（法医学专业论文）人死后玻璃体液化学成分含量改变与死亡时间关系的研究.pdf

华西基础医学与法医学院2 0 0 2 级 法医学博士论文 p m i e t s d v h g l u c r e a n a k c 1 c a m g i d h p l c s i d s c e c i a h x h a p o s t m o r t e mi n t e r v a l e s t i m a t i o no ft h et i m es i n c ed e a t h v it r e o u sh u m o u r g l u c o s e c r e a t i n i n e s o d i u m p o t a s s i u m c h l o r i n e c a l c i u m m a g n e s i u m i n o r g a n i cp h o s p h o r u s u s h i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y s u d d e nin f a n td e a t hs y n d r o m e c a p i l l a r ye 1 e c t r o p h o r e s i s c a p i l l a r yi o na n a l y s e h y p o x a n t h i n e h y a l o p l a s ma c i d 死后间隔时间 死亡时间推断 玻璃体液 葡萄糖 肌酐 钠 钾 氯 钙 镁 无机磷 高效液相色谱仪 婴儿猝死综合症 毛细管电泳 毛细管离子分析 次黄嘌呤 透明质酸 华西基础医学t 掂 医学院2 0 0 2 级法医学博士论文 刖舀 】人体玻璃体液化学成分参考值的测定 测定尸体体液中化学成分的含量，用以推测死亡时间、死亡原因和 生前所患疾病，为法医病理学开辟了一个新的研究领域“。1 。随着检验技 术的高速发展，测定尸体体液的化学成分成为法医病理学的一个热点。 玻璃体是一种透明的结缔组织，填充于玻璃体腔，玻璃体液充满眼球后 部4 5 ，容积为4 6 m l 。玻璃体液的组成约9 9 为水，约1 为蛋白质，无 机盐、糖、乳酸、尿素、维生素c 、氨基酸、脂质等，至今仅对其中少 部分进行过研究“1 3 。由于玻璃体在眼球中的特殊位置，尸体腐败和外界 污染以及外界环境对其影响甚小，因此，玻璃体液化学成分的测定结果 最为可靠。研究玻璃体液的化学成分，需要人体眼球玻璃体液中化学成分 的参考值，但由于眼睛对于人的重要作用，无法抽取到正常人眼球玻璃 体液，所以至今尚无人体玻璃体液的化学成分的参考值。随着脑死亡这 一新概念为医学界和法律界逐步认可以及器官移植的开展，使人体玻璃 体液参考值的测定在理论上具有可行性：同时，随着高效、微量自动生 化仪器的出现，使玻璃体液的测定在技术上有了保障。本课题收集了有 健康资料的颅脑损伤死亡后极短时间内人眼玻璃体液，用自动生化分析 仪进行测定其化学成分含量。 2 死亡时间推断的法医学意义 死亡时间( t h et i m es i n c ed e a t h ) 在法医学上是指死后时间或死后 间隔时间( p o s t m o r t e mi n t e r v a l ，p m i ) ，死亡时间的推断( t h ee s t i m a t i o n o ft h et i m es i n c ed e a t h ，e t s d ) 是推断或估计死后间隔时间，又称死 后经过时间的推测，是法医学尸体检验要求解决的重要问题之一。早在三 百多年前，被誉为欧洲法医学之父的意大利医生p a u lz a c c h i a ( 1 5 8 4 1 6 5 9 ) 已明确指出：死亡时间的推断，是法医学鉴定中首要解决的问题。我国公 华西基础医学。法医学院2 0 0 2 级法医学 博士论文 安部曾于1 9 8 5 年组织8 省、市协作，进行从尸体赢肠温度变化推测死亡 嚣瘸豹磺究，说鹱照亡聪趣豹雄颧，在法医学要缀受重褪“3 。 由于犯罪活动与死亡时间有着必然的联系，在许多情况下，死亡时间 标志着案律发生静辩闯，荠与有关懿久帮事紧密穗笑。霾麓，推鼗繇亡薅 间对确定案发时间，确定和排除犯罪嫌疑人，对划定侦察范围，对判定犯 罪嫌疑入是荫在犯罪现场、霄无作索对问等脊着菲常重要的意义。孺亡时 间的推断在撼事案件中，对保险和遗产的继承等方磷也有着麓要意义。法 医学者准确地推断死亡时间，对案件的侦破和审理其有重要的价值。 3 爨翦死亡慰闯的推断存焱熬闽题 最然至今也未能做到完企精确地推断或估计死亡时间，但经过历代法 医久戆努力，人翻跫越寒越接逶这个器振。攀期豹尸体现象霹淤爰予早期 死亡时间的推断，假是，时至今日，这一问题尚未得到圆满的解决，仍然 需要迸一多瓣赞究。警前，法医学者辩死亡辩淹豹磷究主要裔；掇撼尸冷 推断毵亡时间“1 ；根据超生反应( s u p r a v i t a lr e a c t i o n ) 推断死亡时间 “”；根据死蔚死者胃肠内容物的消化情况维新死亡时间“”；穰据d n a 降解 程度推断死亡对闯“3 “”；根据酶组织化学和级织学交化推断死亡对阍；根 据尸体上昆呶发育情况推断死亡时间“”“。 