（外科学专业论文）结直肠癌中nup88的表达及其与p53的意义.pdf

、 j t 、f 。 l i i i i l l le iiiiii i ii ili i iii i l y 17 7 9 8 7 8 目录 中文摘要 1 英文摘要 4 研究论文 结直肠癌中n u p 8 8 蛋白及m r n a 的表达及其临床意义 前言 8 月l j 吾 ”。芍 材料与万法8 结果 1 4 附图17 附表 2 2 讨论 2 5 结论2 9 参考文献3 0 综述n 1 m r r 的石井窝讲脬现状3 2 致谢 4 0 个人简历 4 1 中文摘要 结直肠癌中n u p 8 8 蛋白及m r n a 的表达及其临床意义 摘要 目的：结直肠癌的发生和发展与许多基因和蛋白质的表达密切相关， 是一个复杂的多步骤的过程，包括原癌基因的激活( 如如三r 2 n e u ) 和抑 癌基因的突变或丢失( 如p 5 3 ) 等，近年来对于结直肠癌肿瘤生长的标志 物的研究已经成为本领域的一个热点问题，尤其是对于结直肠癌的早期诊 断意义尤为重大。在l 临床工作中，除根据结直肠癌的临床分期、淋巴结转 移、组织学分级等定性研究评估肿瘤的进展和预后外，已深入到分子水平 的研究进行个体化评估肿瘤的进展及预后。作为跨越核膜的唯一通道，核 孔复合物( n p c ) 在核浆穿梭过程中发挥着重要作用。而核孔蛋白 ( n u c l e o p o r i n s ，n u p s ) 作为n p c 的重要组成成分，在细胞周期信号转导、 凋亡等生命过程中发挥“非转运的作用。n u p 8 8 是核孔蛋白复合物n p c s 家族中的一种，目前已经成为临床各相关专业领域研究的一个热点问题， 对其相关研究越来越深入。研究表明，n u p 8 8 与肿瘤发生密切相关，这提 示我们：n u p 8 8 它是否也在结直肠癌中高表达，是否可以作为结直肠癌肿 瘤生长的标志物。 本研究采用r t - p c r 方法测定不同个体在结直肠癌、癌旁无瘤粘膜、 上残端和下残端粘膜组织中的n u p 8 8 蛋白和m r n a 表达水平的差异，以 明确n u p 8 8 在大肠癌的发生、发展中的作用；采用w e s t e r nb l o t 方法检测 同组患者结直肠癌、癌旁无瘤粘膜、上残端粘膜和下残端粘膜组织中 n u p 8 8 蛋白的表达；并结合免疫组织化学法检测同组患者癌组织及非癌灶 组织中蛋白的定性表达，同时检测n u p 8 8 蛋白的表达与结直肠癌临床病 理特征间的关系；旨在探讨n u p 8 8 表达与结直肠癌的临床分期、组织学 分级、淋巴结转移的关系，分析n u p 8 8 在结直肠癌发生、发展中的作用 及可能的作用机制。 方法：收集唐山市工人医院病理科存档蜡块的石蜡组织标本，其中结 直肠癌组织1 8 1 例，匹配的癌旁无瘤粘膜组织8 4 例及转移淋巴结组织1 8 例。年龄3 9 8 8 岁，平均5 9 岁，中位年龄6 3 岁。其中男性8 8 例，女性 9 3 例。绒毛状+ 管状腺癌151 例，粘液腺癌3 0 例。高分化6 2 例、中分化 中文摘要 8 8 例、低分化3 1 例。伴有淋巴结转移者5 6 例，无淋巴结转移者1 2 5 例， d u k e s 分期：a 4 6 例，b 7 8 例，c 5 l 例，d 6 例。同时收集2 0 0 7 年1 0 月2 0 0 8 年1 2 月手术的2 9 例新鲜结直肠癌组织以及癌旁2 c m 无瘤粘膜 组织和切缘粘膜。其中2 0 例来自唐山市工人医院，5 例来自河北医科大 学第一医院，4 例来自河北医科大学第四医院。年龄3 7 8 3 岁，平均年 龄为6 1 岁，中位年龄6 0 岁。男性17 例，女性1 2 例。绒毛状+ 管状腺癌 2 5 例，粘液腺癌4 例。高分化4 例、中分化2 2 例、低分化3 例。所有诊 断均经两位高年资病理医师证实。病变标本离体半小时内取结直肠癌组 织、癌旁无瘤粘膜组织、上残端粘膜组织和下残端粘膜组织各o 1 克，立 即置入液氮罐速冻，保存于8 0 冰箱，用于r t - p c r 方法检测结直肠癌 组织、癌旁无瘤粘膜、上残端粘膜和下残端粘膜组织中n u p 8 8m r n a 的 含量；采集同组病人结直肠癌组织、癌旁无瘤粘膜组织、上残端粘膜组织 和下残端粘膜组织标本，w e s t e r nb l o t 方法检测n u p 8 8 蛋白的表达，比较 其差异性，以期明确n u p 8 8 在结直肠癌发生、发展中的作用。同时分析 n u p 8 8 蛋白与结直肠癌临床病理特征间的关系，探讨n u p 8 8 蛋白及m r n a 的表达在结直肠癌发生、发展中的作用及可能的机制。 结果：l 、n u p 8 8 蛋白在结直肠癌无瘤粘膜、癌及转移淋巴结中的表 达：结直肠癌组和淋巴结转移癌组中n u p 8 8 蛋白的阳性表达率显著高于 癌旁无瘤粘膜组0 0 0 5 ) ；结直肠癌组和淋巴结转移癌组中n u p 8 8 蛋白 的阳性表达率之间的差别无统计学意义( 尸 o 0 5 ) 。 2 、n u p 8 8 蛋白在结直肠癌组织中的表达与临床病理特征间的关系： n u p 8 8 蛋白在结直肠癌组织中的表达与患者性别、年龄、肿瘤位置、组 织学类型、d u k e s 分期及淋巴结转移均无关( 尸 o 0 5 ) ，与组织分化程度有 关，在中低分化组其阳性表达率明显高于高分化组俨o 0 3 ) 。 3 、n u p 8 8 m r n a 在癌组织中的表达较癌旁无瘤粘膜、上残端粘膜、 下残端粘膜的表达明显增强，差异有统计学意义( 尸 o 0 5 ) 。 4 、n u p 8 8m r n a 与结直肠癌临床病理特征的关系：n u p 8 8m r n a 在 癌组织中的表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、组织学分类、分化程度、 浸润深度、淋巴结转移无关( 尸 o 0 5 ) 。 中文摘要 结论：1 、n u p 8 8 的表达与恶性肿瘤组织的生长密切相关，n u p 8 8 参 与了结直肠癌的发生，在细胞癌变的过程中发挥着重要作用。 2 、组织学分级低的结直肠癌组织中，n u p 8 8 表达水平较高，提示该 类患者恶性程度高。 3 、n u p 8 8m r n a 在癌组织中的表达与患者性别、年龄、肿瘤位置、 组织学类型、d u k e s 分期及淋巴结转移均无关。 