免疫质控PPT课件.ppt

免疫质量控制,1,检验质量的重要性,医学检验是一门综合性应用学科，是现代医学不可缺少的组成部分，其检验质量直接影响着医疗工作的整体水平。,2,免疫质量控制相关的几个概念质量Quality一组固有特性满足要求的程度。注1：术语“质量”可使用形容词如差、好或优秀来修饰。注2：“固有的”（其反义词是“赋予的”）就是指存在某事或某物中本身就的，尤其是那种永久的特性。质量控制(QualityControl,QC)质量管理的一部分，致力于满足质量要求质量保证(QualityAssurance,QA)质量管理的一部分，致力于提供质量要求会得到满足的信任。,3,室间质量评价（ExternalQualityAssessment,EQA）/能力验证(ProficiencyTesting,PT)利用实验室间的比对确定实验室的检测能力(能力验证)室内质量控制采用每天随标本测定质控血清的方法，并将结果误差控制在一定限度之内系统误差通常表现为质控物测定均值的漂移,是由操作者所使用的试剂、仪器设备、标准品或校准物出现的问题而造成的,这种误差可以通过质量控制的措施和方法加以控制,是可以排除的。随机误差则表现测定SD的增大,主要是因为实验操作人员的操作等随机因素所致,其出现难以完全避免和控制。,4,单波长与双波长单波长如：405nm、450nm、490nm、630nm等要设空白对照孔，所有孔要减空白对照值双波长如：主波长450nm，参考波长630nm等可不用设空白对照孔OD值与S/CO值OD值:酶标仪比色的吸光度S/CO值:标本OD值/判断值（CUT-OFF）统计数据时要选用S/CO,5,临界值（CUT-OFF）是ELISA方法检测的阴阳性结果的判断值。不同项目的试剂盒CUT-OF值不同,常见有以下几种方式:试剂盒直接提供的常数如HCV-IgGCO=1.5与阴性对照相关的计算值如HBsAgCO=2.1N与阴阳性对照相关的计算值如HBcAbCO=1/2(N+P)“灰区”（可疑结果的含义）把定量分析的正常值范围引入定性分析建立灰区概念，即将CO值上下的一段区域定为阳性可疑，需重复实验或换试剂重测以确定其阴阳性，如仍落在灰区范围内则报告“+”（阳性）,6,定性酶免疫测定的CUT-OFF值,7,ELISA检测的“钩状”效应“HOOKEFFECT”,一步法和二步法均存在，只是前者出现的更早些，大多数是高值低吸光度，很少阴性结果。,8,质量控制血清,质控血清是已知靶值的血清，在每次的常规检验中加入一份或数份，通过所得结果来了解本次检验的情况。质控血清检验的结果如能控制其误差在一定范围内，就说明该检验没有发生不允许的误差。如果出现超过允许误差范围的异常结果，提示该检验不合格，应寻找原因，纠正后，重检待测标本。因此质控血清在质控工作中起重要作用。,9,临界值质控血清,质量控制血清分定值和未定值两种。如只用一份质控血清定值，一般定在正常值与异常值交界点上，定性测定时处于弱阳性水平，称为临界值。乙肝标志物临界值的制定，应按临床需求，为临床提供统一的判断弱阳性的标准。临界值质控血清可以作为试剂盒中的阳性对照品和阴性对照品以外的第三个对照品，它可以灵敏地反映出试剂盒的检出水平，确保弱阳性反应的标本不漏检。,10,质控品（临界血清）通常选用的浓度,卫生部临检中心提供：HBsAg1IU/mlHBsAb10mIU/mlHBeAg2NCU/mlHBeAb4NCU/mlHBcAb2NCU/mlHCV-IgG2NCU/mlHIV-Ab2NCU/mlTP2NCU/ml,11,质量控制的形式,按其进行范围和评价目的：室间质量评价室内质量控制,12,室间质量评价的目的是相互校正各参与实验室测定结果的准确性，要求保持在临床所能接受的误差范围内，从而使参加活动的实验室之间结果具有可比性，因此室间质量评价着重考察检验操作的整体状态，由于室间质量评价活动是借助外部力量来进行回顾性检查，而不能控制实验室每天所发生的报告质量，故绝不能代替室内质量控制。