（分析化学专业论文）淀粉纳米颗粒的制备及其作为抗癌药物基因载体的研究.pdf

博士学位论文 摘要 纳米技术被广泛地应用于医药领域，特别是在纳米药物载体制备方面取得了 长足的进展。但是目前对纳米材料的选择更多集中在合成聚合物上，而天然材料 淀粉的应用还很少。本研究采用纳米制备技术，将天然淀粉通过改性，成功制备 了阴离子型淀粉纳米颗粒，再以此为主线，对该颗粒进行物理、化学和生物修饰， 获得一系列可以作为基因载体、肿瘤靶向载体、抗肿瘤复合药物载体和化学活性 药物载体等多种淀粉纳米颗粒，并对这些颗粒作为纳米药物基因载体的生化特性 及其在体内外的抗肿瘤活性进行了深入的探讨，首次系统地研究了淀粉纳米颗粒 在抗肿瘤药物载体方面的应用。 该论文的具体研究内容如下： 1 阴离子淀粉纳米颗粒的制备及性能研究 阴离子淀粉纳米颗粒的制备：以油相为连续相，将可溶性淀粉水解液作为水 相滴加入油相，高速搅拌形成稳定的微乳液体系，再以三氯氧磷作为交联剂，常 温下进行交联反应。 阴离子淀粉纳米颗粒的特性：原子力显微镜检测制备的颗粒平均直径为 5 0 h m ，颗粒均匀、分散性好。z e t a s i z e r 粒度仪检测到颗粒的平均电荷为一8 5 m y ， 呈较强负电性。水溶胀性检测表明淀粉颗粒在水溶液中的溶胀能力大大降低，具 有较好的水溶液稳定性。颗粒能够高效率地装载在中性溶液中带正电荷的精氨酸， 通过药物释放动力学分析表明该颗粒对精氨酸有缓慢释放的作用，在生理盐水中 释放持续时间可达4 8 小时以上。阴离子淀粉纳米颗粒主要通过物理吸附和静电结 合两种方式结合药物。 2 淀粉纳米基因载体的合成及在乳腺癌细胞中的基因转染 淀粉纳米基因载体的合成：以阴离子淀粉纳米颗粒为内核，经多聚赖氨酸修饰， 成功制备获得了多聚赖氨酸淀粉核壳纳米颗粒( p l l s t n p s ) ，在原子力显微镜下 检测到这些颗粒的大小为5 0 n m 左右，分散均匀。经研究发现p l l s t n p s 的主要特性 有：( 1 ) 有效结合外源d n a 。在p l l - s t n p s 溶液中直接加入质粒d n a ，凝胶电泳分 析，p l l s t n p s 能有效结合d n a 。洗脱复合物中的d n a 凝胶电脉分析d n a 条带没有 改变，说明与p l l - s t n p s 的结合不改变d n a 性质。并能从复合物上有效分离。( 2 ) 有效保护外源d n a 。结合了d n a 的n p s 在超声波发生器中处理不同的时间后，洗脱 复合物中的d n a ，经电泳发现d n a 条带没有改变，表明n p s 能有效地保护d n a 防止 超声波的破坏。用d n a s el 消化d n a - n p s 复合物，进行凝胶电泳分析，发现d n a 条 带均没有改变，实验结果表明d n a - n p s 也能较好地保护d n a 防止d n a s ei 的酶切。 淀粉纳米颗粒的制备及其作为抗癌药物基因载体的研究 ( 3 ) 无细胞毒性：空白颗粒与体外细胞共培养，结果表明该纳米颗粒无细胞毒性。 基因载体的体外细胞转染：p l l - s t n p s 结合绿色荧光蛋白基因p e g f p ，能有效 导入体外培养的m c f 一7 细胞，并在细胞内获得高效表达，转染率达2 8 左右。通过 多次改变n p 的比值进行细胞转染实验，结果表明，以n p = 1 5 的p l l s t n p p e g f p 复合物转染乳腺癌m c f 一7 传代细胞的转染效果最好。 上述结果表明：p l l s t n p s 可以作为一种有效的基因载体。 3 叶酸修饰淀粉纳米药物载体的研制及其肝癌靶向特性分析 叶酸一淀粉纳米药物载体的合成及表征：叶酸活化后先与p e g 一( n h 。) 。结合，得 到f a p e g - n h 。然后将f a p e g n h ：修饰到淀粉纳米颗粒( s t n p ) 上，从而成功制备 获得叶酸一淀粉纳米颗粒( f a p e g - s t n p ) ，经扫描电子显微镜检测其平均直径约为 1 3 0n m 。 f a p e g - s t n p 的特性：( 1 ) f a - p e g s t n p 的亲水性。将f a p e g - s t n p 和f a s t n p 分别注射到小鼠的腹腔诱导巨噬细胞，结果显示f a p e g - s t n p 诱导出的巨噬细胞数 目只有f a s t n p 的一半，结果表明f a p e g - s t n p 具有更强的亲水性，降低了机体对 它的清除能力( 2 ) f a - p e g - s t n p 结合药物的缓释作用。与抗癌药物多柔比星( o o x ) 结合，饱和量为2 8pg m g ，药物具有明显的缓释现象。( 3 ) f a - p e g s t n p 肝癌靶 向特性：修饰了荧光物质f i t c 的f a p e g s t n p 与肝癌细胞和正常肝细胞共培养， 在前者细胞中检测到的荧光值是后者的3 倍；修饰了荧光物质f i t c 的 f a - p e g - s t n p 和s t n p 分别与肝癌细胞共培养，前者的荧光值是后者的4 倍，表明 修饰叶酸的颗粒具有明显的肝癌细胞靶向的功能。 载药颗粒作用于肝癌细胞：装载抗癌药物阿酶素( d o x ) 的f a p e g s t n p 与 装载d o x 的s t n p 分别在无叶酸培养基中与肝癌细胞b e l 7 4 0 4 共培育，结果显示前 者的细胞致死率达是后者的2 倍，而药物对细胞的半致死浓度是后者的3 0 左右， 说明修饰在颗粒上的f a 能显著提高颗粒对肝癌细胞的靶向作用，保持药物的有效 浓度，提高了治疗效果。 所制各的叶酸一淀粉纳米颗粒具有药物缓释、靶向识别、降低毒副作用的特点， 可以作为肿瘤靶向性药物载体。 