（生物化学与分子生物学专业论文）血浆高密度脂蛋白亚类及其分布特征.pdf

四川大学博士学位论文中文摘要 血浆高密度脂蛋白亚类及其分布特征 博士生：贾连群 导师：傅明德教授 中文摘要 第一部分 血浆高密度脂蛋白亚类的分布特征 本部分我们从受试者血脂水平出发，分析了血脂( 甘油三酯，t g ；总 胆固醇，t c l 及t c h d l - c ( 高密度脂蛋白胆固醇，h d l c ) 、t g h d l - c 比值与h d l 亚类分布的关系。进一步我们还将根据现有的资料对载脂蛋 白与h d l 亚类分布的关系进行探讨。 i 血浆t c h d l c 、t g h d l c 比值与h d l 亚类关系的研究 背景与目的： 血浆t g 水平是导致动脉粥样硬化( a s ) 及冠心病( c h d ) 发生的独立危 险因素，t c 与a s 的发生呈正相关而h d l - c 与a s 的发生和严重程度呈 负相关。t a h d l - c 和t g h d l c 是同时综合考虑致a s 和抗舢因素的 两个参数，对它们进行深入研究必将使人们在评估舢危险性方面有更为 深刻的认识。研究发现高密度脂蛋白( h d l ) 是一类组成、密度、颗粒大 小极不均一的脂蛋白，主要包括a h d l ( h d l 3 。、h d l 3 b 、h d l 3 。、h d l 2 。、 h d k b ) 和p r e g h d l ( p r e g l - h d l 、p r e s 2 一h d l 、p r e l 3 3 一h d u 等亚类。h d l 参与体内胆固醇逆向转运( r c t ) ，可将外周细胞堆积的胆固醇转运至肝脏 转化清除，因而具有抗a s 的作用。 脂蛋白是血浆脂质的载体，血脂水平变化必然影响脂蛋白的组成和分 四川i 大学i t - + - 学位论文中文摘要 布。近年发现血浆t c h d l c 、t g h d l ，c 比值与a s 和c h d 发生高度相 关，但是t c h d l c 、t g h d l - c 比值对h d l 亚类组成及含量影响的研 究尚未见报道。本研究分析血浆t c f l d l c 、t g h d l - c 比值与h d l 亚 类组成之间的内在联系和变化规律，为阐明h d l 亚类组成、分布与a s 发生机制提供重要依据。 方法： 1 采用双向电泳免疫印迹检测法分析4 4 2 例受试者血浆h d l 亚类的组 成及含量。 2 ，根据t c h d l - c 及t g h d l c 比值将受试者分组 美国国家胆固醇教育计划( n c e p ) 成人治疗专家组发布的第三版文 件( a t p 1 1 1 ) 将血浆t c 划分为合适水平( 一2 4 0m g d 1 ) ；将血浆t g 划分为合适水平( ，5 0 0m g d 1 ) ；将血浆h d l - c 划分为低水平( 5 时，a s 及c h d 的发病风险显著升高，我们插入 5 作为另一切点。因此，根据t c h d l c 比值，我们将受试者分为 t c h d l - c 一 3 3 ( n = 6 9 ) 、3 3 6 、t g h d l 广c 5 时，受试者h d k d p r e b l - h d l 比值为1 1 ，表明高比值的受试者h d l 大、小颗粒比值倒置。 3 在t g h d l c 2 5 组，无论t c h d l c 比值是否增加，p r e b l h d l 和 h d k b 含量几乎保持一致；但是在t c h d l - c 比值相同各组，随着 t g h d l c 比值增大，p r e l 3 1 h d l 含量显著增加而h d l 2 b 含量显著降 低。 4 相关分析结果表明，t g h d l - c 比值与小颗粒p r e b l h d l 和h d l 3 。 含量呈显著正相关，与大颗粒h d l 2 。和h d k b 含量呈显著负相关；而 t c h d l - c 比值仅与h d l 2 b 呈显著正相关，而且t g h d l - c 相关系数 在数值上较t c h d l - c 及单纯的t g 、t c 或h d l c 相关系数更大。 结论： 1 3 i i 究 t c h d l c 及t g h d l c 比值可以作为反映h d l 亚类分布变化的准确 指标。 硎dl - c 及t g h d l c 比值同时增大，h d l 颗粒变小的趋势明显， 成熟大颗粒与新生小颗粒比例倒置，提示h d l 成熟受阻，r c t 作用 减弱。 t g i ：t d l c 比值可能是影响血浆h d l 亚类分布的更加突出的指标。 高胆固醇血症及混合型高脂血症患者血浆t l d l 亚类组成及含量的研 四川火学博士学位论文中文摘要 背景与目的： 高胆固醇血症以血浆t c 水平升高而t g 水平保持正常为特征，混合 型高脂血症则表现为血浆t c 、t g 水平同时升高。研究证实高胆固醇血症 及混合型高脂血症均与a s 和c h d 的发生相关。研究发现新生缺脂的小 颗粒p r e 9 1 h d l 从外周摄取胆固醇并在各种血浆因子如卵磷脂一l ul l 醇酰 基转移酶( l c a t ) 、胆固醇酯转运蛋白( c e t p ) 、磷脂转运蛋白( p l t p ) 等的参与下，按p r e b l h d l - - p r e l 3 2 - h d l - - - - p r e b 3 一h d l _ h d l 3 _ h d l 2 代 谢过程成熟，逐步转变为富含胆固醇酯的h d k 而被运至肝脏进一步代谢。 因此，h d l 亚类组成、含量及分布变化与r c t 有密切关系。本研究探讨 高胆固醇血症及混合型高脂血症患者血浆h d l 亚类的分布特征，为阐明 h d l 亚类组成、分布与高胆固醇血症及混合型高脂血症患者a s 的发生机 制提供新的依据。 