EZH2在大肠癌中的表达及其临床意义

临 床 医 学 EZH2在 大 肠 癌 中 的 表 达及 其 临 床 意 义刘 志 勇 1 ,欧 阳 忠 1 ,邹 小 明 211赣 南 医 学 院 第 一 附 属 医 院 (赣 州 341100) ；21哈 尔 滨 医 科 大 学 附 属 第 二 医 院 (哈 尔 滨 150086)摘 要 目 的 :探 讨 果 蝇 zeste基 因 增 强 子 同 源 物 2( EZH 2)蛋 白 在 大 肠 癌 中 的 表 达 状 况 及 其 临 床 意 义 。 方 法 :应 用 免 疫 组 化 S - P法 检 测 大 肠 癌 60例 、 正 常 大 肠 组 织 10例 中 EZH2蛋 白 的 表 达 。 结 果 : EZH2蛋 白 主 要 表 达 于 细 胞核 ,大 肠 癌 、 正 常 大 肠 组 织 的 EZH2蛋 白 阳 性 表 达 率 分 别 是7117% (44 /50)、 010% ( 0 /10) , EZH2蛋 白 在 大 肠 癌 组 织 中的 表 达 明 显 高 于 在 正 常 大 肠 组 织 中 的 表 达 ( 2 = 15168, P 0101)。 且 EZH2蛋 白 在 大 肠 癌 中 的 表 达 与 性 别 、 年 龄 、 分 化程 度 、 临 床 分 期 、 大 体 分 型 、 癌 肿 大 小 有 关 。 结 论 : EZH2异常 表 达 与 原 大 肠 癌 的 发 展 密 切 相 关 ,在 大 肠 癌 的 发 展 过 程中 起 重 要 的 作 用 。关 键 词 :大 肠 癌 ； EZH2；免 疫 组 化中 图 分 类 号 : R73513 + 4 文 献 标 识 码 : A文 章 编 号 : 1006 - 2882 (2010) 04 - 628 - 03Expression and Clinic Significanceof EZH2 Protein in Primary HumanColorectal CarcinomaL iu Zh iyon g1 , et a l11the fi rs t a ffi lia ted hosp i ta l of G a n n a nm ed ica l u n ivers i ty (G a n zhou 341000)Abstract:O bjective: This study is to exp lore the exp res2sion and clinic significance of EZH2 ( enhancer of zeste homolog2) p rotein in human colorectal carcinoma1M ethods: The exp res2sions of EZH2 p rotein in 60 colorectal carcinoma tissues, 10 nor2mal tissues were assessed by immunohistochem icalmethod1Results: The exp ressions of EZH2 p rotein was located atnucleus1The rate of exp ressions of EZH2 p rotein in cancer tis2sues, normal tissues were 7117% ( 44 /50 )、 010% ( 0 /10 ) re2spectively1The exp ressions of EZH2 p rotein in cancer tissueswas higher than that in normal tissues ( 2 = 15168, P 0101)1The exp ressions of EZH2 p rotein in cancer tissues was correla2ted with the tumor size、 sex、 differentiation、 