相反只有首先搞好室内质量控制，保证检验结果达到一定的精密度，才能得到较好的室间质量评价成绩，才谈得上室间结果的可比性。当室间质量评价某一项目出现明显差异时，又要从室内质量控制中寻找原因，重新制订改进计划。,室间质量评价的目的,13,室内质量控制的目的,实验室为了监测和评价本室工作质量，决定常规检验报告能否发出所采取的一系列检查、控制手段，旨在检测和控制本室常规工作的精密度，并检测其准确度的改变，提高本室常规工作中批间和日间标本检测的一致性。,14,室内质量控制的质量保证,提昌全程保证或全方位保证，主要因素：人质量体系实验前的质量保证实验中的质量保实验后的质量保证,15,人是质量保证的关键素质：热爱医学检验专业具有广泛的临床医学知识和检验基础知识具有高度的责任心具有闲熟的检验操作技能具有严谨的工作作风和实事求是的工作态度设立质量监督管理员：督促、检查、落实各项质量要求,16,质量管理体系建立各种管理文件（操作规程）包括:分析前、中、后各个环节相关表格的建立、填写及归档建立各项标准化操作程序（SOP）包括:仪器设备检验项目等,17,室内质量控制的基本内容包括,分析前的质控分析中的质控分析后的质控病人准备量具与测量计算结果标本采集试剂质量标准曲线标本转移仪器状态质控图绘制标本处理反应条件结果统计分析标本储存比色测定,18,免疫室内质控各种表格的填写,冰箱、水浴箱温度记录表仪器设备故障维修记录本各种仪器设备使用记录本各种仪器设备校准记录本各种仪器设备保养记录本环境温度、湿度记录表各种原始操作记录表尤瑞纳斯、I2000操作记录表杂项操作记录表自身抗体操作记录表TORCH操作记录表ASA、ACA操作记录表体检项目操作记录表HIV-Ab标本检测登记表HIV-Ab原始记录、,原始结果记录试剂、质控物批次更换记录免疫室内质控失控结果记录尤瑞纳斯室内质控即时审核记表即刻法室内质控原始数据记录（计算）表HCV-Ab阳性报告记录表HIV-A结果登记表室内质控图月分析总结室间质评回报结果分析总结,19,免疫质控方法Levey-Jennings法(回顾性)“即刻审核”分析,20,“L-J”质控方法免疫质控目前没有统一的方法,最合适的质控方法尚待研究建立中。目前由各实验室根据各自的情况制定,但必须要满足临床的需要，本实验室引用“L-J”质控方法，其内容基本上与临床化学测定的质控方法相同,但失控的判断标准不同。本室ELISA失控的判断标准暂定：1.标本OD值CO值为阳性的，S/CO值1为失控；标本OD值CO值为阳性的，S/CO值1为失控；2.S/CO值3S为失控。,21,免疫质控的特点影响ELISA检测的因素很多。检测时，阴阳性对照物、质控物和标本同时同板进行检测。检测完成后要对空白孔、阴阳对照孔、质控物进行即刻审核，判定是否在控，该板结果可否发出。,22,即时审核规则,UranusAE200（所有项目数据自动换算自动传输）:设空白1孔，阴、阳性对照各2孔,室内质控1孔（乙肝两对半、HIV-Ab、HCV-Ab、TP、CEA、AFP、EB、肝吸虫抗体）乙肝两对半（上海科华）在控的情况下，阳性结果必须符合特有的模式方可发出报告；对少见或不可能出现的模式必须复查。重点注意HBsAg，复查的方法有:金标、两步法、时间分辨、PCR、中和试验等。,23,（HBsAgHBsAbHBeAg）CUT-OFF值=2.1N(N-阴性对照,OD值不到0.05按0.05算)。通常CO值为0.105。结果判断阳性：CUT-OFF值；阴性：CUT-OFF值（HBeAbHBcAb）CUT-OFF值=1/2（N+P）（N-阴性对照,P-阳性对照)。通常CO值为1.5-1.7。结果判断阳性：CUT-OFF值；阴性：CUT-OFF值,24,HIV-Ab（北京金豪）筛查阳性按条例规定用另一种方法和本法复查，3次2阳送确认，发“HIV-Ab待复查”报告，3次2阴发“阴性”报告。