（药理学专业论文）双环醇对实验性非酒精性脂肪肝的保护作用及机制研究.pdf

d i s s e r t a t j o no f p h d c h i n e s ea c a d 锄yo fm e d i c a ls c i e n c e & p e k i n gu n i o no fm e d i c a lc o i l e g e 目录 目录1 缩略词表( a b b r e v i a t i o n ) 4 摘要8 a b s t r a c t ll 引言15 第一部分双环醇对四环素引起小鼠脂肪肝的保护作用及机制研究1 7 前言1 7 材料和方法18 实验结果2 9 1 双环醇对四环素引起小鼠脂肪肝的保护作用2 9 1 1 双环醇对四环素引起小鼠血清a l t 、a s t 升高的保护作用2 9 1 2 双环醇对四环素引起小鼠肝脏脂质蓄积的保护作用3 l 1 3 双环醇对四环素引起小鼠血脂异常的保护作用3 3 1 4 双环醇对四环素引起小鼠肝脏组织形态学改变的保护作用3 5 2 双环醇对四环素引起小鼠肝脏氧化损伤的保护作用3 6 2 1 双环醇对四环素引起小鼠肝脏脂质过氧化的影响3 6 2 2 双环醇对四环素腹腔注射小鼠肝脏g s h 含量的影响3 6 2 3 双环醇对四环素腹腔注射小鼠肝脏抗氧化物酶活性的影响3 6 3 双环醇对四环素引起小鼠肝脏线粒体损伤的影响3 7 3 1 双环醇对四环素腹腔注射小鼠肝脏线粒体膜电位的影响3 7 3 2 双环醇对四环素腹腔注射小鼠肝脏线粒体肿胀度的影响一3 8 3 3 双环醇对四环素腹腔注射小鼠肝脏m r ci 和i v 的影响3 9 3 4 双环醇对四环素腹腔注射小鼠肝脏a t p a s e 活力的影响4 0 4 双环醇对四环素腹腔注射小鼠肝脏脂肪酸氧化酶活性的影响4 l 4 1 双环醇对四环素腹腔注射小鼠肝脏线粒体b 氧化速率的影响4 1 4 2 双环醇对四环素腹腔注射小鼠肝微粒体c y p 4 5 0 酶含量及酶活性的影响4 2 4 3 双环醇对四环素腹腔注射小鼠肝脏过氧化酶体b 氧化速率的影响4 4 5 双环醇对四环素腹腔注射小鼠肝脏p p a r q 及其靶基因m r n a 表达的影响4 5 6 双环醇对四环素腹腔注射小鼠肝脏s r e b p 1 c 及其靶基因m r n a 表达的影响4 6 d i s 靶r t a t i o no f p h d c h i n e s ca c a d 锄yo fm e d i c a ls c i e n c e & p e 虹n gu n i o no fm e d i c a lc o l i e g e 讨论z 1 7 以、结5 0 参考文献。5l 第二部分5 6 双环醇对高脂饮食引起大鼠脂肪肝的保护作用及机制研究5 6 前言5 6 材料和方法5 7 实验结果6 4 1 双环醇对高脂饮食大鼠脂肪肝的保护作用6 4 1 1 双环醇对高脂饮食大鼠肝脏脂质蓄积的影响6 4 1 2 双环醇对高脂饮食大鼠血脂异常的影响6 5 1 3 双环醇对高脂饮食大鼠肝脏组织形态学改变的影响6 6 2 双环醇对高脂饮食大鼠肝脏脂肪酸合成酶系m r n a 表达的影响6 7 2 1 双环醇对高脂饮食大鼠a c cm i 矾a 表达的影响6 7 2 2 双环醇对高脂饮食大鼠肝脏f a sm r n a 表达的影响6 8 2 3 双环醇对高脂饮食大鼠肝脏s c dm r n a 表达的影响6 9 3 双环醇对高脂饮食大鼠肝脏脂肪酸合成酶系蛋白表达的影响7 0 3 1 双环醇对高脂饮食大鼠肝脏a c c 蛋白表达的影响7 0 3 2 双环醇对高脂饮食大鼠肝脏f a s 蛋白表达的影响7 l 4 双环醇对高脂饮食大鼠肝脏s r e b p 1 cm r n a 及蛋白表达的影响7 2 4 1 双环醇对高脂饮食大鼠肝脏s r e b p 1 cm r n a 表达的影响。7 2 4 2 双环醇对高脂饮食大鼠肝脏s r e b p 1 c 蛋白表达的影响。7 3 4 3 双环醇对高脂饮食大鼠n s i 迎b p 1 c 蛋白表达的影响7 4 5 双环醇对高脂饮食大鼠肝脏l x r am i 酬a 表达的影响7 5 6 双环醇对高脂饮食大鼠肝脏i n s i gm l a 表达的影响7 6 6 1 双环醇对高脂饮食大鼠肝脏i n s i g ln l 】 州a 表达的影响7 6 6 2 双环醇对高脂饮食大鼠肝脏i n s i g 2 am i 矾a 表达的影响。7 7 讨论7 8 ，j 、结。8l 参考文献8 2 d i s s e r t a t i o no fp h d c h i n e s ea c a d 锄yo f m e d i c a js 堂皇! 