（农业机械化工程专业论文）玉米浸泡水中脂多糖及蛋白质的开发利用研究.pdf

摘要 玉米是世界三大粮食作物之一，也是我国的主要农作物之一。我国玉米消费主 要分为食用消费和工业消费，工业消费一直占消费总量的8 0 以上，并且在不断上 升。因此提高玉米的综合利用水平，提高玉米的经济效益，具有重要的意义。 玉米8 0 以上成分为淀粉类物质，因此大量用于生产淀粉，当前我国很多玉米 淀粉厂都具有相当的生产规模。玉米湿法加工淀粉过程中，会产生大量的浸泡水， 过去多数淀粉厂将其作为废料排放或浓缩为玉米浆出售。在玉米浸泡水中含有丰富 的蛋白质及脂多糖( l p s ) ，脂多糖是一种具有生物活性的物质，在抗肿瘤、增强 人体免疫力方面，具有重要作用。如果将蛋白质及脂多糖从玉米浸泡水中提取出来， 就可以变废为宝，大大提高淀粉厂的经济效益。 课题先采用异染法及其它方法测定了玉米浸泡水的组成，结果表明玉米浸泡水 中确实含有脂多糖，还含有蛋自质、糖类( 包括一般多糖) 、酸类及灰分等，有开 发利用价值。 浸泡水中含量最高的固形物是蛋白质，脂多糖含量非常小，因此首先考虑将大 部分蛋白质分离出来，再将浸泡水浓缩，然后进一步去除蛋白质及一般多糖。利用 脂多糖易被活性炭吸附的特点，用活性炭将脂多糖从经过浓缩和去蛋白的浸泡水中 吸附分离出来。部分蛋白质及般多糖会随腊多糖一起被活性炭吸附，因此下一步 除了要考虑使脂多糖从活性炭上脱附以外，还要考虑脂多糖的提纯。该课题将脂多 糖脱附与提纯两步合并为一步，通过色谱分离实现。 最后，对玉米浸泡水利用进行了中试和产业化分析，分析结果表明，对玉米浸 泡水的利用一旦形成产业化，就会产生很高的经济及社会效益。 关键词：玉米浸泡水：脂多糖；蛋白质；色谱分离；膜分离 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方步卜，论亳守不包含其他 人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得翅毖丝五鲎 或其他教 育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何 贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：橱艚种蓼 签字日期：夕哆年f 月彩日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解潮鲤l 必堂有关保留、使用学位论文的规定， 有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和 借阅。本人授权爱谊幽龌可以将学位论文的全都或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签每啪4 砾眵 导师签名： 膨午 签字日期：朋年j 月名日 签字日期。汨户年，月妙日 ! 型! 查些查堂垫皇三矍兰堕 些堡要! 三鲞星塑查主堕查塑垦堡自堕堕互垄! ! 旦! ! 堑 引言 玉米是世界上也是我国最重要的农作物之一，种植历史早，曾是一种人类最重 要的食物来源。随着人们生活水平的提高，玉米的主食地位已逐渐被其它花样繁多 的食品所取代，但玉米的种植面积并未因此而减少，当前仅我国玉米年产量就超过 了1 3 亿吨。 玉米的主要用途已经从食物转向了工业利用。工业上利用玉米的重要途径之一 是用它来生产淀粉“。淀粉可再进一步加工成其它产品，如各类淀粉糖、变性淀粉、 及各种有机化学品。这些产品可作为食品添加剂或用于开发各类健康食品。 在淀粉生产过程中，会产生大量的副产物。如湿磨法生产玉米淀粉时，首先要 将玉米粒放在水中浸泡，并加入一定的化学药品如亚硫酸等，浸泡时间一般在 5 0 6 0 个小时左右。玉米粒浸泡后留下的废水称为浸泡水或浸渍水，通常每处理一 吨玉米就会产生o 8 m 3 的浸泡水，浸泡水中含有植酸、蛋白质及脂多糖等大量有价 值的物质。玉米提取淀粉后还会留下富含蛋白质及纤维素的玉米黄浆。 当前玉米淀粉厂的经济效益，除了来源于淀粉本身及其深加工产品以外，还来 源于浸泡水、黄浆等副产物的综合加工利用。国外一些国家对玉米的整体利用率是 很高的，象美国等国家可达到9 9 ，而我国目前对玉米的综合利用率还很低，尤其 是一些中小型淀粉厂，利用率通常只有5 0 5 5 ，这样的淀粉厂经济效益很低， 和发达国家的淀粉厂相比根本没有竞争力。 从另一个角度考虑，如果不能对淀粉厂一些副产物进行充分的利用，不仅浪费 了大量资源，而且还会造成环境的污染，包括大气及水体污染。 为了提高我国玉米的综合利用率，众多科研工作者已经对玉米淀粉厂黄浆及浸 泡水的利用进行了大量的研究。其中黄浆的利用相对而言比较简单，主要是提取其 中的蛋白质、膳食纤维及植酸等物质并加以利用。有些淀粉厂虽然不能提取其中的 有用成分分别加以利用，但也将黄浆浓缩，作为蛋白粉出售。这样做虽然未能充分 体现玉米黄浆的全部价值，也在一定程度上减小了资源浪费。 玉米浸泡水的综合利用是一个更迫切需要解决的问题。就当前情况看，很多淀 粉厂根本不利用浸泡水，而是将它当作废水直接排放掉。