结核菌素试验的原理.ppt

掌握：分枝杆菌的共同特性；结核杆菌细胞壁脂类含量与其染色性、培养特性、抵抗力和致病性的关系；结核杆菌的致病性与免疫性；结核菌素试验的原理、结果意义及应用价值；白喉棒状杆菌的生物学特点、致病性、特异性防治;熟悉：结核杆菌的微生物学检查原则及特异性预防；麻风杆菌的致病特点、微生物学诊断。白喉外毒素的组成及其毒性作用;了解：麻风病防治原则；锡克试验。,目的要求,呼吸道感染细菌,概念：经呼吸道传播，主要引起呼吸道器官或呼吸道以外器官病变的一类细菌。范围：1、结核分枝杆菌2、白喉棒状杆菌3、嗜肺军团菌4、百日咳鲍特菌5、流感嗜血杆菌6、肺炎克雷伯菌,结核分枝杆菌,M.tuberculosis,EUGONICGROWTH14DAYS,DYSGONICGROWTH14DAYS,Mycobacteriumtuberculosis,Mycobacteriumbovis,COLONIALMORPHOLOGYOFTHETUBERCULOSISCOMPLEXMYCOBACTERIA,是一类细长略弯曲的杆菌,有分枝生长的趋势。细胞壁含有大量的脂质，与染色性、抵抗力、致病性等密切相关。抗酸染色（+）致病性与菌体成分有关，引起的疾病都呈慢性，并伴有肉芽肿。,分枝杆菌共同特点,分枝杆菌分类,结核分枝杆菌人型、牛型结核分枝杆菌非结核分枝杆菌堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、瘰痨分枝杆菌、鸟-胞内分枝杆菌、蟾分枝杆菌、偶发分枝杆菌麻风分枝杆菌,分类对人致病的主要分枝杆菌,形态：细长略带弯曲或直的杆菌，有时有分枝；在不同条件下形态不尽相同，呈现多形性。大小：140.4m排列：常聚集成团染色性：齐-尼抗酸染色阳性（红色）,Much颗粒,一、生物学性状,形态与染色,专性需氧。生长缓慢，约18小时分裂1代，2-4周才见菌落生长。,培养特性,营养要求高，初次分离常用含有蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐和孔雀绿的Lowenstein-Jensen(罗氏）培养基。典型菌落：粗糙型。菌落呈颗粒、结节或菜花状，乳白色或米黄色、粗糙、不透明。,液体培养基：在管底开始生长，最后在表面形成菌膜。结核杆菌有毒株呈索状生长，细菌排列呈索状。,生化反应：不活跃,糖发酵（-）人型可合成烟酸和还原硝酸盐，而牛型不能。结核杆菌触酶（+）、热触酶（-），而非结核分枝杆菌均为（+）,抵抗力：较强,抗干燥，耐酸硷，对多种染料有抵抗力对紫外线敏感，可用于患者衣物的消毒对链霉素、利福平、异烟肼、环丝氨酸、乙胺丁醇、卡那霉素、对氨水杨酸敏感，但长期用药易出现耐药性。,生化反应,抵抗力,四抗,干抗燥,抗酸碱,抗碱性染料,抗青霉素等,怕痨药物,四怕,怕湿热,怕紫外线,怕酒精,不发酵乳糖，触酶阳性,变异性,形态、菌落变异毒力变异：卡介苗（BCG）Calmette和Guerin二人将牛型结核杆菌放在含有甘油、胆汁、马铃薯的培养基中经13年230次传代而获得的减毒活菌苗，用于预防结核病。耐药性的变异,致病物质,脂质,分枝杆菌生长素,分枝菌酸,蛋白质,结核菌素最重要,磷脂,索状因子,蜡质D,硫酸脑苷脂,二、致病性和免疫性,1、脂质（1）分枝菌酸：细胞壁脂质中的主要成分，与抗酸性有关。（2）磷脂：促使单核细胞增生，引起结核结节形成与干酪样坏死。（3）索状因子：能破坏细胞线粒体膜，抑制白细胞游走和引起慢性肉芽肿。（4）蜡质D：具有佐剂作用，可激发机体产生迟发型变态反应。（5）硫酸脑磷脂：抑制吞噬细胞中吞噬体与溶酶体的结合，使其能在吞噬细胞中长期存活。2、蛋白质：主要成分是结核菌素。与蜡质D共同作用引起迟发型变态反应。3、分枝杆菌生长素：脂溶性的铁螯合剂。