缀据琵戆尸薅滋震下降黪变化栽律来推鞭兹亡辩瓣，是法医学实鼗中 常用的一种古老而传统的方法，具有重要的现实意义。r a i n yh 在1 8 6 8 年 提爨蕊瑟尸冷攥律符合牟顿冷去| 】定簿( n e w t o n sl a wo fc o o li n g ) 豹理 论，并制定出计算死亡时间的公式。影响尸冷的因素主要有环境温度和尸 体斡状况。由于尸冷瀚律静彩响因素穰多，如环境溢度、湿蕊、空气流动 情况、死者农着情况等。因此用尸冷雄断死亡时间缀难完全定量，只能与 实际死亡时间近似。 令偻嚣亡嚣，人体组织、鳃跑和一些器蠢溻戆生存一段时阗，在越期 华西基础医学与法医学院2 0 0 2 级 法医学博士论文 间，这些组织或器官对物理、化学刺激仍可以产生反应，称之为超生反应。 法医学者们根据刺激强度和收缩强度的分级判断死亡时间，误差较大。由 于各学者在研究工作中所使用的电刺激方式及肌肉收缩程度的分级标准 各不相同，难以对比应用。同时，电流阈值测量和肌电电图研究需要专门 的仪器，多数法医学研究机构不具各，而且也难以在现场实施，因此在实 践应用方面受到限制。根据死后死者胃内容物的消化情况虽然可以用于推 断死亡时间，但由于食物在胃肠道的消化和排空受许多因素的影响，包括 食品的性质、形态、胃肠功能状态和健康状况、精神状况，药物以及饮酒 等方面的影响，因此，根据胃肠内容物消化程度推断死亡时间，结果有很 大的差异，只能大致判断死亡时间，应用价值不大。 攫据d n a 降解纛凄接鼗惩亡嚣耀熬方法主要毒鼹耱，一耱是渡式缨戆 仪检测技术；另一种是d n a 组化定墩分析技术。各学者通过研究建立各自 霾翔方程，稳由于采蔫匏方法鞍靛器不同，瓣盈主繁是蔽定瞧为主，是糍 估计大概的时间段，大多处于科研阶段，实际应用意义不大。根据酶组织 化学和缀绞举变亿掭断死亡时闻，有劲予狂略估诤弼亡对阍，只艚俸为推 断死亡时间嬲参考，常常受捻验者的经验影响，在实践中很少应用。根据 尸体上昆虫发育情况推断死亡时间，需要具肖昆虫学专业知识和实黢室， 也只能大致臻甄死亡瓣阙，疆内臻究较少，赁少应用于法医学实践。 4 根据尸体体液中化学成分的变化推断死亡时间 尸体耗攀( p o s t m o r t e r ic h e m i s t r y ) 是磺突瑟瑟尸薅鑫滚、弦鼗液、 玻璃体液以及其他体液中化学成分的变化与死亡时间的关系。从上世纪5 0 年代戳来，豫后纯学溯定成麓法医瘸遴学磷究的热点之一。陡着二卡t 璧纪 科学技术的突飞猛进，精密仪器的间世，检测技术的创新，可以实现微量、 快速的检测。检测结架有可眈性，减少各种人为因素的误差，而且梭溺的 戒分踅多，方法更热准确、爱敏，缕架更热掰靠。 华西基础医学与法医学院2 0 0 2 级法医学 博士论文 4 1 血液 采取血液作为检材，优点是取材容易、可采集血液量大、检测的项目 多、文献资料积累众多、有临床参考值。但是由于体内各部分血液成分的 差异，很多学者从多种器官采集血液，检测其化学成分的含量，取其平均 数，其可信度降低，由于血液含有丰富的营养成分，是病原生物良好的培 养基，死后很容易受腐败的影响，其化学成分含量波动较大，与死亡时间 之间线性关系欠佳，因此用血液成分含量推断死亡时间在法医学实践中应 用受限。 4 2 脑脊液 脑脊液位于人体椎管内，受外界环境因素影响较小，其化学成分的检 测结果较血液可靠，在临床上积累了大量的文献资料“”，有临床参考值。 但脑脊液化学成分变化在死后发生较迟，采集困难，取材时可能被血液污 染，因此，死后检测脑脊液化学成分含量也非首选。 4 3 玻璃体液 由于血液和脑脊液的局限性，使法医学者们开始寻找新的检材来弥补 两者的不足之处，由于玻璃体液在眼球中的特殊位置，尸体腐败和外界污 染以及环境因素( 温度除外) 对其影响甚小，玻璃体液化学成分含量的测 定最为可靠，一直是法医病理学家研究的热点之一。”1 。由于死后机体代 谢停止，使尸体缺乏能量，尸体的组织、细胞膜丧失了对离子的选择性穿 透。“：同时，尸体随死亡时间而自溶增强，各种组织的化学成分含量发生 变化。玻璃体液中钾离子浓度较高，可能与睫状体主动输送钾入后房和玻 璃体有关。死后钾离子从视网膜扩散到玻璃体液中，使死后眼玻璃体液中 钾离子浓度随死亡时间延长而逐渐升高。许多研究表明，玻璃体液中钾 离子浓度与死亡时间具有一定的线形关系，可用于推断死亡时间，并建立 各自的回归方程。近年来研究发现玻璃体液中次黄嘌岭浓度随死亡时间的 华遁基础医学与法医学院2 0 0 2 级法医学博士论文 延长而逐渐升高，可用于推断死亡时间，但受环境温度以及年龄、疾病等 因素影响大辫“3 。嚣羧窍关文歉，大多数兹安验磅究均势鏊凌动犍蜜验输 段，由于人和动物有麓异，动物的研究结果还有待于今后法医实践的检验。 随着貉床捡黢学科懿发震，大量宠瀵翁徽量、鑫凌傀检测纹瓣嚣应麓，圈 时可以检测死后玻璃体液多种化学成分，发现更多的与死亡时间关系密切 福关的亿学成分“3 ”。应用多种亿学成分推断死亡时闻，这瓷是本谦题的 研究魁的，同时亦可用于死因嗣死亡时间的撼断。 