丛略i n gu n i o no f m e d i c a lc 塑 综述8 6 多不饱和脂肪酸与非酒精性脂肪肝8 6 参考文献r 9 0 发表文章9 3 p r o t e c t i v ee f f e c to f b i c y c l o lo nt e t r a c y c l i n ei n d u c e df h 坶l i v e ri nm i c e 9 3 附录9 5 致 射9 6 独创性声明9 7 学位论文版权使用授权书9 7 d i s s e r t a t i o no f p l l d c h i n e s e 垒c 型! 墨z2 1 坚! ! 丝型；! ! ! 翌! ! 垒! ! ! ! 旦墨望翌! 竺里2 1 坚! ! 堕! ! 2 1 1 1 墨!一一 _ _ _ - _ - _ 一一一 缩略词 a c c a c d 缩略词表( a b b r e v i a t i o n ) 英文全称 a c e 够i c o ac a r b o x y l a s e a c e t y lc o ad e h y d r o g e n a s e a d p n a 2 a d e n o s i n e5 d i p h o s p h a t ed i s o d i 啪s a l t a l d a l t a o x a i c o h o l i cl i v e rd i s e 2 l s e a l a n i n ea m i n o t r a n s f e r a s e a c e t y l c o e n z y m ea o x i d a s e a s t a s p a r t a t ea m i n o t r a n s f e r a s e k 时 b y c h o a d e n o s i n e5 - t “p h o s p h a t e b i c y c l o l c h o l e s t e r o l c m c - n a s o d i u mc a r b o x y m e t h y lc e l l u l o s e c o c o a c o n a c a r b o nm o n o x i d e c o e n z y m ea c o n c a n a v a l i na c y p 2 e 1 c y t o c h r o m ep 4 5 02 e 1 c y p 4 5 0 c ”o c h r o m ep 4 5 0 c y p 4 a c y t o c h r o m ep 4 5 04 a d - g a l n d g a l a c t o s a m i n e d m s o d n p h d i m e t h y ls u i p h o x i d e 2 ，4 - d i n i t r o p h e n y l h y d r a z i n e 4 中文全称 乙酰辅酶a 羧化酶 乙酰辅酶a 脱氢酶 腺苷5 二磷酸二钠 盐 酒精性肝病 丙氨酸氨基转移酶 酰基辅酶a 氧化酶 天门冬氨酸氨基转移 酶 三磷酸腺苷 双环醇 胆固醇 羧甲基纤维素钠 一氧化碳 辅酶a 刀豆蛋白 细胞色素p 4 5 02 e 1 细胞色素p 4 5 0 细胞色素p 4 5 04 a d 半乳糖按 二甲基亚砜 2 4 二硝基苯肼 d i s s e r t a t i o no f p l l d 垦堕! 堕! ! c a d a m yo fm e d i c a is c i e n c e p e k i n gu n i o no fm e d i c a lc o l l e g e d t n b d t t e b e d t a e g t a d i t h i o - b i s n i t r o b e n z o i ca c i d d i t h i o t h r e i t o l e t h i d i u mb r o m i d e e t h y l e n e d i a m i n et e t r 龃c e t i ca c i d e t h y l e n eg l y c o - b i s 2 - a m i n o e t h y l e t h e r 】 n ，n ，n ，n - t e t r a a c e t i ca c i d e i e l e c t r o ni m p a c ti o n i z a t i o n e r e n d o p l a s m i cr e t i c u l u m e s i e l e c t r o n s p r a yi o n i z a t i o n f a df l a v i na d e n i n ed i n u c l e o t i d e f a s f 螂a c i ds y n