苦参素氯化钠注射液质量标准的相关研究.doc

苦参素氯化钠注射液质量标准的相关研究关键词：苦参素氯化钠注射液；高效液相色谱法 【摘要】目的建立苦参素氯化钠注射液中苦参素含量及有关物质检测的高效液相色谱方法。方法HypersilC18(5m，4.6mm200mm)色谱柱;流动相：三乙胺磷酸缓冲液(pH7.2)-乙腈(80：20);流速1ml/min，检测波长210nm。取三批试药单点外标法测定苦参素含量，归一化法测定制剂中有关物质的含量。结果苦参素浓度在121200g/ml范围内，峰面积(A)与浓度(C)线性良好，回归方程为(A)=15262759C+24440(r=0.9999)。日内日间RSD<1%，平均回收率为100.6%。三批样品的含量分别为102.9%、102.4%和102.2%，三批样品有关物质的含量分别为0.31、0.31、0.32。结论可以应用HPLC测定苦参素氯化钠注射液中苦参素的含量和有关的物质，该方法准确度和精密度高，检测限低，适合应用于该制剂的质量控制。 【关键词】苦参素氯化钠注射液；高效液相色谱法；含量；有关物质 Thestudyofqualityabouttheinjectionofkurarinoneandsodiumchloride 【Abstract】ObjectiveTouseliquidchromatograghy(LC)，andtodetectthecontentofkurarinoneandcorrelativematterintheinjectionofkurarinoneandsodiumchloride.MethodsChromatograghiccolumnwasHypersilC18(5m.4.6mm200mm);mobilephasewerethebuffersolutionoftriethylaminephosphoricacid(pH7.2);acetenitrile(80：20)，flowrate1ml/minanddetectionwavelengthwas210nm.Touseextiernalstandardmethod，detectedthecontentofkurarinoneinthethreegroupsofreagent，detectedthecontentofthecorrelativematterinthereagentwithnormalizedmethod.ResultsWefoundthatthecontentofkuarinoewas121200g/ml，peakarea(a).concentration(c)andlinearregressionwerefavorable，regressionequationwasA=15262759c+24440(r=0.9999)，andRSD<1.inadayornext，theeveragerecoverywas100.6%，theecontentofkurarinoneinthethreegroupsofreagentwere102.9%，102.4%and102.2%，thecontentofthecorrelativematterinthethreegroupsofreagentwere0.31，0.31，and0.32.ConclusionThestudyshowsthatwecandetectthecontentofthekurarinoneandcorrelativematterintheinjectionofkurarinoneandsodiumchloridewithHPLC，Themethodshasverygoodaccuracyandprecision，itissuitableforthequalitycontrolofthereagent，withlowdetectionlimit. 【Keywords】kurarinonesodiumchlorideinjection;high-performanceliquidchromatography(HPLC);content;correlalivematter 苦参素(Oxymatrine)是从中药苦豆子中提取的生物碱，98%为氧化苦参碱，具有抗炎、抗菌、抗病毒、调节机体免疫功能等生物化学作用1。临床应用的苦参素氯化钠注射液为每瓶250ml，含0.2g苦参素和2.25g氯化钠，每次用3瓶，液体用量较大，静点时间较长，为了满足临床的需要开发了每瓶100ml，含苦参素0.6g和氯化钠0.9g的新制剂，从而减少了临床应用次数和输液量，且缩短了静脉点滴时间。在参考国内文献基础上2，本实验建立了测定制剂中苦参素含量及有关物质的HPLC方法，该测定方法为制剂的质量研究提供参考。 1仪器和试药 1.1仪器Waters高效液相色谱系统(600E泵，712自动进样品，996PDA检测器，在线脱氧机，Millenium色谱管理系统)。 1.2试药苦参素氯化钠注射液(规格100ml含苦参碱0.6g，氯化钠9g；批号：020621、020622、02623；生产厂家：哈尔滨康信药物技术开发有限公司)；苦参素对照品(黑龙江省药品检定所提供);乙腈为色谱纯，磷酸、三乙胺为分析纯。 