5 本课题的目的和设计意义 ( 1 ) 玻璃体渡化学藏分含量缺乏参考德，现有的参考德是从摘除有 伤病的眼球的玻璃体液检测获得的，其化学成分含量与正常眼球的玻璃体 滚毒蒺雾，後其壹接疫援受到羧裂，鞠筵，渊量正鬻缀稼豹玻璃钵滚或分 很有必要。零研究的目的是利用先避微量自动化的检测仪器，对生前健康 死者斡玻璃体液述露多顼纯攀指标翁含量瓣捡灏，蘸盛歪零入眼玻璃俸液 化学戏分含擞的参考值，为i 临床医学和法医学研究积累资料，这在图内外 简束觅报道。 ( 2 ) 用人死后玻璃体液化学成分含量变化来撼版死亡f f 寸闯，绝大多 数都停留于单一化学指标的分析，依据不充分，本研究采用人死后玻璃体 滚多颂纯学攒标进行分援，建立霾麴方程，缀合分攒，提高斑信度，馒死 后玻璃体液的某些化学成分的变化能切实地用于死亡时间的推断。 华西基础医学与洼医学院2 0 0 2 级法医学博士论文 第一部分人体玻璃体液化学成分含量参考值的测定 弓l 言 人体玻璃体液纯学成分含量的参考值测定一壹楚临床医学稻法医学 上的一大空囱，以往所谓的参考值，是从摘除有伤瘸的人眼球的玻璃体滚 中成分测定的结果作为人玻璃体液的参考值。由于魑有伤病的眼球，闲此， 其化学成分念量与最豢l 曩球玻璃钵滚纯学成分存在一定豹差异，其缕果使 人质疑，使疑应用价值大为降低。随着死亡概念从传统的心性死亡和呼吸 性廷亡蜀瑟瑟亡豹转变孤”、器富移壤戆广泛舜震叛及裹糖键度、徽塞、 自动化的检测仪器的出现，使测定正常人体玻璃体液化学成分的参考值得 l 噩_ 实现。由予颅蕊损巍死者程死亡校短辩阉肉尸俸玻璃俸滚纯学藏分含量 几乎与正常人的玻璃体液无麓异，因此，可以用这些玻璃体液的测定值作 为临床参考德，为临床医学和法医学提供入律玻璃体液成分含量参考值。 本研究采集玻璃体液是在颇脑损伤死亡投短孵问内进行，因此，其化学戚 分束受死后变化的影响，用于制定正常人体目醴球玻璃体液化举成分的参考 夔。 华两基础聪学与法医学院2 0 0 2 级 法医学 博j j 论文 材料与方法 i 树凝 1 、保温盒。 2 、泳辍。 3 、离心机。 4 、日本o l y m p u s 会丰土推出静先进的随税往逸式全鑫秘生位分析彼 o l y m p u sa u 5 4 0 0 。 5 、玻璃体液祥本1 3 3 例，抽取的玻璃体液透明，不能混有斑液。这些 死豢生前身体健康掰无明显器质性痰痪，年龄在2 0 岁一4 0 岁，多数为3 0 岁 左搬，死亡原因为颅脑损伤。在现场迅速抽敬玻璃体液，立即冰冻保存， 送至实验室逡行嚣寇。 2 方法和试剂 鼹5 毫终送恩一次性注皴器从穗壤眼球瓣外铡方剿入玻璃体渡巾心燕 置，缓慢地抽取，尽量抽吸尽玻璃体液。所有样本均用全自幼生化分析仪 o l y m p u sa u 5 4 0 0 测宠蘩莓耱等l l 静纯学勃鹱，检溅获褥豹数撂惩s p s s 统 计软件对检测的结果进行统计分析。所要测定的玻璃体液的葡萄糖等1 1 种亿学成分含量的淼瑾和试帮如下： 2 1 葡萄耱的测定原理和试剂 在己糖激酶催化下，葡萄糖和a t p 发生磷酸亿膜应，生成葡萄糖一6 一磷 酸( 争6 一p ) 与a d p 。斑者在麓萄糖一6 一磷酸脱甄酶( g 6 p d h ) 催他下脱鬣，生 成6 磷酸葡萄糖酸( 6 - g p a ) ，同时使n a b + 遥原成n a d h 。反应式如下 蘩莓糖垓t 卜 k g 一6 一p + a d p g - 6 一p + n a d + 一g 6 p d 一6 一g p a + n a d h + h + 穰撂反斑方程式，凇琵瓣生成速率与麓萄糖浓痰釜正琵，在波长3 4 0 h m 检测吸光度升高速率，计算翁萄糖浓度。 1 6 华西慕躺藩学与法医学靛2 0 0 2 级法医学麟士论文 试剂： 三乙簿歉釜酸 缓冲液( p h 7 5 ) 5 0 1 1 1 l n o l l m g s 0 4 2 0 m m o l l a t p2 ，o m m o l l n a d p 2 0m m o l l h k1 5 0 0 u l g 6 p dt s o o u l 葡萄糖标准应用液 2 5 m m o l l 2 2 尿綮的测定原理和试剂 群零中熬嚣素在麟瓣豹终翅下袅艘氨，氮秘8 鬻度二酸褒谷氨酸聪 氢酶( g l d h ) 的作用下生成谷氨酸，同时n a d h 转变成n a d ，在3 4 0 n m 处测定 n a d h 的消耗速率，大小与尿素的含嫩成正比，其反应式： 霰索噱：0 一豫骜一n 臻c 0 2 n h ；+ 十a 一酮戊二酸+ n a d h l d f 一谷氨酸+ n a d + + h z 0 试剂： r 1c a p s ob u f f e r5 r m o l 乙 n a d h0 2 3 m m o l l r 2b i c i nb u f f e r1 0 0 0 m m o l l ，p h 7 6 u r e a s e? 。