t h e s i s f f a f r e ef 撕a c i d g 一6 - p g l u c o s e 一6 - p h o s p h a t e g 6 一pd h g l u c o s e 6 - p h o s p h a t ed e h y d r o g e n a s e g s h g 1 u t a t h i n n h e h e p e s h f d i n s i g s l c a d l c m s l x r h 比 m d a 二硫代硝基苯甲酸 二硫苏糖醇 溴乙啶 乙二胺四乙酸 乙二醇双( 2 氨乙基 醚) 四乙酸 电子轰击电离 内质网 电喷雾电离 黄素腺嘌呤二核苷酸 脂肪酸合成酶 游离脂肪酸 葡萄糖6 磷酸 葡萄糖6 磷酸脱氢酶 谷胱甘肽 h e m a t o x y l i na n d e o s i n 苏木素和伊红 h y d r o x y e t h y lp i p e r a z i n ee t h a n e s u l f o n i ca c i d 羟乙基哌嗪乙磺酸 h i g hf a t d i e t i n s u l i ni n d u c e dg e n e s l o n g c h a i na c y l - c o ad e h y d r o g e n a s e l i q u i dc h r o m a t o 旷a p h y t a n d e mm a s s s p e c t r o m e t 巧 l i v e rx a c t i v a t e dr e c e p t o r m a s s c h a r g er a t i o m a l o n d i a l d e h y d e 5 高脂饮食 胰岛素诱导基因 长链脂酰辅酶a 脱氢 酶 液质联用 肝脏x 活化受体 质荷比 丙二醛 d i s s e r t a t i o no fp h d 一一 曼! ! 里竺垒! ! 皇竺兰竺! 坚! 皇堡型兰! ! ! 呈! ! 垒! ! ! ! ! 墨竺翌1 2 翌2 1 坚! ! ! ! ! ! 曼21 生竖 m o p s 3 ( m o 印h o l i n o ) p r o p a n e s u l f o n i ca c i d 3 - 吗啉基丙磺酸 m p t m r c m e m b m n ep e m l e a b i l 时仃a n s i t i o n 膜渗透性转换 m i t 。c h 。n d r i a lr e s p i r a t o 巧c 。m p l e x 线粒体呼吸链复合物 n a d n i c o t i n a m i d ea d e n i n ed i n u c l e o t i d e n a d h n a d p h r 七d u c e df b n no fn i c o t i n a m i d e d i n u c l e o t i d e 烟酰胺腺嘌呤二核苷 酸 a d e n i n e 还原型烟酰胺腺嘌呤 二核苷酸 r e d u c e df o 哪o fn i c o t i n 锄i d ea d e n i n e 还原型烟酰胺腺嘌呤 d i n u c l e o t i d ep h o s p h a t e二核苷酸磷酸 n a d p h - g s n a d p h g e n e r a t i n gs y s t e m n a f l d n o n a l c o h o l i cf 撕l i v e rd i s e a s e n a s h n d m a p b s p m s f p p a r q p t p p v d f r 1 2 3 r o s r ，r - p c r s c a p s c d s d s n o n a l c o h o l i cs t e a t o h e p a t i t i s n i t r o s od i m e t h y l 锄i n e p h o s p h a t eb u 行e r e ds o l u t i o n p h e n y l m e t h y ls u l f o n y l f l u o r i d e n a d p h 发生系统 乙醇脱氢酶 非酒精性脂肪性肝炎 亚硝基二甲胺 磷酸盐缓冲液 苯甲基磺酰氟化物 过氧化酶体增殖活化 p e r o x i s o m ep r o l i f l e r a t o r a c t i v a t e dr e c e p t o r q 受体 p e r m e a b i l i 够t r a n s i t i o np o r e p o l y v i