a t i o no f a n a l y t i c a lm e t h o d 1 9 3r e s u l t sa n da n a l y s i s ：! ( ) 3 1v e r i f i a t ed a t ao f u p l c m s m so f a m o x i c i l l i ns o d i u m 2 0 东北农业大学农学硕士学位论文 ：；1 1m a s ss p e c t r o g r a p h i ca n a l y s i s 2 0 ：；1 2m e t h o d o l o g i c a ls p e c i f i c i t y 2 1 3 1 3s t a n d a r dc u r v ea n d1 i n e a rr a n g e 2 2 3 1 4p r e c i s i o n sa n d a c c u r a c y 2 3 ：；1 5s e n s i t i v i t y ：! z i 3 2v e r i f i a t ed a t ao f u p l c m s m so f t y l o s i nt a r t r a t e 2 4 3 2 1m a s ss p e c t r o g r a p h i ca n a l y s i s 2 4 ：；2 2m e t h o d o l o g i c a ls p e c i f i c i t y 2 5 3 2 3s t a n d a r dc u r v ea n dl i n e a rr a n g e ：1 6 3 2 4p r e c i s i o n sa n da c c u r a c y 2 7 3 2 5s e n s i t i v i t y 2 8 3 3t h er e s a r c ho f p h a r m a c o k i n e t i co na m o x i c i l l i ns o d i u mb yo f a la d m i n i s t r a t i o n 2 8 3 3 1t h er e s u l to f a m o x i c i l l i ns o d i u mi ns e r u mb yo r a la d m i n i s t r a t i o n 2 8 3 3 2p h a r m a c o k i n e t i cp a r a m e t e r so fa m o x i c i l l i ns o d i u mb yo r a la d m i n i s t r a t i o n 3 0 3 4t h er e s a r c ho f p h a r m a c o k i n e t i co nt y l o s i nt a r t r a t eb yo r a la d m i n i s t r a t i o n 3 2 3 4 1t h er e s u l to ft y l o s i nt a r t r a t ei ns e r u mb yo r a la d m i n i s t r a t i o n 3 2 3 4 2p h a r m a c o k i n e t i cp a r a m e t e r so f t y l o s i nt a r t r a t eb yo r a la d m i n i s t r a t i o n 3 4 4d i s c u s s i o n 3 6 4 1d i s c u s s i o no f a n a l y t i c a lm e t h o do f u p l c m s m so f a m o x i c i l l i ns o d i u m 3 6 4 1 1s e l e c t i o no f m a s ss p e c t r o g r a p h i cc o n d i t i o n 3 6 4 1 2s e l e c t i o no fc h r o m a t o g r a p h i cc o n d i t i o n 3 6 4 1 3s e p a r a t i o na n de x t r a c t i o no fa m o x i c i l l i ns o d i u mi np o r c i n es e r u m 3 7 4 2p h a r m o k i n e t i cf e a t u r eo fa m o x i c i l l i ns o d i u mi np i g 3 8 4 2 1p h a n n o k i n e f i cf e a t u r eo fa m o x i c i l l i ns o d i u mb yo r a la d m i n i s t r a t i o n 3 8 4 2 2p h a r m o k i n e t i cf e a t u r eo f t y l o s i nt a r t r a t e - a m o x i c i l l i ns o d i u m 3 8 4 3d i s c u s s i o no f a n a l y t i c a lm e t h o do f u p l c m s m so f t y l o s i nt a r t r a t e 。