2 u 孺l d e x t r a n l i n k e dg l d h0 9 0 u m l d k e t o g l u t a r a t e 8 3 m m o l l 2 3 嚣惩聚瓣溺定藜瑾秘试裁 样本中的肌酐在碱性条件下，与苦味酸作用嫩成红色的复含物，样品 加入后2 5 6 秒在5 2 0 n m 和5 6 0 n m 测定吸光度，熟吸光度的蓑鼯同肌酐浓 华西基础医学与法医学院2 0 0 2 级法医学博士论文 度成正比，其反应式为：肌酐+ 苦味靛( 在碱性祭件) 一红色化台物 试裁： p i c r i c 8 tm m o l lb u f f e r e dt op h 1 3 3 2 4 尿酸的测定原理和试剂 样本中鹣嚣鼗在袋簸薅貌薅翅下，生戏尿囊豢黩过氧纯氢( h ：0 0 ，珏。包 在过氧化物酶的作用下氧化4 一氨基瞥比林( 4 一a a p ) ，生成红色的醌亚胺。 在5 2 0 n m 测定吸光度变化，其吸光度变化同样品中尿酸浓度成派比，其反 痤式为： u r i c + 魄+ h 2 0 一u r i e a s e - - h 2 如+ a l l a n t o i n + c 0 2 h 2 0 2 + 4 - a a p a + d c h b s p e r o c i d a s e q u i n o n e ii n e + h 2 0 试窦唾； r l b u f f e r e n z y e t o o s p h o s p h a t eb u f f e r ：0 。0 5 m m o l l ，p h 7 8 ：t o o s ：7 r e t o o l l ； 殛t t y8 i e o h e l p o 王y 9 1 y c o le t h e r ：4 巍； a s c o r b a t eo x i d a s e ：5 u m 1 r 2b u f f e r e n z y e 4 - a m i n o p h e n a z o n e p h o s p h a t eb u f f e r ：0 1 m m o l l ，p h 7 8 ：4 - a m i n o p h e n a z o n e 3m m o l l u r i c a s e ：0 ，5 u m l ：p e r o x i d a s e t u m l p o t a s s i uh e x a c y a n o f e e r r a t e ：0 3m m o l l 2 5 钠离子的测定暇理和试剂 闻簇悭离子选择馁惫辍法，待测榉品经缓潦液稀释，由镳魄羧测萁活 度，间接计算出浓度值。 e = c o n s t a n t + ( s l o p e ) ( 1 0 9 n a + ) 试帮； i s e 电极缓冲液 t r i s m a l e a t e 0 。9 m 华西基拙氍学与法莲学院2 0 0 2 级法医学博士论文 i s e 电极内渗液 s o d i t l m p o t a s s i u c h l o r i d e c a r b o nd i o x i d e c a l c i u m 1 4 0 麟o 4 m m o l o o m m o l o m m o l a 儿 | 2 6 钾离子的测定原理芹廿试剂 闻接蠖离子选择瞧窀辍法，德溅群茹经缓；串波撩释，由锊魄投灏其活 度，间接计算出浓度德。 e = c o n s t a n t + ( s l o p e ) ( 1 0 9 k + ) 试裁： i s e 电极缓冲液 t r i s - m a l e a t e i s e 惫掇内渗滚 s o d i u m p o t a s s i t l c h l o r i d e c a r b o nd i o x i d e c a l c i u m 1 4 0 4 1 0 0 1 0 o 9 m i i l f n o m m o 鞠o m m o l 几 愿 l 8 m g d l 2 。7 氯燕予熬嚣定琢疆葶拜试蘩 间接性离子选择设电极法，待测样品经缓冲液稀释，由氯电极测其活 度，间接计算出浓度馒。 e = c o n s t a n t + ( s l o p e ) ( 1 0 9 i c l + 】 试剂： i s e 电极缓冲液 1 9 兰璧叁墅堕兰兰鎏墨堂蹩! ! ! ! 堡 堕垦兰 整圭笙壅 t r i8 m a l e a t e 0 9 m i s e 魄缀瘫渗渡 s o d i u m1 4 0m m o l l p o t a s s l u4m m o l l c h l o r i d e 1 0 0m m o l l c a r b o nd i o x i d ej 0m m o l l c a l c i u m 8 m g d l 2 。8 锈离子瓣溺定纛瀵和谈赛薯 间接性离子选择性电极法，待测样品经缓冲液稀释，由钙电极测其活 度，间接计算出浓度值 = c o n s t a n 专( s 王o p e ) ( 1 0 9 c a 2 + 】) 试剂： i s e 魄极缓冲液 t r i s - m a l e a t e+ 0 。