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山豆根毒效规律及靶器官毒性机制研究 摘要 1 i l y l l l l l l l l l 7 8 l l l l l l l l l l l l l l l l 5 1 1 1 1 1 1 2 1 u 1 1 1 1 1 1 1 1 1 7y 17 8 5 2 1 目的：探讨山豆根的毒性效应谱及毒作用规律，可能的靶器官毒性及 作用机制。方法：1 急性系统毒性试验：以山豆根水提物、7 0 乙醇提物 及总生物碱，分别一次性灌胃予昆明种小鼠，观察1 4 d 内小鼠的毒性反应 及死亡情况。2 重复给药毒性试验：山豆根水提物不同剂量( 分别为药典 推荐临床用量的1 2 0 、6 0 、3 0 倍) 给大鼠连续灌胃9 0 d ，停药1 5 d ，观察山 豆根水体物对大鼠的长期毒性。3 靶器官毒性研究：重点观察中枢神经系 统毒性作用，观察尼可刹米、美多巴对山豆根中毒的影响；检测单次和多 次给予山豆根水提物和总生物碱对小鼠大脑d a 、a c h 含量的影响。结果： 1 急性毒性试验：所试山豆根三种样品毒性症状谱均为给药后不同时间( 山 豆根生物碱约在2 - 3 m i n 出现，山豆根水提物在1 0 m i n 之内，醇提物在 1 0 2 0 m i n ) 出现短暂兴奋，然后静卧少动，精神萎靡，厌食，闭眼，继而 出现呼吸频率减慢，加深加大，行走困难，步态不稳，四肢抽搐，震颤， 竖毛，紫绀等，直至死亡。山豆根水提物l d 5 0 为3 1 6 6 9 ( 原生药) k g ， 山豆根醇提物的l d 5 0 为7 9 5 8g ( 原生药) k g ，山豆根生物碱的l d s o 为 5 2 4 5g ( 原生药) k g 。2 长期毒性试验高剂量组给药第3 天动物体重明显 降低，进食量减少；第5 周出现不同程度的颤抖、步态不稳、抽搐等症状。 给药1 个月大剂量组血液学和血生化指标、脏器系数与空白对照组比较 t g 、n a 降低，c h 0 1 、c k 增加；肾、肾上腺、睾丸、附睾指数增加；给药 3 个月与空白对照组比较大剂量组血液学指标没有显著变化，血生化中 a l t 、c h o l 显著增加，脏器肝、肺、肾、肾上腺、睾、附睾指数增加。 病理检查无异常改变。停药后大剂量组大鼠体重明显增加，肝指数降低， 其他指标与空白对照组比较无明显变化。3 靶器官毒性研究：山豆根组动 物出现颤抖、抽搐、全身震颤、步态不稳、呼吸困难等症状；尼可刹米组 动物的存活时间明显延长；美多巴组动物颤抖、步态不稳、抽搐等症状明 显减轻，还可以增加其存活率。d a 含量无明显改变，a c h 含量降低。结 论：1 我们认为山豆根具有胃肠、神经、呼吸系统毒性和肝毒性，其毒性 是可逆的，停药后可恢复。2 山豆根可以抑制呼吸中枢，可引起药物性帕 金森氏综合征。3 其毒性物质为其所含的生物碱，其生物碱可能具有d a 受体阻滞作用。 关键词：山豆根毒性作用规律机制 f r a d i x o r g a n s ew a t e r e x t r a c tt o n k i n e n s i s ，7 0 e t h a n o le x t r a c ta n dt o t a la l k a l o i d s g a s t r i cp e r f u s i o n o n e - t i m eg r a n tk u n m i n gm i c e ，o b s e r v ew i t h i n14d a y so ft h em i c et o x i c r e a c t i o na n dd e a t h 。2 r e p e a t e dd o s et o x i c i t y s t u d y ：t h ew a t e re x t r a c to f r a d i xs o p h o r a et o n k i n e n s i sd i f f e r e n td o s e s ( r e c o m m e n d e df o rp h a r m a c o p o e i a r e s p e c t i v e l y , c l i n i c a ld o s a g eo f12 0 ，6 0 ，3 0t i m e s ) g a s t r i cl a v a g er a t sf o r9 0 d a y sa n dt h e nw i t h d r a w a lo f 15d a y s ，t oo b s e r v et h el o n g - t e r m t o x i c i t yi nr a t s 3 t h et o x i c i t ys t u d yt a r g e to r g a n s ：k e yo b s e r v et h ec e n t r a ln e r v o u ss y s t e mo f t o x i c