3 9 4 3 1s e l e c t i o no f m a s ss p e c t r o g r a p h i cc o n d i t i o n 3 9 4 3 2s e l e c t i o no f c h r o m a t o g r a p h i cc o n d i t i o n 3 9 4 3 3s e p a r a t i o na n de x t r a c t i o no f t y l o s i nt a r t r a t ei np o r c i n es e t u m 4 0 4 4p h a r m o k i n e t i cf e a t u r eo f t y l o s i nt a r t r a t ei np i g 4 1 4 4 1p h a r m o k i n e t i cf e a t u r eo ft y l o s i nt a r t r a t eb yo r a la d m i n i s t r a t i o n 4 2 4 4 2p h a r m o k i n e t i cf e a t u r eo f t y l o s i nt a r t r a t e - a m o x i c i l l i ns o d i u m 一4 2 c o n e l u s i o n 4 3 a c k n o w l e d g e m e n t z 1 4 r e f e r e n c e s 4 5 a p p e n d i x 5 2 a c a d e m i ca r t i c l e sp u b f i s h e dd u r i n gp o s t g r a d u a t e 5 2 独创声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得 ( 逵! 垫遗查基丝盏塞挂别童明笪! 奎拦亘窒2 或其他教育机构的学位或证 书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：褊司- j 日期：五j d 年月j e l 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。 本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以 采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。( 保密的学位论文在解 密后适用本授权书) 学位论文作者签名：钤司i j 日期：劢加年白3 日 签撕 吼拟啤钿“ 摘要 摘要 酒石酸泰乐菌素阿莫西林钠是自行研制的用于防治猪链球菌病的复方药物，为指导其临 床应用，进行了药物动力学研究。本文分别建立了测定猪血清中酒石酸泰乐菌素和阿莫西林 钠的超高效液相色谱串联质谱法，应用此法分别测定酒石酸泰乐菌素、阿莫西林钠和复方酒 石酸泰乐菌素阿莫西林钠的血药浓度，根据血药浓度时间计算药动学参数。对所得的药动 学参数进行统计学分析，对单独用药和联合用药的药动学参数进行比较，为指导临床应用提 供理论依据。 本文建立了高效、灵敏的超高液相一串联质谱法测定猪血清中阿莫西林钠的浓度，血清样 品经固相萃取后，以乙腈0 2 乙酸( 5 ：9 5 ，v ) 作为流动相，进行梯度洗脱，采用a c q u i t y u p l c t mb e hc 1 8 柱分离，通过电喷雾离子化串联质谱，以选择多反应监测方式进行离子监 测。用于定量分析的离子反应为质荷比m z 3 6 6 3 3 4 9 2 ；血清内源性物质及其他物质均不干 扰阿莫西林的样品峰。阿莫西林的线性范围为0 , 0 6 1 t g m l , - 一l p g m l ，标准曲线相关系数( r 2 ) 为0 9 9 7 5 ；猪血清中样品分析精密度均小于1 0 ：在0 0 6 1 a g m l 、0 2 5 p , g m l 和l i _ t g m l 三个 浓度下的血清样品平均回收率分别为6 8 3 、7 2 0 和7 5 1 ；定量浓度下限为0 , 0 3 1 t g m l 。 说明该方法符合生物制品的分析要求，可以用于阿莫西林钠的药物动力学研究。 1 0 头健康猪分别口服阿莫西林钠( 1 5 m g k g ) 和复方酒石酸泰乐菌素( 1 0 m g k g ) - 阿莫 西林钠( 1 5 m g k g ) 后主要药动学参数分别为c 。为( o 8 8 ：主- 0 0 1 ) 和( 2 1 3 4 - 0 4 4 ) p , g m l ， t d 为( 0 9 2 士0 0 6 ) 和( 0 9 5 士0 1 6 ) h ，消除半衰期t i r 2 b 为( 0 7 8 士0 0 6 ) 和( 1 3 1 士0 9 6 ) h ，a u c 为( 2 2 4 士0 1 1 ) 和( 5 8 1 ：1 ：2 1 4 ) ( p g m l ) 妯。对上述药动学参数进行统计分析，说明单药阿 莫西林钠与酒石酸泰乐菌素合用后酒石酸泰乐菌素对阿莫西林钠药代动力学参数有较大影 响，表现为：酒石酸泰乐菌素增强了阿莫西林的吸收程度，但减慢了阿莫西林在体内的吸收 速度；维持了阿莫西林向组织的转运，保持了较长时间的较高血药浓度；减慢了阿莫西林在 猪体内的消除速度，延长了阿莫西林在体内的作用时间。 本文建立了高效、灵敏的超高效液相一串联质谱法测定猪血清中酒石酸泰乐菌素的浓度， 用于猪口服酒石酸泰乐菌素后的体内药物动力学研究。血清样品经固相萃取后，以乙腈0 2 乙酸( 3 0 ：7 0 ，v ) 作为流动相，进行梯度洗脱，采用a c q u i t yu p l c l mb e hc 1 8 柱分离， 通过电喷雾离子化串联质谱，以选择反应监测方式进行离子监测。用于定量分析的离子反应 为m z 9 1 6 9 7 7 2 4 。血清内源性物质及其他物质均不干扰阿莫西林的样品峰。阿莫西林的线 性范围为o 5n g m l 5 0 n g m l ，标准曲线相关系数( r 2 ) 为0 9 9 9 4 ；猪血清中样品分析精密 度均小于1 5 ；在0 5 n g m l 、5 n g m l 和5 0 n g m l 三个浓度下的血清样品平均回收率分别为 7 4 o 、7 8 4 和8 3 3 ；定量浓度下限为0 5 n g m l 。说明该方法符合生物制品的分析要求， 可以用于酒石酸泰乐菌素的药物动力学研究。 