实际上浸泡水中含有大量 植酸、蛋白质、脂多糖等物质，尤其是脂多糖，同其它植物脂多糖一样，具有生物 学活性，能提高人体免疫力，可以用于医药及健康食品的生产上，具有很高的生物 学价值及经济价值，不能加以利用非常可惜。且浸泡水排入其他水体后，会造成这 些水体化学耗氧量及生物耗氧量增加，形成水体污染；蛋白质及其它有机物在水体 中分解后还会产生二氧化硫及氮氧化物，因而又能造成大气污染。 关于浸泡水的利用，已经有很多人进行了研究。对植酸的利用，在工业上相对 较为成熟：对蛋白质的利用有人提出了部分回收法和完全回收法；对浸泡水中脂多 糖的利用，也有文献报道。但已有的回收利用方法都存在一定的缺陷，或是回收利 河北农业大学机电工程学院曲保雪：玉米浸泡水中脂多糖及蛋白质的开发利用研究 用不完全，或是回收操作过于繁琐，或是成本较高，这一切都不利于迅速实现和推 广浸泡水利用的工业化。 本课题是在上述背景下提出的，作者力图在前人研究的基础之上，克服已有方 法的缺陷，寻找一种更简单、成本更低以及更易实现工业化的浸泡水中脂多糖及蛋 白质利用新途径。 2 塑! ! 查些查堂塑皇三堡堂堕 些堡量! 至鲞望塑查堕墨塑墨堡鱼堕塑墅苎型! 塑 1 概述 1 1 我国玉米利用情况 玉米又称玉蜀黍，是世界三大粮食作物之一，也是我国的主要农作物之一， 占我国粮食总产量的2 5 。当前我国玉米年产量已超过i 3 亿吨，仅次于美国，居 世界第二位。据权威机构和有关专家预计，2 0 0 5 年玉米产量将达到1 6 1 亿吨。 我国玉米消费主要分为食用消费和工业消费，食用消费量目前每年仅1 7 0 0 万吨左 右，且有逐年下降的趋势工业消费一直占消费总量的8 0 以上，并且在不断上升。 在很多玉米产区，玉米并不作为主食，因此提高玉米工业上的综合利用水平，提高 玉米的经济效益，具有重要的意义。 玉米8 0 以上成分为淀粉类物质，淀粉的出路决定了玉米深加工企业的发展。 当前我国玉米淀粉的年产量为4 7 0 万吨左右，玉米淀粉经进一步加工可以得到大量 高附加值产品，象各类淀粉糖、变性淀粉、及各种有机化学品等等。淀粉糖包括葡 萄糖浆、麦芽糖浆、含4 2 果糖的果葡糖浆和含5 5 果糖的高果糖浆以及医用结 晶葡萄糖，这些产品可作为食品添加剂或用于开发各类健康食品。当前玉米生产淀 粉以湿磨法为主，其综合利用产品如下图( 图1 1 ) ”1 ： 其中的变性淀粉是以原淀粉( 又称天然淀粉) 为主要原料，采用化学法、物理 法或生物方法进行变性处理，改变原淀粉的物理、化学特性后得到的。变性淀粉为 许多工业部门的新型原材料。例如纺织行业，用变性淀粉制成一种新的不污染环境、 对人体无害的浆料取代乙烯类浆料。造纸及纸制品行业，用变性淀粉制成各种助剂、 施胶剂、粘结剂来提高纸张内在和表面质量、改善印刷性能，这些应用使变性淀粉 成了造纸行业第三大原材料。另外在食品行业、水产饮料行业、建材行业等等，都 在逐渐推广使用变性淀粉，使用面和使用量日益扩大。 用淀粉生产的另一大类衍生物是有机化学产品，在这类产品中产量最大的是发 酵酒精，玉米酒精生产开始于= 战以前，但直到2 0 世纪7 0 年代，才大量生产。最 初生产酒精的目的是作为生产橡胶的工艺辅剂和燃料填充剂，而当前主要是减少汽 车尾气的有害成份，清洁空气。汽油中加1 0 燃料酒精掺合成酒精汽油，可以不需 要对发动机作任何改造。目前的研究表明有望使用酒精作为燃料柴油的添加剂。 用淀粉生产有机酸、氨基酸也是已工业化的、获得高附加值产品的途径之一。 它可以生产赖氨酸、异亮氨酸、精氨酸、结氨酸等。味精( 谷氨酸钠) 生产当前也 以玉米淀粉为主要原料。淀粉生产的有机酸有柠檬酸、乳酸、苹果酸、衣康酸、草 酸等。其中柠檬酸产量较大，柠檬酸在食品工业、医药业、洗涤业、纺织工业、化 妆品业上都有广泛的应用。 1 9 9 8 年世界产淀粉1 6 0 0 万吨，其中大部分是玉米淀粉，马铃薯淀粉只有1 6 0 万吨。虽然根据玉米的化学成分，除了淀粉外，还含有蛋白质、脂肪、纤维等物质。 由于条件的限制，过去往往只利用其中某一种组分，而将其它组分当作”三废”处理 河北农业大学机电工程学院 曲保雪：玉米漫泡水中脂多糖及蛋白质的开发利用研究 和排放，不仅浪费资源，经济效益低，而且造成环境污染。 我国大型淀粉厂目前对于浸泡水的利用通常是将它浓缩至含固形物7 0 左右 的玉米浆，应用于抗生素和味精行业。而我国仅当前每年就约有5 0 0 万吨玉米用于 生产淀粉，按每吨玉米产生0 8 m 3 的浸泡水计，每年约产生4 0 0 万立方米浸泡液， 由于近年玉米淀粉生产增长较快，所以玉米浆的出路也成了问题，特别对于玉米淀 粉厂比较集中的产区。 玉米 ( 温寡 法加 工) 淀粉 6 0 ) 玉米胚 ( 7 ) 废水 10 * ) 废渍 2 0 ) 变性淀粉 米胚饼+ 饲料蛋白粉 纤维蛋白饲料、饲科酵母、水解蛋白 豉，菲酊、魔乡糖等 图i 一1 湿磨法玉米淀粉厂产品的综合利用 1 2 进一步提高玉米的综合利用水平的必要性 i 2 1 国外玉米综合利用情况 4 表面活性剂 结晶葡萄糖 维生素c 油漆 牙膏 酸 凝固荆) 河北农业大学机电工程学院曲保雪：玉米浸泡水中脂兰塑墨堡旦堕堕墅垄型星! ! 堕 国外一些国家对玉米的综合利用率很高，例如美国对玉米的整体利用率已达到 了9 9 “+ ”，玉米副产品加工的收入高于其主产品( 如淀粉) 的收入。