i t y , t oo b s e r v en i k e t h a m i d e a n dm a d o p a ra b o u tt h ee f f e c t so f r a d i xs o p h o r a et o n k i n e n s i s s p o i s o n i n g ，s i n g l ea n dm u l t i p l e t i m e sg i v e s r a d i xs o p h o r a et o n k i n e n s i s sw a t e re x t r a c t sa n dt o t a la l k a l o i dc o n t e n to f m i c eb r a i nd a ，a c h r e s u l t ：1 a c u t et o x i c i t yt e s t s ：a l lt h r e es a m p l eo fr a d i x s o p h o r a et o n k i n e n s i s st o x i cs y m p t o m ss p e c t r u m a r e a p p e a rt e m p o r a r y e x c i t e m e n ta f t e ru s et h ed r u g ( t h ea l k a l o i d so fr a d i xs o p h o r a et o n k i n e n s i s a b o u t2 - 3m i n u t e s a p p e a r s ，r a d i xs o p h o r a et o n k i n e n s i s sw a t e re x t r a c t s p r o b a b l yi n 10m i n u t e s ，a l c o h o le x t r a c ti n10 2 0m i n u t e s ) t h e nr e p o s e ， l i s t l e s s n e s s ，l e s sa n o r e x i a ，c l o s ee y e s ，a n dt h e nt h e r eb r e a t h i n gs l o wd e e p e na n d d i f f i c u l t yt ow a l k ，u n s t e a d yg a i t ，l i m bt i c ，t r e m o r , p i l o e r e c t i o n ，c y a n o s i se t c ， 3 d a y , a n i m a lw e i g h td e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y ，r e d u c ef o o di n t a k e ，a r t i c l e5w e e k s a p p e a rd i f f e r e n td e g r e eo ft r e m b l i n g ，u n s t e a d yg a i t ，a n do t h e rs y m p t o m s 1 m o n t h sh e m a t o l o g ya n db l o o db i o c h e m i c a li n d i c a t o r s ，v i s c e r ac o e f f i c i e n ta n d b l a n kc o n t r o l c o m p a r et h a t ，t ga n dn ar e d u c e d ，c h o la n dc ki n c r e a s e d ， k i d n e y , a d r e n a l s ，t e s t i c u l a r , e p i d i d y m a li n d e xi n c r e a s e d ；c o m p a r e dw i t ht h e b l a n kc o n t r o l3m o n t h s ，n os i g n i f i c a n tc h a n g e s ，h e m a t o l o g yi n d e x i nt h e b i o c h e m i c a lb l o o dc h o la l t ，i n c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y , v i s c e r al i v e r , l u n g s ， k i d n e y s ，a d r e n a l s ，n o r m a l i z i n g ，e p i d i d y m a li n d e xi n c r e a s e d t h e r ei sn o 5 i t sa l k a l o h a n i s m - j 一 月i j舌 山豆根又名为广豆根，为豆科植物越南槐( s o p h o r at o n k i n e n s i sg a p n e p ) 的干燥根及根茎，味苦，性寒；有毒。