方法： 采用双向电泳一免疫印迹检测法分析了6 6 例高胆固醇血症患者 ( t c 一2 4 0m g d l ，t g 2 4 0 r a g a l l ，t g 一 2 0 0m g d 1 ) 以及2 4 2 例血脂正常者( t c 5 p e a r s o n c o r r e l a t i o n a n a l y s i s r e v e a l e dt h a tt h et g h d l - cr a t i ow a sp o s i t i v e l y 一9 四川火学i 尊：1 一学位论文英文摘要 c o r r e l a t e dw i t hp r e b l h d la n dh d l 3 ab u tn e g a t i v e l yc o r r e l a t e dw i t hh d l 2 a a n dh d k bw h i l et h et c h d l cr a t i ow a so n l yi n v e r s e l yc o r r e l a t e dw i t h h d k b c o n c l u s i o n s ：t h et c h d l - ca n dt g h d l - cr a t i o st o g e t h e rm a yb eg o o d i n d i c a t o r so fh d ls u b c l a s s e sd i s t r i b u t i o n w h e nt h e s et w or a t i o si n c r e a s e d s i m u l t a n e o u s l y , t h et r e n dt o w a r ds m a l l e rh d l s i z ew a so b v i o u s ，w h i c h ，i nt u r n ， i n d i c a t e dt h a tt h em a t u r a t i o no fh d l m i g h tb ei m p e d e da n dt h er c tm i g h tb e w e a k e n a d d i t i o n a l l y , t h et g h d l - cr a t i om i g h tb eam o r ep o w e r f u lf a c t o rt o i n f l u e n c et h ed i s t r i b u t i o no fh d ls u b c l a s s e s i ia l t e r a t i o n so f h i g h d e n s i t yl i p o p r o t e i n s u b c l a s s e s i n h y p e r c h o l e s t e r o l e m i aa n dc o m b i n e dh y p e r l i p i d e m i a b a c k g r o u n d ：h y p e r c h o l e s t e r o l e m i a a n dc o m b i n e d h y p e r l i p i d e m i a a r e c o m m o nf o r m so fa t h e r o g e n i cd y s l i p o p r o t e i n e m i a t h i ss t u d ye v a l u a t e st h e a l t e r a t i o n so fh d ls u b c l a s s e si n h y p e r c h o l e s t e r o l e m i c a n dc o m b i n e d h y p e r l i p i d e m i cs u b j e c t s m e t h o d s ：a p o l i p o p r o t e i na - i c o n t e n t so fp l a s m ah d ls u b c l a s s e sw e r e q u a n t i t a t e db y 2 - d i m e n s i o n a l g e le l e c t r o p h o r e s i s i n2 4 2n o r m o l i p i d e m i c s u b j e c t s ，6 6h y p e r c h o l e s t e r o l e m i cs u b j e c t sa n d5 9c o m b i n e dh y p e r l i p i d e m i c s u b j e c t s r e s u l t s ：c o m p a r e dw i t h t h en o r m o l i p i d e m i cs u b j e c t s ，a p o l i p o p r o t e i na i c o n t e n t so fs m a l l - s i z e d p r e - 1 3 1 一h d l ，h d l 3 c ，h d l 3 b a n dh d l 3 aw e r e s i g n i f i c a n t l yh i g h e ri nb o t hh y p e r c h o i e s t e r o l e m i cs u b j e c t sp 0 1 ，p 0 5 ，p 0 1a n d p 0 5 ，r e s p e c t i v e l y ) a n dc o m b i n e dh y p e r l i p i d e m i cs u b j e c t sp 0 1 p 0 5 ，p 0 1a n dp 0 1 ，r e s p e c t i v e l y ) ，i nc o n t r a s t ，a p o l i p o p r o t e i na i c o n t e n t so f l a r g e s i z e dh d l 2 aa n dh d k bw e r es i g n i f i c a n t l y l o w e ri n 一1 n 四川火学博十学位论文英文摘要 h y p e r c h