CUT-OFF值=0.1+N(N-阴性对照,不到0.02按0.02算),通常为0.12阳性：0.12阴性：0.12HCV-Ab（北京现代）阳性时应与PCR检测HCV-RNA相比较，为防假阳性，HCV-Ab阳性时应告知PCR室作进一步检验或做中和试验。CUT-OFF值=0.1+N(N-阴性对照,不到0.05按0.05算),通常为0.15阳性：0.15阴性：0.15,25,梅毒抗体检测采用的方法：TP（ELISA）、梅毒明胶凝集法(TPPA)、梅毒血球凝集法（TPHA）、TRUST(非特异性)本室质控原则：先用ELISA试剂在UranusAE200上检测，若阳性标本应即时用TPPA复查，进一步确认后发出报告。TP（ELISA）CUT-OFF值=2.1N(N-阴性对照,OD值不到0.05按0.05算)。通常CO值为0.105结果判断阳性：CUT-OFF值阴性：CUT-OFF值,26,AFP、CEA定性（郑州安图）：设空白1孔，阳性对照(高浓度)2孔，阴性对照(低浓度)2孔，不设室内质控。AFP高浓度：400ug/L低浓度：20ug/LCEA高浓度：80ug/L低浓度：10ug/LCUT-OFF值低浓度OD值为阳性阳性的标本审核时在“结果评价”栏注明“建议进一步做定量检查”,27,EB病毒抗体（VCA-IgA）（深圳华康）设空白1孔，阳性对照2孔，阴性（正常）对照2孔，无室内质控物CUT-OFF值=0.270+正常对照OD值结果判断EBVVCA-IgA阳性：待测血清或血浆OD值/CO值1.0EBVVCA-IgA阴性：待测血清或血浆OD值/CO值1.0,28,TORCH(IgM)(CMV、RUBE、TOXO、HSV+)设阴、阳对照各1孔、CO值血请两孔。结果计算:标本OD值CO的1.1倍为阳性，标本OD值处在CO值10的范围为可疑。质量要求:阳性ODCO值的1.5倍；阴性OD值/CO的OD值0.6。符合以上要求方可发出报告。,29,ELISA定量抗精子抗体ASA6个浓度的标准品，各单孔。操作要求高，相关系数r0.96方可发出报告。抗心磷脂抗体ACA（IgG、IgA、IgM）单个校正品阴阳对照。结果计算：标本浓度值=OD值标本/OD值校准CV(标于盒内标签上)质量要求：阳性对照OD值0.5；阴性对照OD值0.25；校正OD0.3；阳性/校正1.25；阴性/校正0.9。符合以上要求方可发出报告。,30,时间分辨荧光定量检测乙肝两对半,设A-F6个不同浓度校准品（见说明书）和室内质控各1孔（室内质控采用卫生部临检中心乙肝两对半定性质控物）HBsAg结果判读：标本浓度值0.2ng/ml的判为阳性；否则为阴性。质量要求：1.A点计数值应5000，F点计数值应100万。2.相关系数r值应0.983.典型的剂量反映曲线HBsAb结果判读：标本浓度值10mIU/ml的判为阳性；否则为阴性。质量要求：1.A点计数值应5000，F点计数值应8万。2.相关系数r值应0.983.典型的剂量反映曲线HBeAg：CUT-OFF值=2.1Ncounts(N-阴性对照,Ncounts值不到2250按2250算,Ncounts值高于2250，按实际计数值计算)。结果判读：标本的counts与CUT-OFF的比值1.0判为阳性，否则为阴性。质量要求：1.阳性对照counts值应60万。否则实验无效，全部重做。2.阴性对照counts值应8000。否则实验无效，全部重做。,1000,10000,100000,1000000,10000000,0.21525150,HBsAg校准品（ng/ml）,51040160640,抗HBs校准品,31,HBeAb：CUT-OFF值=1/2Ncounts结果判读：CUT-OFF与标本counts值的比值1.0判为阳性，否则为阴性。质量要求：1.阳性对照counts值应1万。否则实验无效，全部重做。2.阴性对照counts值应30万。否则实验无效，全部重做。HBcAb：CUT-OFF值=1/2Ncounts结果判读：CUT-OFF与标本counts值的比值1.0判为阳性，否则为阴性。质量要求：1.阳性对照counts值应1万。否则实验无效，全部重