归肺、胃经，具有清火、解毒、消 肿、止痛之功效。用于治疗火毒蕴结，咽喉肿痛，牙龈肿痛，口舌生疮以 及肺热咳嗽等症。山豆根的主要含总生物碱及黄酮化合物，具有抗炎、抗 心律失常、抗溃疡保肝等药理作用【1 1 。 目前实验研究显示小鼠单次口服山豆根的l d 5 0 为3 4 3 9 l ( g 【2 】。有报道 山豆根可使小鼠胃肠推进率降低【3 1 ，人服用1 2 9 山豆根即产生恶心、呕吐 等不良反应，服用6 0 9 中毒死亡【4 】。临床主要中毒症状有恶心、呕吐、头 晕、眼花、恶寒、冒汗及恶心呕吐，重则四肢麻木、剧烈头疼、呼吸急促、 腹胀、全身肌肉颤动，手足抽搐痉挛，继而昏迷、口唇发绀、瞳孔散大、呼吸 衰竭死亡【5 1 。有人认为山豆根可损害基底节神经核而类帕金森综合征样症 状【6 1 ，山豆根引起的中毒性脑病属于迟发性运动障碍 刀。山豆根能麻痹呼吸 中枢运动神经，大剂量引起呼吸衰竭，可能是引起山豆根中毒死亡的原因 嗍 。 以上提示山豆根的毒副作用主要涉及胃肠系统、神经系统和呼吸系统 等。据报道山豆根的毒性主要是由于其所含的苦参碱、氧化苦参碱、金雀 花碱、槐果碱等生物碱 9 , 1 0 ( 结构见图1 ) 引起。 本实验通过对山豆根急性毒性、长期毒性及靶器官毒性机理研究，阐 明山豆根的毒性、作用规律和物质基础以及其部分机制，对指导临床合理 用药具有重要意义。 ( c i s h 2 2 n 2 0 ) 图l山豆根主要化学结构式 7 碱 实验内容 1 急性毒性研究 急性毒性是指在动物一次或2 4 小时内多次接受一定剂量的受试物，在 一定时间内出现的毒性反应，包括一般行为和外观改变、大体形态变化以 及死亡情况。是预测药物安全性的重要手段，通过急性毒性实验可了解药 物的毒性反应和毒性程度。 1 1 小鼠急性毒性实验 1 1 1实验目的 观察药物的毒性症状谱，确定l d 5 0 等毒性参数，初步判断可能的毒性 靶器官及机理。 1 1 2 材料 1 2 1实验药品山豆根饮片购于新荷花药品有限公司，批号：0 9 0 4 2 1 6 ， 产地：广西，规格：l k g 袋。山豆根水煎液、山豆根7 5 乙醇提取物、山 豆根总生物碱和山豆根非生物碱部分，由中国科学院成都生物所按照图1 1 制备。 山豆根水煎液：棕褐色、无味浓浸膏，1 9 浸膏相当于5 5 6 9 原生药。 山豆根7 5 乙醇提取物：棕褐色、无味浓浸膏，1 9 浸膏相当于8 7 0 9 原生药。 山豆根总生物碱：淡黄色、无味浸膏，1 9 浸膏相当于9 3 7 9 原生药。 山豆根非生物碱部分：棕色、无味浸膏，1 9 浸膏相当于5 2 9 原生药。 保存：2 0 。c 冰箱避光保存，临用时以蒸馏水配成适当浓度备用，现 图1 1山豆根水提物工艺流程图 i 浓缩液 l r 第一次9 0 r a i n ， 流2 次，第一次9 0 r a i n ， 滤 图1 2山豆根乙醇提取工艺流程图 9 。 山显根饮片 】 第一次加入l o 倍量7 5 l 醇 剂煮沸6 0 m i n ，合并溶液。 1r 上 r 醇提液残渣 回收乙醇至干 上 1， l 弃去 加入两倍量的蒸馏水 用1 n 盐酸调p h = 3 ，过滤 1r r r 残渣滤液 l 用1 0 n a 2 c 0 3 调p h = 1 0 r 加入氯仿萃取4 次 r 合并氯仿层 无水m g s 0 4z f 燥，浓缩叵 1 r 山豆根生物碱浸 煮沸 收氯仿 图i - 3山豆根生物碱提取工艺流程图 1 1 2 2 实验动物 k m ：j 、鼠，s p f 级，雌雄各半，体重1 8 2 2 9 ，由四川省中医药科学院实 验动物中心提供，动物合格证号：s c x k 0 1 1 ) 2 0 0 8 1 9 。实验前置s p f 级动物 房适应性饲养2 d 。 1 1 3 方法 1 3 1预试验 选用适量k m d 鼠，雌雄各半，找到( 最小) 全死量和( 最大) 全不死 量。受试物实验前用蒸馏水配成不同梯度浓度，剂距1 ：o 8 或1 ：0 9 。连续 观察1 4 d ，记录动物死亡情况，找到( 最小) 全死量和( 最大) 全不死量。 组间距为1 ：o 8 或l ：0 9 。根据预实验结果求出正式实验的剂量比， r = ( n - i ) 如m e ) 1 1 式中：f 相邻两组剂量的比值；d m = 1 0 0 死亡剂量；d n = 0 死亡剂量； n = 正式实验所需组数 1 3 2 正式实验 在死亡率o ( d n ) 和1 0 0 ( d m ) 范围内确定5 7 个给药剂量组，山豆根 水提物剂距为l ：o 8 ，山豆根醇提物和山豆根生物碱剂距l ：0 9 。每组1 0 只，雌雄各半，禁食不禁水1 2 d 时后一次性灌胃给药，给药后立即观察小 鼠的行为活动、精神状态、毛色、摄食饮水，大小便情况，鼻、眼、口腔有 无异常分泌物以及死亡等情况，连续观察1 4 d 并记录。