1 0 头健康猪分别口服酒石酸泰乐菌素( 1 0 m g k g ) 和复方酒石酸泰乐菌素( 1 0 m g k g ) - 阿莫西林钠( 1 5 m g k g ) 后主要药动学参数分别为c 一为( 2 7 4 1 士1 0 1 3 ) n g m l 、( 4 2 4 9 士2 0 6 5 ) n g m l 和( 3 3 5 6 土1 3 8 4 ) n g m l 、( 2 7 4 2 - - i ：1 3 3 7 ) n g m l ，t d 为( 0 3 7 * 0 0 9 ) h 、( 4 5 5 士0 9 3 ) h 和( 0 3 3 土0 0 7 ) h 、( 4 8 7 士1 8 7 ) h ，消除半衰期t l ，2 为( 4 0 8 士0 6 7 ) h 、( 3 6 5 士0 7 4 ) h ，a u c o 8 为 ( 1 5 6 2 7 士3 5 ，6 3 ) ( u g m l ) 1 1 、( 9 4 5 0 士2 3 9 5 ) ( u g m l ) 幸h 。对上述药动学参数进行统计分析，说 东北农业大学农学硕b 学位论文 明阿莫西林钠不影响酒石酸泰乐菌素在猪体内药物动力学参数影响。 关键词超高效液相色谱串联质谱法；阿莫西林钠：酒石酸泰乐菌素；酒石酸泰乐菌素阿莫 西林钠联合应用；药物动力学；猪 a b s t r a c t s t u d yo n t h ep h a r m a c o k i n e t i c so ft y l o s i n a m o x i c i l l i n c o m p o u n d m e d i c i n ei np i g a b s t r a c t t y l o s i nt a r t r a t e a m o x i c i l l i ns o d i m nc o m p o u n dm e d i c i n eh a sb e e nd e v e l o p e db yo u r s e l v e sf o r p r e v e n t i o na n dt r e a t m a n to fs t r e p t o c o c c u ss u i si n f e c t i o n s i no r d e rt og u i d e i t sc l i n i c a la p p l i c a t i o n ， i t i sn e c e s s a r yt os t u d yt h ep h a n n a c o k i n e t i c au l t r ap e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h yc o u p l e d w i t he l e c t r o s p r a yi o n i z a t i o nt a n d e mm a s ss p e c t r o m e t r y ( u p l c i v i s m s ) f o rd e t e r m i n a t i o no f t y l o s i nt a r t r a t ea n da m o x i c i l l i ns o d i u mi ns w i n es g r u m sh a sb e e nd e v e l o p e d t h em e t h o dw a s u s e d t ot h ed e t e c tt y l o s i nt a r t r a t e ，a m o x i c i l l i ns o d i u ma n dt y l o s i nt a r t r a t e - a m o x i c i l l i ns o d i u m t h e p h a r m a c o k i n e t i cp a r a m e t e r sw e r eo b t a i n e db yc o n c e n t r a t i o n - t i m ew e r ea n a l y z e ds t a t i s t i c a l l y c o m p a r i s o no fs i n g l ea n dc o m b i n a t i o no fp h a r m a c o k i n e t i cp a r a m e t e r s ，w ep r o v i d eat h e o r e t i c a l b a s i sf o rc l i n i c a la p p l i c a t i o n as e n s i t i v ea n ds e l e c t i v eu l t r ap e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y - t a n d e mm a s s ( u p l c m s m s ) m e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fa m o x i c i l l i ni ns w i n es e l b mw a sd e v e l o p e d a f t e ras i m p l e s o l i d - p h a s ee x t r a c t i o n ，t h ep o s t - t r e a t m e n ts a m p l e sw e r ea n a l y z e do naa c q u i t y u p l c1 ”b e h c 1 8c o l u m ni n t e r f a c e dw t hat r i p l eq u a d m p o l et a n d e mm a s ss p e c t r o m e t e r p o s i t i v ee l e c t r o s p r a y i o n i z a t i o nw a se m p l o y e da st h ei o n i z a t i o ns o u r c