他们对玉米 的深加工，精度高、质量好、产品种类多、原料利用率高。 同我国一样，国外也把大量玉米用来生产玉米淀粉，然后将淀粉迸一步加工成 为变性淀粉、各种淀粉衍生物、饴糖、果葡糖浆、高果糖浆、酒精等产品。同时， 他们还从玉米胚中提取玉米油。玉米油中含有5 9 的亚油酸，还含有维生索e ，对 人体生长发育、肝功能、血栓胆固醇的降低、预防高血压等方面都具有一定功效”。 玉米朊和玉米蛋白是另外两种玉米籽粒综合利用产品，玉米朊是一种高分子氨 基酸聚合物，可用作糖果、硬果、粮食制品等食品的涂料，起到保持水分、抗磨、 抗油脂、抗微生物等作用。 除了玉米籽粒，国外对玉米轴、玉米苞叶及秸秆也都能充分利用。 1 2 2 提高我国玉米综合利用率的必要性 目前，我国玉米研究和生产与先进的国家相比有很大差距“7 8 “”。某些大型 玉米淀粉生产企业原料利用率也只有8 0 ，而广大中小企业只有5 0 - 5 5 。用玉米深 加工综合利用技术对现有玉米加工企业进行改造，对我国粮食加工业的发展是十分 必要的。 玉米湿法加工淀粉过程中，会产生大量的浸泡水，当前多数淀粉厂( 尤其是中 小型淀粉厂) 将其作为废料排放或最多浓缩为玉米浆出售e i t , g , 1 0 , 1 1 浓缩后的玉米 浆一般作为配合饲料，由于玉米浆中含有植酸，会影响动物对饲料的消化和吸收“”。 玉米浸泡水的利用，已有多人进行了研究，如以它为原料提取菲酊并进一步制 取肌醇和植酸：将浸泡水用石灰中和，使其p h 值达到5 8 左右，再经过精滤、压 滤、干燥、粉碎等工序，即可得到粉末状产品o ”1 。菲酊水解即可生成肌醇。让肌 醇流经强酸离子交换树脂，再经脱色、真空蒸发可得到植酸。这不仅可提高工厂的 经济效益，还可减少废水对环境造成的污染。但对于浸泡水中另外两种重要成分 蛋白质和脂多糖却未加利用。 2 1 世纪国际食品工业的发展与竞争，主要是食品和高新技术的发展与竞争，要 提高我国的玉米综合利用水平，进一步提高其附加值，不能只依靠传统的方法，要 充分利用当前的高新技术如膜分离技术、冷冻干燥技术、生物技术、微胶囊、超临 界萃取、超微粉碎、高速冷冻粉碎等技术等，这样才能大幅度提高玉米的综合利用 率，生产具有高附加值的产品，提高玉米综合加工企业的经济效益。 提高玉米的综合利用水平，可以达到如下目的： ( ! ) 提高淀粉厂经济效益及玉米综合利用率 目前淀粉价格比较便宜，淀粉厂要取得更好的经济效益，应更多的依赖于淀粉 生产中的副产物，如从玉米胚中提取的玉米油、浸泡水及黄浆中的蛋白质、菲酊、 玉米黄色素“1 、膳食纤维、脂多糖等等。就这类产品而言，即使是在比较大的淀 粉厂中，也只是胚芽油、菲酊生产比较普遍，更不用说小厂了，所以目前淀粉厂玉 米的综合利用率是非常低的。很多淀粉厂对浸泡水的处理只是浓缩后作为饲料出 河北农业大学机电工程学院曲保雪：玉米浸泡水中脂多糖及蛋白质的开发利用研究 售，甚至直接排放，这就造成了资源的严重浪费，使淀粉厂不能获得应有的高效益。 生物学价值 除了从经济角度考虑以外，充分利用玉米淀粉加工中产生的浸泡水还具有重大 的社会意义：随着人类科技的不断进步和发展，特别是由于人类生活医疗条件的不 断改善、抵抗自然灾害能力的提高等，人类的预期寿命不断增长，这是好事，是社 会的进步，但它同时也带来了一个问题：社会的老龄化问题。目前世界上5 0 多个 国家己面临人口老龄化。据统计，我国目前6 0 岁以上的老年人已超过1 3 亿，占 总人口1 0 5 ，进入了老年型国家，养老问题将成为我国最主要的社会问题之一。 同时，环境的恶化以及社会竞争加剧，使得患”文明病”( 高血脂、高血糖、高血压 等) 的人越来越多。目前，我国有6 0 0 0 多万人患高血脂、高血压、心血管病；还有 1 5 0 0 万糖尿病人，肿瘤、高血压、心血管病的死亡率占全年总死亡率的7 0 “。 老年人、肿瘤病人等机体代谢能力下降者，迫切的需要提高免疫力，因而有许 多科技工作者都在积极开发具有抗肿瘤、抗心血管疾病、增强机体免疫力的保健品 和药品。 玉米浸泡水中含有的许多物质均具有生理活性，如玉米浸泡水中含丰富的蛋白 质，其中的白蛋白、球蛋白均可增强人体免疫力。玉米浸泡水中还含有一种被称为 脂多糖的物质( 1 i p o p o l y s a c c h a r i d e 。简写为l p s ) ，脂多糖也是浸泡水中所含有的 经济价值较高的物质，在生物学上，它既可提高人体的特异性免疫力，又可提高人 体的非特异性免疫力。脂多糖能诱生干扰素及肿瘤坏死因子( t n f ) “，也可以直 接或间接激活b 淋巴细胞及巨噬细胞“”。 减少环境污染 前已述及，淀粉厂，尤其是中小型厂，对玉米浸泡水的利用率极低，很多小厂 是将其不加任何处理直接排放入河流或湖泊。浸泡水中含有大量的有机质，因而 c o d ( 化学耗氧量) 、b o d ( 生物耗氧量) 都非常高，会造成水中含氧量急剧下降， 最终导致鱼类大批死亡。另外，这些有机质在分解过程中还会产生二氧化硫及氮氧 化物，造成大气污染。 