死亡动物即刻尸检， 肉眼观察其主要脏器( 心、肝、脾、肺、肾) 的变化，发现病变器官则进行病 理组织形态学检查。给药后常规饲养，给药前和给药后连续1 4 d 每天记录小 鼠体重。计算l d 5 0 等参数。 1 1 4 试验结果 经研究表明，山豆根水提物、醇提物及生物碱部分给药后动物出现明 显的毒性反应，三种提取物均在给药2 小时内出现死亡且无性别差异。死 亡情况如表1 。 1 1 4 1 动物死亡情况 表1三种药物动物死亡情况 注：第一组为高剂量组，按组间距递减。 山豆根水提液、7 0 乙醇提取物和山豆根生物碱均可引起相似的毒性 反应( 给药剂量分别为6 6 6 0 、11 9 2 9 、6 4 0 3g 生药k g ) ，表现为给药后出现 毒性时间分别为( 1 0 m i n 内，1 0 2 0 m i n ，2 3 m i n ) 出现短暂兴奋，然后静卧 少动，精神萎靡，厌食，闭眼，继而出现呼吸频率减慢，加深加大，行走 困难，步态不稳，四肢抽搐，震颤，竖毛，紫绀等，直至死亡。 山豆根水提物剂量( 6 6 6 0g 生药k g ) 给药后几分钟出现中毒表现，并且 前十几分钟症状比较明显，2 h 后症状有所缓解，多数动物在症状出现十几 分钟后挣扎死亡，也有动物数小时后死亡，未死亡动物2 4 h 后基本恢复正 常。 山豆根7 5 醇提物( 1 1 9 2 9g 生药k g ) 在给药后二十多分钟出现中毒症 状，试鼠在2 h 后死亡，未死亡动物3 6 h 后可基本恢复正常。 试鼠给山豆根生物碱( 6 4 0 3 9 生药k g ) 之后大约2 - 3 m i n 死亡，未死 亡动物约3 6 h 后可基本恢复正常。 肉眼尸检心、肝、脾、肺、肾等主要脏器均未见异常，对肺进行病检， 1 1 4 3 毒理学参数 表2毒理学参数 。见图1 4 。 1 1 5山豆根非生物碱部位急性毒性 山豆根非生物碱部分是提取山豆根生物碱之后剩下的所有成分合并而 成的部分为其非生物碱部分。 本文对山豆根非生物碱部分采用最大给药量( 3 6 7 4 9 原生药k g ) 对小鼠 进行急性毒性研究，结果表明，给药后所有动物均无明显毒性反应，5 m i n 后正常进食进水。 1 1 6 小结 本研究表明山豆根毒性成分主要是其所含的生物碱部分，其非生物碱 部分无明显毒性反应。山豆根水提物、醇提物以及生物碱都含有生物碱部 分，均具有一定的毒性反应。 由表1 可知，以换算为生药量计，毒性大小依次是水提物 生物碱 醇 提物，但试验中具体表现却以总生物碱毒性最强。这可能与不同提取工艺 的得率不同有关。三种提取物的中毒表现均相似，而非生物碱部分未表现 出明显毒性，表明山豆根主要毒性成分为其所含的生物碱部分，病理结果 显示可引起轻度肺水肿。 1 3 图l - 4 小鼠肺脏病理切片图 a 轻度充血b 轻度充血c 间质增宽d 间质水肿充血 1 2 大鼠急性毒性试验 1 2 1试验目的 探讨山豆根对s d 大鼠的l d 5 0 ，为重复给药毒性实验提供剂量选择，初步 揭示可能的毒性作用靶器官。 1 2 2 试验药品及动物 1 2 2 1实验药品山豆根水提物深棕色浸膏，相对密度1 2 ，由四川省中 医药科学院中试基地按前述提取工艺制备( 图1 1 ) ，2 0 避光密封保存。 1 2 2 2 实验动物s d 大鼠1 0 只，s p f 级，雌雄各半，体重1 4 0 , - 一1 8 0 9 ，由四 川省中医药科学院实验动物中心提供，动物合格证号：s c x k ( ) i i ) 2 0 0 8 1 9 。 实验前置s p f 级动物房适应性饲养2 d 。 1 2 3 实验方法 本实验采用o e c d 和e p a 推荐的急性毒性常用方法之一的上下法( 阶 梯法，u pa n dd o w nm e t h o d ) 。 1 2 3 1 预实验 采用6 只大鼠，雌雄各半，按照小鼠急性毒性结果折算进行试验。 观察大鼠的行为变化和死亡情况。结果显示小鼠的l d l o o 剂量大鼠出现1 只死亡，小鼠的l d 5 0 剂量大鼠未出现死亡，2 倍的小鼠l d l 0 0 大鼠两只动 物死亡。 1 2 3 2 正式试验 根据预实验结果，选择低于l d 5 0 剂量作为起始剂量，给药第1 只动物， 观察4 h 后动物无明显毒性表现并存活；第2 只动物给予小鼠l d 5 0 剂量， 观察4 h 后动物出现明显的毒性反应并存活；第3 只动物给予l d l o o 剂量， 动物出现明显的毒性反应，2 h 后死亡；第4 只动物给予2 3l d l 0 0 剂量，动 物出现明显的毒性反应，3 h 后死亡。第5 只动物给予1 2l d l o o 剂量，动物 出现明显的毒性反应，6 h 后死亡。第6 只动物给予1 3 l d l 0 0 剂量，动物出 现明显毒性反应，次日早死亡。连续5 只动物发生存活死亡转换，停止实 验。用( 软件a o t 4 2 5 s t a t p g m ) 最大可能性法计算l d 5 0 值。 