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱：HyperSilC18(5m，4.6mm200mm)柱；流动相：三乙胺磷酸缓冲（三乙胺ml溶于800ml水中，用磷酸调p至7.2，再加水至1000ml）：乙腈（：vv）;检测波：210nm;流速ml/min;进样量l。 2.2系统适应性分别取流动相，苦参素氯化钠注射液及苦参素对照品适量，流动相溶解并稀释得稀释溶液，另取苦参素原料适量两份，其中1份加6mol/L硝酸0.5ml，另1份加1mol/L氢氧化钠0.5ml，分别于60水浴h后，用流动相稀释倍，得苦参素酸、碱破坏稀释溶液。取上述溶液l进样，色谱分离，结果苦参素的保留时间为6.353min，流动相无干扰峰，酸破坏后降解产物与苦参素分离良好，分离度1.5，见图1。a空白溶液；b苦参素对照品；c苦参素氯化钠注射液；d酸破坏稀释溶液；e碱破坏稀释溶液；1苦参素图1系统适应性色谱图2.3 线性实验 精密称取干燥恒重的苦参素的对照品mg，置ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度摇匀，得浓度为.mg/ml的溶液，用流动相逐级稀释使苦参素的浓度分别为0.24、0.12、0.048、0.024和0.012mg/ml的系列溶液，分别精密量以上溶液20l，按上述色谱条件进样，进行色谱分离，以峰面积（A）对浓度（C）进行回归，得回归方程为A1526275C+24440(r=0.9999，P<0.05)。结果表明苦参素浓度在0.0120.24mg/ml范围内浓度与峰面积的线性关系良好。 2.4 最小检测限 取“2.3”项下浓度为0.012mg/ml的溶液，逐级稀释，进样20l，按上述色谱条件进行分离，以信噪比优于3：1为有效色谱峰，结果表明苦参素的最小检测限为2.6ng。 2.5 溶液稳定性 取“2.3”项下浓度为0.12mg/ml的溶液，分别与0、1、3、5、7、10、15和20h进样20l，按上述条件进行色谱分离，结果20h内溶液稳定，浓度为（0.120.047）mg/ml，RSD为0.39%。 2.6 精密度实验 取苦参素对照品适量，置于100ml容量瓶中，按处方量加入氯化钠和超纯水，分别制备苦参素处方标示量的80%、100%和120%三个浓度供试液。每个浓度制备5份，即，分别每日5次和每日1次连续5天制备，取上述各溶液20l进样，色谱分离纪录色谱峰，将色谱峰带入线性方程计算侧得值，计算精密度，结果RSD1%，见表1。 表1 密度实验结果 2.7 回收率实验 按“2.5”方法制备标示含量为80%、100%、120%的三个浓度溶液5份，按上述色谱方法进样20l，进行色谱分离，得色谱峰（A），将色谱峰代入线性方程计算侧得值，以侧得值/加入值100%计算回收率，结果回收率在97%103%范围内，见表2。表2 回收率实验结果 2.8 含量测定 取恒重的苦参素对照品适量，精密称量，加流动相稀释，制备苦参素浓度为0.12mg/ml的溶液作为对照品溶液。另精密量取苦参素氯化钠注射液2ml，置100ml容量瓶当中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各20l，按上述色谱条件，对照品和供试品色谱峰，按外标法计算苦参素的标示量百分含量。对三批苦参素氯化钠注射液，每批10瓶进行含量测定。结果三批样品（020621、020622、020623）的含量分别为（102.90.87）%、（102.40.85）%、（102.21.89）%，见表3。表3 三批样品含量测定结果 2.9 有关物质测定 分别取三批苦参素氯化钠注射液，每批10瓶，每瓶精密量取2ml，置于10ml容量瓶中加流动相至刻度，摇匀，得有关物质测定的供试液。在再精密量取上述供试液1ml取于50ml容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作对照溶液。精密量取20l，按上述色谱条件进行分离。调整仪器灵敏度，使供试液主峰的峰高约为满量程的20%40%，用归一化法计算除试药外各有效峰的百分含量，以各有效峰的百分含量总和计算有关物质含量，另外各有关物质峰面积的总和不得大于对照溶液的峰面积，即有关物质含量2%。结果表明三批样品（020621、020622、020623）的有关物质分别为（0.310.022）%、（0.330.025）%、（0.340.029）%，均2%，见表4，图2。 图2 有关物质测定色谱图a 空白溶液；b 有关物质测定的供试液；c 有关物质测定的对照溶液 表4 三批样品有关物质含量 3 讨论 氧化苦参碱(oxymatrine)是从豆科槐属植物苦豆子及苦参根中提取分离得到的一种双稠哌啶衍生物，现代药理学研究表明它有强心、抗心律失常、抗炎抗肿瘤等作用，近年来它还被用于治疗乙型肝炎，取得良好的效果，临床上广泛用于治疗因肿瘤放疗、化疗引起的白细胞减少和慢性乙肝等3。通过对溶剂、提取次数、碱化条件的选择，用离子交换和重结晶的方法提取纯化氧化苦参碱。其工艺为60的酒精提取、沉淀、浓缩、酸化后上柱交换，已交换的树脂碱化后用氯仿萃取，收干氯仿后用乙醚萃取，沉淀用丙酮结晶得氧化苦参碱。苦参素为氧化苦参碱和氧化槐果碱的混合物，其中氧化苦参碱的含量在98%以上，苦参素质量标准中的含量测定多采用硫酸滴定薄层扫描等方法繁项，其含量杂质无法计算4。 我们曾在预试验中探索应用氨基柱、C8柱等，均未得满意的分离效果。这样应用十八基硅烷