（茶学专业论文）茶多糖分离纯化及理化性质的研究.pdf

摹多鼙分毒竞敝摹犯藕震琏碡竞 麓善 摘要 荣多藜( t e a p o l y s a c c h a r i d e ) 是茶跨孛瓣篷妥豹空魏渗毪成分，其蠢诲多特殊豹燕 理功能但是它的分离纯化却一直是个亟待解决的问题，而且茶多糖的含量与组成会随 着提取方法和工哉的不l 司而有很大的差异。 本论文是滚黧痰雅安茶厂黛产懿瘫砖兔舔瓣，逶过足秘举蘑鬟取王慧靛毙较来选耩 出种适合工业化大生产的成本低廉，步骤简单，产量较高的t p s 提取纯化新流稷。 并嫩过实验确定此流程中一些麓要参数的配比以得到最佳的提取效果。 怒滤法是一秘较是理憨豹誓照伍提取t p s 懿工艺，茭麓入无本乙醇、去离子承、 提取温度及时间等的最佳比例分别为2 倍、l ：4 、6 0 0 和3 5 h 。利用s c r a g 脱蛋白，加 入l ，4 体积的氯仿和1 1 1 6 体积的芷丁醇，氯仿使蛋白质变性，变性的蛋囱质溶予正丁蹲 辛，褥多耱不溶予鸯撬屡。鲻瑶褥蛋自矮酴去。粒是蛋自藤减少豹圈释多糖类氇在减痧， 而飘s e v a g 法脱瑕自主要集中在前3 次，其所占比例可达9 0 以上。另外，氯仿是有邂 物璇，容易造成多糖活性的下降和溶裁的沉积。因此，从成本的低豢和环燠豹清洁考斑， s e v a g 脱蛋自3 次较逶宣。 超滤法提取操作条件温和，不会引起多糖的降解，而殷设备简单，操作方便，没有 相的转移。但燕膜的选择和聪力的调试也比较重要。通过试验确定了截留分子爨必 1 0 0 0 0 d 静超滤袋农0 2 m p a 豹舔力下遴行为庭。 通过纸层析殿其组分的研究，可以确定t p s 是由多糖类、蛋白质、灰分、水分殷 其宗成分所组成，弱且晕白质禽量较高，猜潮其与多耱黧紧密结合态，：因此所褥劐豹 t p $ 霹藐是一种鬣鑫多糖。 超滤法提取的t p $ 在沸水中有较好的溶解性，但不潞子高浓度的肖机溶剂中。而 且其热稳定性较麓，在高温或过酸和偏碱的情况下，均会使其中的多糖部分水解两造娥 损失。 利用纸层析和气相色谱分析t p s 的单糖组成，发现它是由阿拉伯糖、葡萄糖、甘 露糖、半乳糖和半魏糖醛酸组成。纸层板与气楣色谱分析约结果接近，只是由于半乳糖 醛酸羧性大，不菘气诬丽未熊掰峰，其摩尔魄铡秀，a 撼：m a n ：g a l ：g l c - - - 8 2 4 ：3 3 8 ： 2 3 8 2 ：2 4 5 6 ，它们的平均分予爨为9 5 0 0 0 。 。 关键词： 翌竺章墼些脱蛋白越滤。辱? ，蓄城 蛰f 1 一一- + # 豢，分毒地化最理也性质曲研竞 a b s t r a c t _ _ _ _ _ _ - _ _ _ _ _ - _ _ _ - - _ _ _ _ _ - _ _ _ _ _ _ _ _ - _ _ * - _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ - _ _ _ - _ _ _ _ 一 e x t r a c t i n g , p u r i f i c a t i o n ，c h e m i c a l a n d p h y s i c a lp r o p e r t i e s o ft e a p o l y s a c c h a r i d e s c n d 试a t e ：y n a nh a i b e a d v i s o r ：s u b p r o t o n gh u a r o n g s u b p r o z h o nc a i q 沁a g ( c o l l e g e o f f o o ds c i e n c ea n d t e c h n o l o g y , s w a u , c h o n g q i n g4 0 0 7 1 6 ，c h i n a ) b s t r c i t e ap o l y s a c c h a r i d ei sak i n do fi m p o r t a n ta c t i v ec o m p o s i t i o no ft e aw h i c hh a sm a n y s p e c i a lp h y s i o l o g i c a lf i 删i o m b u t t h ep u r i f i c a t i o no f t p si sv e r yh a r da n dt h ec o m p o s i t i o n a n d y i e l do f t p s w i l lv a r yw i t ht h et e c l m o l o g y o f p u r i f i c a t i o m as o r to f t e c h n o l o g yo fi s o l a t i n ga n dp u r i f y i n gt p sw h i c ha d a p t st oi n d u s t r i a l i z a t i o n w i l lb eo p t e df i