1 2 4 结果 山豆根水提物一次灌胃给大鼠，给药1 4 h 后出现与小鼠相似的毒性症 状，即短暂兴奋后静卧少动，精神萎靡，厌食，闭眼，继而出现呼吸频率 减慢，加深加大，行走困难，步态不稳，四肢抽搐，震颤，竖毛，紫绀等， 直至死亡。未死亡动物约4 8 h 后才可基本恢复正常。山豆根水提物s d 大 鼠的l d 5 0 为4 5 2 + 1 0 7g 生药k g ，相当于药典临床推荐每日剂量的3 0 0 倍。 1 2 5小结 实验结果表明，山豆根水提物对s d 大鼠具有一定的毒性，从毒性表 现来看，可能的靶器官主要涉及神经系统、消化系统和呼吸系统，也可能 影响心血管系统。 2山豆根水提取物长期毒性试验研究 长期毒性研究是反复多次给药的毒性试验的总称，描述动物重复给予 受试物后的毒性特征，它是非临床安全性评价的重要内容。长期毒性研究 的主要目的包括以下五个方面：发现受试物由于积蓄而对机体产生的可 能引起的临床不良反应，包括不良反应的性质、程度、量效和时效关系等； 提供毒性反映的靶器官或靶组织及其损害的可逆性；预测临床试验的 起始剂量和重复用药的安全范围，确定无毒性反应剂量，探讨其中毒机理； 提示临床试验中需重点监测的安全性指标；对毒性作用强、毒性症状 发生迅速、安全范围小的受试物，长期毒性研究还可以为临床试验中的解 毒或解救措施提供参考信息【9 j o 】。为临床安全用药的剂量设计和临床毒副 反应的监护及生理生化指标监测提供依据 1 h 。 临床报道山豆根长期大剂量服用能引起消化系统、神经系统、呼吸系 统和心血管系统等不良反应【1 2 】。急性毒性结果提示山豆根可能具有神经毒 性和胃肠毒性。山豆根临床应用以水煎为主，因此有必要对山豆根水提物 做全面毒性研究。中华人民共和国药典2 0 1 0 版一部山豆根项下规定山 豆根用量为3 6 9 天 1 3 】，但目前临床常用剂量在l o g 天。因此本试验以临 床常用剂量1 0 9 天为换算依据，进行山豆根水提物的大鼠3 个月长期毒性 试验。观察毒性反应及其特点，毒性作用的靶器官及其损害的可逆性，确 定安全剂量范围，探讨毒性作用机制，为临床用药提供有价值的参考依据。 2 1实验材料 2 1 1受试药物 山豆根水提取物，棕褐色浸膏，相对密度为1 2 ，由四川省中医药科学 院中试基地按前述提取工艺制备( 图1 1 ) ，2 0 避光密封保存。 2 1 2 实验动物 s d 大鼠1 4 0 只，雌雄各半。4 6 周龄，体重约1 4 0 1 8 0 克。由四川省 中医药科学院动物中心( 动物合格证号：s c x k ( 川) 2 0 0 8 1 9 ) 。 2 1 3 饲养环境： s p f 级，实验环境设施合格证号：s y x k ( 川) 2 0 0 8 1 0 0 。室温2 0 2 6 ， 湿度4 0 7 0 ，1 2 小时照明，1 2 小时黑暗。 2 2 主要检测仪器 日立7 0 2 0 自动生化分析仪( 日立公司，日本) ；a v l 9 1 3 0 钠钾氯分析 仪( 美国) ；血细胞计数分析仪( j t - i r ，美国) ；x s z h 7 双目生物显微镜( 重 庆) ；离心机；日立h 6 0 0 i v 型透射电子显微镜。 2 3 试验方法 2 3 1 实验分组 大鼠l d 5 0 为临床剂量的3 0 0 倍，长期毒性起始剂量( 小剂量) 取l d 5 0 的1 1 0 ，按等比计算中剂量和大剂量。实验动物给药量和分组如表2 1 所 示。 表3大鼠灌胃山豆根水提物重复给药毒性试验分组设计 注：人体重按6 0 k g 计算，每天服用山豆根生药按1 0 9 d ，人等效剂量换算参照文献p 1 。 2 3 2 给药途径和方法 大鼠适应性饲养1 周后开始灌胃给药，给药体积为l m l 1 0 0 9 体重，试 验过程中根据体重随时调整给药量。每天定时给药1 次，每周给药6 天， 连续给药3 个月，给药期间动物自由摄食饮水。未次给药后一定时间，动 物禁食不禁水1 2 小时，股动、静脉放血处死动物，收集血液，剖取相应组 织器官进行检测。 2 3 3 观测指标与时间 每周称动物体重和饲料量1 次，给药1 个月、3 个月及停药后2 周，每 组活杀1 0 只动物，雌雄各5 只，进行血液学、血液生化学、系统尸体解剖 及组织病理学和超微结构透射电镜检测，具体指标见表4 。 主要脏器、组织取出后以1 0 福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片5 9 r n ， h e 染色，光镜观察组织病理学变化。同时取部分小肠、结肠，迅速以3 戊二醛预固定，l 四氧化莪再固定，丙酮逐级脱水，e p o n 8 1 2 包埋，半薄 切片光学定位，超薄切片，醋酸铀及枸橼酸铅双重染色，透射电镜观察超 微结构病理变化。 