4 、n u p 8 8 的高表达可能和结直肠癌的发生有关。 总之，n u p 8 8 作为n p c 的重要组成成分，在结直肠癌组织中的表达 较非癌组织明显上调；n u p 8 8 在结直肠癌组织中的表达与组织分化程度有 关，由此得出n u p 8 8 的高表达和结直肠癌的发生密切相关，对结直肠癌 的发生、发展具有重大的影响。 关键词：结直肠癌，n u p 8 8 ，核孔复合物( n p c ) ，r t - p c r ，w e s t e r nb l o t ， 免疫组织化学 一一薹查塑墨一 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 一 t h ee x p r e s s i o na n dc l i n i c a ls i g n i f i c a n c eo fn u p 8 8g e n e i nc o l o n c a n c e ra n dr e l a t i o nw i t hp 5 3 a b s t r a c t o b j e c t i v e ：t h ed e v e l o p m e n t a n dp r o g r e s s i o no fc o l o nc a n c e r , w h i c hi sa c o m p l e x ，m u l t i s t e pp r o g r e s si n c l u d i n gm u t a t i o no rl o s so f t u m o u rs u p p r e s s o r g e n e s ( e gp 5 3 ) a n d s oo n i nr e c e n ty e a r s ，t h ed e s i g n a t e do b j e c tr e s e a r c hw h i c h g r o w sr e g a r d i n gt h ec o l o nc a n c e rt u m o ra l r e a d yb e c a m eam a i nh o tt o p i c ， p a r t i c u l a r l y i th a si m p o r ts i g n i f i c a n c eo fd i a g n o s i sc o l o nc a n c e r i nc l i n i c a l w o r k m u l t i v a r i a t e a n a l y s i s h a sb e e ni n v o l v e dt oa s s e s s t h e g r o w t h ， d e v e l o p m e n ta n dp r o g n o s i so f c o l o nc a n c e r b e s i d e st u m o rs i z e ，p a t h o l o g i c a l s t a g ea n dg r a d e ，l y m p hn o d es t a t u s ，a n de ra n dp rs t a t u s ，q u a n t i t a t i v e a n a l y s i so fs o m eg e n e so nm o l e c u l a r1 e v e lh a sb e e nu s e dt o e v a l u a t et h e p r o g r e s s i o na n dp r o g n o s i s a st h eo n l ya c c e s sa c r o s st h en u c l e a rm e m b r a n e ， n u c l e a rp o r ec o m p l e x ( n p c ) p l a y sa ni m p o r t a n tr o l ei nt h en u c l e o c y t o p l a s m i c s h u t t l i n g a n dn u c l e a rp o r ep r o t e i n s ( n u c l e o p o r i n s ，n u p s ) ，a sa l li m p o r t a n t c o m p o n e n to fn p c ，p l a ya n o n t r a n s f e r r o l ei nt h ec e l ls i g n a lt r a n s d u c t i o n ， a n da p o p t o s i s n u p 8 8w a sam e m b e ro fn u c l e a rp o r ep r o t e i nc o m p l e xn p c s f a m i l y , a n dw a sc l o s e l yr e l a t e dw i t ht u m o r , a n dw a sr e s e a r c h e dd e e p l y a t p r e s e n tn u p 8 8a sn u c l e a rh o l e p r o t e i nc o m p l e xb e c a m et h e c l i n i c a le a c h r e l a t e dp r o f e s s i o n a lf i e l dr e s e a r c hah o tt o p i ca l r e a d l y , t h eh i 曲e x p r e s s i o ni n t h et u m o u rc e l lo fn u c l e a rh o l ep r o t e i nc o m p l e xn u p 8 8p r o m p t e du s ：i t w h e t h e ra l s oi nc o l o nc a n c e rh a sh i g he x p r e s s i o nr a t e ，w h e t h e rc a ng r o wa st h e c o l o nc a n c e rt u m o rd e s