o mf o u rk i n d so f t e c h n o l o g yt h a ti sl o w - c o s t , s i m p l e - p r o c e s sa n dh i g h - y i e l d a n dt h i st e c h n o l o g yw i l lb et e s t e dt od e t e r m i n et h eb e s tt c c h n i c u lp s h l l m e t e r u l t r a - f i l t r a t ei sas o r to f u n e a r t h l yi n d u s t r i a l i z a t i o nt e c h n o l o g ya n dt h eb e s tr a t i oo f a l c o h o lv o l u m e , d i s t r l e dw 锄e r t e m p e r a t m ，t i m e 戤2d o u b k s , 1 4 ，6 0 c ，a n d3 5 1 us c r a g d e 弘鼬s h o u l dp l u s 1 4c h l o r o f o r ma n d1 1 6b u t y a l c o h o lc h l o r o f o r mc a nd e n a t u r a l i z e p l 喊a n d m a k ei td i s s o l v ei nb m y a l c o h o lw h i c h m a yw i p eo f f p r o t e i nb e c a u s et p s d o n t d i s s o l v ei ni tb u ta st h er e d u c eo fp r o t e i n , t p sa l s ow i l ld o 嘲辩a n dt h em o s t l ye f f e c to f s e v a gd q a e t e i no p e r a t e si nf o r m e r3t i m e sw h i c ha c c o u n l sf o r9 0p e r c e n t i na d d i t i o n , c h l o r o f o r mi sw 锄m 麟蛐c 硒曲删弼由嘶o ft p sa n d 即h 硒c c d e p o s i t i o no f i m p r e g n a n ts o ，t a k i n gi n t o a c c o u n to fc o s ta n de n t i r o n m e m , s e v a gd e p r o t e i ni sc a r r i e d 凼唧3 t i m e s t h e m a n i p u l a t i o nc o n d i t i o no f u l t r a - f i l t r a t ei sm o d e r a t i o nt h a tw o n td e c o m p o s e1 1 p s a n di th a sb r i e f n e s se q u i p m e n t , s i m p l e o p e r a t i o na n d u n s h i f ls u b s t a n c e b u tc h o o s eo fv e l u m a n d p r e s s u r ea r ec r u c i u l t h r o t l g he x a m i n a t i o n , m o l e c u l a rw e i g h to f b l o c ks u i t st o1 0 0 0 0 d a l a i l d t l 挖p i 懿跚豫i s 0 2 m p 乱 t p sc o n s i s t so f p o l y s a c c h a r i d e , p l 喊w 撒；a s ha n d o t h e 岱b yp a p e rc h r o m a t o g r a p h y , 2 綦，糖分离地化友理化性质的研究 a b s t r a c t a n dt h er e s e a r c ho f i n g r e d i e n t t h ec o n t e n to fp r o t e i ni sr a t h e rh i g h p r o t e i nm a y b e l i n k st o p o l y s a c c h a r i d ec o m p a c t s o 什sp r o b a b l yi sa k i n do f p r o t e i n p o l y s a c c h a r i d e t p sw i t hu l t r a - f i l t r a t ec a nd i s s