表4观测指标、内容和时间 观测内容 观测时间 生理指标 指标( 2 0 项) 3 、血生化指标( 2 0 项) 4 、病理检查 精神状态、行为活动、纤体分泌、体表粘膜、粪便形状、皮肤被毛 每天 等； 体重；摄食量 每周 ( 1 )一般血液学指标：w 4 ，1 3 ，1 5 白细胞计数( w b c ) 血红蛋白( h g b ) 淋巴细胞( l ：r ) 单核细胞( m o )中性粒细胞( g r ) 嗜酸性粒细胞( e o ) 血小板压积( f c t ) 红细胞计数( r b c ) 网织红细胞( r e t ) 血红蛋白( h b ) 红细胞容积( h c t ) 平均红细胞血红蛋白含量( m c i d 平均红细胞体积( m c v ) 平均红细胞血红蛋白浓度( m c h c ) 红细胞分布宽度变异系数 ( r d w ) 血小板计数( f l a t ) 血小板分布宽度( p d w ) ( 2 ) 凝血指标t 凝血酶原时间( 呻 天门冬氨酸氨基转换酶( a s t ) 总胆固醇( t = c h ) 肌醉( c r c a ) 氯( c 1 ) 碱性磷酸酶( a l p ) 总胆红素( t - b i n ) 尿素氮( b u n ) 钾( i o 胆固醇( c h o i ) b 羟丁酸脱氢酶( h b d h ) ( 1 ) 系统尸检 ( 2 ) 脏器系数( 1 0 ) 血小板平均体积( m p v ) 白细胞总数及其分类( w b c + d c ) 活化部分凝血激酶时间( a p t t ) 白蛋白( 札b ) w 4 ，1 3 ，1 5 肌酸磷酸激酶( c k ) 钠( n a ) 丙氨酸氨基转换酶( 岫 总蛋白( t p ) 甘油三酷( 1 g ) 血糖( g l u ) 血清磷酸酶( j u ( p ) 乳酸脱氢酶( l d h ) 肌酸激酶同工酶( c k = m b ) w 4 ，1 3 ，1 5 脑心脏肝脏脾脏肾脏肺脏肾上腺胸腺 雄性动物睾丸、附睾、前列腺雌性动物子宫、卵巢 ( 3 ) 组织学检查( 3 0 ) 脑( 大脑、小脑、脑干)脊髓( 颈、胸、腰段) 胸腺 甲状旁腺小肠和大肠胰腺 肾上腺 心脏肺脏甲状旁腺 雄性动物附睾 雌性动物子宫 雄性动物前列腺 雌性动物卵巢 雄性动物睾丸 垂体甲状腺胃肝脏 肾脏脾脏肠系膜淋巴结胸骨和骨髓 2 4 统计分析 1 9 所有数据均为；士s 表示。采用p e m s 统计软件进行统计分析。 2 5实验结果 2 5 1 动物死亡情况见表5 。 表5动物死亡情况 2 5 2 一般观察 2 5 2 1 一般状况 山豆根水提物给药3 天后高剂量可见动物排稀便，进食量减少，精神 萎靡。持续给药一个月后症状有所缓解，给药组较对照组体重减缓，精神 、 不振，被毛脏乱、颜色较对照组暗黄；给药第5 周，排稀便现象有所好转， 但多数动物不同程度出现明显的颤抖，步态不稳；停药后该症状消失。 2 5 2 2 体重 表6 山豆根水提物重复给药3 个月对大鼠体重的影响( g ) 雄性 时间组别 ( w )对照组高剂量组中剂量组低剂量组 n = 1 5n = 2 0n = 1 5n = 1 5 02 2 3 6 1 + 9 1 22 1 5 8 2 士8 3 7 2 1 4 2 6 4 - 1 8 6 32 1 0 8 4 + 1 5 0 8 1 2 7 2 4 6 4 - 1 5 5 32 2 5 6 3 + 1 4 4 92 5 5 1 2 + 2 4 4 62 4 3 1 5 4 - 1 7 0 4 n = 1 5n = 1 9n = 1 5n = 1 5 2 3 0 2 1 1 4 - 1 3 8 72 4 5 1 6 士3 2 0 7 *3 0 0 4 1 4 - 3 7 5 62 8 9 6 1 4 - 1 6 7 4 33 5 6 6 1 4 - 1 7 4 12 9 5 0 9 士2 6 8 1 木3 6 6 6 8 4 - 2 6 4 73 3 0 2 7 4 - 1 1 2 6 4 3 7 7 4 7 4 - 2 2 8 13 2 3 8 1 4 - 2 4 5 1 27 4 2 6 士1 2 1 53 3 4 2 6 4 - 1 5 0 5 n - - l on = 1 4n = l on = l o 5 2 5 1 6 2 - - 1 ：1 4 0 82 5 6 8 3 - 4 - 1 4 1 3 毒3 6 2 4 1 4 - 2 4 5 22 5 3 6 8 4 - 1 2 5 0 64 1 4 8 5 4 - 5 1 1 43 8 8 6 5 4 - 3 0 1 14 1 8 8 2 士3 0 0 64 0 4 4 5 4 - 1 6 2 8 7 4 3 9 2 1 4 - 5 8 1 63 9 7 6 2 4 - 3 4 6 2 * 4 3 0 8 3 4 - 3 5 6 84 4 3 6 5 4 - 2 4 5 0 84 4 6 11 4 - 5 8 133 9 0 2 6 士3 0 9 4 * 4 4 6 8 0 士4 0 8 0 4 5 0 4 4 4 - 2 2 7 6 94 7 0 6 3 4 - 5 7 5 13 8 5 2 2 士2 8 8 7 4 6 2 4 4 4 - 3 9 9 74 5 9 8 2 士2 1 0 0 1 04 8 5 8 8 4 - 6 1 7 0 3 7 9 6 3 4 - 2 2 6 6 4 5 8 8 6 士3 