1 3 浸泡水中脂多糖及蛋白质的利用价值 i 3 1 蛋白质 玉米浸泡水中所含有的蛋白质大致可以分为四类：白蛋白、球蛋白、醇溶蛋白 和谷蛋白“1 8 1 它们在玉米及玉米蛋白中所占比例如下f 表1 - 1 ： 表l 一1 玉米中的蛋白质 蛋白质种类白蛋白球蛋白醇溶蛋白 谷蛋白 在玉米粒中的114 4 含量( ) 在玉米蛋白中89 3 94 0 的比例( ) 6 河北农业大学机电工程学院 曲保雪：玉米浸泡水中脂多糖及蛋白质的开发利用研究 白蛋白和球蛋白具有生物学活性，经济价值较高，但含量较小，只占蛋白总量 的2 0 左右。 对于一个年处理万吨玉米的淀粉厂，它每年产生的浸泡水量约为8 0 0 0 m 2 ，浸泡 水中大约含有2 的蛋白质，如果不利用，每年仅蛋白质就要白白排放掉1 6 0 吨! 将浸泡水中的蛋白质提取出来，可用于生产各类食品添加剂、水解蛋白及调味 品等。目前，国内外均有这方面的研究“9 。比如日本回收玉米蛋白作饲料和酱油 原料：美国采用膜分离技术分离出蛋白质后，作为食品和美容品添加剂；如果能将 这些蛋白质转变为各类氨基酸制剂，或水解后生产生物活性肽( 用于制药) ”“，其 经济价值将会更高。 蛋白质的性质及其价值人们已经比较熟悉了，所以以下将着重介绍一下玉米浸 泡水中另外一种重要的物质：脂多糖。 1 3 2 脂多糖 1 _ 3 2 1 脂多糖概述 脂多糖原系指覆盖于革兰氏阴性菌外膜的一种复合多糖，原来指的都为细菌 来源。细菌脂多糖也通称为细菌内毒素( b a c t e r i a le n d o t o x i n ) ，为细菌毒素( 包含 内毒素和外毒素) 之一。1 9 3 3 年b o i v i n ”2 1 首先从鼠伤寒杆蒲中提取得到细菌内毒 素，当时因其与一般蛋白质反应呈阴性，故称为脂多糖抗原，后来人们称之为b o i v i n 型抗原。另一些学者则因其具有0 型菌的特异抗原性而称之为0 抗原或菌体抗原。 至今研究较多、较成熟的仍为细菌来源的脂多糖，尤其是沙门氏杆菌来源的脂多糖， 在此基础上曾提出了几种沙门氏杆菌脂多糖的构造模型”。 脂多糖具有多种毒性反应，如致热性、白细胞增多( 小剂量) 或减少( 大剂量) 以及对小鼠致死作用等。由于其结构复杂、生物学活性多样，还能引起广泛而复杂 的病理变化，故一直为医学研究的重要课题。脂多糖研究主要集中在它们的毒副作 用以及免疫学方面，二十多年来已有大量的论著论述该方面的进展“。，近几年来， 针对脂多糖分子学结构方面的研究也不断增多。3 。 植物脂多糖的研究是从1 9 9 2 年日本学者杉源一郎等人从小麦面粉中提取得 到脂多糖开始的，并且发现该来源的脂多糖对糖尿病、胃溃疡、疼痛等疾病有抑制 作用，还具有降低血清胆固醇、促进动物、植物生长的功效以及增进鸡胚骨骼生 成和提高母鸡产蛋率等作用“。在他们以后的研究中又发现中国的许多中草药中含 有较多的脂多糖( 如昆布) “，也许这是中草药在治疗某些顽症方面较西药优越的原 因之一。从此，对于植物来源的脂多糖的研究不断深入。江南大学曾对脂多糖进行 过一系列的研究，其中包括对南瓜脂多糖的研究、对米糠脂多糖及玉米脂多糖进行 的研究“”。目前，植物脂多糖的研究已成为多糖研究的热点之一，有关植物脂多 糖的研究报道越来越多，植物脂多糖产品也不断面市。 1 3 2 2脂多糖的化学结构特征 革兰氏阴性菌细胞膜不同于革兰氏阳性菌细胞膜的一个重要方而是：革兰氏 塑! ! 坐些盔堂塑皇三堡堂堕 些堡要! 至鲞里塑查主塑兰塑墨墨鱼堕箜茎! 型! 塑! 塑 5 h 性菌的细胞壁含有较多低聚糖，而不含有脂多糖”；脂多糖为革兰氏阴性菌的特 有组分，其外膜中含有脂多糖、磷脂及蛋白质等成分，磷脂构成外膜双磷脂层。大 量的研究表明，脂多糖基本上由n 抗原寡糖链、核心寡糖链及脂质a ( l i p i d a ) 三部 分组成“。抗原寡糖链游离于菌体表面，其基部与核心寡糖相连；核心寡糖与脂 质a 相连并镶嵌于外膜磷腊层的外叶中，这种形式的结构赋予了脂多糖中极两性的 特性，因为脂多糖分子中具有一个亲脂部分( 脂质a ) 和一个亲水部分( 杂多糖) “。 o 一抗原寡糖链一般讲o 一抗原寡糖链由卜5 个单糖组成重复单位，重复单 位及链长的长度则取决于细菌的种类“。即使是从同一细菌提取得到的同一批脂多 糖也有很显著的微观异质性( m i c r o h e t e r o g e n e i t y ) 。o 一抗原寡糖链能与相应抗体 起特异性反应，故。一抗原寡糖链是各菌种血清学特异性的结构基础“。 核心寡糖核心寡糖由两部分较短的低聚糖链组成。外部核心低聚糖含有数 种已糖：内部核心含有庚糖及k d o ( 3 - 脱氧一甘露一辛酮糖酸) ，此两种成分为脂多 糖所特有。核心寡糖链k d o 以不耐碱( p h l l ) 的酮糖键与脂质a 的氨基葡萄糖相连。 脂质a 脂质a 由d 一氨基葡萄糖、磷酸及长链脂肪酸组成，氨基葡萄糖双糖 构成脂质a 的骨架，双糖之间以焦磷酸键于1 ，4 位相连”0 “1 。双糖的3 位羟基与核 心寡糖相接，双糖的氨基以酰胺键与羟基脂肪酸相连，而双糖上3 ，4 ，6 位上烃基则 以酯键分别与各种不饱和脂肪酸及羟基脂肪酸相连。 在菌体中脂多糖与双价阳离子和外膜磷脂紧密结合成复合物“，脂多糖的糖 链是脂质a 的助溶剂。脂质a 因含有疏水性中心( 酰化的双糖) 及亲水性边缘( 磷酸) ， 故为双相分子；因其含有酸性及碱性基团，故又为两性分子。这种特殊结构赋予脂 质a 以特殊的功能，它既与糖链结合为脂多糖构成菌体细胞壁的重要成分，成为防 止外界有害物质入侵、保护自身生存的屏障结构，又能与宿主细胞膜受体结合发挥 各种生物效应1 。 