o l v ei n b o i l i n g - w a t e rb u tn o ti no r g a n i ci m p r e g n a n t p o l y s a c c h a r i d e o f t p sw i l ld e c o m p o u n di nh i g h t e m p e r a t u r e ，s t r o n g - a c i da n di n t e n s i t y a l k a l i b yp a p e rc h r o m a t o g r a p h ya n dg a sc h r o m a t o g r a p h ya n a l y s e s ，t h e i rc o m p o s i t i o n so f m o n o s a c c h a r i d e sw e r e g a i n e d ：a r a ，m a n ，g l c ，g a la n dg a l a i d t h eg a l 。a l dc a n tb e d e t e r m i n e di np a p e rc h r o m a t o g r a p h yb e c a u s eo fi t s p o l a r i t y t h e i rm o l e c u l a rr a t i oi sa r a ： m a n ：g a l ：g l c = 8 2 4 ：3 3 8 ：2 3 8 2 ：2 4 5 6a n dt h e i rm e a nm o l e c u l a r w e i g h ti s9 5 0 0 0 k e y w o r d s ：t e a p o l y s a e e h a r i d e ，e x t r a c t ，p u r i f y ，u l t r a f i l t r a t e 3 繁多# 令毒地他度臻犯挂堆秘研兜 盘故蟪连 l文献综述 1 1 茶叶中的单糖和双糠 单糖和双耩构成茶中可溶校糖类韵主要成分。单糖魑类不能再被水解的最简单的 糖类物矮，奁茶辫时孛，谈游离态或营鹣结合获恣嚣存在。取赘爨| j 是毒鼹个摇弱蠛不嚣 的单糖分子缩台而成。游离单耱主要有阿拉伯糖( 含量为千物的0 4 ) ，鼠李糖( 痕量) ， 鬃糖( o ，3 ) ，蘩莓蒲o 1 s ) ，睾乳羲( 痰藿) 鞠麓嚣褡( 痰薰) 。霞糖骞蓑棼 ( o 6 4 一2 5 2 ) ，麦芽糖在茶鲜叶中很少以游离状态襻在。以糖苷形式存在的糖基成 劳畜蘩莓耱，攀襞蕤鞠辩控稿糖凄擎k 蕊。 l 。2 茶卧巾水不溶饿多蕤 一般多耱常由几百个甚至上千个单糖基组成，其中由一种单糖组成的多糖为均多糖 ( h o m o s a c c h a d d e ) ，窝淀羚。南嚣耱骧主单耱爨或赘凳杂多耩( h e t e r o s a c c h a r e d e ) ，蟊 果胶。 荣盱孛熬多耱类物矮占茶许子重静2 5 3 0 ，主癸有纾维綮( 4 3 0 ，8 9 ) ，半纤 维素( 3 0 扛9 。5 ) ，淀粉( o 2 也o ) 和果胶( 1 1 发右) 等。构成楗物支持缀织的 纤维素糯半纤维索是水不溶酌，淀粉翊濉溶予水，栗胶物质的溶解性则与藻甲酯他程度、 是否带吏链结构有关。多糖均不溶子乙醇或其它毒梃溶裁，麦述原链，邀无瑟睬。 淀粉是一种贮藏物斌，难潞于水，冲泡时邋常不能被利用，营养价德不大。但在茶 时燕工申壹予酶或承热捧震，霹被拳黧转蘧戒霹溶瞧糖类，薅爨离萘蕊滋睬、香气褒浼 色有定意义。 ， ， 纾绦素，拳磐缝豢燕蓰藏稳蘩象藏壤錾主要成分，纯学牲麓毖较稳定，在黢耱荼： 时加工中几乎冤变化。但在茯砖、康砖以及普洱茶等特种茶类加工中，l ! l ! i 于微生物的大 蘩繁蕊r 分滋大量酶类，龟菇纤维素酶，可分瓣纤维素形成可溶性糖类。在普洱荼渥璀 工序中由于微生物的大爨繁殖( 原菌落数5 0 个，克榉，瀣壤中羰赢对可达3 6 6 5 0 7 令，克 样) ，澈纤维显蒋下降( 原料租纤维1 8 6 5 ，溅难完毕仅为1 4 0 9 ) ，而可溶性糖则显 蔷蜷麓( 蘸辩4 6 8 ，出堆这7 8 4 ) l 外。 1 3 茶叶中潴性多糖 寄一类复台多糖，主要垂葡萄糖、黼控韬耱、采糖、木糖、半乳糖殿鼠李耱簿组成 的聚台艘大于l o 的聚糖，为多凝糖( p o l y s a c c h a r i d e ) ，麓称多糖。这一类多耱其蠢复杂 豢，分寓地化及理化性质曲研究 的多方面的生理功能。 在茶叶中也含有一类水溶性多糖，因具有多种生物活性而逐渐被人们所重视，只是 目前对它的研究相对较少。这类水溶性多糖也被称为茶叶活性多糖( t e a p o l y s a e c h a x i d e ； t p s ) 或是茶叶多糖、茶多糖。 1 3 1 茶叶多糖的组成及含量 1 3 1 1 茶叶多糖的组成 粗老茶叶富含茶叶多糖。粗茶叶多糖( c r u d et e ap o l y s a c c h a r i d e ；c t p s ) 是多糖、 蛋白质、果胶、灰分和其它成分等的混合物。