2 2 14 7 7 3 14 - 2 6 3 7 1 1 4 9 2 8 5 4 - 5 2 8 03 8 3 4 1 4 - 3 3 2 8 掌幸4 7 4 2 1 4 - 3 6 1 84 8 7 8 2 士2 6 6 7 1 2 4 8 0 4 2 4 - 5 6 9 63 4 0 1 2 士2 2 4 4 奉4 4 3 4 1 + 3 8 4 84 6 8 8 钍2 7 7 6 1 35 0 0 2 3 4 - 5 3 2 33 7 5 5 6 士2 1 5 6 木 4 5 2 9 6 4 - 4 0 1 24 9 6 2 3 4 - 3 0 6 3 n = 5n - - 9 n - - 5n = 5 1 45 2 3 6 3 4 - 5 3 6 03 7 5 2 1 4 - 2 0 7 0 * 4 7 4 8 2 士4 8 6 55 1 4 7 6 士3 6 2 6 1 5 5 5 4 4 1 4 - 3 7 7 24 8 1 4 1 4 - 3 5 5 3 宰枣5 0 3 6 2 4 - 9 0 2 25 7 3 4 4 - 6 3 2 8 注：n 为动物数；与同期对照比，p o 0 5 ，枣木p o 0 1 2 1 表7 山豆根水提物重复给药3 个月对大鼠体重的影响( g ) 一雌性 时间( w ) 组别 对照组高剂量组中剂量组 低剂量组 n - - 1 5 n = 2 0 n = 1 5n = l5 0 1 8 6 6 6 a ：1 2 1 7 1 7 6 6 2 a ：3 1 5 2 1 6 3 8 2 - 4 2 2 81 7 1 6 3 4 - 5 9 8 2 0 2 0 9 - j = 1 4 6 2 1 9 8 6 3 士3 7 9 11 8 1 6 2 + 7 6 6 1 8 9 6 8 士7 5 6 n = 1 5 n = 1 8n = 1 5 n = 5 2 2 6 6 3 士1 7 3 5 2 1 0 8 6 - j ：4 4 2 31 9 4 2 6 士8 1 6 2 0 5 8 3 - 4 - 7 6 9 2 5 0 11 士19 8 6 2 3 0 2 8 士5 6 8 82 4 6 6 3 4 - 11 4 8 2 4 2 6 3 士5 0 4 2 5 6 6 3 士2 1 1 8 2 3 5 6 1 士3 1 0 02 4 3 6 0 - j ：1 2 8 4 2 4 9 o o a ：2 5 5 n = l o n = l on = l o n - - l o 52 51 6 2 - 士：1 4 0 8 2 6 5 8 3 士1 4 132 6 2 4 7 士2 4 5 2 2 5 3 6 5 士1 2 5 0 6 2 6 7 2 4 + 2 5 4 1 2 7 4 5 5 士7 7 2 2 6 3 2 7 士2 7 6 22 6 1 6 5 士1 2 5 8 7 2 7 1 8 9 - a ：2 6 4 9 2 8 7 3 3 士9 9 52 8 0 8 1 士2 5 4 3 2 6 3 6 钍2 3 6 2 8 2 7 3 2 5 士2 7 0 3 2 8 2 8 3 士11 9 0 2 8 2 4 4 士2 1 312 6 7 8 6 士2 0 3 3 n = l on = 1 2 n - - l o n = l o 9 2 8 6 2 5 士2 5 9 4 2 9 2 3 3 士9 8 3 2 7 5 8 6 + 2 5 7 0 2 6 8 1 4 士2 3 4 8 1 0 1 1 1 2 1 3 n = l on - - 1l n = l o n = l o 2 8 4 1 1 士2 6 8 92 7 3 1 7 士1 8 7 8 2 7 9 4 5 士2 6 4 2 2 7 0 8 1 士2 5 5 0 2 8 9 1 6 - 士3 0 5 9 2 7 3 1 6 士1 5 0 32 8 6 2 5 士2 9 8 0 2 7 3 2 6 - 士2 2 8 6 2 8 2 2 1 士3 2 8 62 5 1 3 3 士1 2 2 5 2 7 2 8 2 士2 9 3 72 6 6 3 2 a = 2 5 4 6 2 8 9 2 3 士3 1 2 5 2 6 0 5 5 士1 5 6 22 7 6 2 3 士1 8 5 9 2 7 5 5 6 - z ：2 5 2 3 n = 5 n = 5 n = 5n = 5 2 9 8 3 5 士3 3 9 0 2 6 8 7 5 圭1 7 9 42 8 1 0 7 士7 4 8 2 8 6 1 5 士2 2 3 0 1 5 2 8 5 1 4 + 6 4 1 4 2 8 3 0 9 士6 4 3 82 9 8 2 2 士4 8 1 4 2 7 3 5 2 - 4 - 1 7 3 注：n 为动物数；与同期对照比，p o 0 5 ，木幸p 0 0 1 123 4 56 78 9 1 01 11 21 31 4 时间向 图2 2 山豆根水提取物重复给药3 个月雄性大鼠体重变化 与同期对照比，幸p o 0 5 ，掌幸p o o 1 图2 3 山豆根水提取物重复给药3 个月雌性大鼠体重变化 与同期对照比，p o 0 5 ，母奉p o 0 1 由表6 、7 ，图2 2 、2 3 可知山豆根水提物高剂量组动物体重增长出 现明显的抑制，给药2 周后与对照组相比较出现显著性差异，其后雄鼠在 给药期间体重差异显著，雌鼠一直处于缓慢增长状态由于个体差异较大， 与对照组比较没有统计学差异，恢复期动物的体重增长基本恢复正常。