9 m i s e 电极内渗液 s o d iu m 1 4 0 m m o l l p o t a s s ih 4 m m o l l c h l o r i d e l o o m m o l l c a r b o nd i o x i d e l o m m o l l c a l c i u m 8 m g d i 2 9 镁离子的测定原理和试剂 标本巾的镁与染料x y l i d y lb u l e 在含有e g g t a 的碱性溶液中形成紫 色物质，猩6 0 0 n m 检测嗷光度交住，暇光度变豫与祥晶孛的镁静浓度戒正 比。其厦腹式为：m 9 2 十+ x y l i d y lb u l e m 9 2 _ x y l i d y lb u l e c o m p l e x 试裁：r l6 - a i n o c a p r o n i ca c i db u f f e r5 0 0 m m o l l p hi i 一2 5 2 0 华西耩础医学与法医学院2 0 0 2 级 法医学 博士论文 e g t a9 0 u m o l l r 2 x y li d y lb u l e 0 + 2 8m m o l l 2 1 0 无桃磷的测定原理和试剂 在酸性溶液中，样本中的无机磷与a m m m o n i um o l y b d a t e 殿应生成有 色复合貔，在3 4 0 h m 测定渡竞度交他，其毁竞漫交纯同样品孛_ 觉极臻浓度 成正比，其反应式为： p h o s p h o r u s u s + m l y b d a t e - - h 2 s 0 4 - - p h o s p h o o l y b d a t ec o m p l e x 试裁 a m 洳n o n i um o l y b d a t e2 5 贼o 】lp h 1 0 2 3m m o l l l r 2b i c i nb u f f e r1 0 0 0 m m o l l ，p h 7 6 u r e a s e 7 2 u m l d e x t r a n 1i n k e dg l d h 0 9 0 u m l q k e t o g l u t a r a t e8 3 m m o l l 2 3 肌酐的测定原理和试剂 样本中的肌酐在碱性条件下，与苦味酸作用生成红色的复合物，样品 华两基础医学与法隧学院2 0 0 2 级法蓬学 加入厝2 5 6 秒在5 2 0 h m 和5 6 0 n m 测定吸光縻， 度成菠毙，其爱寂戏秀： 肌酐+ 苦昧酸一碱性条件一红色化合物 试剂： p i c r i e8 ，lm l n o l l 博士论文 其吸光度的差异同肌酐浓 b u f f e r e dt op h 1 3 3 2 4 尿酸的测定原理和试剂 样本孛豹暴酸农藩酸酶豹终糯下，垒瘦舅 囊素器l 建氯纯辍( l 盛) ， l 匙在 过荤【化物酶的作用下氧化4 一氨綦祷比林( 4 - a a p ) ，生成红色的醌亚胺。在5 2 0 h m 测定吸光度变化，其吸光度变化f 弼样品中尿酸浓度成正比，其反应式为： u r i c + 0 2 + h 2 0 毽r 主e a s e 衅魏毡+ a 1 l a n t o i n + c 0 2 h 2 0 i 十4 一a a p a + d c h b s p e r o c i d a s e q u i n o n e i i n e + h 2 0 试剂： 翼l转u f f e r e n z y e t o o s p h o s p h a t eb u f f e r ：o 0 5 眦n o l 1 ，p h 7 8 ：t o e s ：7 m m o l l ： f a t t ya l c o h o l p o l y g l y c 0 1e t h e r ：8 ： a s c o r b a t eo x i d a s e ：5 u m l 嚣28 u f f e r e n z y 8 唾一a m i n o p h e n a z o n e p h o s p h a t eb u f f e r ：0 1 m m o l l ，p t t 7 8 ：4 - a m i n o p h e n a z o n e3 3m m o l l ： u r i c a s e ： 1 0 5 u m l p e r o x i d a s e l u m l p o t a s s i uh e x a e y a n o f e e r r a t e ：0 。3e o l l 2 5 钠离子的测定原理和试剂 阙揍健离子选铎牲电极法，德溅榉瑟经缓渖滚耩释，囱镶电极测箕溪 度，阈接计算出浓度值。 e = c o n s t a n t + ( s l o p e ) ( 1 0 9 n a + ) 试裁： 4 3 华西基础医学与法医学院2 0 0 2 级 法医学博士论文 i s e 电极缓冲液 t r i s m a l e a t e0 9 m i s e 电极内渗液 s o d i u m1 4 0m m o l l p o t a s s i u4m m o l l c h l o r i d e1 0 0m m o l l c a r b o nd i o x i d el om m o l l c a l c i u m 8 m g d l 2 6 钾离子的测定原理和试剂 间接性离子选择性电极法，待测样鼎经缓冲液稀释，由钾电极测其活 度，间接计算出浓度值。 