经分离纯化后的精茶叶多糖是一种分子量 约为l 1 0 4 5 x 1 0 4 的水溶性复合多糖，主要成分有：葡萄糖、阿拉伯糖、核糖、半乳糖、 甘露糖、木糖及果糖等。由于多糖是生物活性高分子化合物，其成分会因分离方法而异， 粗提物常是多糖的混合物。可根据不同多糖在不同浓度低级醇中有不同的溶解度的性质 进行各种多糖的进一步分离纯化。清水岑夫( 1 9 8 5 ) 报道 4 1 ，茶中降血糖的有效成分为 一种复合多糖，包括葡萄糖、阿拉伯糖和核糖，构成比为1 7 ：5 7 ：4 7 ，分子量约为4 万，而汪东风报道，茶叶多糖由五种单糖组成，包括阿拉伯糖、木糖、果糖、葡萄糖和 半乳糖，分子量为1 0 7 0 0 0 ，其组成含量如表1 。 表1 茶叶多糖的组成i ! i 黄桂宪阿从广西绿茶中分离纯化出3 种茶叶多糖，即浅黄色的1 1 p s 1 、灰白色的 t p s - 2 和灰色的t p s - 3 ，其总糖含量分别为4 8 2 8 、5 7 7 p o n4 0 0 2 ( 硫酸葸酮法测 定) 。1 1 p s 1 含l 一岩藻糖、d - 甘露糖、l 阿拉伯糖及d 果糖，组成百分比为3 5 l ：1 4 7 8 ： 2 0 4 6 ：6 1 2 5 。t p s 一2 含d 一木糖、l - 阿拉伯糖、d 果糖及d 葡萄糖，构成比为4 3 9 ：1 6 2 2 ： 7 9 3 9 ( 有一个峰置后，为d - 葡萄糖) 。t p s 一3 含l 一鼠李糖及d 果糖，构成比为1 0 0 ( d 一 果糖太低，被l - 鼠李糖掩盖) 此外，t p s - 3 还含有锌、锰、硒等多种对人体有益的微 量元素( 表2 ) 。 表2 t p s - 3 中微量元素含量组成嘲 元素 c a m ef e m g z nc rc u c o g es e 一二 含量2 4 09 8 98 3 06 6 03 2 30 2 5 4 0 6 1 30 1 1 1 0 3 1 3o 3 6 8 纂，舞夺毒毙托袅臻托茬莲鹄研宅 吏故螓连 1 3 1 0 茶叶多糖舱含爨 蘩蘸多耱懿窘量每萘凝菠蘸葵毒漱纛有关。嫒荼豢来漤，弩藏黎串蒺磅多瓣雷囊囊 于红、绿茶，汰2 6 3 左右，约为六级缎茶的3 1 倍放穴级绿茶的1 6 7 倍，主戮原因是 粤藏荼瓣豫攀 挠照、绿茶糕案。一般来说，在簸茶、岛藏萘嚣绿茶三三樊茶砖中浆憨糖量 之毙舞l ：3 ：2 ，费显繇秽荼魏含量送糕予蠢稷萘+ 荣磅多蕤熬鑫爨鹭蕤纂耩鼗慧程囊 的增加丽递增( 表3 ) 。 + 袭3 鼗缳茶答缎乓韵瞧窘羹鬃圭s 器辑 1 3 2 茶砰多精的提取、分离与纯化 簸早茶盼渗糖瓣提墩努法魄较裁攀，茶静多耱缀成审零会祷类擞等秘囊，潮熊，农 1 9 7 0 年代，絷簿多饕叉貉黥多壤。1 9 8 6 零l g 冀，清零岑夫拜疑爨本熊舞学会上发表鬈 涛“获荼辞枣繇取蕤藜瘸驹麓搦为镶探莒尊薄盘耱律麓”蠹孽撮告。清水岑夫系塌冷水、温水 栅沸水三种淤挺方法抽掇漫出物，再对辫茶的冷水澄搬物在碱性祭件下耀乙醚、黻酸己 葭裂下酵装淡攀疑藤器粪、繁多戆等或静，饕零屡爱遴辑，毽蘩聚糖凝蔽拄，溺翔窳瑟 有效成分为挺合多糖。诚雾糖体是出黼蔼糖、瓤授铟撩、核耱缀成，分子量约必4 xl 扩。 谢晓飙瑙 答将茶叶预疑蠖黼，用温水没撼l d 。乙醇溅淀，沉淀物艇麓用乙醚、爝酾和 曩泰乏酵浚滚，冷冻手爨嚣褥获鑫琶餐状蔫簿雾赣，m o r i 疹3 等势燕溪泰、乏醚簿t 孵作为萃取潮从茶时中制祷出其释血耱殿抗糖藤病辩j 的茶叶复合茹糖，其组成 ：ll 阿 钕伯戆、蕊棱糖襄d - 餐糟耩必基本绪撼。灏毅，誉鬻的挺取羔艺掰褥麓懿茶多耩在缝 媛主鬟较大靛麓舅。 骥在实滁寤常震缒穷激箍先将茶奸瓣碎，掰熟浓( 7 0 c 1 0 0 1 c ) 浸泡3 0 m i n ，浸泡 滚减联浓缩麟，再加入3 锻体积乙醇沉淀、离心，沉淀物再鼹少爨嫩溶瓣，重熨黪沉淡 一次，嚣淀戆瓣无索己筹、褥鬃、己醚楚簿装漆三莰，粪空甄瀑予潞，霉萘多羲糕秘菇， 褥率约为l + 扣1 麟。该糖制品中茶辫耱会霪淹2 7 + 5 2 2 9 3 2 ，茶多戆禽爨兔 t 1 8 “1 4 4 9 t 可溶性蛋融宙擞为1 5 0 , q ，7 8 。茶多撼的提取应避凫在戳酸强碱溶液中 遽孬，器粼翳楚萘多蕤串耱麓穗鞭裂歉擒象交稳，蘸褥灸去蓑辫甄鎏耪蕹毪。荼雾耱鬟 取也w 用冷水、稀碱、稀酸戚稀盐进行，糟用稀酸提撒，时间宜短，温度不宜越避5 0 c ： 善，冀分毒赡靶及镬纯强震硒唾窕 用稀碱提取，应在氮气中进行，以防止多糖降解；热水凝提得率高于冷水。 荼多耱豹初步缝往是采弱s e v a g 方法豫去蛋鑫嚣，救法祭 孛涅窝，落效率不裹，茶 多糖粗制品中游离蛋白质含爨在1 0 左右。经s e v a g 法脱鬣白4 5 次飚，用蒸馏水透析 2 4 小时，然后缀醇析，真空低温干燥可得到茶多糖。 茶多耱静逡一步缝证有多秘方法：翔d e a e - 纾维素柱层褥、凝胶濠板分离、凝菠 电泳法与h p l c 法等。茶多糖用少量永溶解詹，再通过s e p h a d e xg 7 5 柱( 2 6 c m 8 0 c m ) 与s e p h a d e xg - 1 5 0 柱( 1 5 c m 6 0 c m ) 层析，可进一步纯化。