按照o 抗原抗原性不同可分成几十种血清型( s e r o g r o u p ) ，按照核心寡糖的结 构，脂多糖至今又可分成5 0 多种不同的化学型( c h e m o s y p e ) 结构。 己进行的植物脂多糖( 小麦脂多糖和米糠脂多糖等) 的化学结构研究表明，其 结构基本组成成分与细菌脂多糖相似，晟大的差别是植物脂多糖的分子量远远小于 细胞脂多糖，小麦脂多糖的分子量为5 0 0 0 左右，米糠脂多糖约为6 5 0 0 “，而细菌 脂多糖分子量在5 千到5 万之间。 1 3 2 _ 3 脂多糖的物理、化学特性 溶解性由于脂多糖中存在亲水性多糖和疏水性基团弓脂a ，这种结构赋 予脂多糖双相分子结构。除此之外，影响其水中溶解性原因是上述两种基团的相对 比例，如s 血清型脂多糖水中溶解度高于r 血清型，原因在于s 血清型多糖含量高 于r 血清型。提取脂多糖的方法对其溶解性也有一定的影响，如r 血清型采用c p p ( 氯 仿苯酚石油醚) 提取方法其最终产品的溶解性高于苯酚热水法。由于脂多糖中含 有磷酸和羰基阴离子基团，这两种基团对脂多糖的溶解性起重要的作用，磷酸基团 含量越低，其溶解性越差；同时两价阳离子的存在，也会导致脂多糖的聚集而沉淀 塑! ! 查些u 丈兰垫皇三堡兰堕 些堡重! 垩鲞望塑查旦堕兰塑墨里皇堕些翌垄型旦型窒 卜来。 热稳定性1 0 0 。c 时不发生明显的分解，1 2 0 c j j n 热4 小时可破坏9 8 ，1 8 0 加热2 小时或者2 5 0 。c ) j n 热3 0 分钟，可彻底被破坏”“。 对酸、碱、氧化剂耐受性一般多糖通常耐碱不耐酸，而脂多糖e h 于其含有 酮糖键，当p h 1 】时，发生水解。脂多糖也可被强酸和氧化剂破坏”“。 1 3 2 4 脂多糖对免疫系统的生物学活性 脂多糖的生物学活性非常复杂，对机体作用的原始动因也非单一。脂多糖的各 种生物活性是通过脂质a 表达。o 一抗原寡糖链及核心寡糖除具有免疫原性外，还 是脂质a 的增溶性载体。小剂量脂多糖刺激能增强机体的特异性及非特异性免疫 力，诱生干扰素及肿瘤坏死因子( t n f ) 。脂多糖可以直接或间接激活b 淋巴细胞、t 淋巴细胞及巨噬细胞。 脂多糖对淋巴细胞的作用脂多糖直接作用于b 淋巴细胞，增加d n a 合成， 从而促使b 淋巴细胞分裂“1 。因此脂多糖能取代t 淋巴细胞对b 淋巴细胞的辅助作 用。w a h l ”等报道脂多糖能激活b 淋巴细胞和t 淋巴细胞产生淋巴因子，如单核细 胞趋化因子和巨噬细胞激活因子。同时他们以纯化的淋巴细胞进行实验，证明脂多 糖可直接激活b 淋巴细胞产生淋巴因子，而激活t 淋巴细胞则需要巨噬细胞的协助。 最近对香茹多糖( l e n t i n a n ) 与腊多糖抑制肿瘤的功能与作用途径进行了比较研 究，研究结果表明香茹多糖诱导t n f ( 肿瘤坏死因子) 是t 细胞依赖型，而脂多糖诱 导t n f 是s h w a r t z m a n l i k e 反应；而且脂多糖能大量增加自然杀伤细胞的数量。其 优点是剂量小，5 0 0 p g k g 脂多糖能在注射2 小时后诱导产生l o o n g m l 白细胞介素， 而香菇脂多糖注射( 1 0 m g k g x 3 次) 在3 7 天仅诱导产生每毫升几百纳克自细胞介 素。 脂多糖对巨噬细胞和单核细胞的作用巨噬细胞和单核细胞对脂多糖很敏 感，仅纳克级量脂多糖即可引起反应。巨噬细胞经脂多耱作用后，细胞内非溶酶体 酶( 如乳酸脱氢酶、亮氨酸耐胺酶) 以及分泌到胞外的溶酶体酶( 如酸性磷酸酶、b n 一乙醚葡萄胺酶) 均增加，因此吞噬和杀菌能力也随之增强。 另外脂多糖能刺激单核细胞和巨噬细胞产生集落刺激因子( c s f ) ，体外试验中 该因子能刺激骨髓颗粒细胞和巨噬细胞集落的形成从而推想体内亦可能促使该两 类细胞的生成。n o w o t n y 等认为脂多糖的此种促进作用是核心寡糖的活性，而a p t e r n ”等却证实为脂质a 的活性，且提出脂多糖诱导产生集落刺激因子需要淋巴细 胞和巨噬细胞的协同作用，如将两种细胞分别与脂多糖培养，只产生少量集落刺激 因子，两种细胞按适当比例混合后与脂多糖共同孵育则可产生大量集落刺激因子。 r a m e m o n 1 等1 9 9 3 年系统的研究了脂多糖产生t n f 的模型。b e r e n d t ”等1 9 7 8 年报道了基于脂多糖的免疫学特征和抗肿瘤作用，详细研究了脂多糖对于激发态肿 瘤较高的抑制作用。t a k a s h i ”1 等1 9 9 6 年报道了不同剂量的脂多糖对于正常小鼠和 脂肪肝小鼠血清中脂类组织的酶体系的影响，研究表明脂多糖主要是刺激体内的巨 噬细胞产生t n f ，在超过一定剂量时会导致体内的脂类酶体系不正常。 9 河北农业人学机电工程学院| 1 保雪：玉米浸泡水中脂多糖及蛋白质的翌发币塑! 里堕 1 3 2 5 植物脂多糖与细菌脂多糖的生理活性比较 细菌脂多糖具有上述提到的众多有益的免疫增强作用，但长期以来一直未在临 床上进行应用，主要原因是细菌脂多糖具有很大的毒副作用。