4 活性硒一淀粉载药复合纳米颗粒的合成及协同作用研究 活性硒一淀粉复合载药纳米颗粒的合成：先将n a 2 s e 0 3 还原成具有抗氧化活性 的红色单质硒，然后将其结合到装有阿霉素( d o x ) 的淀粉纳米颗粒的表面，形成 活性硒一抗肿瘤药物的复合载药纳米颗粒。该颗粒平均直径为7 0 n m ，具有明显核 壳结构，表面电荷为一1 3 9 m y 。 协同作用研究：复合颗粒作用于肝癌b e l 7 4 0 4 细胞，其细胞生长抑制率比相 当量的红色单质硒与d o x s t n p 的细胞抑制率总和高出1 3 ，出现了活性硒与b o x 之间的协同效果。协同作用的可能原因为：( 1 ) 硒壳层减慢了药物的释放速度，延 博士学位论文 长了药物的作用时间；( 2 ) 红色单质硒的抗自由基活性消除了细胞周围的氧化性 物质，一方面降低了肿瘤细胞的分裂速度，另一方面使细胞膜的通透性得到改善， 有利于药物进入细胞内部；( 3 ) 单质硒晶体表面的负电荷加强了细胞膜的电负性， 进一步改善细胞膜的通透性，加强了药物对细胞的抑制作用。 5 双醛淀粉纳米颗粒的制备及作为抗癌药物载体的活体研究 双醛淀粉纳米颗粒的制备、表征及药物装载：以高碘酸钠为氧化剂，将淀粉 定点氧化成双醛淀粉，在微乳液体系内，以三氯氧磷作为交联剂，常温下进行交 联反应，制备成双醛淀粉纳米颗粒( d a s n p ) 。d a s n p 的氧化度为( 4 0 5 ) ， 颗粒呈球形，分散性好，粒径分布在8 0 1 0 0 n m 之间，平均直径为9 0 r i m ，能溶于 碱性水溶液，不溶于酸性水溶液，在p h 5 8 的范围内，颗粒缓慢溶解。经体外细 胞m t t 检测和裸鼠活体皮下注射观察发现该颗粒无细胞毒性、无炎症反应，表明 其作为药物载体的应用具有安全性保障。抗癌药物5 一氟尿嘧啶( 5 - f u ) 通过亚胺 键与双醛淀粉纳米颗粒上的醛基结合，获得5 f u d a s n p s 复合颗粒，研究发现药 物装载量约为1 0 ，在p h 5 7 的溶液中药物释放时间为2 0 h ，具有明显缓释现象。 装载药物d a s n p 对体外细胞作用的检测分析：该载药颗粒对体外肿瘤细胞具 有明显的抑制作用，在浓度为l m g m l 时对乳腺癌m c f 7 细胞生长抑制率达7 4 5 ， 并经流式细胞术检测发现其抑制作用主要发生在细胞周期的g 0 g 1 期。 装载药物d a s n p 对肿瘤生长抑制的活体研究：将载药颗粒皮下注射到肿瘤厨 围，其肿瘤抑制率达到7 5 ，其抑制率比单纯药物提高了3 0 左右。对肿瘤切片 进行苏木红染色观察，可见明显的组织细胞凋亡区域；b c l 2 b a x 免疫组化实验结 果显示，药物组肿瘤细胞中b c l 2 的表达降低，而b a x 的表达明显增多。上述结 果表明，载药复合颗粒能高效地抑制肿瘤的生长，而对肿瘤的抑制主要是通过诱 导肿瘤细胞的凋亡实现。 关键词：淀粉，纳米技术，药物载体，基因载体，靶向，协同作用，肿瘤抑制 i h 淀粉纳米颗粒的制备及其作为抗癌药物基因载体的研究 a b s t r a c t n a n o t e c h n o l o g yw a sb e e nw i d e l yu s e di nt h ef i e l do fm e d i c i n e ，e s p e c i a l l yi nt h e p r e p a r a t i o no fn a n o d r u gc a r r i e r b u tt h ec h o i c eo fm a t e r i a lw a su s u a l l yf o c u s e d o nt h e m a n m a d ep o l y m e r , a n df e wn a t u r a lm a t e r i a lo fs t a r c hw a sa p p l i e d i nt h i ss t u d ya n i o n s t a r c h n a n o p a r t i c l e ( s t n p ) w a sp r e p a r e db yn a n o t e c h n o l o g y , a n d as e r i e so f n a n o p a r t i c l e s w h i c hc a nb eu s e da sg e n ec a r r i e r , t u m o r t a r g e t i n g d r u gc a r d e r , a n t i c a n c e rc o m p l e xd r u gc a r r i e ra n da c t i v ed r u gc a r r i e rw e r eo b t a i n e dt h r o u g h p h y s i e a l ，c h e m i c a la n db i o l o g i c a lm o d i f y i n g t h eb i o c h e m i c a lc h a r a c t e r i s t i c a n d a n t i c a n c e rc a p a b i l i t yo ft h e s en a n o p a r t i c l e sw e r ed i s c u s s e di nv i t r oa n di nv i v od e e p l y 1 p r e p a r a t i o no fs t n pa n d t h ep r o p e r t i e sr e s e a r c h s y n t h e s i s o f n a n o p a r t i c l