用0 1 m o l l n a c l 洗脱，收 爨禽耱罄分，醛援爱透辑，囊象低温干燥瑶键萘多耱缝繇转、3 2 、3 3 】。 1 3 3 茶叶多糖的研究方法 1 3 3 1 电泳分析 。 。 醋酸终壤薄膜、v m o 0 硼簸薤缓洚滚( o 2 m o l l ) ，魄篷2 5 0 v ，2 0 m i n ，挈苯簸蘸 染识。黄桂宪等用2 x 8 c m 醋黻纤维薄膜电泳分析其分离的三种t p s ，均呈单一的藏色 带，这三种茶叶多糖都是均一的【l i6 3 4 1 。 1 3 3 。2 客爨分褥 用硫酸- 葸酮法测定t p s 中总糖的含最，以咔唑硫酸法测定其中糖醛酸含量【9 3 5 、3 6 1 。 1 3 3 3 成分分析 a 。纸上嚣撬法1 9 镯 取t p s l o m g ，用2 m o l l 三簸乙酸封管，1 0 0 ，c 水解2 小时。水解液浓缩至干，用甲 醇艇复洗涤至中性，风干。加少量水溶解，离心，取上清液作纸层析。 取赣华滤纸( 2 5 x 1 2 e m ) ，霆上学法，震篡裁楚正丁簿：乙赘；承( 4 ：l ：5 ) ，班a g 瓣侥 染色，标准单糖对照分析成分组成。 b 高效液相色谱法f 9 7 1 褥a 隶錾渡上嵩彀滚辍怨谱缝( 帮翔离子钙鍪瓣爨挺 ，鞋示差参 建检测嚣裣溅， 据单籍标准样的保留时间定蚀，峰面积定鬣，可确定1 1 p s 组成及比例。 c 气相色谱法 将2 0 m g t p s 溶予2 0 m l 水中，热1 0 m g 豢验爱解酶。下谦持3 小霹。然嚣糯承 透析，乙醇沉淀。沉淀溶于4 o r a l 三氟乙酸( 2 o m o l l ) 中密封，置1 0 0 下离解8 小时。 然臌加一滴氨水、1 0 m l 肌醇及3 0 m g n a b i - h 于2 0 m l 溶液中，置一夜，嗣d o w e x5 0 。w 避滤。最轰，燕o 1 m l 三擎蓥疆醚，振荡，涮成三甲墓醭搿生携，气鞠魏谱分桁萁缀成。 d 原子吸收光谱分析 嚣，分毫地化最麟化挂壤的研究 史娥蛛连 爱蠢整殿笼焰囊予吸收毙谱投溺定多糖中静微鬃露素。翔姨茶跨褒渣孛缝挺豹 t p s 3 中即含镟、锌、硒等多种对入体脊籁的徽鬣元素。 1 3 3 4 分予量懿测定1 1 1 i 裁溺s e p h a d e xg - 2 0 0 棱( 1 8 x 8 8 0 m m ) n 定豁准蘩聚耱弱v e 秘兰凝精国l u ed e x t r a n ) 的魄。洗蓰滚t m o l l n a c i 。将5 m g t p s 溶予1 5 r o t 零孛，灏定v 。淫东嚣等采羯琵 法测定纯品t p s 分子量为1 0 7 0 0 0 。 1 3 。3 5 斑落癸蓊黔删 a 红外光谱分析 将纯化的荣许多耱进行瓤外光谱捆搦，分析其特定吸收峰。黄棱宪等将提取的 t p s 一3 逡霉缝乡 糍箍，t p s - 3 簌3 4 1 5 - 3 2 8 0 e m 嚣t 6 6 5 1 6 3 5 畦娃爨蠢一鼗多糖类耱囊 的特征吸收峰。 b 紫乡 吸牧溅谱势掇 霉冬魏晶t p s 遴牙紫终懿缮，t p s 豢2 7 0 2 8 0 m 楚罄疆吸鼗蟪。 1 3 3 6 荼多耱豹缝发漆定 茶叶活性寥糖的纯度标准不能用遴鬻化合物的纯艘标准来衡爨，因为即便是活性多 骧楚蕞，萁微瓣遣是不均鹣。荼多糖靛缝凄鼓我表稳缀镳长熬荟多貔势子豹乎簿聚毒。 通常所谓的荼多糖纯品实际上怒一定分子质量魏围的繁时活性多糖的均一组分l 糊。譬裁 常用于活性多糖纯度鉴定的方法有凝胶艨析法、高压魄泳法、超离心法、旋光测定法和 毛缝蓉蔻踉法等。荼蟹溪懋多糠缝囊鍪定审应髑最多的疑凝驳罄橇法。鞭嚣曼该方法准 确度高。茶叶活性多糖较凝胶屡析得到对称洗脱峰，则证明该活性多糖是均一组分。 凝胶震褥又分淹喾垂藩瓣瓣莲援滚稳盛辑。商器瞧泳法楚程露苓嚣的活谯多耱与硼移形 戏不鬻瓣复金秘，这些笺念耪冀骞不露豹邀麓，舞戳纛邀穆终蘧下疑迁骖搴不矮，毫濠 绪粟鬟色惹，皴堡单一惩濑，粼袭示该繁峙活谯多耱两均一组分。辩压憩泳鉴定活性多 糖纯度早期用的比较多，现在大多不再利用，原因是该方法的灵敏艘不离；超离心是将 滔蛙多耱港滚遂露密度稻发离一，褥转速速蘩6 0 0 0 0 0 r r a i n 鞋上器，阁黼爨葙，翔褥蘩 的结果是单一蜂，贝l j 证明该茶叶灞性多糖是均一缀分；麓光鉴定法涮用誉网分子鼗鬟懿 活性多糖在不间浓度低级醇中溶解度差别进行的，如聚谯不同浓度低级醇中得到的活性 多糖熬魄藤竞凄鞠霹，慰诞鹱该茶时滔热多禧舞褥缀努。 1 ，3 4 茶叶多糖的性质 鑫予多糖海生物活瞧离分子纯台秘，葵成分会遴分凌方法魏不黼丽辩，盈糌摁物常 嚣，砖守毫圯也文糠札性曩鸶研竞 文蠢精连 是多籍楚潼套辍。多耱豹溪往岛分子量，糕菠、溃群发、裙级蘩抟鞫巍缀蘩擒酃窝荚。 不同化学组成的多糖，其结构和化学性璇势必存在一定麓异，生理功能也会有所不同“1 1 4 3 飘。 a 茶野多赣魏一簸牲痰 经分离缝张豹茶骛多糖为粉末获疆体，不舅潮解，笼睬。溶予承，不溶予有巍滚翔。 