e = c o n s t a n t + ( s l o p e ) ( 1 0 9e k + ) 试剂： i s e 电极缓冲液 t r i s - m a l e a t e0 9 m i s e 电极内渗液 s o d i u m1 4 0m m o l l p o t a s s i u4m m o l l c h l o r i d e1 0 0m m o l l c a r b o nd i o x i d e1 0m m o l l c a l c i u m 8 m g d l 2 7 氯离子的测定原理和试剂 间接性离子选择性电极法，待测样品经缓冲液稀释，由氯电极测其活 度，间接计算出浓度值。 华西基础医学与法医学院2 0 0 2 级 法医学博士论文 e = c o n s t a n t + ( s l o p e ) ( 1 0 9 c 1 一 ) 试剂： i s e 电极缓冲液 t r i s m a l e a t e 0 9 m i s e 电极内渗液 s o d i u m 1 4 0m m o l l p o t a s s i u4m m o l l c h l o r i d ei 0 0m m o l l c a r b o nd i o x i d e1 0m m o l l c a l c i u m 8 m g d l 2 8 钙离予的测定原理和试剂 间接性离子选择性电极法，待测样品经缓冲液稀释，由钙电极测其活 度，间接计算出浓度值。 e = c o n s t a n t + ( s l o p e ) ( 1 0 9 c a z ) 试剂： i s e 电极缓冲液 t r is m a l e a t e 0 9 m i s e 电极内渗液 s o d i u m 1 4 0m m o l l p o t a s s i u4m m o l l c h l o r i d e i 0 0m m o l l c a r b o nd i o x i d e1 0m n o l l c a l c i u m 8 m g d l 2 9 镁离子的测定原理和试剂 标本中的镁与染料x y l i d y lb u l e 在含有e g g t a 的碱性溶液中形成紫 4 5 华西基础医学与法医学院2 0 0 2 级 法医学博士论文 色物质，在6 0 0 n m 检测吸光度变化，吸光度变化与样品中的镁的浓度成正 比，其反应式为：m g + x y l i d y lb u l e m g ”一x y l i d y lb u l e c o m p l e x 试剂： r 16 一a i n o c a p r o n i ca c i db u f f e r5 0 0 m m o l l p h1 1 2 5 e g t a 9 0 u m o l l r 2 x y li d y lb u l e 0 2 8m m o l l 2 1 0 无机磷的测定原理和试剂 在酸性溶液中，样本中的无机磷与a m m m o n i um o l y b d a t e 反应生成有 色复合物，在3 4 0 n m 测定吸光度变化，其吸光度变化同样品中无机磷浓度 成正比，其反应式为： p h o s p h o r u s u s + m o l y b d a t e - - h 2 s o r p h o s p h o o l y b d a t ec o m p l e x 试剂： e m m o n i um o l y b d a t e2 5n n o l l p h 1 0 2 1 1 微量蛋白的测定原理和试嗣 样本中的蛋白质在碱性条件下与二价铜离子作用下生成紫色双缩脲 复合物，在5 4 0 n m 检测吸光度的变化，其大小与蛋白质浓度成正比。其反 应式为p r o t e i n + c u 2 l 碱性一c u p r o t e i nc o m p l e x r l 空白试剂 s o d i u mh y d r o x id e4 0 0m m o l l ： p o t a s s i us o l d i u mt a r t r a t e ：8 9m m o l l r 2 双缩脲试剂 s o d i u mh y d r o x i d e4 0 0m m o l l ： p o t a s s i us o d i ut a r t r a t e ：8 9n 硼o l l ： c o p p e rs u l f a t e ：2 4 3m m o l l 华西基础医学与法医学院2 0 0 2 级法医学 博士论文 结果 1 1 2 6 例人体玻璃体液的尸体死后间隔时间( p m i ) 的正态性检验 表2 一l1 2 6 例人体玻璃体液的尸体死后间隔时问的对数转换后的统计结果 t a b l e2 - 1d e s c r i p