e ：a n i o n s t a r c h n a n o p a r t i c l e w a ss y n t h e s i z e di n w a t e r - i n o i lm i c r o e m u l s i o nu n d e rr o o mt e m p e r a t u r e ，a n ds o l u b l es t a r c h w a su s e da sr a w m a t e r i a l sa n dp o c l 3a se r o s s l i n k i n ga g e n t d e t e r m i n a t i o no fs t n p ：t h ea v e r a g ed i a m e t e ro fn a n o p a r t i c l e sw a s5 0 n md e t e c t e d b ya t o m i cf o r c em i c r o s c o p e ( a f m ) ，w i t hu n i f o r mi ns i z ea n dw e l ld i s p e r s e d ，a n d ，t k z e t ae l e c t r i cp o t e n t i a lv a l u eo fs t n pw a s - 8 5 m v t h ep a r t i c l e ss w e l l e ds l i g h t l yi n s a l i n es o l u t i o n ，b u tt h es u r f a c ec h a r a c t e r i s t i c sd i dn o tc h a n g eo b v i o u s l y s t n pc o u l d l o a da r g i n i n e ( a r g ) l a r g e l y , w h i c ht a k e sp o s i t i v ec h a r g ei nn e u t r a la q u e o u ss o l u t i o n t h ek i n e t i c so fd r u gr e l e a s es h o w e dt h a tt h er e l e a s et i m eo fa r gf r o ms t n pw a s4 8 h ， a n dt h ed r u gw a sl o a d e dt h r o u g hr o u t e so fp h y s i c a la b s o r p t i o na sw e l la ss t a t i c c o m b i n a t i o n 2 s y n t h e s i z eo fg e n ec a r r i e rp o i y - l - l y s i n e ( p l l ) - s t n p a n dg e n e t r a n s f o r m a t i o ni nb r e a s tc a n c e rc e l li i n em c f - 7 s y n t h e s i z eo fp l l - s t n p ：p l l - s t n p sw e r ep r e p a r e db yl i n k i n gp o l y - l - i y s i n e ( p l l ) o nt h es u r f a c eo fs t n p s o b s e r v e du n d e ra t o m i cf o r c em i c r o s c o p e p l l s t n p s d i s t r i b u t e de v e n l y a n dt h e i rs i z ew a sa b o u t5 0 眦t h ec h a r a c t e r i s t i c so fp l l s t n p s a r e ：( 1 ) c o n j u g a t i n gd n ae f f i c i e n t l y ：w h e nd n aw a sa d d e d t op l l s t n p ss o l u t i o n ， g e le l e e t r o p h o r e s i si l l u m i n a t e dt h a tp l l - s t n p sc o u l di n t e g r a t ed n ae f f e c t i v e l y d n a c o u l db er e l e a s e df r o mt h ed n a p l l - s t n p sc o m p o u n d s a n dt h eb a n d so fd n ai n e l e e t r o p h o r e s i sg e ld i dn o tc h a n g e i tm e a n s t h a tp l l s t n p sd i d n tc h a n g et h ep r o p e r t y o fd n a ( 2 ) p r o t e c t i n gd n af r o md n a s ei c l e a v a g e a n du l t r a s o u n dd a m a g e ： d n a - p l l s t n p sc o m p l e x e sw e r et r e a t e dw i t hu l t r a s o u n df o rd i f f e r e n tt i m e g e l