clinical stage、 typ2ing、 tumor size1Conclusion: The abnormal exp ression of EZH2are closely associated with the development of human colorectalcarcinoma, which may p lay an important role in the developmentof p rimary human colorectal carcinoma1Key words: Colorectal carcinoma； EZH2； Immunohisto2chem istryHP感 染 是 导 致 消 化 性 溃 疡 病 的 主 要 病 因 之 一 2 。 HP能 减少 胃 粘 膜 粘 液 的 分 泌 ,降 低 胃 粘 膜 防 御 屏 障 功 能 ,并 能 促 使胃 泌 素 分 泌 增 加 ,胃 蛋 白 酶 及 胃 酸 水 平 增 高 ,引 起 胃 、 十 二指 肠 粘 膜 损 伤 ,导 致 溃 疡 形 成 。 流 行 病 学 研 究 显 示 95%以上 的 十 二 指 肠 溃 疡 , 75%以 上 的 胃 溃 疡 病 人 存 在 HP感染 2 。 因 此 抗 HP感 染 是 治 疗 消 化 性 溃 疡 的 一 个 重 要 方 面 ,为 提 高 疗 效 ,彻 底 根 除 HP,我 们 采 取 四 联 疗 法 ,取 得 了 良 好的 疗 效 。 其 溃 疡 愈 合 率 9611% , HP根 除 率 9611% ,显 著 高于 对 照 组 溃 疡 愈 合 率 的 7416%及 HP的 根 除 率 76%。 潘 托拉 唑 为 H + - K+ - ATP酶 的 抑 制 剂 ,其 原 理 是 抑 制 壁 细 胞泌 酸 的 最 后 环 节 H + - K+ - ATP酶 的 活 动 ,使 H +不 能 由 壁细 胞 内 远 移 至 细 胞 外 及 在 胃 内 形 成 胃 酸 。 PP I抗 HP表 现 在两 方 面 4 : (1)直 接 抑 制 HP； (2) PP I和 抗 菌 药 物 协 同 作 用 ,阿 莫 西 林 是 是 治 疗 HP感 染 的 唯 一 的 内 酰 胺 药 物 ,它 对 细菌 的 最 小 抑 菌 浓 度 非 常 低 ,且 它 和 呋 喃 唑 酮 的 耐 药 率 低 。荆 花 胃 康 丸 是 从 植 物 土 荆 芥 和 水 团 花 中 提 取 的 挥 发 性 油 按照 一 定 的 比 例 组 成 的 复 方 制 剂 ,具 理 气 散 寒 ,清 热 化 瘀 ,用于 寒 热 错 杂 症 。 荆 花 胃 康 丸 可 显 著 降 低 胃 及 十 二 指 肠 内 的酸 度 ,从 而 改 善 胃 环 境 ,使 胃 液 分 泌 步 向 正 常 ,达 到 缓 解 上腹 疼 痛 ,促 进 溃 疡 愈 合 ,恢 复 胃 肠 道 功 能 。 并 能 够 通 过 抑 制溃 疡 病 患 者 胃 肠 道 平 滑 肌 的 痉 挛 达 到 解 痉 止 痛 ,又 由 于 是挥 发 油 成 分 ,故 能 够 起 到 迅 速 止 痛 的 效 果 。 荆 花 胃 康 丸 通过 抑 制 幽 门 螺 旋 杆 菌 的 生 长 繁 殖 ,清 除 其 对 胃 粘 膜 的 损 伤作 用 。 荆 花 胃 康 丸 由 于 是 植 物 药 ,故 能 杀 菌 却 不 产 生 耐 药性 ,尤 其 适 用 于 对 抗 生 素 过 敏 的 溃 疡 病 患 者 。 荆 花 胃 康 丸的 有 效 成 分 均 匀 分 布 在 胃 粘 膜 的 表 面 ,并 增 加 胃 粘 膜 的 厚度 ,起 到 保 护 和 修 复 胃 粘 膜 的 作 用 5 。 因 此 ,我 们 认 为 潘 托拉 唑 、 阿 莫 西 林 、 呋 喃 唑 酮 联 合 荆 花 胃 康 丸 治 疗 消 化 性 溃 疡为 理 想 的 药 物 ,其 疗 效 可 靠 ,副 作 用 少 ,可 促 进 溃 疡 愈 合 ,根除 HP,值 得 临 床 推 广 。