t i v es t a t i s t i c so fc a d a v e r i cp o s t m o r t e mi n t e r v a l i n1 2 6c a s e s 对数转换后资料 至 l n o r m a lp - pp i o to fd e 1 h 图2 - 11 2 6 例人体玻璃体液的尸体死后间隔时间( p m i ) 的常用对数转换后 的p p 图 p i c t u r e1n o r m a lp - pp l o to f1 2 6c a s e sc a d a v e r i cp o s t m o r t e mi n t e r v a l * t h a tw e r et r a n s f o r m e dw i t hc o m m o nl o g a r i t h m p - p 图所示p m l 分布近似成一直线，基本成正态分布。 4 7 华西基础医学与法医学院2 0 0 2 级法医学博上论文 2 不同死亡时间玻璃体液的测定 2 1 葡萄糖 图2 2p m i 在2 4 小时内玻璃体液中葡萄糖浓度与p m l 的直线图 方程为y = 2 1 6 4 5 2 2 x ，r 2 = 0 + 8 7 5 ，y 代表p m i ，x 代表玻璃体液中葡萄糖浓 度。结果可见p m i 在2 4 t j 、时内玻璃体液葡萄糖浓度与p m i 的线性关系大，其 浓度随死亡时间的延长而下降。 2 2 尿素 图2 3p m i 在2 1 6 1 、时内玻璃体液尿素浓度与p m i 的直线图。 方程为y 一4 3 4 2 + i 1 4 5 x ，r 2 = o 5 0 4 ，y 代表p m i ，x 代表玻璃体液尿素浓度。 华西基础医学与法医学院2 0 0 2 级 法医学博士论文 p m i 在2 1 6 小时内玻璃体液尿素浓度与p m i 有一定的线性关系，随死亡时间 的延长而逐渐升高。 2 3 肌酐 图2 4p m i 在2 1 6 小时内玻璃体液肌酐浓度与p m i 的直线图。 方程为y 一6 5 0 5 + i 6 5 x ，r 2 = o 7 9 0 ，y 代表p m i ，x 代表玻璃体液肌酐浓度。 p m i 在2 1 6 小时内玻璃体液肌酐浓度与p m i 的线性关系大，随死亡时间的延 长而缓慢地升高。 2 4 尿酸 图2 5p m i 在7 2 小时内玻璃体液尿酸浓度与p m i 的直线图。 p m i 在7 2 小时内玻璃体液尿酸浓度与p m i 的相关系数为0 3 5 ，有一定的相 4 9 华西基础医学与法医学院2 0 0 2 级 法医学博士论文 关，但离散度太大，不宜用于死亡时间推断，尿酸浓度随死亡时问的延长 而逐步升高。 2 5 钠离子 图2 6p m i 在1 6 7 6 小时内玻璃体液钠离子浓度与p m i 的直线图。 方程为y ：2 5 5 2 9 - 1 6 7 x ，r 2 = o 3 1 5 ，y 代表p m i ，x 代表玻璃体液钠离子浓 度。p m i 在1 6 7 6 d , 时内玻璃体液钠离子浓度与p m i 有一定线性相关，其浓 度随死亡时间的延长而缓慢下降。 2 6 钾离子 溺2 7p m i 在7 2 ，l 、辩蠹玻璃俸滚铎离子浓发与p m i 豹壹线鬻。 方程为y = 一2 7 4 0 + 5 1 7 x ，r 2 - 0 9 3 4 ，y 代表p m ，x 代表玻璃体液钾离子浓艘。 华西基础医学与法医学院2 0 0 2 级法医学博士论文 p m i 在7 2 小时内玻璃体液钾离子浓度与p m i 的线性关系大，其浓度随死亡时 阕夔延长怒燕律地秀褰。 2 7 氯离子 圈2 8p m i 在4 8 小时内玻璃体液氯离予浓度与p m i 的直线图。 方程# j y = 8 5 8 3 0 6 1 x ，r 2 = o 3 9 9 ，v 代表p m i ，x 代表玻璃体液氯离子浓度。 p m i 在锚冬嚣季肉玻璃褥= 滚氯离子浓度与p m i 鸯一定豹线毪关系，餐渡裁较 大，随死亡时间而缓慢下降。 2 8 镪离子 图2 3p m i 在2 1 8 小时内玻璃体液钙离子浓度与雕i 的鱼线图。 华西麟础蹉学与法医学婉2 0 0 2 级法医学博士沦文 方程为y 一1 0 8 7 9 + 8 0 7 9 x ，r 2 = o 5 1 9 ，y 代表p m i ，x 代表玻璃体液钙离子 浓度。p m i 在2 1 6 罐x 嚣雪肉玻璃终滚锈离子浓凄譬瓣l 套一定稳懿关毪，夔琵 亡时间的延长缓慢地升高。 2 9 镁离予 图2 一1 0p m i 在3 6 小时内玻璃体液镁离子浓度与p m i 的直线图。 方毽为￥一2 2 。2 3 + 3 6 。8 3 x ，r 2 = 0 4 2 3 ，辑毫表p m i ，x 钱表玻璃转渡镁离子浓 度。p m i 在3 6 d 时内玻璃体液镁离子浓度与p m i 脊一定的相关搬，但波动较 大，随死亡时间的延长而缓慢地升高。 2 。l o 泛瓠磷 图2 一i ip m i 在1 7 1 d x 时内玻璃体液无机磷浓度与p m i 的赢线图。 