i v 博七学位论文 e l e c t r o p h o r e s i ss h o w e dt h a td n a s t i l lb o u n dt op l l s t n p sa n db a n d so fr e l e a s e dd n a d i dn o tc h a n g e i n d i c a t i n gt h a tp l l s t n p sc o u l dp r e v e n td n af r o mu l t r a s o u n dd a m a g e a f t e rd i g e s t i o no fp l l s t n p s d n ac o m p l e x e sw i t hd n a s ei t h es t r i p so fe l u t e dd n a r e m a i n e dt h es a m e s o p l l s t n p sm i g h tp r e v e n td n an o to n l yf r o mu l t r a s o u n d d a m a g eb u ta l s of r o md n a s eic l e a v a g e ( 3 ) n oc e l lt o x i c i t y ：b l a n kn a n o p a r t i c l e sw e r e c u l t i v a t e dw i t hm c f 7c e l l a n dt h em t ta s s a ys h o w e dt h a tp l l s t n pw a sn o n t o x i c a l t oc e l l s g e n et r a n s f e c t i o ni nb r e a s tc a n c e rc e l ll i n em c f - 7 ：p l l s t n pl o a d i n gp l a s m i d d n ap e g f p ，w h i c hc o m p r i s e dg r e e nf l u o r e s c e n c ep r o t e i ng e n e ，c o u l db et r a n s f e c t e d i n t om c f 一7c e l l s ，a n dg r e e nf l u o r e s c e n c ep r o t e i nw a se x p r e s s e de f f i c i e n t l yi nc e l l s t h eb e s tt r a n s f e c t i o ne m c i e n c e sw a sw i t hn p = l5 3 p r e p a r a t i o no ff o l a t ec o n j u g a t e ds t a r c hn a n o p a r t i c l e sa n dt h et a r g e t i n g f u n e t i o nt oi i v e rc a n c e rc e l l s s y n t h e s i so fd r u g - l o a d i n g f a p e g s t n p ：a c t i v e df o l a t ew a sc o n j u g a t e dw i t h p e g - ( n h 2 ) 2 t h ep r o d u c t i o nw a st h e nm o d i f i e d o nt h es u r f a c eo fs t n p , a n d f a p e g s t n pw a so b t a i n e dw i t hd i a m e t e ro f13 0 n m c h a r a c t e r i s t i c so ff a p e g s t n p ：( 1 ) h y d r o p h i l i c i t yo ff a p e g s t n p ：f a - p e g - s t n pa n df a s t n pw e l 3 ei n j c o t e di n t op e r i t o n e u mo f m i c er e s p e c t i v e l y , a n dt h en u m b e r o fp e r i t o n e a lm a c r o p h a g e si n d u c e db yf a p e g s t n pw a sh a l fo ft h a ti n d u c e db y f a - s t n pg r o u p ，a n dt h er e s u l t ss h o w st h a tt h ef a p e g s t n pw a sm o r eh y d r o p h i l i e a l t h a nf a - s t n p ( 2 ) d r u gs u s t a i n i n gr e l e a s ef u n c t i o n ：a n t i c a n c e rd r u gd o x o r u b i c i n ( d o x ) c o u l db ec o n j u g a t e dt of a p e g s t n p sw i t ht h es a t u r a t i n gc a p a c i t yo f2 8ug m g ，a n d c o u l db es u s t a i n i n gr e l e a s e df