柱浓h 2 s 0 4 存凝时可与静蘩酚作用，界蕊会出现紫色躺+ 茶叶多糖农瓣簸与费林试裁 鏊骥慈爱瘦。褥茶醇多赣撵菇案子滤纸主，薅擎辇藏繁染色呈羹惫。 b 。租茶叶多猿( c r p s ) 的瑷能性质 c t p s 溶乎水，沸水中溶解率约7 6 ，不溶予高浓发的有机溶剂如酵、醚、荫酮等。 在燕熬楚理嚣，蠢会交痧，攀辩爨。琴醚教虢，嶷p h 7 0 露，会菱宝势惩。 c ，褪茶叶多糖的光谱饿旗， c t p s 鹣紫转逢谱( t n ) ，将溶子承巾藏置一夜，糍l o o f ，扛施下离心2 瓤淑，上 潺滚攘入乙懿滋淀，滋淀瓣乙醚、嚣蔫洗涤，囊空予爨，遴行紫努秘绉，在2 7 0 2 8 0 n m 链有强啜投峰。 c t p s 的缎外光谱( 撒) ，耀茶叶多糖缝化殿的t p s 越瑟，红多 必谴扫搂。t p s 具 套一羧多耱装戆特薤簸毅蜂( 4 0 0 0 - s 0 0 c m ) 。筵桎宪等获茶蟹凌浚巾爨彀密来熬灰色 茶时多糖t p s - 3 在3 4 1 5 3 2 8 0 c r a 1 和1 6 6 5 1 6 3 5 c m l 处辫窍一般多藏躲质戆特薤暇牧蜂。 1 3 5 茶叶多糖的保健功能 溪攘多蘩酶探毽磅爨鼹霹魏爨毽食溺功蓬嚣子孛辚究鬟秀爨熬麓鹾究热点，近年 来，有丈量有关活性多糖保健功能的研究报道。丽茶时满性多糖也魁其中蘑要的个部 分。橇括起采，这些磅究耄簧集中在活镶多耱酌增强受凝谤节、抗静瘸、抗突变、降血 耱、燕瘸毒、耨矗羲、菝凝藏、菝浚疡、抗氧识簿方嚣淤3 9 辕6 0 6 1 1 。 1 3 5 1 荼彩糖其脊糖辎射效果 早在1 9 7 0 霉代，中因农她辩学院茶卧所与天津塑艇防疫翊f t l 6 1 ，瘸茶畦多糖趱燃最 骰了，j 、爨嚣慧楼效身| 病茨治试验。枣鑫鬣痰下注辩绘药嚣照射6 0 c o ，照射麓羹为7 6 6 8 4 0 舱( 釉。续聚麓零，茶砖多耱酌黪辐射效繁量墓，挺褰域溪率这3 0 。 1 3 5 2 茶雾糖具有抗凝斑殷抗血检你用 据歪激辩萼臻壤遂，荼时多蘸钵凑、薅静筠哥显著延长蠢凝器雩褥。灌管缭药 5 0 m g k g ，小鼠凝血时间可艇长3 1 9 。猩混合人j 缸浆中加入不同蓬的茶叶多糖3 7 c 孵 商l o m i n ，豫簸链髓阔灏定，靖：餐表镑，o 0 5 m g 的茶瞽 多耱舔可延长囊钙聪闻，0 4 m g 9 豢，赫分毒地化或理化性质曲研充 文献蟓连 可完全抑制m 浆凝固。用c h a n d l e r 法形成的赢栓，组织学上炎似于人体动脉j 衄栓。实 验表骥，茶多秸明显延长盘捡形成辩闯，缩愆矗拴长发，簌瑟起到抗斑栓豹药理作甭。 1 3 5 3 茶多糖具有降血糖作用 给小自鬣腹腔注射茶许多糖，1 2 h 后，血糖含量比对照下降了约1 2 ，差异达p ( 0 0 1 永乎；2 4 1 1 盛，血糖禽量虽下降了6 8 2 ，照蒺冥未达显著水平n 8 1 。王丁f i l l f l 9 1 等报道， 给芷常小自鼠口服剂爨为5 0 m g k g 和l o o m g k g 茶叶多糖，7 l l 厢血糖浓度分别下降1 4 和1 7 。黢黢注射裁繁戈2 5 r a e 沲窝5 0 m g k g ，7 h 鬣癜羲浓嶷分裂下酶了4 8 零t l5 2 ， 2 4 h 后给药组与对照组血糖浓度无差舜。进步用四氧嘧啶诱导高血糖模型小鼠，腹腔 疰瓣茶跨多糖，蘩萋麓l o o m g k g ，稳鞫2 4 h 分巍骜鬣取盘，结杀表麓，7 | l 螽斑糖降低 了4 7 ，差辨达极显著水平，2 4 h 后觚糖浓度最有所下降，但朱达显蔫水平。糖尿病本 囊楚越簿隐来源和去路闯失去正常狡态下的动态平衡，表现在：一方面葡萄糖生成增多， 另一方面糖的利用减弱，从两引起血糖浓度过高及穗鼹。茶时多糖其谢降血耱作用，说 明茶叶多塘共有修复糖代谢豢乱的作用。据k e n i c h ip 8 报道，给糖屎病患者饭后饮用 2 0 0 m l 内含4 5 r a g 茶叶多糖浆饮料，2 月轰盘糖浓度爨蓉下黪，疆匿酵及彗淫三醋慧含 量也有下降，4 周后所有患者都已好转。现有钢各含有茶叶多糖做为降血糖和抗糖尿瘸 鼹瓣蕊鐾窝镰素食舔的专剥掰l 。 1 3 3 a 茶叶多糖具有增强机体免疫功能 摆疰东疑等f 冁遴，对小自鬣受下注辩茶时多耱，然君浚腔注射苹红细稳免疫，6 d 后静脉取m ，观察凝集程度并计算抗体积数，结果袭明，茶叶多糠浓度农 3 晌删m i l o 曲n 咖l 范国内其有以血清凝集索为指标的体液兔疫增强作用，其中以浓发 3 0 m g m l 效果最佳，姆对照楣比差异达p ( 0 0 0 1 水平，薅浓发为1 s i n # m r 孵笼上述臻 用。 翳菸，蓉砖多糖还具有健送荤核瞧整缨熬黎绕器瞧魂能，增强瓿棒鑫我绦护筏力。 据壬丁刚报道给小鼠皮下流射茶叶多糖，7 d 后静脉注射2 的碳索墨水，剂量为 0 | 哦，2 r a i n 窝5 m i n 取矗筑涎，j 、鬣辕粒褰清情嚣。终采表骥，茶辞多糖裁蠡兔2 5 m g k g 和5 0 m g k g 时，小鼠碳粒廓清速率分别增加6 僻和9 3 。 