参 考 文 献 1 周 丽 雅 ,崔 荣 丽 ,林 三 仁 1幽 门 螺 旋 杆 菌 感 染 与 消 化 性 溃 疡 J 1中 华 消 化 杂 志 , 20081 28: 4361 2 中 华 消 化 杂 志 编 委 会 1消 化 性 溃 疡 病 诊 断 与 治 疗 规 范 建 议(2008,黄 山 ) J 1中 华 消 化 杂 志 , 2008128: 4471 3 沈 玉 根 ,陈 建 成 ,陈 士 葆 1消 化 性 溃 疡 的 病 因 和 治 疗 J 1中华 新 药 与 临 床 杂 志 , 2003, 32 (10) : 620 - 6241 4 孙 培 红 ,管 云 兰 1质 子 泵 抑 制 剂 的 药 理 作 用 及 临 床 应 用 J 1中 国 医 院 用 药 评 价 与 分 析 , 2003, 3 (3) : 1801 5 池 国 锋 1荆 花 胃 康 丸 三 联 治 疗 消 化 性 溃 疡 75例 疗 效 观 察DB 1天 下 论 文 网 120071111231收 稿 日 期 : 2010 - 06 - 10826 黑 龙 江 医 药 HeilongjiangMedicine Journal Vol123 No14 2010大 肠 癌 是 消 化 道 系 统 中 常 见 的 恶 性 肿 瘤 之 一 ,其 发 病 率 、 死 亡率 逐 年 增 高 ,但 其 发 病 机 制 尚 不 明 确 ,目 前 认 为 是 一 个 多 步骤 、 多 阶 段 及 多 基 因 参 与 的 遗 传 性 疾 病 。 EZH2基 因 是 1996年 发 现 的 一 种 新 的 人 类 基 因 , EZH2蛋 白 在 转 移 性 前 列 腺 癌和 乳 腺 癌 中 明 显 上 调 ,其 作 为 转 录 阻 遏 因 子 抑 制 与 肿 瘤 转 移相 关 的 基 因 ,刺 激 肿 瘤 细 胞 的 不 断 增 殖 和 扩 散 1 。关 于 EZH2与 恶 性 肿 瘤 的 相 关 性 及 作 为 肿 瘤 的 预 后 指标 已 逐 渐 成 为 肿 瘤 的 基 础 研 究 和 临 床 研 究 的 热 点 ,然 而 对于 EZH2基 因 在 大 肠 癌 中 的 作 用 国 内 尚 未 见 相 关 报 到 。 因此 我 们 检 测 了 大 肠 癌 中 EZH2 mRNA及 蛋 白 在 大 肠 癌 中 的表 达 情 况 ,以 探 讨 EZH2基 因 的 表 达 与 大 肠 癌 的 病 理 学 特 征的 相 关 性 及 其 在 大 肠 癌 的 发 生 发 展 中 可 能 的 作 用 及 意 义 。笔 者 利 用 免 疫 组 化 法 检 测 EZH2蛋 白 在 大 肠 癌 中 的 表 达 情况 ,并 探 讨 其 临 床 意 义 。1 材 料 与 方 法111 材 料 : 60例 新 鲜 原 发 大 肠 癌 组 织 标 本 均 来 自 赣 南 医 学院 第 一 附 属 医 院 胃 肠 外 科 2008年 至 2009年 住 院 手 术 治 疗的 患 者 ,另 选 取 10例 癌 组 织 周 边 10cm肠 组 织 作 对 照 。 其中 男 性 32例 ,女 性 28例 ,年 龄 最 小 40岁 ,最 大 85岁 ,平 均年 龄 6318岁 ,中 位 年 龄 68岁 。 按 最 新 大 肠 癌 AJCC /U ICCTNM分 期 标 准 ,全 组 病 例 分 组 为 按 Dukes分 期 , A期 15例 ,B期 20例 , C期 12例 , D期 13例 ；结 肠 癌 22例 ,直 肠 癌 38例 。 所 有 病 例 均 经 病 理 证 实 ,术 前 均 未 接 受 新 辅 助 放 化 疗 ,术 中 标 本 在 切 除 30m in中 内 留 取 ,所 有 标 本 均 用 10%中 性甲 醛 溶 液 固 定 ,石 蜡 包 埋 , 4 g厚 连 续 切 片 。 本 研 究 获 得 赣南 医 学 院 伦 理 委 员 会 批 准 。 所 有 患 者 均 获 得 知 情 同 意 。