o r4 8 h ( 3 ) t a r g e t i n go ff a - p e g - s t n pt ol i v e rc a n c e rc e i l s ： f i t c 1 0 a d i n gf a p e o s t n pw a sc o - c u l t i v a t e dw i t hl i v e rc a n c e rc e l l sa n dn a t u r a ll i v e r c e l l s ，a n dt h ef l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yi nf c r n l e rc e l l sw a s3t i m e sh i g h e rt h a nt h a to f l a t e r c e l l s f i t c l o a d i n gf a p e g s t n pa n df i t c l o a d i n gs t n pw e r ec o c u l t i v a t e dw i t hl i v e r c a n c e rc e l l s ，a n dt h ef l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo ff o f r e e rn pw a s3t i m e sh i g h e rt h a nt h a to f l a t e rnp t h e s er e s u l t si n d i c a t e dt h a tt h en a n o p a r t i c l em o d i f i e db yf ah a dt h et a r g e t i n g f u n c t i o nt ol i v e rc a n c e rc e l l s i n h i b i t i o ne f f e c to fd r u gl o a d e df a p e g s t n po nl i v e rc a n c e rc e l l sb e l 7 4 0 4 ： d o x 1 0 a d e df a p e g s t n pa n dd o x 一1 0 a d e ds t n pw e r ei n c u b a t e dw i t hl i v e rc a n c e r c e l l sb e l 7 4 0 4r e s p e c t i v e l y 1 1 1 ee e l ld e a t hr a t i oo ft h ef o r m e rw a s2t i m e st h a nt h a to f t h el a t e r a n dt h el c 5 0o ft h ef o r m e rw a sa b o u t3 0 o ft h a to ft h el a t e r t h e s er e s u l t s s u g g e s t e dt h a tm o r ed o x c o u l de n t e ri n t ot h ec a n c e rc e l l sb e c a u s eo ft h ec o m b i n a t i o n o ff o l a t eo nf a p e g s t n pw i t ht h ef o l a t er e c e p t o ro nc a n c e rc e l l s 。t h u st h eg r o w t ho f v 淀粉纳米颗粒的制备及其作为抗癌药物基因载体的研究 c a n c e rc e l l sw a si n h i b i t e de f f e c t i v e l y 4 s y n t h e s i sa n ds y n e r g e t i ea n t i - t u m o re f f e c to fd r u g l o a d e ds e - s t n p s y n t h e s i so fd r u g l o a d e ds e - s t n p ：d r u g l o a d e ds e - s t n pw i t hs i z eo f7 0 r i mw a s o b t a i n e db yc o v e g i o no fr e de l e m e n ts eo nt h es u r f a c eo fd o x - l o a d e ds t n p , w h i c hh a d o b v i o u ss h e l l c o r es t r u c t u r e ，a n dt h es u r f a c ec h a r g ew a s 一1 3 9 m y s y n e r g e t i ca n t i - t u m o re f f e c tr e s e a r c h ：d r u g l o a d e ds e - s t n p sw e r ei n c u b a t e dw i t h l i v e rc a n c e rb e l 7 4 0 4c e l l ，a n dm t t a s s a yw a su s e dt od e t e c tt h ec e l lg r o w t h i n h i b i t i o n r a t i o t h er e s u l ts h o w e dt h a tt h eg r o w t h i n h i b i t i o nr a t i oo fd r u g l