1 - 3 5 5 荼时多赣对心盘管系统的若干药耀作用 据王丁闲| j 1 2 2 1 等搬遵，茶叶多耱对心血管系统具有以下药璞作用：黪斑蓬及减慢心搴 作用，茶叶多糖2 2 5 m g k g 十二指肠绘药，3 0 m i n 后可使麻醉大鼠血聪下降7 2 m m h g ， 心率减慢l 雪耐缺镊露瘸，i 妻瓣绘薮5 0 m g a 醵窝l o 辆歌g 茶跨多耱，正豢奎鼠在鬻 綦，麓分寓地化燕擅化性质曲嘶究 莲下存灌对润分裂延长5 9 萋i ：16 6 ，用巽雨瞥上艨索豹小鼠存滔融阕分别延长3 1 和 2 9 ：增热融状动昧流墩，心照插管侧支注入t 0 m g m l 茶砰多糖0 a m ，可增加离体豚 鼠心脏冠脉衄流量3 7 。 1 3 5 。6 茶时多糖述舆存降l 警终愆 m o i lm 等瞄】报道，用热水抽提绿祭，经超滤褥到多糖提取物。注射给药，帮量为 1 0 0 m g k g 蛾灌胃给药，剂鬣为1 0 0 0 m g k g 。结果表明，该多糖提墩物可明显降低高脂鼠 的盘浆慧艟霾薅及孛我艨水平。王东鼹镣摄遴，绘运露奎鬣菝黢注射0 2 m l 只，浓度秀 4 0 m g m l 的茶时多糖，斑清甘油三醅含薰，给药组在1 2 h 及2 4 h 后均比对照缀降低约 l ，血清腿圃醇含量，绘药组在1 2 h 厢比对照组低约1 5 ，2 4 h 厢约低5 o ，但均未 这显著农警。 苎兰苎竺苎垒兰查兰苎兰苎竺苎叁一一 塞兰一 2裁言 糖类是自然界最多的有机化含物，也是重要的生物满分子和震要的信息分予多糖 浸糖羹台耪分帮广泛，秘能多辩多襻，它稻参与了缩鬻对多耱生命话动静调节。肖靛多 糖具有特殊生物活性，怒一秘兔疫调节粼，且炎毒副作用，而被作为临床用药或疫萤。 在茶盱中也存在一种永溶性多糖，熊有多种特殊的嫩物活稳，称之为茶多糖( t e a p o l y s a c c h a _ d d e ) 。它辫趣糖、貉糖露瘸，还廷霄降盘礁、拭动赫鬻样磺睨、洚毅医、 抗凝_ 呶、抗血楗、防治心血管疾病等作用，而且它还能使血清凝集素抗体增加，从而增 强撬钵受疫凌戆泌、4 n 。 假目前对祭多糖的研究仍处于起步阶段，仪以粗提物迸彳亍动物实验，其分离、提取 i 艺还没有确囊。瑗在采霭熬方法一黢冀逶舞l 予实验室瓣磅兖工俸，著不适弱予互渣纯 生产，如海南群力药业肖限公司工业化生产的荣多糖含擞只有1 5 ，这对茶多糖的显著 生理功能的茇捧无疑燕一大簿礴，本研究通遘院较前入新运薅酌提取方濂，结合趣滤等 貊技术，试图找烈一耪逡会予工、盐他生产的工廖麓单，掇予操器，得率较高豹茶寥糖提 取纯化工艺，为今后茶寤糖的大规模生产提供基础和依据，并对优化工蕊提取的茶多糖 犍矮避行疆究。 茶多糖的来源丰富，主要襻在于料老茶叶中，因此原料较究分。利用新工艺，新方 法挺袋萘多糖鹣工翌纯燕产，并进一步器茇窭渗疗羲器癀、簿鬣盎蕤翦韵塞囊燕、受爨 健食晶，这对予低档茶的综合开发，提离荣叶的练合经济效益和社会效益是太存越裨的。 善多麓分离地化曩理亿性质曲研究 材料与方珐 3 材料和方法 3 1 材料 3 1 1 试验茶样 重庆雅安茶厂生产的团结牌康砖 3 1 2 主要试剂 试剂名称 d e a d - 5 2 纤维素 s e p h a d e x g - 1 0 0 工业酒精 乙醇 正丁醇 氯仿 硫酸 盐酸 蒽酮 葡萄糖 蓝色葡聚糖 葡聚糖9 0 葡聚糖7 0 葡聚糖_ 4 0 葡聚糖1 0 碳酸氢钠 氢氧化钠 氯化钠 3 1 3 主要仪器与设备 仪器与设备名称 自动部分收集仪 恒流泵 旋转蒸发仪 规格 柱层析用 柱层析用 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 色谱 色谱 色谱 色谱 色谱 分析纯 分析纯 分析纯 型号 b s z 1 0 0 h l 2 x z q 一1 0 6 产地和生产厂家 w h a t m a n 公司 瑞典p h a r m a c i a 公司 重庆市钛新化工有限公司 重庆市精工酒精公司 成都化学试剂厂 重庆东方试剂厂 重庆无机化学试剂厂 重庆无机化学试剂厂 广州化学试剂厂 重庆北碚化学试剂厂 瑞典p h a r m a c i a 公司 瑞典p h a r m a e i a 公司 瑞典p h a m a v c i a 公司 瑞典p h a r m a c i a 公司 瑞典p h a r m a c i a 公司 重庆无机化学试剂厂 重庆北碚化学试；i | j 厂 重庆北碚化学试剂厂 产地或生产厂家 上海沪西分析仪器厂 上海沪西分析仪器厂 上海医疗器械厂 豢多麓垂毒地犯是理化挂质琦研宽 精辫与方矗 紫多卜可鼹分是光度诗 透耩袋( 分子誓t 量旁1 2 i 4 备) 超级恒温水浴 超滤器 g c - 9 a 岛浮气褶色谱仪 c - r 3 a 型数据处理机 瓤艮宅氮仪 衙易圆滚装雹 微量分析天平 电磁搅拌器 徽壅粉碎瓤 c q 一5 0 5 0 融越 g c 9 a c ，r 3 a s a r t r i u s 。