n y l i d e n ed i f l u o r i d e r 1 1 0 d a m i n el2 3 r e a c t i v eo x y g e ns p e c i e s r e v e r s e t r a n s c r i p t i o n a l p o l y m e r a s e r e a c t i o n 渗透性转换孔道 聚偏二氟乙烯 罗丹明1 2 3 活性氧自由基 c h a i n 逆转录聚合酶链式反 应 s r e b p c l e a v a g e a c t i v a t i n gp r o t e i n s r e b p 裂解活化蛋白 s t e a 巧l - c o ad e s a t u r a s e 硬脂酰辅酶a 脱氢酶 s o d i u md o d e c y ls u i p h a t e 6 十二烷基硫酸钠 d i s s e r t a t i o no fp i i d 兰! i ! ! ! ! 垒! ! ! ! 巴兰2 1 坚! ! 堕! ! 坠堡! 竺垒些! ! 呈墨竺里1 2 竺! ! 坚! ! ! ! 兰! 竺2 1 堡竖!_ _ _ _ - _ _ _ _ _ _ _ i i _ _ - _ - _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ i _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 。 s o d s u p e r o x i d ed i s m u t a s e 超氧化物歧化酶 固醇调控元件结合蛋 s r e b p s t e r o l r e g u l a t 。巧e l e m e n t - b i n d i n gp r o t e i n 白 t b a r s t h i o b a r b i t u r i ca c i d r e a c t i v es u b s t a n c e t g t r i g l y c e r i d e t m e m d t e t r a m e t h y l e t h y l e n e d i a m i n e t r i s t r i h y d r o x y m e t h y la m i n o m e t h a n e b - n a d p b 。n i c o t i n a m i d e a d e n i n e p h o s p h a t c 7 硫代巴比妥酸反应性 底物 甘油三酯 四甲基乙二胺 三羟甲基氨基甲烷 d i n u c l e o t i d e b 烟酰胺腺嘌呤二核 苷酸磷酸 d i s s e n a t i o no fp h d c h i n e s ea c a d 哪yo fm e d i c a ls 噬e n c e & p e k i n gu n i o no fm e d i c a lc o l l e 壁 摘要 非酒精性脂肪性肝病( n o n a l c o h o l i cf a t t ) ，l i v e rd i s e a s e ，n a f l d ) 是无过量饮酒 史( 1 4 0 9 乙醇周) ，但肝脏组织学病变与酒精性肝病( a l c o h o i i c l i v e rd i s e a s e ， a l d ) 相似的临床综合症，包括单纯性脂肪肝( s i m p l es t e a t o s i s ) 和非酒精性脂肪性 肝炎( n o n a l c o h o l i cs t ea _ t o h e p a t i t i s ，n a s h ) ，后者与肝硬化和肝癌关系密切。近年来 随着生活水平的提高，n a f l d 的发病率逐年攀升，普通人群中约有1 4 至2 4 患 有n a f l d ，已成为最常见的肝脏疾患之一。目前，限制热量摄取是治疗n a f l d 唯一有效的手段，但对多数患者而言常难以坚持，因此，寻找有效的药物治疗 n a f l d 药物十分必要。 双环醇( b i c y c l 0 1 ) 是我所研制的治疗慢性肝炎的国家一类新药。临床资料显示， 双环醇在改善慢性乙肝病人临床症状和肝功能的同时，对乙肝病毒复制也有一定抑 制作用，且停药后反跳率低，未发现明显不良反应。以往药理研究表明，双环醇对 多种化学毒物、酒精等引起的急慢性肝损伤模型均具有较好的肝保护作用，其作用 机制与其清除自由基、保护线粒体功能等密切相关。 本实验室既往研究表明，双环醇对实验性非酒精性脂肪肝有显著的保护作用， 但对相关机制尚未进行深入研究。因此，本研究选用四环素和高脂饮食引起的两种 非酒精性脂肪肝模型观察双环醇的保护作用，并对相关机制进行深入探讨，为其临 床应用提供科学可靠的实验依据。 