112 试 剂 :所 用 试 剂 EZH2抗 体 ,即 用 型 免 疫 组 化 S - P试剂 盒 ； DAB显 色 试 剂 盒 、 柠 檬 酸 组 织 抗 原 修 复 液 (以 上 试 剂均 购 于 福 州 迈 新 公 司 )。113 方 法 : S - P法 免 疫 组 化 染 色 按 试 剂 盒 说 明 操 作 , PBS代 替 一 抗 作 阴 性 对 照 。 用 已 知 阳 性 片 作 阳 性 对 照 。114 结 果 判 断 :用 双 盲 法 对 染 色 结 果 进 行 评 估 。 在 400倍显 微 镜 下 每 张 载 玻 片 计 数 5个 视 野 ,计 数 每 个 视 野 中 细 胞总 数 及 EZH2阳 性 的 细 胞 数 。 阳 性 细 胞 的 判 断 标 准 参 照 :染色 强 度 :不 着 色 为 0,轻 度 着 色 为 1,中 度 着 色 为 2,强 着 色 为3；阳 性 细 胞 所 占 的 百 分 比 :无 着 色 为 0, 50%为 3；两 种 积 分 相 加 ,依 照 0为 - , 1 - 2为+ , 3 - 4为 + + , 5 - 6为 + + + ,进 行 半 定 量 判 断 ； 2 ( +和 + + + )为 阳 性 , 2 ( -和 + )为 阴 性 进 行 定 性 判 断 。115 统 计 学 处 理 :各 组 间 样 本 率 差 异 的 比 较 采 用 2 检 验 ,采用 SPSS 1310统 计 软 件 进 行 ,以 P 0105确 定 为 有 统 计 学 意 义 。2 结 果211 EZH2蛋 白 的 表 达 情 况EZH2蛋 白 主 要 表 达 于 细 胞 核 ,呈 棕 黄 色 ,弥 漫 分 布 。EZH2蛋 白 在 大 肠 癌 中 的 表 达 率 为 7117% ,在 正 常 大 肠 组 织中 无 一 例 阳 性 表 达 ,其 在 大 肠 癌 组 织 中 的 表 达 明 显 高 于 在正 常 大 肠 组 织 中 的 表 达 ( 2 = 15168, P 0101)。 见 表 1。表 1 EZH2在 大 肠 癌 与 正 常 组 织 中 的 表 达分 类 例 数 EZH2基 因 表 达 EZH2基 因 表 达 缺 失 阳 性 表 达 率 ( % )大 肠 癌 60 43 17 7117正 常 组 织 10 0 10 010 统 计 分 析 : x2 = 15168, p 0101212 EZH2蛋 白 在 肝 癌 组 织 中 的 表 达 与 相 关 临 床 病 理 因 素分 析EZH2蛋 白 随 着 年 龄 的 增 加 ,其 阳 性 率 也 随 之 升 高 。 不同 性 别 ,不 同 分 化 程 度 ,不 同 临 床 分 期 ,不 同 癌 肿 大 小 其 阳性 率 差 异 显 著 。 EZH2蛋 白 在 大 肠 癌 中 的 表 达 与 性 别 、 年龄 、 分 化 程 度 、 临 床 分 期 、 大 体 分 型 、 癌 肿 大 小 有 关 ,但 与 其部 位 无 关 。 见 表 2。表 2 EZH2蛋 白 在 肝 癌 组 织 中 的 表 达与 相 关 临 床 病 理 因 素 分 析临 床 病 理 特 征 n 阳 性 阴 性 P性 别男 32 27 5女 28 16 12 0105年 龄40 - 50 18 14 450 - 60 24 20 4 60 18 9 9部 位结 肠 22 17 5直 肠 38 26 12 0105分 化 程 度中 +高 17 6 11低 +未 43 37 6 0101临 床 分 期A +B 35 21 14C +D 25 22 3 0105大 体 分 型肿 块 型 21 19 2浸 润 型 29 20 9 0105溃 疡 型 10 4 6癌 肿 大 小 5cm 33 28 5 5cm 27 15 12 60岁 ,肿 瘤 组 织 低 分 化 ,肿 瘤 组 织 5cm患 者 EZH2的 表 达增 加 。