i g n a t e do b j e c t i nt h i s r e s e a r c h ，r t - p c rw a su s e dt o d e t e r m i n et h ec o n t a n t sa n d d i f f e r e n c e so fn u p 8 8p r o t e i na n dt h em r n ae x p r e s s i o nl e v e li nt h ec o l o n c a n c e rt h en o n l u m pm u c o u sm e m b r a n e ，o nt h er e m n a n te n dm u c o u s m e m b r a n ea n du n d e rt h er e m n a n te n dm u c o u sm e m b r a n ei no r d e rt o d e m o n s t r a t ei t se f f e c to nt h ed e v e l o p m e n ta n dp r o g n o s i so fc o l o nc a n c e r a n d n u p 8 8p r o t e i nw e r ee x a m i n e db yw e s t e r nb l o ta n di m m u n o h i s t o c h e m i c a l 4 美文摘要 m e t h o di nt h es a n l ec a n c e rt i s s u e st oi n v e s t i g a t ei t sc o r r e l a t i o nw i t hc l i n i c a l a n dp a t h o l o g i c a lf e a t u r e s t h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nn u p 8 8a n dp a t h o l o g i c a l g r a d e ，c l i n i c a ls t a g e ，a n dl y m p hn o d es t a t u s w a sa l s os t u d i e d ，s u c hs t u d i e s w o u l dp r o v i d e dt h e o r e t i c a le v i d e n c ef o rt h ee a r l yd i a g n o s i sa n dp r o g n o s i s a s s e s s m e n to fc o l o nc a n c e r m e t h o d s ：m a l i g n a n ta n dn o n n e o p l a s t i ct h et a n g s h a nw o r k e r s h o s p i t a l p a t h o l o g yd e p a r t m e n tt op u to nf i l et h ew a x b l o c kp a r a f f i nw a xo r g a n i z a t i o n s p e c i m e n ，t h ec o l o nc a n c e ro r g a n i z e sh a s l81 e x a m p l e s ，n e a r b yt h em a t c h c a n c e rt h en o n - l u m pm u c o u sm e m b r a n eo r g a n i z e sh a s8 4e x a m p l e sa n dt h e s h i f tl y m p hn o d eo r g a n i z e sh a s18e x a m p l e s a g e3 9 - 8 8y e a r so l d ，a v e r a g e5 9 y e a r so l d ，p o s i t i o na g e6 3y e a r so l d a n dm a s c u l i n e 8 8e x a m p l e s ，f e m i n i n e9 3 e x a m p l e s v i l l o s e + t u b u l a ra d e n o c a r c i n o m ah a s151e x a m p l e s ，m u c i l a g e a d e n o c a r c i n o m ah a s30e x a m p l e s s p l i t su ph a s6 2e x a m p l e s ，t os p l i tu ph a s 8 8e x a m p l e s ，t os p l i tu ph a s31e x a m p l e sl o w l yh i g h a n di ti sa c c o m p a n i e d b yt h el y m p hn o d es h i f th a s5 6e x a m p l e s ，n o n - l y m p hn o d es h i f th a s 12 5 e x a m p l e s ，d u k e s b ys t a g e s ：a 一4 6e x a m p l e ，b - 7 8e x a m p l e ，c 一5 1e x a m p l e ，d 一6 e x a m p l e s i m u l t a n e o u s l yc o l l e c t s 2 9e x a m p l e s w h i c hf r e s hc o l o nc a n c e r o r g a n i z a t i o na sw e l l a st h ec a n c e rt h e2 c mn o n l u m pm u c o u sm e m b r a n e o r g a n i z a t i o na n dc u t st h er e a s o nm u c o u sm e m b r a n