1 双环醇对四环素引起小鼠脂肪肝的保护作用及机制研究 单次腹腔注射四环素( t e t r a c y c l i n e ，2 0 0 m g l ( g ) 可引起小鼠急性脂肪肝，表现为 血清丙氨酸氨基转移酶( a l a n i n et r a n s a m i n a s e ，a l t ) 、天门冬氨酸氨基转移酶( a s p a n a t e a m i n o t r a n s f e r a s e ，a s t ) 升高，肝脏甘油三酯( t g ) 及胆固醇( c h o ) 聚积，肝细 胞小泡性脂肪变及水样变性等病理改变。双环醇预防给药( 3 0 0 m g 1 ( g ) 可降低血清 a l t 及a s t 水平的升高、抑制甘油三酯及胆固醇的蓄积，同时改善上述肝脏组织 病理学改变。 体内脂肪酸氧化主要发生在三个细胞器，即线粒体和过氧化酶体的b 氧化以及 微粒体( i ) 氧化。四环素注射2 4 h 后小鼠肝脏线粒体d 氧化速率显著下降，过氧化酶 体( a c e t y i c o e n z y m eao x i d a s e ，a o x ) 及微粒体( c y p 2 e l 及c y p 4 a ) 脂肪酸氧化 也受到显著抑制，表现为上述三个细胞器中四个限速酶( a c d 、a o x 、c y p 2 e l 以 及c y p 4 a ) 的氧化速率与对照组相比分别降低了3 4 、4 0 、5 8 和3 0 。线粒 体长链脂酰辅酶a 脱氢酶( 1 0 n g c h a i na c y l c o ad e h y d r o g e n a s e ，l c a d ) 、微粒体脂 肪酸代谢酶c y p 4 a 1 0 及c y p 4 a 1 2 的m r n a 表达也受到显著抑制。双环醇预防给 d i s 靶r t a t i o no fp l l d c h i n e s ea c a d 锄yo fm e d i c a is c i e n c e p e k i n gu n i o no fm e d i c a lc o i l e g e 药( 3 0 0 m g i ( g ) 可显著提高线粒体乙酰辅酶a 脱氢酶( a c e t y lc o ad e h y d r o g e n a s e ， a c d ) 、过氧化酶体a o x 、微粒体c y p 2 e l 以及c y p 4 a 的氧化速率，同时增加l c a d 以及c y p 4 a 1 0 、c y p 4 a 1 2 的m r n a 表达。 过氧化酶体增殖活化受体( p e r o x i s o m ep r o l i f e r a t o r - a c t i v a t e dr e c e p t o r ，p p a r q ) 为调节脂肪酸代谢过程所需多种酶表达的转录因子。四环素注射2 4 h 后，小鼠 肝脏p p a rqm i 斟a 表达显著下降，双环醇预防给药( 3 0 0 m g i ( g ) 可在一定程度上 提高该基因的表达。 线粒体损伤尤其是线粒体呼吸链( m i t o c h o n d r i a lr e s p i r a t o 叫c h a i n ，m r c ) 功能 异常在n a f l d 的发病过程中发挥关键作用。四环素注射2 4 h 后，肝脏m r ci 和i v 活性与对照组相比分别降低4 2 、3 l 。双环醇预防给药( 3 0 0 m g l ( g ) 可显著增加 m r ci 和m r ci v 活性，使之恢复到接近正常水平。此外，注射四环素2 4 h 后，小 鼠肝脏线粒体对罗丹明1 2 3 ( r h o d a m i n e1 2 3 ，r 1 2 3 ) 的摄取量明显少于对照组，对高钙 浓度诱发肿胀的敏感性显著降低，提示线粒体发生了膜渗透性转换。双环醇预防给 药( 3 0 0 m g l ( g ) 可显著改善受损的线粒体功能，表现为线粒体对r 1 2 3 的摄取量以及高 钙浓度引发的吸光度下降幅度均明显增加。a t p a s e 是反映线粒体能量代谢状况的重 要指标，注射四环素2 4 h 后，小鼠肝脏a t p a s e 活性显著下降。双环醇预防给药 ( 3 0 0 m g l ( g ) 能够显著提高受损的a t p a l s e 活性，使之接近正常水平。 线粒体损伤能够引起r o s 生成增加，造成肝组织氧化损伤。氧化应激是启动 及维持n a s h 的重要病理因素。注射四环素2 4 h 后，小鼠肝脏m d a 显著升高，而 g s h 含量及s o d 活性也出现代偿性升高。双环醇预防给药( 3 0 0 m 舭g ) 能够改善 m d a 升高，使g s h 含量及s o d 活性恢复至接近正常水平。 