内毒素( 细菌脂多糖) 的毒副作用主要表现以下几种： ( 1 ) 致死性内毒素注入实验动物，常可导致动物死亡。常用小白鼠致死性和鸡 胚致死性作为内毒素生物学活性的试验方法之一，其机制尚不清楚。 ( 2 ) 致热性内毒素可使人体和动物发热，且人体对内毒素的致热性很敏感，采 用家兔法测定生物制品中的内毒素就是采用的该性质。一些菌苗注入人体后常伴有 发热现象，可能也与此有关。 ( 3 ) 损伤溶酶体膜内毒素被细胞吞饮后，与溶酶体膜作用，破坏溶酶体膜，释 放溶酶体酶，导致细胞自身溶解。 ( 4 ) 损伤线粒体膜内毒素能使线粒体膜结构损伤，抑制a t p 产生。 目前对于植物脂多糖生理活性研究结果显示，植物脂多糖在生理活性方面与 细菌脂多糖有很大的差别。主要表现为以下方面： 毒副作用半致死量是衡量受试物在一次大剂量给药后产生的毒性反应和死 亡情况。目前的研究认为植物脂多糖的口服基本无毒，符合”卫生、安全、回归自 然”规律。b a l b c 小白鼠腹腔注射毒性试验表明，植物脂多糖的半致死量较大，如 米糠脂多糖为0 2 6 9 6 9 k g ) ，而e c o l i 脂多糖( 细菌脂多糖) 腹腔注射半致死量 为2 9 0 m g k g 1 。 使用途径广由于植物脂多糖分子量比细菌脂多糖小得多，使得其有可能在 一种新型疗法皮肤渗透法中进行应用。 有效剂量低植物脂多糖的动物实验表明，其有效剂量远远低于一般活性多 糖( 如竹叶多糖、虫草多糖、香菇多糖、地衣多糖等) “2 6 ”。 两种脂多糖的生理活性方面的差别，充分表明植物脂多糖在临床上应用的优点 使用的有效剂量低、毒性小、使用途径广。植物脂多糖具有广泛的应用开发前 景。 1 4 浸泡水中脂多糖及蛋白质利用现状 对于玉米浸泡水的利用，已有许多人做出了有益的探索。 在蛋白质利用方面，有人提出了利用蒸发浓缩的方式“1 ，生产玉米蛋白粉作为 微生物培养基或作为饲料添加物。这种方法简单易行，浓缩过程中蛋白质损失小， 原料利用率高，但其缺陷也很明显：其一，浸泡液的浓度很低( 固形物含量通常低 于7 ) ，需要蒸发大量的水分，才能最终得到蛋白粉，因而能源消耗很大，而蛋白 粉经济价值又不是很高，一般只作为饲料添加剂或微生物培养基，故对大批的中小 型淀粉厂而言，其经济可行性还值得考虑。其二，蒸发工艺未考虑浸泡水中其它经 济价值较高的成分，如脂多糖，从这个角度讲，这种方法仍然造成了资源的浪费。 蛋白质利用方面还有部分回收方法“1 ，其实质是采用各种方法使浸泡水中的蛋 白质沉淀，再通过过滤将其分离出来。常用的方法有盐析法、生物碱沉淀法、等电 1 0 塑! ! 查些查堂盟皇三塑兰堕 些堡量! 至鲞望塑查童堕兰塑墨里鱼堕竺互垄型! ! ! ! 堑 点法等。这些方法存在的缺陷是蛋白质沉淀不完全，如等电点法分离出的蛋白质不 到浸泡水中蛋白质总量的4 0 ，生物碱沉淀法蛋白质回收率只有2 0 ，文献中对多种 蛋白质沉淀方法进行了研究，但并未对联合使用这些方法进行探索，未获得理想的 蛋白质回收率。另外，文献中也未考虑浸泡水中其它经济价值较高的组分( 如脂多 糖) 的利用。 对玉米浸泡水中的脂多糖的利用也有研究报道，如江南大学研究生李友林研究 了玉米浸泡水中脂多糖的提取和分离纯化方法“，该方法分三步：( 1 ) 浸泡水中蛋 白质的去除。( 2 ) 浸泡水的浓缩与脂多糖分离。( 3 ) 脂多糖提纯，得到高纯度的脂 多糖成品。这种方法具有实用性，但也存在着不足之处： 其第一步蛋白质的分离率过低，文献中采用调节p h 值沉淀法和超滤法去 除蛋白质，最后蛋白质去除率仅达到6 8 ，结果浸泡水中固形物仍以蛋白 质及一般多糖为主，而且这两类物质在浸泡水中的浓度仍是脂多糖的上千 倍。这对于先充分去除蛋白，再提取脂多糖的这一目的实现是十分不利的。 由于第一步蛋白质的去除不够充分，造成后续脂多糖提取过程过于复杂： 按照既定方案，去蛋白后对浸泡水进行浓缩，然后提取脂多糖，浓缩采用 纳米滤技术，但由于前面蛋白质去除不够充分，大量蛋白质在浓缩过程中 会很快堵塞纳米滤膜，致使无法获取较高的浓缩倍数，文献中采用了两次 纳米滤的方案：先第一次纳米滤，然后用乙醇沉淀法再次去蛋白，接着进 行第二次纳米滤浓缩，最终达到浓缩脂多糖的目的。但由于操作步骤多， 生产成本增加，脂多糖损失也比较大。 文献中采用乙醇沉淀法使浸泡水中的脂多糖沉淀，从而将它从浸泡水中分 离出来。但浸泡水中加入的乙醇，对脂多糖及蛋白质没有选择性，也就是 说，它在使脂多糖沉淀的同时，也使蛋白质沉淀下来，而且蛋白质的分子 量比脂多糖大，它比脂多糖更容易沉淀。虽然前面几次进行去蛋白操作， 但由于最初的浸泡水中蛋白质的含量远远高于脂多糖的含量，所以沉淀物 中仍有大量蛋白质，文献中最后得到的脂多糖粗产品，脂多糖的实际含量 只有2 4 。 文献中采用的乙醇沉淀法实际上是分步沉淀法，需要多次向浸泡水中加入 乙醇，将浸泡水中乙醇浓度调到规定值，每次加入乙醇后都要进行沉淀的 分离。这样操作就比较麻烦，应用于工业上生产成本必然相应增加。还有 就是这种方法乙醇的用量非常大，这一方面是由于进行脂多糖沉淀时溶液 中乙醇的浓度要求非常高( 文献中最后一次沉淀时，浸泡液中乙醇浓度为 8 5 ) ，另一方面，尽管经过浓缩，浸泡水的量仍然是非常大的，如年处理 万吨玉米的淀粉厂，它每年产生的浸泡水量约为8 0 0 0 m 3 ，假如浓缩8 倍， 仍然有1 0 0 0 m 3 。