en e a r b yi no c t o b e r , 2 0 0 7 2 0 0 8y e a ri nd e c e m b e r a n d2 0e x a m p l e sf r o mt a n g s h a nw o r k e r s h o s p i t a l ， 5e x a m p l e sf r o mt h eh e b e im e d i c a l c o l l e g ef i r s th o s p i t a l ，4e x a m p l e sf r o mt h e h e b e im e d i c a lc o l l e g ef o u r t hh o s p i t a l a g ei n37 8 3y e a r so l d ，t h ea v e r a g e a g ei s6 1y e a r so l d ，p o s i t i o na g ei s6 0y e a r so l d m a s c u l i n eh a s17 e x a m p l e s ， f e m i n i n eh a s12e x a m p l e s v i l l o s e + t u b u l a ra d e n o c a r c i n o m ah a s 2 5 e x a m p l e s ，m u c i l a g ea d e n o c a r c i n o m ah a s 4 e x a m p l e s s p l i t i o nh a s 4 e x a m p l e s ，t os p l i t i o nh a s2 2e x a m p l e s ，t os p l i t i o nh a s3e x a m p l e sl o w l yh i g h a l ld i a g n o s e sp a s st h r o u g ht w oh i g hp e d o do fs e r v i c ep a t h o l o g yd o c t o rt o c o n f i r m t h e0 1gp e c i m e n sw e r et a k e nw i t h i nh a l fa nh o u rf r o mt h eb e n i g n t u m o ro rc o l o r e c t a lc a n c e r , a d ja c e n tn o n t u m o rm u c o s a ，u n d e rt h es t u m po n t h es t u m pm u c o s aa n dm u c o s a lt i s s u e ，a n di m m e d i a t e l yw e r ef r o z e nb yl i q u i d n i t r o g e na n dw e r es t o r e da t 一8 0 r e f r i g e r a t o r , t od e t e c tt h el e v e l so fn u p 8 8 5 英文摘要 m r n ao fb r e a s tc a n c e rt i s s u ea n db e n i g n b r e a s tt u m o rt i s s u e b y r t - p c r ；w e s t e mb l o tw a su s e dt od e t e c tt h ec o n t a n t so fn u p 8 8p r o t e i ni nt h e c o l o r e c t a lc a n c e r , a d ja c e n tn o n - t u m o rm u c o s a ，u n d e rt h es t u m po nt h es t u m p m u c o s aa n dm u c o s a lt i s s u ea n db e n i g nc o l o r e c t a lc a n c e r , a d j a c e n tn o n - t u m o r m u c o s a ，u n d e rt h es t u m po nt h es t u m pm u c o s aa n dm u c o s a lt i s s u e ，t oc o n f i r m t h ee f f e c to fn u p 8 8i nt i s s u eo nt h ed e v e l o p m e n ta n dp r o g n o s i so fc o l o n c a n c e r c o l l e c t i n gt h ec a n c e ra n db e n i g ns p e c i m e n sf r o mt h es a m eg r o u po f p a t i e n t s ，t oa n a l y s i st h er e l a t i o n s h i po fn u p 8 8p r o t e i na n db r e a s tc a n c e r , t h e r e l a t i o n s h i pb e t w e e nc l i n i c o p a t h o l o g i c a lf e a t u r e st oe x p l o r et h en u p 8 8p r o t e i n i nb r e a s tc a n c e ro c c u r r e n c ea n dd e v e l o p m e n to ft h er o l ea n dp o s s i b l e m e c h a n i s m s d i s c u s s e st h en u p 8 8p r o t e i na n dm r n a e x p r e s s i o ni nt h ec o l o n c a n c e ro c c u r r e n c e ，i nt h ed e v e l o p m e n tt h ep o s s i b l