o a d e ds e s t n p sw a s h i g h e rb y1 3 t h a nt h es u m m a t i o no fg r o w t h i n h i b i t i o nr a t i o so fe l e m e n ts ea n d d o x - s t n p t h i si n d i c a t e dt h a tt h es y n e r g e t i ca n t i - t u m o re f f e c tw a sa c h i e v e db yu s i n g d o x l o a d e ds e s t n p s t h ep o s s i b l er e a s o n sf o rt h es y n e r g e t i ca n t i t u m o re f f e c to f c o m p l e xn a n o p a r t i c l e sa r et h ef o l l o w s ：t h ef i r s ti st h a tt h es p e e do fd r u g r e l e a s ew a s s l o w e dd o w nb e c a u s eo ft h ep r o t e c t i o no fs h e l l c o r es t r u c t u r e ；t h es e c o n di st h a t e l e m e n ts ee l i m i n a t e dt h eo x i d a t e dm a t e r i a la r o u n dc e l l s ，a n di n h i b i t e dt h es p e e do f t u m o rc e l ld i v i s i o n i na d d i t i o n t h ep e r m e a b i l i t yo fc e l lm e m b r a n ew a si m p r o v e da n d w a sa v a i l a b l ef o rd r u g s st r a n s p o r t i n gi n t oc e l l ；t h el a s tr e a s o ni st h a tt h en e g a t i v e e l e m e n ts ei n c r e a s e dt h ee l e c t r o n e g a t i o no fc e l lm e m b r a n ea n dt h ep e r m e a b i l i t yo fc e l l m e m b r a n ew a st h u si m p r o v e df u r t h e r 5 s y n t h e s i z eo fd i a l d e h y d es t a r c hn a n o p a r t i e l e ( d a s n p ) a n di t sa p p l i c a t i o n a sa n t i c a n e e rd r u gc a r r i e r nv i v o s y n t h e s i s ，d e t e r m i n a t i o na n dd r u g - l o a d e do fd a s n p ：h y d r o l y z i n gs t a r c hw a s o x i d i z e db ys o d i u mp e r i o d a t e ( n a l 0 4 ) t oo b t a i nd i a l d e h y d es t a r c h ( d a s ) ，a n dd a s w a sc r o s s l i n k e db yp o c l 3i nw a t e r - i n - o i lm i c r o e m u l s i o nt oo b t a i nd i a l d e h y d es t a r c h n a n o p a r t i c l e s ( d a s n p s ) u n d e rr o o mt e m p e r a t u r e t h eo x i d a t i o nd e g r e e ( o d ) o f p r e p a r e dd a s n p sw a s ( 4 0 士5 ) ，a n dt h ed i a m e t e rw a si nr a n g eo f8 0 lo o n m ，w i t h u n i f o r mi ns i z ea n dw e l ld i s p e r s e d d a s n p sc o u l ds u s t a i nr e s o l v ei ns o l u t i o nw i t h p h 5 8 m t ta s s a ys h o w e dt h a td a s n p sh a dn oc e l lt o x i c i t yi nv i t r o d a s n p s s u s p e n s i o nw a si n j e c t e di nn u d em i c es u b c u t a n e o u s l y ，a n dt h e r ew a sn oi n f l a m m a t i o n r e a c t i o ni nt h eh y p o d e r m a lt i s s u e i tm e a n st h a td a s n p