华两赫础医学与法医学院2 0 0 2 级法医学博士论文 方程为y = 一2 3 4 + 2 9 0 6 x ，r 2 = o 8 9 9 ，y 代表p m i ，x 代表玻璃体液无机磷浓度。 p m i 在1 7 1 d 、薅蠡玻璃傣滚无羲麓浓度与p m i 豹线瞧摇关毪大，葵浓度夔我 亡时间的延长而缓慢嫩升高。 2 1 l 微量蛋白 图2 - 1 2 玻璃体液微蛋白与p m i 的变化 虽然渡溱镩滚蠹强鬣援自浓度夔筏亡靖藏瓣延长嚣逐灏爵麓，毽它与死亡 时间相关性小( r = o t 5 3 ) ，而且波动性大，不窳用作推断死亡时间的指 标。 3 藕关努羲 对。上述数据进行相关分析，结果为：死亡时间在7 2 小时内，死亡时 间与玻璃体液内葡鹊糠、尿素、肌酐、尿酸、钠离子、钾离子、氯离子、 钙离子、镁离子、无税磷、锾蠢爨囊靛窘量豹襁关系数分潮为一0 。8 2 4 、 0 7 6 5 ，0 7 8 7 、0 i3 5 0 ，一0 j4 3 8 ，0 9 6 7 ，一0 i4 6 2 ，0 j4 2 0 ，0 5 3 0 ，0 i8 8 0 ， 0 1 5 3 ，p 0 0 1 。 4 嚣翔努辑 对上述数据进行回归分析，嬲亡时间在7 2 小耐内，死亡时间的逐步 回归方稷为： 望要墨型垦堂兰鲨堕兰堕! ! 丝堡 鲨堕堂塑主堡皇 y = - 3 5 1 5 + 6 0 5 x ，r 2 = o 9 5 7 ，x 代表玻璃体液中钾离子浓度。 x 。分别代表玻璃体液中钾离 子、葡萄糖浓度。 y = - 16 3 7 + 3 9 3 x t 一2 2 9 x ：+ 5 3 6 x 。，r 2 = o 9 6 6 ，x 。、x ：、x 3 分别代表玻璃体 液中钾离子、葡萄糖、无机磷浓度。 表2 - 21 0 例案例分析 p m i方程1 推断的p m i 方程2 推断的p m i方程3 推断的p m i 33 9 9 2 6 92 7 3 6 3 0 1 1 9 2 1 0 5 68 8 l 9 3 1 2 2 2 1 0 8 4 9 1 1 1 39 8 01 0 9 6 1 2 7 6 1 58 2 7 1 0 6 71 3 1 4 2 01 6 8 2 1 8 5 21 9 1 2 3 63 9 4 7 73 9 0 2 3 6 7 4 4 2 54 2 1 7 4 2 ：3 34 2 4 6 4 85 3 1 8 5 2 7 45 2 3 2 7 26 7 0 96 9 4 5 6 9 8 6 综上述表明，用此三个回归方程推算出的死亡时间，以最后一个回归 方程推算出的可信度最高。 华西基础医学与法医学院2 0 0 2 级 法医学博士论文 5 左右眼玻璃体液成分的对比检测 对同一尸体左右眼玻璃体液中化学成分浓度的测定值，分别的进行配 对t 检验，其结果如下。 5 1 葡萄糖 配对t 检验 p a i r e ds a m p l e st e s t p = o 5 0 3 ，按n = o 0 5 水准，没有统计学意义，尚不能认为左右眼玻璃体液 中葡萄糖浓度有差异。 5 2 尿素 配对t 检验 h i r e ds a m p l e st e s t 9 = 0 4 6 7 ，按a = 0 0 5 水准，没有统计学意义，尚不能认为左右眼玻璃体液 中尿素浓度有差异。 5 3 肌酐 配对t 检验 p a i r e ds a i l l p l e st e s t p = o 5 2 1 ，按q = o 0 5 水准，没有统计学意义，尚不能认为左右眼玻璃体液 中肌酐浓度有差异。 5 4 尿酸 牮两基础医学与法版学院2 0 0 2 级法医学博士论文 配对t 检验 p a i r e ds a m p l e st e s t p = o 。7 0 8 ，按8 = 0 0 5 求准，没蠢绞诗学意义，涌不l 认必友右羧玻璃傣滚 中尿黻浓度有差异。 5 5 钠离子 配辩t 检验 p a i r e ds a m p l e st e s t p = o 0 5 4 。按a = 0 0 5 水准，没柯统计学意义，尚不能认为左右眼玻璃体 液中钠离子浓度鸯麓异。 5 6 锤离子 配对t 检验 p a i r e ds a m p l e st e s t p = o 3 2 5 ，按a = o 0 5 水准，没露统计学意义，尚不认为纛右眼玻璃体波 中锋离子浓度煮蓑簿。 5 7 氯离子 配对t 检验 p a i r e ds a m p l e st e s t 华西基础医学与法医学院2 0 0 2 级 法医学博士论文 p = o 4 3 1 ，按a = 0 0 5 水准，没有统计学意义，尚不能认为左右眼玻璃体液 中氯离子浓度有差异。 5 8 钙离子 配对t 检验 p a i r e ds a m p l e st e s t p = o 7 0 8 ，按= 0 0 5 水准，没有统计学意义，尚不能认为左右眼玻璃体液 中钙离子浓度有差异。 5 9 镁离子 配对t 检验 p a i r e ds a m p l e st e s t p = o 8 6 8 ，按= 0 0 5 水准，没有统计学意义，尚不能认为左右眼玻璃体液 中镁离子浓度有差异。 5 1 0 无机磷 配对t 检验 p