o l e s i e r o l e m j cs u b j e c t sp 0 5a n dp o l ，r e s p e c t i v e l y ) a sw e l la s c o m b i n e dh y p e r l i p i d e m i cs u b j e c t s0 ， 0 1a n dp 0 1 ，r e s p e c t i v e l y ) i n a d d i t i o n ，p r e 一1 3 1 - h d l i n c r e a s e ds i g n i f i c a n t l y p 0 5 ) w h i l eh d l 2 aa n d h d l l bd e c r e a s e ds i g n i f i c a n t l yp 0 5a n dj 口 0 1 ，r e s p e c t i v e l y ) i nc o m b i n e d h y p e r l i p i d e m i cg r o u pv e r s u sh y p e r c h o l e s t e r o l e m i cs u b j e c t s w i t ht h ee l e v a t i o n o f t r i g l y c e r i d el e v e l s ，p r e - b 1 h d l ，a n dh d l 3 a i n c r e a s e d s u c c e s s i v e l y ， h o w e v e r ，h d k aa n dh d k bd e c r e a s e ds u c c e s s i v e l y i ns u b j e c t sw i t ht o t a l c h o l e s t e r o ll e v e l sg r e a t e rt h a n2 4 0m g d 1 c o n c l u s i o n s ：t h e p a r t i c l e s i z eo fh d ls h i f t e dt o w a r d ss m a l l e rs i z ei n h y p e r c h o l e s t e r o l e m i cs u b j e c t s ，a n d t h a tt h es h i f tw a sm o r ep r o m i n e n ti n c o m b i n e dh y p e r l i p i d e m i cs u b j e c t s t h ea l t e r n a t i o n sm e n t i o n e da b o v ei n d i c a t e t h a th d lm a t u r a t i o nm i g h tb ea b n o r m a l ，a n dr c tm i g h tb ew e a k e n e d p a r t t 、v o r e l a t i o n s h i pb e t w e e np l a s m ah d l s u b c l a s s e sd i s t r i b u t i o na n d a p o a - ig e n ep o l y m o r p h i s m s b a c k g r o u n d ：i ti sg e n e r a l l ya c c e p t e dt h a ta p o l i p o p r o t e i n ( a p o ) a ii s t h e d o m i n a n ts t r u c t u r a la p o l i p o p r o t e i no ft h eh d lp a r t i c l e sa n dd i f f e r e n th d l s u b c l a s s e sh a v ed i s t i n c tb u ti n t e r r e l a t e dm e t a b o l i cf u n c t i o n s h d li sk n o w nt o d i r e c t l ya f f e c t t h ea t h e r o g e n i cp r o c e s s h e n c ec h a n g e si nh d ls u b c l a s s e s d i s t r i b u t i o nm a yb er e l a t e dt ot h ei n c i d e n c ea n dp r e v a l e n c eo fa t h e r o s c l e r o s i s m e t h o d s ：a p o a - ic o n t e n t s ( m g 1 ) o fp l a s m ah d l s u b c l a s s e sw e r ed e t e r m i n e d b yt w o d i m e n s i o n a lg e le l e c t r o p h o r e s i sc o u p l e dw i t hi m m u n o d e t e c t i o na n d a p o a - 1g e n o t y p e sw e r ea s s a y e db yp o l y m e r a s ec h a i n r e a c t i o n r e s t r i c t i o n f r a g m e n tl e n g t hp o l y m o r p h i s m ( p c r - r f l p ) i n3 0 7c h i n e s es u b j e c t s ( 1 6 9 四川大学博士学位论文 英文摘要 m a l e s ，1 3 8f e m a l e s ) r e s u l t s ：t h eg ga n dc cg e n o t y p e sw e r et h em o