e t h em o b i l ep h a s ec o n s i s t e do fa c e t o n i t r i l e - o 2 a c e t i ca c i d ( 5 ：9 5 ，v v ) m u l t i p l er e a c t i o nm o n i t o r i n g ( m r m ) u s i n gt h ep r e c u r s o rp r o d u c ti o ne o m b i f m a t i o no fm z 3 6 6 3 - 3 4 9 2w a su s e dt oq u a n t i f ya m o x i c i l l i n t h el i n e a rc a l i b r a t i o nc u r v e s o b t a i n e di n t h ec o n c e n t r a t i o nr a n g eo f0 0 6 p 咖l 1 l g m lf o ra m o x i c i l l i n t h er e c o v e r i e so f a m o x i c i l l i ns o d i u ma tt h ea d d e dc o n c e n t r a t i o nl e v e l so f0 0 6 9 9 m l ，o 2 5 9 9 m l ，ll 沮g m lr a n g e d f r o m6 8 3 7 5 1 w i t h i n d a yc va n di n t e r d a yc va r e 1 0 t h em e t h o dh a sal o w e rl i m i to f q u a n t i f i c a t i o n ( l l o q ) o fo 0 3 r t g m lf o ra m o x i c i l l i n 1 1 1 er e s u l ts h o w s t h a tt h em e t h o di sc o n s i s t e n t w i t ht h ea n a l y s i so fb i o l o g i c a lp r o d u c t sa n dc a l lb eu s e dt os t u d yt h ep h a r m a c o k i n e t i c so f a m o x i c i l l i ns o d i u m n em e t h o dw a sa p p l i c a t i o nt os t u d yt h ep h a r m a c o k i n e t i c so f10h e a l t h yb i g sa f t e ro r a l a d m i n i s t r a t i o no fa m o x i c i l l i ns o d i u m ( 15 m g k g ) a n da m o x i c i l l i ns o d i u m ( 15 m g k g ) 一t y l o s i nt a r t r a t e ( 1 0 m g k g ) m e a np e a ks e r u ml e v e l s ( c m x ) w e r e ( o 8 8 4 - 0 0 1 ) a n d ( 2 1 3 4 - 0 4 4 ) r t g m l t pw e r e ( o 9 2 士0 0 6 ) a n d ( 0 9 5 + 0 16 ) h t h em e a nt 1 2 bw e r e ( o 7 8 4 - 0 0 6 ) a n d ( 1 31 + 0 9 6 ) h ，a u cw e r e c a l c u l a t e d t o b e ( 2 2 4 士o 1 1 ) a n d ( 5 8 1 4 - 2 1 4 ) ( r t m l ) 幸h as e n s i t i v ea n ds e l e c t i v eu l t r ap e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y - t a n d e mm a s s ( u p l c m s m s ) m e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no ft y l o s i nt a r t r a t ei ns w i n es e r u mw a sd e v e l o p e d a f t e ra s i m p l es o l i d - p h a s ee x t r a c t i o n ，t h ep o s t t r e a t m e n ts a m p l e s w e r ea n a l y z e do naa c q u i t y i i i 东北农业大学农学硕十学位论文 u p l c t m b e hct sc o l u m ni n t e r f a c e dw t hat r i p l eq u a d r u p o l et a n d e mm a s ss p e c t r o m e t e r p o s i t i v e e l e c t r o s p r a yi o n i z a t i o nw a se m p l o y e da st h ei o n i z a t i o ns o u r c e t h em o b i l ep h a s ec o n s i s t e do f a c e t o n i t r i l e 一0 2 a c e t i ca c i d ( 3 0 ：7 0 ，、，v ) m u l t i p l er e a c t i o nm o n i t o r i n g ( m r m ) u s i n gt h e