,致病性,磷脂,分枝菌酸,索状因子,蜡质D,硫酸脑苷脂,脂质,蛋白质,结核杆菌细胞壁上的,致病物质,肺炎肉芽肿的损害,淋巴和血行传播,任何部位的肉芽肿,所致疾病:结核，尤其以肺结核多见,传染源：病人,传播途径：多途径,PULMONARYTUBERCULOSIS,Bacteriacoughedupinsputum,Inhalationofbacteria,Bacteriareachlungs,entermacrophages,Bacteriareproduceinmacrophages,Lesionbeginstoform(caseousnecrosis),Activatedmacrophages,Bacteriaceasetogrow;lesioncalcifies,Immunesuppression,Reactivation,Lesionliquefies,Deadphagocytes,necrosis,M.tuberculosis,Phagocytes,Tcells,andBcellstryingtokillbacteria,Death,Spreadtobloodorgans,Stepsinthedevelopmentoftuberculosis,Largecaseatingtubercle,Miliarytubercles,HUMANLUNG,HUMANLUNG,TUBERCULOSIS,systemicdisease(versuspulmonary)greaterinAIDSlesionsoftenlepromatous,ClinicalfeatureswithAIDS,胞内菌,不完全吞噬,肺结核的两种表现,原发感染,原发后感染,原发综合征：原发灶、淋巴管炎、肺门淋巴结肿大,病程呈慢性渐进性，伴有乏力、体重减轻、咳嗽、盗汗、午后潮热、胸痛等。病灶多局限呈干酪样结节，若结节破溃，则可形成空洞，传染性强。,致病性,1、细胞免疫为主,为传染免疫（infectionimmuity)/有菌免疫，2、免疫与变态反应共存,传染免疫（infectionimmuity)/有菌免疫即只有当TB菌在体内存在时才有免疫力，一旦体内的TB菌被杀灭，免疫也随之消失。,是应用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核杆菌是否能引起变态反应的一种试验。原理：迟发型变态反应试剂：OT（tuberculin)、PPD,测红肿硬结直径,5mm为“+”,15mm为“+”,结核菌素试验,意义：“+”已感染过结核杆菌或预防接种“+”可能有活动性感染“-”未感染过结核杆菌，但还要考虑是否感染初期、老年人、细胞免疫功能低下。应用：（1）选择BCG接种对象和免疫效果的测定（2）作为婴幼儿结核病诊断的参考（3）测定肿瘤患者的非特异细胞免疫功能（4）在未接种BCG的人群中调查结核病的流行情况。,临床资料、细菌学检查、放射学诊断仍是目前肺结核诊断的主要依据，其中细菌学检查具有确诊意义。,直接涂片镜检：抗酸染色,分离培养,动物试验,标本采集和集菌,检测鉴定新技术：PCR、核酸探针、DNARFLP、色谱分析技术、BactecTB-460系统等,L型培养,三、微生物学检查,预防（1）加强卫生管理，改善营养条件。（2）早期发现和治疗病人（3）接种卡介苗治疗链霉素、利福平、异烟肼、对氨水杨酸为第一线药物,强调联合用药、足疗程，防止耐药性、减少毒性。,四、防治原则,麻风分枝杆菌M.leprae,是引起慢性传染病麻风的病原体。,Mycobacteriumleprae,麻风杆菌形态、染色与结核杆菌相似，常在细胞内呈束状或团状排列，外观似松叶或烟丝撒落在纸上为其特点。含菌的细胞浆呈泡沫状，称麻风细胞。典型胞内菌,动物感染模型：小鼠足垫模型、犰酴模型,一、生物学性状,人工体外培养迄今尚未成功。,传播途径：呼吸道、接触传播,传染源：瘤型麻风病人为主要传染源,以细胞免疫为主,肉芽肿损害色素减退感觉缺失,二、致病性与免疫性,标本采集：鼻粘膜或皮损涂片染色镜检病理组织切片检查麻风菌素试验：不能用于诊断，但可用于分型及了解麻风患者及接触者的预后。,三、微生物学检查,目前尚无特异性预防方法普查、定期检查，早期发现，早期隔离BCG预防有一定效果,防,治,药物治疗：氨苯砜、氯法齐明、利福平和氟喹诺酮类制剂为麻风联合化疗主要的配伍药物。,四、防治原则,白喉棒状杆菌,C.diphtheriae,棒状杆菌特点,革兰阳性,菌体一端或两端膨大呈棒状。菌体染色不均匀，出现节段染色或异染颗粒；排列常呈栅栏状或Y、V等形状。