s tf r e q u e n ta t - - 7 8 b pa n d + 8 3 b po fa p o a - ig e n e ，r e s p e c t i v e l y t h e r ew e r en os i g n i f i c a n td i f f e r e n c e si n t h ef r e q u e n c i e so fr a r eaa l l e l ea t - - 7 8 b pa n dr a r eta l l e l ea t + 8 3 b pb e t w e e n m a l e sa n df e m a l e s c o m p a r e dw i t ht h eg gc a r r i e r s g aa n d 舢c a r r i e r sh a d s i g n i f i c a n t l yh i g h e rp l a s m ac o n c e n t r a t i o n so ft g ( 尸 o 0 5 ，p 0 0 0 1 ) ，a p o c i i ( 尸 o 0 5 ，p 0 0 1 ) ，a p o c i i i ( p o 0 5 ，p 0 0 1 ) ，a p o a - ic o n t e n t so fp r e l 3 1 一h d l ( 尸 0 0 5 ，p 0 0 1 ) ，h d l 3 。( p o 0 5 ，p 0 0 1 ) a n dt g h d l _ cr a t i o ( p 0 0 5 ， p 0 0 1 ) a n di na d d i t i o n ，m c a r r i e r sh a ds i g n i f i c a n t l yl o w e ra p o a _ ic o n t e n t s o fh d l 2 a ( p o 0 1 ) a n dh d k b ( p o 0 5 ) f e m a l e sh a di n c r e a s e dp l a s m a c o n c e n t r a t i o n so fa p o a - i ，h d l - c ，a p o a - i c o n t e n t so fh d l 2 aa n dh d l z b w h i l ed e c r e a s e da p o a - ic o n t e n t so fp r e b l - h d l , h d l 3 da n dt g h d l - cr a t i o a sc o m p a r e dt om a l e sc a r r y i n gt h es a m eg e n o t y p e n os i g n i f i c a n td i f f e r e n c e s w e r e d e m o n s t r a t e do nt h ec o n c e n t r a t i o n so fp l a s m al i p i d s ，l i p o p r o t e i n s ， a p o l i p o p r o t e i n sa n da p o a - i c o n t e n t so fp l a s m ah d ls u b c l a s s e sb e t w e e nt h e c ca n dc f rs u b j e c t s c o n c l u s i o n ：t h eg ap o l y m o r p h i s ma t - - 7 8 b po fa p o a ig e n ew a sa s s o c i a t e d w i t h c h a n g e s o fh d ls u b c l a s s e sd i s t r i b u t i o n t h e r ew a sag e n e r a ls h i f t t o w a r d ss m a l l e r s i z e dh d l ，w h i c h ，i nt u r n ，i n d i c a t e dt h a tr c tm i g h tb e w e a k e n e da n dh d lm a t u r a t i o nm i g h tb ea b n o r m a li nt h es u b j e c t sw i t hg | a m u t a t i o n p a r tt h r e e s t u d yo nt h ep r o t e c t i v ee f f e c to fh d l s u b c l a s s e sa g a i n s t l i p o p o l y s a c c h a r i d e 1 2 四川大学 ! 士学位论文英文摘要 b a c k g r o u n d ：i nr e c e n ty e a r s ，t h e r eh a sb e e na ni n c r e a s i n gr e c o g n i t i o no f t h e l i n kb e t w e e ni n f l a m m a t i o na n da t h e r o s c l e r o s i s i ti sn o we s t a b l i s h e dt h a th d l c a nb i n da n di n a c t i v a t ei i p o p o l y s a c c h a r i d e ( l p s ) t h i ss t u d yw a su n d e r t a k e n t oe l u c i d a t et h ea n t i l p se f f e c to fh d ls u b c l a s s e s m e t h o d s ：t h ep n f - 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