固醇调控元件结合蛋白( s t e r o lr e g u l a t o 叮e l e m e n t b i n d i n gp r o t e i n ，s i 也b p ) 1c 是调控肝脏脂质合成代谢的重要转录因子。但四环素腹腔注射2 4 h 后，小鼠肝脏 s i 汪b p 1 c 及其靶基因脂肪酸合成酶( f a t t ya c i ds y n t h e s i s ，f a s ) 及固醇辅酶a 脱氢 酶( s t e a r o y l c o ad e s a t u r a s e ，s c d ) 的m r n a 表达未见显著变化。 由此可见，单次注射四环素能引起小鼠出现明显脂肪肝，损伤机制与抑制p p a r q 及其靶基因、氧化损伤有关。双环醇对四环素引起脂肪肝的保护作用与其调控 p p a r 0 【转导通路紊乱及抑制氧化损伤密切相关。 2 双环醇对高脂饮食引起大鼠脂肪肝的保护作用及机制研究 高脂饮食喂养四周后，大鼠出现明显脂肪肝，表现为肝脏脂质聚积( 肝脏t g 、 c h o 以及f f a 含量明显增加) ，血脂异常( 出现高胆固醇和低甘油三酯血症) ，肝 细胞损伤及小泡性脂肪变、水样变性以及炎性细胞浸润等病理改变。双环醇预防给 药或治疗给药( 1 5 0 ，3 0 0 m g i ( g ) 可有效地抑制h f d 引起的肝脏脂质堆积、血中 t g 水平降低，并且改善上述肝脏病理学损伤。 9 d i s s e r t a t i o no f p i l d c h i n e s ea c a d a m yo fm e d i c a ls c i 塑c e & p e k i n gu n i o no fm e d i c a lc o l l 皇壁 s r e b p 1 c 是调控肝脏脂肪酸及甘油三酯合成过程中诸多代谢酶表达的重要转 录因子。高脂饮食喂养4 周后，大鼠肝脏s l 迮b p 1 c 前体蛋白及成熟型n s r e b p l 蛋 白表达显著升高，分别为对照组的3 5 倍及2 倍，双环醇预防及治疗给药( 3 0 0 m g 瓜g ) 均能明显降低s r e b p 1 c 前体蛋白及成熟型n s r e b p 1 c 蛋白表达，使之接近正常水 平。 乙酰辅酶a 羧化酶( a c e 哆1 c o ac a r b o x y l a s e ，a c c ) 、f a s 以及s c d 是脂肪酸 代谢过程中的关键酶，其转录过程受s r e b p 1 c 的调控。高脂饮食喂养4 周后，大 鼠肝脏a c c 、f a s 以及s c d 的m r n a 表达均显著升高，a c c 及f a s 的蛋白表达 也显著增加，分别为对照组的1 8 4 倍和3 1 倍。双环醇对a c c 、f a s 以及s c dm i 蝌a 表达均有不同程度的抑制作用，并能显著抑制a c c 及f a s 的蛋白表达。 胰岛素诱导基因( i n s u l i ni n d u c e dg e n e s ，i n s i g s ) 是调控s r e b p l 活化的重要 因子，能造成s r e b p s c a p ( s r e b p 裂解活化蛋白，s r e b pc l e a v a g e a c t i v a t i n gp r o t e i n ， s c a p ) 在内质网( e r ) 的滞留。高脂饮食喂养4 周后，大鼠肝脏i n s i g 一1m i 斟a 表 达显著下降，i n s i g 2 am i 矾a 表达无显著变化，双环醇预防及治疗给药( 3 0 0 m g l ( g ) 对i n s i g 1 和i n s i g 2 a 的m r n a 的表达均无显著影响。 由此可见，高脂饮食喂养4 周能够引起大鼠脂肪肝发生，其损伤机制与高脂饮 食增加s r e b p 1 c 的翻译及活化，从而增加脂质合成基因的转录有关。双环醇对高 脂饮食引起大鼠脂肪肝的保护作用与其从翻译水平抑制s r e b p 1 c 的表达进而调控 脂质合成基因的转录相关。 综上所述，双环醇对四环素及高脂饮食引起的急慢性实验性脂肪肝均有显著的 保护作用，不仅可以降低血清转氨酶的升高、抑制肝脏甘油三酯及胆固醇蓄积，还 可显著改善肝脏小泡性脂肪变、水样变性及炎性损伤等病理改变。其保护作用机制 可归纳为： 1 ) 抑制氧化应激：减轻脂质过氧化，使g s h 含量及s o d 活性的代偿性升高 恢复至接近正常水平。 2 ) 减轻线粒体损伤：维持线粒体膜完整性和正常膜电位，恢复线粒体a t p a s e 活性，增加m r c i 和i v 活性。 3 ) 调控p p a rq 及其靶基因的表达：增加降低的p p a rq 表达，增加a c d 、a o x 、 c y p 2 e l 以及c y p 4 a 的m r n a 表达及活性。 