主要菌种：白喉棒状杆菌、假白喉棒状杆菌、干燥棒状杆菌等。引起人类致病的主要是白喉棒状杆菌。,形态：菌体细长微弯，一端或两端膨大呈棒状；排列：不规则，常成V、L及栅栏状。染色性：G+美蓝染色：菌体着色不均，有浓染颗粒。Neisser/Albert染色：有异染颗粒。,形态与染色,白喉棒状杆菌,一、生物学性状,培养特性,Loffler（吕氏）血清斜面上生长迅速，1218小时生成细小、灰白色、湿润、圆形凸起的菌落。鉴别培养基：亚碲酸钾血琼脂平板上，菌落呈黑色。,抵抗力,对湿热抵抗力不强，但对寒冷和干燥抵抗力强。对青霉素、氯霉素、红霉素敏感。,白喉棒状杆菌,二、致病性与免疫性,致病性,致病物质：白喉外毒素,Electronmicrographofcorynebacteriophage,whichcarriestox,受体结合功能区B片段,催化功能区,穿膜功能区,A片段,白喉外毒素,DiphtheriaToxin(DT),CleavedtoyieldA/Bfragment,joinedbyS-Sbond-A(catalyticdomain)-B(transmembraneandreceptorbindingdomains),Pathogenesis,A片段,B片段,A片段灭活延长因子,白喉外毒素作用机制,细菌局部繁殖部位，形成灰白色的假膜。,所致疾病：白喉,外毒素入血造成毒血症并到达易感细胞神经系统、心脏、肾脏等。,Thickgreypseudomembranecomposedoffibrin,epithelialcells,bacteriaandpolymorphneutrophilsPseudomembranemaycauseblockage,suffocation,Thecervicallymphnodesenlargecausingoedemaoftheneck(aclassicalconditionofbullneck),传染源：患者和带菌者,传播途径：飞沫、接触被污染的物品,咽白喉咽炎假膜阻塞性缺氧发热淋巴结炎,皮肤白喉,循环并发症：毒性外周神经病、毒性心肌炎和充血性心衰,致病性,Elekimmunodiffusiontest.,免疫性,病后可产生牢固的免疫，抗毒素是保护性抗体。,Schicktest结果分析,试验侧对照侧本质阴性反应有免疫力阳性反应2448h,47d达峰无免疫力假阳性反应618h红肿,12d消退同前有免疫力，超敏反应混合反应618h红肿,618h红肿免疫力，超敏反应47d达峰34d反应消退,原理：毒素抗毒素的中和作用原理,三、微生物学检查法,标本直接涂片镜检:可作初步诊断分离培养毒力试验：1、体外法：SPA协同凝集反应2、体内法：动物（豚鼠）试验,白喉棒状杆菌,试验,对照,试验前腹腔注射白喉抗毒素250-500U,皮下注射待检菌的48h培养液,白喉棒状杆菌,四、防治原则,人工主动免疫人工被动免疫药物预防：青霉素、红霉素、氯霉素抗毒素治疗,白喉棒状杆菌,Legionellapneumophila,嗜肺军团菌,嗜肺军团菌,1976年新发现的菌属。各种天然水源及冷、热水管道系统（如自来水、空调系统、冷却水塔）是本菌的储存场所。,生物学性状G-杆形菌，有菌毛和单端鞭毛。用Dieterle镀银法（黑褐色）或Giemsa法染色（红色）需氧菌，营养要求较苛刻，且生长缓慢,嗜肺军团菌,致病性与免疫性,所致疾病：军团病。有流感型、肺炎型和肺外型3种类型主要通过呼吸道吸入带菌飞沫而感染。多流行于夏秋季。主要症状：发热、寒颤、咳嗽、咳痰、胸痛、呼吸困难及腹泻等。军团菌是胞内寄生菌，细胞免疫为主。,嗜肺军团菌,Legionnairesdiseasepneumoniafatalifnottreatederythromycin,Pontiacfeverflu-likemilderself-limitingmyalgia(musclepain)nopneumonia,Legionellapneumophila,流感嗜血杆菌（H.influenzae）是一类革兰阴性小杆菌,常呈多形态性在人工培养时需新鲜血液才能生长(生长需要X和V因