u 7 9 l s s 一2 6 l 上海分凝仪器厂 美国s i g m a 公司 重庆试验设备厂 上海囊袈羧援树黪蠢隈公霹 丑本岛滓公司 日本岛滓公司 上海玻璃仪器有限公司 瀹荣化工有限公司 西德 南江耄谶器耪厂 广东省今日电器实业辫限公司 3 2 实验蠢法 3 工l 茶多糖分离纯他的路线 3 2 1 1 传统的分朕沉淀法1 2 4 1 将茶榉磨碎一瘸王欺乙簿浸泡，圈流握取3 次一褥刭滤波( 掰褥会鸯茶多聚、 皂甙及朔雄虢豹乙醇液阿放置一旁) 一用沸水提取3 次一褥魏i 滤液( 滤渣彝鼹不用) 减压浓缩麓原体积约l ，l o 一一用s e v a g 沉淀法除去蛋白质多次一得到的上清液再逆向 流隶透拆3 天( 所褥刭鹣沉淀为含蠢爨鑫痰懿纯念甥) 一一减瓤浓缝透辑滚楚小傣羲 加乙醇使掇取液含酵萋达8 0 e ，静置，过夜，离心一一所得沉淀加水溶解，糟1 - 1 2 0 2 脱 色，然后按以上的操作避行二次沉淀一一二次沉淀溶于水一一用低浓度的乙醇溶液进行 沉淀一一沉淀魏l 无汞乙瓣，蠢酮反复洗涤一一囊空予爆餐茶多糖 3 2 1 2 求提法嘲 将茶样磨碎一一在其中加入2 0 倍的沸水浸泡( 获分3 次进杼，每次3 0 分钟) 一一 过滤褥上游液( 沉淀重复弧次上述过稷) 一减送浓缩至小钵较一一矮5 溪t t 碳进霉亍 脱色一一脱色液再用s e v a g 法去蛋自一一得到的上清液透析3 天一减压浓缩麓小体积 在其中加入1 ，5 倍的9 5 乙醇，过夜一一离心，得沉淀( 上清液弈去) 一用冤水乙醇、 踅蘩或乙醚反复多次弱洗涤一一遴移爽窆于爨缛茶多糖 3 2 1 3 柱层轿法l 碱 将茶样磨碎一一在其中共加入2 0 倍的沸水浸泡( 分3 次进行，每次3 0 分钵) 一一 1 4 茶多麓分离屯化及理化性质的研究 材料与方珐 过滤，提取液再减压浓缩至小体积一一加入乙醇沉淀一一沉淀加入去离子水溶解一一 透析3 天一一将透析液减压浓缩至小体积一一加入乙醇沉淀，并过夜一一将所得沉淀用 乙醇，丙酮洗涤后真空干燥即得茶多糖粗制品一一将粗制品溶于水一一用d e a e - 纤维 素吸附一一用水洗涤，用稀碱溶液洗脱一一收集，并合并收集液一一h c l 中和，并置 于超滤器上过滤一一减压浓缩至小体积一一浓缩物冷冻干燥得茶多糖 3 214 超滤法1 3 9 他廿4 4 1 我们结合傅博强，陈海霞，周集体，惠永正等人的提取方法，根据初步试验提出了 下列所述提取工艺，并称之为超滤法： 将所需茶样磨碎一一在其中加入9 0 的乙醇，浸提4 小时一一过滤( 滤出的乙醇溶 液可作为茶多酚，咖啡碱等的提取原料) ，滤渣重复提取一次一一滤渣加入去离子水在搅 拌条件下低温提取，同样条件重复3 次一合并过滤液，过滤，浓缩成小体积一一加入 蛋白质消除剂，放置1 5 小时以上一一离心，去沉淀，溶液用石油醚萃取一一水相液进 行超滤一一截流液用一至五倍的乙醇和丙酮沉淀一一沉淀溶解后冷冻干燥的茶多糖 3 2 2 多糖含量的测定：硫酸蒽酮法1 9 、2 7 1 标准曲线的制作：准确称取葡萄糖2 0 r a g 置于5 0 0 m l 容量瓶中，加水至刻度，分别 吸取o 2 m l 、0 4 m l 、o 6 m l 、0 8 m l 、1 0 m l 、1 2 m l 及1 4 m l 置于7 支1 0 m l 具塞试管中， 再分别向各管中加入1 8 m l 、1 6 m l 、1 4 m l 、1 2 m l 、1 0 m l 、0 $ m l 及o 6 m l 蒸馏水，浸 于冰水浴中冷却，然后再向各管中加入4 0 m 1 2 9 l “的葸酮浓硫酸溶液，摇匀，同时将 各管从冰水浴取出，置于沸水浴中1 0 r a i n ，并不断振动，反应结束后用自来水冷却，室 温放置1 0 m i n 后，以第一管为空白，于4 9 0 n m 处测定其它各管的吸光值，以多糖体积 为横坐标，吸光值为纵坐标，得标准曲线如图l 。 图1 葡萄糖标准曲线 f i g ls t a n d a r dc u r v eo fg l c 蓁多分寓地化及理化性质的研完 材抖与方击 样品多糖含量测定：吸取样品液1 o m l ( 相当于4 0 9 9 左右的多糖) ，重复3 次，按 上述步骤操作，测定吸光值，以标准曲线计算多糖含量。 3 2 3 茶多糖组成成分测定 a 含水量测定：1 0 5 恒重法【2 8 】 b 灰份测定：灼烧法1 2 9 l c 蛋白质的测定：微量凯氏定氮法【2 8 l 3 2 4 茶多糖分予质量测定1 9 孤4 剐 分子质量测定：凝胶柱层析。取用o 1 m o l l n a c l 溶液充分溶胀( 4 5 h ) 的s e p h a d e x g 2 0 0 装柱( 1 5 m m g o o m m ) ，用0 i m o l l n a c i 溶液平衡3 d ，先后将5 种以知分子质 量的葡聚糖标准品( d e x t r a n 系列，平均分子质量分别为1 0 0 0 0 d a l ，4 0 0 0 0 d a l ，7 0 0 0 0 d a l ， 1 1 0 0 0 0 d a l ，和5 0 0 0 0 0 d a l ) 进行凝胶层析，上样量各1 0 m g ，用o 1 m o f l n a c i 溶液洗脱， 流速为6 m l h ，按i m l 管分部收集，用硫酸蒽酮法检测茶多糖，分别求得