大量使用乙醇，无疑也是增加工业生产成本的一个重要因 素。 1 5 研究内容 河北农业大学机电工程学院曲保雪：玉米浸泡水中脂多糖及蛋白质的开甚孽! 用婴窦 为了提高湿法玉米淀粉厂的经济效益、提高我国玉米的综合利用水平，着重对 玉米浸泡液中蛋白质的分离；脂多糖的提取、分离和纯化进行研究。力图寻找一种 能够更充分利用浸泡水中的蛋白质及脂多糖，更简便、更实用的方法，研究内容主 要包括以下几个方面： 玉米浸泡液中蛋白质的分离 玉米脂多糖的浓缩、分离 玉米脂多糖的提纯 玉米浸泡水利用的工业化可行性研究 着重要解决以下几个问题： 确定一种高效率、低成本的蛋白质提取方案。 找到一种更为有效的从浸泡水中分离脂多糖的方法，它应有一定的选择 性，能初步将脂多糖与蛋白质分开。 确定一种新的脂多糖提纯方案，以获得高纯度的脂多糖产品。 2 河北农业大学机电工程学院曲保雷：玉米浸泡水中脂多糖及堡鱼堕盟墅垄型旦塑：塞 2 浸泡水成分分析及蛋白质的分离 生化分离制备过程中，必须对所要分离制备的物质进行追踪检测，这样才能顺 利进行分离制备工作。同样在进行玉米浸泡水的研究过程中，必须有一个完善的分 析检测方法，随时检测玉米浸泡水的组成，特别是其中脂多糖和蛋白质的含量变化。 对于蛋白质含量的测定，方法是成熟和确定的，而对于植物脂多糖的含量测定，现 在还没有一个统一的、为大家所公认的好方法。因而在进行蛋白质及脂多糖的分离 利用之前，首先要考虑选择一种比较好的脂多糖检测方法。 2 1 植物脂多糖检测方法的确定 一个完好的分析鉴定方法，不论是生物学方法或物理化学方法或是两者结合的 方法，必须具备以下要求： ( 1 ) 专一性或特异性强 ( 2 ) 重现性好 ( 3 ) 准确性大 ( 4 ) 操作简便 本节确定脂多糖检测方法，遵循以上原则。 2 1 1 脂多糖的检测方法概述 检测脂多糖的方法有多种，基本上可分为两类：生物学方法和化学方法。由于 脂多糖结构的复杂性，至今，仍没有一种公认的、可完全定量检测脂多糖方法。 脂多糖生物学检测方法都是在检测细菌内毒素的基础上建立起来的。通过测定 脂多糖的生物活性来确定样品的比活性。比较有代表性的方法有：鲎变形细胞溶解 物试验法( 简称鲎试验，l a l t e s t ) 、家兔法、半局部斯氏反应皮肤预备剂量( s p d m ) 测定法、免疫沉淀法和放射免疫法等数种。其中半局部斯氏反应皮肤预备剂量测定 法、免疫沉淀法和放射免疫法可用于实验性内毒素检测，但敏感性较低，方法不简 便，差异性较大。除了以上传统的方法，国内原无锡轻工大学陈正行博士在鲎试验 的基础上建立了一种灵敏度较高的方法一对硝基苯胺肽类底物法 4 3 o 几种主要的脂多糖检测方法的特点如下： ( 1 ) 鲎试验法与对硝基苯胺肽类底物法鲎试验法子1 9 6 4 年由l e v i n 和b a n g 创 立，后又经过不断改进，目前鲎试验法有三种改进方法；试管法、沉淀蛋白法、 微量玻片法。作为一种快速、简单、灵敏的体内检测方法现在广泛用于药品中微量 内毒素的测定。定性鲎试验反应是建立在鲎变形细胞溶解物与内毒素反应形成凝胶 的基础上，对此凝胶反应进行分子学水平的研究“”1 ，它的基本原理是鲎变形细胞 溶解物( 即鲎试剂) 中含有能被脂多糖激活的凝固系统，主要有：c 因子、b 因子、 凝固酶原以及凝固蛋白原。lps 先激活c 因子，活化的c 因子再激活b 因子，在 二价钙离子的协同作用下，b 因子再去激活凝固酶原，使其转变成活化的凝固酶， 塑! ! 查些叁兰垫皇三堡兰堕 堕堡重! 至鲞望塑查主堕兰塑垦墨自堕塑墅垄! 燮丝 此酶切断凝固蛋白原中特定位置的精氨酸肽链，形成凝固蛋白，产生凝胶现象。以 此为原理，以后的研究1 ：作者又进一步发现，鲎试剂中被激活的凝固酶，具有d 一 凝血酶和酰胺酶的活性，能使无色的对硝基苯胺肽类底物水解，释放出呈黄绿色的 对硝基苯胺( p na ) “，用分光光度计在4 0 5 n m 处测定释放的p na 的量，p n a 的量表示酰胺酶的活性，而酰胺酶的活性在一定条件下与内毒素浓度成正比，以此 又建立了鲎试验的定量方法对硝基苯胺肽类底物法，1 9 8 0 年2 0 版美国药典 己收载该法为内毒索检查方法之一。我国卫生部也颁布了“鲎试剂”和“细菌内毒 索检查法”两个部版标准。并于1 9 9 1 年9 月1 日正式开始实施，广泛用于注射药 物及器具、生物制品、卫生检验的内毒素检查。 ( 2 ) 家兔法历史较久，于1 9 4 2 年载入美国药典。中国药典1 9 8 5 年版载入 了该法。家兔法是用一定剂量的供试品，由静脉注入家兔体内，在规定时间内观察 家兔休温升高情况，以决定供试品所含内毒素的量。因家兔有个体差异性，此法应 用受一定限制。 ( 3 ) 化学定量法脂多糖内存在一些比较特征的组分，可用作生物测定标记物 ( b i o m a k e r ) ，如3 一脱氧一d 一甘露一辛酮糖酸( k d o ) 、庚糖、脂质a 中的羟基脂肪酸 和氨基葡萄糖等，其中以测定3 一脱氧一d 一甘鳝一辛酮糖酸和羟基脂肪酸进行化学定 量较多 7 0 , 7 1 7 2 , 7 3 由于羟基脂肪酸的测定需使用现代仪器进行分析，实际实验室常 以测定3 一脱氧- d - 甘露一辛酮糖酸来达到化学定量的目的。 