si sb i o c o m p a t i b l ea n d b i o s e c u r i t y , a n dc a nb eu s e da sd r u gc a r r i e r a n t i c a n c e rd r u g5 - f uw a sc o m b i n e dt o d a s n p st h r o u g ht h ei m i n eb o n d ，a n dt h el o a do fd r u gw a s10 t h ed r u g l o a d e d d a s n p sc o u l ds u s t a i n i n gr e l e a s e5 - f uf o ra b o u t2 0 hi np h 5 7 t u m o rc e l la n a l y s i so fd r u g - l o a d e dd a s n p si nv i t r o ：w h e nt h ec o n c e n t r a t i o no f d r u g l o a d e dd a s n p sw a sl m g m l ，t h eb r e a s tc a n c e rm c f 一7c e l lg r o w t hi n h i b i t i o n r a t i ow a s7 4 5 f l o we y t o m e t r ya s s a ys h o w e dt h a td r u g l o a d e dd a s n p sc h a n g e dt h e v i 博士学位论文 c e l lc y c l ea n dm o r ec e l l sw e r eb l o c k e di nsp h a s e s t u d i e so nt u m o rs u p p r e s s i o no fd r u g l o a d e dd a s n p si n v i v o ：d r u g - l o a d e d d a s n p sw e r ei n j e c t e ds u b c u t a n e o u s l yi nn u d em i c el o a d e ds o l i dt u m o r , a n dt h et u m o r s u p p r e s s i o nw a s7 5 ，w h i c hw a sh i g h e rb y3 0 t h a nt h a to fs i n g l ed r u g h & es t a i n i n g s h o w e dt h a tt h e r ew a so b v i o u st i s s u ec e l l s a p o p t o s i s i n t i s s u e s l i c e s ，a n d i m m u n o h i s t o c h e m i c a ls t u d i e ss h o w e dt h a tt h ee x p r e s s i o no fb c l 一2d e c r e a s e da n dt h e e x p r e s s i o no fb a xi n c r e a s e do b v i o u s l y a l lt h e s er e s u l t si n d i c a t e dt h a td r u g l o a d e d d a s n p sc o u l ds u p p r e s st u m o rg r o w t he f f e c t i v e l yi nv i v o ，a n dt h es u p p r e s s o rw a s a c h i e v e db yi n d u c i n gt u m o rc e l la p o p t o s i s k e yw o r d s ：s t a r c h ；n a n o t e c h n o l o g y ；d r u gc a r r i e r ；g e n ec a r r i e r ；t a r g e t i n g ；s y n e r g i s m ；t u m o r s u p p r e s s i o n 淀粉纳米颗粒的制各及其作为抗癌药物，7 基因载体的研究 n p s t n p a s p h i s a r g p b s a f m p l l p l l s t n p r u b p y d n a s e i g f p e b o d f a n h s d c c p e g m h 2 ) 2 d o x d m s o s e v c t e m d a s d a s n p t g a d a r c k 5 f u 本文所用缩写词 纳米颗粒 淀粉纳米颗粒 天冬氨酸 组氨酸 精氨酸 磷酸缓冲液 原子力显微镜 多聚赖氨酸 多聚赖氨酸淀粉纳米颗粒 钌吡啶荧光染料 脱氧核糖核酸酶i 绿色荧光蛋白 溴化乙锭 光密度 叶酸 n 羟基琥珀酰亚胺 二环己基碳二亚胺 聚乙二醇二氨 盐酸多柔比星 二甲亚枫 元素硒 维生素c 透射电子显微镜 双醛淀粉 双醛淀粉纳米颗 热重分析 差熟分析 对照 5 氟尿嘧啶 v 【 n a n o p a r t i c l e s t a r c hn a n o p a r t i c l e a s p a r t i ca c i d h i s t i d i n e a r g i n i n e p h o s p h a t eb u f f e rs o l u t i o n a u t