长 期 以 来 ,肿 瘤 转 移 是 成 功 治 疗 肿 瘤 的 最 大 障 碍 ,也 是目 前 恶 性 肿 瘤 病 人 的 主 要 死 因 。 EZH2位 于 pRB - E2F通路 的 下 游 ,成 为 此 通 路 的 作 用 点 之 一 , EZH2基 因 的 高 表 达 ,表 现 为 刺 激 癌 细 胞 增 殖 和 肿 瘤 形 成 8 。 这 一 过 程 分 别 受 到肿 瘤 细 胞 转 移 促 进 相 关 基 因 和 转 移 抑 制 相 关 基 因 的 调控 9 。EZH2蛋 白 作 为 转 录 阻 遏 蛋 白 ,抑 制 众 多 基 因 的 转 录 ,却 引 起 肿 瘤 侵 袭 和 转 移 性 增 强 ,常 引 起 人 们 的 困 惑 。 这 是由 于 那 些 被 抑 制 的 基 因 中 ,多 数 可 以 抑 制 肿 瘤 的 演 变 、 发展 ,使 得 转 移 促 进 相 关 基 因 和 转 移 抑 制 相 关 基 因 之 间 的 平衡 偏 向 转 移 促 进 ,揭 示 了 肿 瘤 演 进 的 一 种 新 机 制 10 。 EZH2蛋 白 已 作 为 一 种 新 的 肿 瘤 标 记 物 监 测 前 列 腺 癌 、 乳 腺 癌 等的 恶 性 演 变 ,用 于 临 床 诊 断 和 预 后 判 断 。本 研 究 结 果 显 示 , EZH2蛋 白 在 大 肠 癌 组 织 中 的 表 达 明显 高 于 在 正 常 大 肠 组 织 中 的 表 达 。 这 提 示 了 EZH2作 为 一个 新 的 癌 基 因 ,与 肝 癌 的 发 生 发 展 密 切 相 关 。总 之 ,对 EZH2蛋 白 的 检 测 ,有 助 于 我 们 判 定 大 肠 癌 恶性 程 度 及 进 程 ,同 时 也 为 大 肠 癌 治 疗 提 供 新 的 思 路 。参 考 文 献 1 Kheradmand Kia S, Solaimani Kartalaei P, Farahbakhshian E, etal1EZH2 - dependent chromatin looping controls INK4a and INK4b,but not ARF, during human progenitor cell differentiation and cellu2lar senescenceJ 1Epigenetics Chrom atin, 2009, 2 (1) : 161 2 Hobert O, J allal B, U llrich A1 Interaction of Vav with ENX - l, aputative transcrip tional regulator of homeobox gene exp ression J 1M CB , 1996, l6 (6) : 3066 - 30731 3 Carlos Cardoso, Cecile M ignon, Gilles Hetet, et al1The humanEZH2 gene: geno - m ic organisatin and revised mapp ing in 7q35within the criticat region formalignan tmyeloid disorders J 1EurJ Hum Genetics, 2000, 8 (3) : 174 - l801 4 Chen H, Rossier C, Antonarakis SE1Cloning of a human homologof the drosophila enhancer of zeste gene ( EZH2) that map s to chro2mosome 21q2212 J 1Genom ies, 38 (1) : 30 - 371 5 Yoon KA, Gil HJ, Han J, et al1Genetic polymorphism s in the poly2comb group gene EZH2 and the risk of lung cancer J 1J