化学检测脂多糖存在主要缺陷：不能证明脂多糖是否具有活性；测定样品中 此类化学组成的比例未知，只能进行半定量；化学检测方法本身存在问题，如测 定过程中脂多糖的水解程度和水解过程中样品的破坏。 2 1 2 脂多糖检测方法的确定 以上介绍了脂多糖检测传统的方法，其中鲎试验法、家兔法、对硝基苯胺肽类 底物法是用得相对较多的，但又都存在一些缺陷或者不太方便的地方： 鲎试验法实际上是一种定性分析方法，不能用于脂多糖含量的定量测定，在鲎 试验法的基础上建立的对硝基苯胺肽类底物法，可以进行定量测定，不过，用它来 分析大量样品时，还存在着一些问题：试剂价格昂贵。鲎试剂和对硝基苯胺肽类 底物价格都比较高，而本课题恰恰需要分析大量的样品，如果采用该方法，费用会 很高。对硝基苯胺肽类底物法要靠比色来确定反应中释放的对硝基苯胺的量，然 后在事先绘制的定量标准曲线上确定脂多糖浓度。而鲎试剂彼此之间存在较大差 异，故每批鲎试剂都要测定绘制相应的标准曲线，鲎试剂一般装在安培瓶中，剂量 很小，这样分析大量样品时由于需要多批次的鲎试剂，通过试验绘制标准曲线的工 作量就非常大。最后一点最为重要，e 1 i n 和w o l f 发现”“，鲎试验凝胶反应并 不对内毒素具专性。合成的聚苷核酸( p 0 1 y n u l e o t i d e s ) 如p o l y i ：p o l y c 和p o l y a ： p o l y u 也表现山强烈的阳性反应( 最小鲎试验反应凝胶形成浓度分别为0 1 和 1 0 u g m 1 ) 。1 9 8 1 年m o r i t a ”“等研究鲎试验凝胶反应机理时发现，羧基化水溶剂( 1 3 ) 一p 一葡聚糖( c m p s ) 能激活鲎变形细胞中的凝固系统而导致凝胶反应，利用 1 4 河北农业大学机电工程学院曲保雪：玉米浸泡水中脂多糖及蛋白厘堕墅垄型旦! 堕 亲和层析技术将变形细胞中各组分分离，分别进行鲎试验，研究发现，( 1 3 ) 一p 一 葡聚糖激活导致的凝胶反应不同于以前报道的凝胶反应机理，是一条新的凝固途 径，由鲎变形细胞的另一种组分( 命名为g 因子) 引起，他们由此提出了一种新的 反应机理：葡聚糖使g 因子活化，活化的g 因子与凝固酶原作用产生凝固酶，凝固 酶作用于凝固蛋白原，使之转变为凝固蛋白。g 因子的存在，干扰了对脂多糖的检 测，使检测结果准确性下降。 以后有关( 1 3 ) 一1 3 - 葡聚糖发生鲎试验的报道文献很多 7 5 1 t 研究报道( 1 3 ) 一b 一葡聚糖发生凝胶反应的浓度范围为1 0 1 0 m g m l 。浓度太低或太高均不能发 生凝胶反应。 针对g 因子干扰，有人提出了一种排除g 因子进行脂多糖的检测的新方法”： 无g 因子合成基质显色法。该方法是在对硝基苯胺肽类底物法基础上进一步发展而 来的，该方法的建立者认为：与g 因子作用，并晟终导致凝胶反应的物质一般是 结构相对简单的一类聚多糖，这类简单多糖一般是耐碱不耐酸，在酸性环境下多糖 易发生水解。脂多糖结构中含有类脂a 这一结构，类脂a 是通过0 一酰基基团( 酮 糖键) 与核心寡糖相连，0 一酰基基团在碱性环境中极易发生水解作用而脂多糖的 活性部位位于类脂a 这一结构上，当脂多糖中的类脂a 脱去时，脂多糖的活性单位 将降至原活性的万分之一。利用这一点对样品进行碱处理后再通过对硝基苯胺肽类 底物法测定，并与碱处理前的测定结果比较，就可获得样品中脂多糖的准确含量。 尽管如此，鲎试剂价格高，分析大量样品费用高及鲎试剂定量工作曲线测定工作量 大的缺陷仍无法克服。 至于家兔法，由于家兔间肯定存在的个体差异性使得用这种方法定量测定脂多 糖的结果将不是十分可靠。 j a n d a 及w o r k 曾用复合羰化青染料比色测定内毒素，适合于大量样品的检测， 其缺陷是染料试剂不够稳定，需要在配制后一个小时内使用。否则测定结果的可靠 性将大大降低。 江南大学( 原无锡轻工大学) 博士陈正行研究确立了另外一种染色法一异染 法 4 a l 该方法用一种异染色染料1 , 9 - 二甲基亚甲蓝作为染色剂，染料与脂多糖结 合后吸光度增加，异染色的强度与脂多糖浓度成正比，因而测定吸光度就可测定脂 多糖浓度。1 , 9 - 二甲基亚甲蓝染色剂配好后可以稳定数周，异染法是一种简便快捷 的脂多糖测定方法，本课题决定采用这种方法作为脂多糖测定的主要方法。 2 2 浸泡水的成分分析 由于本课题研究主要是针对玉米淀粉加工厂中玉米浸泡水综合利用，所以采用 了与玉米淀粉加工厂相同的工艺制备的玉米浸泡液。 2 2 1 实验材料与仪器 玉米浸泡液 l ，9 一二甲基亚甲蓝 甘氨酸 自制 a l d r i c h 公司 上海生化试剂公司 河北农业大学机电工程学院曲保雪：玉米浸泡水中脂多糖及堡旦辱的墅茎型旦塑窒 其它试剂为分析纯 p h s ，2 c 精密酸度计上海雷磁仪器厂 7 2 1 分光光度计上海分析仪器三厂 h h s 型电热恒温水浴锅江苏省医疗器械厂 f s i 型试验搅拌器江苏江阴科研器械厂 电热恒温真空干燥箱上海医疗器械七厂 2 2 2 主要实验方法 固形物含量测定 在已恒重的烧杯中加入l o o m l 玉米浸泡液，水浴上蒸干，移入真空干燥箱内干 燥至恒重，称重并计算固形