4 ) 调控s i 垣b p 1 c 转导通路：抑制s r e b p 1 c 的前体蛋白及成熟型蛋白的表达， 抑制负责脂肪酸合成的靶基因a c c 、f a s 以及s c d 的m r n a 及蛋白表达。 上述研究为进一步了解双环醇的肝保护作用特点以及临床治疗n a f l d 提供了 有参考价值的实验依据。 关键词：非酒精性脂肪肝，双环醇，四环素，氧化应激，线粒体损伤，过氧化 酶体增殖活化受体q ，固醇调控元件结合蛋白1 c d i s 辩r t a t i o no fp h d c h i n e a c a d a i i l yo f m e d i c a ls c i e n c c & p e k i n gu n i o no f m e d i c a lc o l l e g e a b s t r a c t n o n a l c o h o l i cf 啦l i v e rd i s e 雒e ( n a f l d ) i sas ) ，n d m m ew i ml i v e rh i s t o p 础o l o g i cf m d 啦s ， w h i c h 豫s 锄b l e sa l c o h o l i ch e p a t i t i si np a t i 锄t sw h ol a c kah i s t o d ro fs i g n i f i c a ma l c o h o lc o m s u m p t i o n ( 1 4 0ge t h 柚o l w e e k ) t i l es p e c 仃u mo fh i s t o l o g i ca b 肿珊a l i t i e so fn a f l d 啪g e so v e rs i i i l p i e s t e a t o s i s ，n o n a l c o h o l i cs t e a t o h e p a t i t i s ( n a s h ) ，6 b r o s i s ，c i 丌h o s i s ，锄de v 明h e p a t o c e l l u l a rc 盯c i l l o m a 0 rl i v e rf a i l u r e t h ep r e v a l e n c eo fn a f l di i l 也eg e n e r a lp o p u l a t i o ni se s t 硫a t e dt ob e1 4 a r n2 4 矾dh a sm a r k e d l yi n c r e a s e dr e c e n t l y t od a t e ，l eo n l ye 仃e “v et r e a t l i l e n to fn a f l d i sc a l o r i c r e s t r i c t i o n ，w h i c hi sd i f f i c u l tt 0a c h i e v ef o rm o s tn a f l dp a t i e n t s ，i ti so f 黟e a tn e c e s s i t yt of i m dt h e e f j 6 t i v et r e a t n l e n to f n a f l d ，i 1 1 c l u d 协gd r u gt t l 唧y b i c y c l o li san o v e la n t i - h e p a t i t i sd r u gf o rt h et r e a t m e n to fc h r o n i cv i r a lh e p a t i t i s i t h a sb e e ns h o w nt 0i m p r o v et h ec l i n i c a ls y m p t o m sa n di n h i b i tv i m sr e p l i c a t i o ni nh b v p a t i e n t s ，f e a t u r e db yl o wr e b o u n d i n gr a t c ，f e wa d v e r s ee n e c t s 锄dc o n v e n i e n tu s a g e p r e v i o u sp h a m a c o l o g i c a ls t u d i e si n d i c a t e dt h a tb i c y c l o lh a dh e p a t o p r o t e c t i v ea c t i o n a g a i n s ta c u t ea n d c h r o