中 低剂量组动物的体重和体重增长与同期对照组比较无明显差异。 表8 山豆根水提物重复给药3 个月对大鼠摄食量的影响( g 只天) 一雄性 检查时间( w )组别 对照组高剂量组中剂量组低剂量组 n = 1 5n = 2 0 n = 1 5n - - 1 5 0 1 7 6 11 8 8 01 8 2 21 8 3 3 12 2 1 0 1 9 6 11 9 0 42 1 2 8 n = 1 5n = 1 9n = 1 5n - - 1 5 22 3 5 62 0 1 6 2 1 5 62 2 3 1 32 3 8 51 8 8 22 0 9 82 1 9 4 42 4 6 0 1 7 8 41 8 8 01 8 1 2 5 6 n = l o 2 2 7 2 2 4 1 5 2 0 5 7 2 0 7 7 2 2 7 7 2 3 2 4 2 5 4 8 2 6 1 7 2 7 7 1 n = 5 2 7 8 6 2 8 1 4 1 1 = 1 4 1 9 1 3 2 4 2 5 1 8 0 4 2 4 9 0 2 0 o o 1 6 2 2 2 5 9 8 2 0 4 0 2 0 1 5 n = 9 2 3 5 6 2 7 2 3 1 1 = 1 0 2 0 0 4 2 4 1 0 1 9 5 0 2 4 1 9 1 8 5 8 1 7 3 4 2 8 1 4 2 1 5 l 2 2 1 0 n = 5 2 4 8 9 2 7 5 7 n - - l o 2 0 6 2 2 6 9 1 1 9 9 0 2 6 3 5 1 9 1 3 2 6 8 2 2 4 0 0 2 4 7 2 2 5 1 3 n - - 5 2 7 4 5 2 8 3 6 表9 山豆根水提物重复给药3 个月对大鼠摄食量的影响( 只天) 一雌性 检查时间( w )组别 对照组高剂量组中剂量组低剂量组 z n = 1 5n = 2 0n = 1 5n = 1 5 01 8 7 1 1 7 9 51 7 5 71 8 0 4 1 2 0 1 51 8 8 l1 8 5 21 8 9 5 n = 1 5n = 1 8 n = 1 5n = 1 5 2 2 0 2 51 4 0 21 6 2 31 6 8 9 31 8 0 51 2 9 8 1 4 0 01 5 4 5 4 2 1 3 61 1 3 51 7 7 01 6 0 1 n = l on = 1 3 n = l on = l o 5 1 9 0 21 9 5 12 0 8 82 1 3 7 62 1 2 12 0 4 8 2 4 4 42 0 6 7 7 1 8 5 71 5 0 21 5 6 21 5 6 2 81 7 2 11 8 7 2 2 0 3 21 7 5 2 n = l on = 1 2n = l on = l o 9 2 0 0 01 7 7 31 3 0 61 8 8 5 n = 1 1 1 02 0 0 2 1 3 4 81 8 3 51 8 1 4 1 1 2 3 1 71 6 0 82 1 1 l2 0 5 2 1 2 2 4 1 51 6 2 61 8 3 41 9 0 2 1 32 3 2 31 9 5 61 9 5 82 0 6 3 n = 5 1 42 2 1 12 1 2 32 0 8 92 1 3 6 1 52 1 0 42 0 0 6 2 1 8 92 2 0 0 注：n 为动物数 2 5 3 摄食量 在整个试验期间可观察到，高剂量组进食量最少，其次中剂量组，小 剂量组，低于空白对照组，并且呈量效关系，可见山豆根水提物对大鼠摄 食量有明显的影响。大剂量组动物在第2 周体重增长缓慢。 2 5 4 血液学和血生化指标检查 2 5 4 1 血液学指标的变化 见表1 0 。给药1 个月，山豆根水提物高剂量m c v 、r d w 升高，中剂 量g r 降低，小剂量组r b c 、m c v 、g r 降低，m c h 升高。给药3 个 月大剂量m c h c 升高，小剂量g r 升高；恢复期结束时大剂量m c v 、 r d w 升高；小剂量g r 降低。这些指标尽管有统计学差异，但没有明显 的时效、量效关系，并且都在各指标的正常范围内波动。 2 5 4 2 血生化指标的变化 由表1 1 可见。给药1 个月，山豆根水提取物大剂量组c h o l 、t g 明 显升高，b u n 、a s t 降低；中剂量组b u n 、t g 降低；小剂量组g l u 、b u n 明显降低；给药3 个月高剂量组a l t 、a k p 明显升高，t p 、c k 降低；中剂 量组a l t 、c h o l 明显升高，g l u 降低；恢复期结束大