n i ce x p e r i m e n t a ll i v e r 叫u 叫c a u s e db yc e r t a i nt o x i n sa n da l c o h 0 1 t h eh e p a t o p r o t e c t i v em e c h a n i s m so fb i c y c l o lw e r er e i a t e dw i t ht h ec l e a r a n c eo fr e a c t i v e o x y g e ns p e c i e s ，r e g u l a t i o no fm i t o c h o n d r i a ld y s m n c t i o n ，e t c p r e v i o u ss t u d yi no u rl a b o r a t o 巧h 硒 a l s od e m o s t r a t e di t sr o l ei np r o t e c t i n g e x p e r i m e n t a l a n i m a l sf r o ms t e a t o s i s ( i n d u c e db yh i g hf a td i e t ，t e t r a c y c l i n e ，c a r b o n t e t r a c h l o r i d ea n de t h i o n i n e ) ，h o w e v e r ，i n - d e p t hi n v e s t i g a t i o no nr e l a t e dm e c h a n i s m sa r e s t i l ln e e d e d t h e r e f o r e ，a c u t ea n dc h r o n i ce x p e r i m e n t a ls t e a t o s i sm o d e l sw e r ee s t a b l i s h e d i nt h ep r e s e n ts t u d yt 0o b s e r v et h ep r o t e c t i v ee a c c to fb i c y c l o la n dr e l a t e dm e c h a n i s m s ， s oa st op r o v i d ee x p e r i m e n t a le v i d e n c e sf o ri t sc l i n i c a la p p i i c a t i o n p a ni ：p r o t e c t i v ee f f e c to fb i c y c l o lo nt e t r a c ) r c u n e i n d u c e df a t 够l i v e ri nm i c ea n d r e l a t e dm e c h a n i s m s s i n g l ed o s eo ft e t r a c y c l i n ei n j e c t i o nc a u s e dh e p a t i cs t e a t o s i sa se v i d e n c e db yt h e e i e v a t i o no fs e r u ma 【ta n da s t ， a c c u m u l a t i o no fh e p a t i ct ga n dc h o ，a n d m o 印h o l o g i cc h a n g e s ( s m a l ll i p i dd r o p l e t s 觚dh y d r o p i cd e g e n e r a t i o no fh e p a t o c y t e s ) ， w h i c hr e n e c t e de a r l ya l t e r a t i o n so fn a f l di nm i c e b i c y c l o lt r e a t m e n ts i g n i f i c a n t l y p r o t e c t e da g a i n s tt e t r a c y c li n e - i n d u c e df 狮l i v e rb yr e d u c i n ge l e v a t e ds e r u ma 【t & a s t i e v e l sa n da l l e v i a t i n gh e p a t i cl i p i da c c u m u l a t i o nb i o c h e m i c a l i ya n dp a t h o l o g i c a l