ef u n c t i o nm e c h a n i s m r e s u l t s ：1 、t h en u p 8 8p r o t e i ni nt h ec o l o nc a n c e rn o n - l u m pm u c o u s m e m b r a n e ，t h ec a n c e ra n dt h es h i f tl y m p hn o d e se x p r e s s i o nc o l o nc a n c e r g r o u pa n di nt h el y m p hn o d es h i f tc a n c e rg r o u pt h en u p 8 8p r o t e i n sm a s c u l i n e e x p r e s s i o nr a t eo b v i o u s l yi sh i g h e rt h a nn e a r b yt h ec a n c e rt h en o n l u m p m u c o u sm e m b r a n eg r o u p 0 0 5 ) 2 、t h en u p 8 8p r o t e i n si nc o l o nc a n c e ro r g a n i z a t i o ne x p r e s s i o na n dt h e c l i n i c a lp a t h o l o g yc h a r a c t e r i s t i c sr e l a t i o n a ln u p 8 8p r o t e i n si nc o l o nc a n c e r o r g a n i z a t i o ne x p r e s s i o nw i t ht h ep a t i e n ts e x ，t h ea g e ，t h et u m o rp o s i t i o n ，t h e h i s t o l o g yt y p e ，d u k e s f e n q ia n dt h el y m p hn o d es h i f th a sn o t h i n gt od ow i t h ( p 0 0 5 ) ，w i t ht i s s u ed i f f e r e n t i a t i o nd e g r e er e l a t e d ，s p l i t su pt h a tt h eg r o u pi t s m a s c u l i n eg e n d e re x p r e s s i o nr a t et ob eh i g h e rt h a no b v i o u s l yl o w l ys p l i t su p t h eg r o u ph i g h ( 卢o 0 3 ) 3 、t h ee x p r e s s i o no f n u p 8 8 m r n ai nt h ec a n c e r o r g a n i z e si sh i g h t e r t h a nn e a r b yt h ec a n c e rt h en o n l u m pm u c o u sm e m b r a n e ，o nt h er e m n a n te n d m u c o u sm e m b r a n e ，u n d e rt h er e m n a n te n dm u c o u sm e m b r a n ee x p r e s s i o n o b v i o u se n h a n c e m e n t ，t h ed i f f e r e n c eh a ss t a t i s t i c ss i g n i f i c a n c e ( 尸 0 0 5 ) 英文摘要 4 、n u p 8 8m r n a a n dc o l o nc a n c e rc l i n i c a lp a t h o l o g yc h a r a c t e r i s t i cr e l a t i o n a l ： t h ee x p r e s s i o no f n u p 8 8m r n a w h i c hi nt h ec a n c e ro r g a n i z e sw i t ht h e p a t i e n t s e x ，t h ea g e ，t h et u m o rs p o t ，t h eh i s t o l o g yc l a s s i f i c a t i o n ，t os p l i tu pt h ed e g r e e ， t h ei n f i l t r a t i o n d e p t h ，t h el y m p hn o d es h i f tt oh a v en o t h i n gt od ow i t h 咿0 0 5 ) c o n e u l t i o n s ：1 、t h ee x p r e s s i o no f n u p 8 8i sc l o s e l yr e l a t e dt ot h eg r o w t h o fm a l i g n a n tt u m o r s ，n u p 8 8i n v o l v e di nt h eo c c u r r e n c ea n d d e v e l o p m e n to f c o l o nc a n c e r , i nt h ep r o c e s so fc a n c e rc e l l sp l a ya ni m p o r t a n t r o l e 2 、n u p 8 8e x p r e s s i o nl e v e l sa r eh i g h e ri np a t i e n t sw i t hs u c hah i g hd e g r e e o f m a l i g n a n c y , p o o rp r o g n o s i sa n ds h o r ts u r v i v a lt i m e 3 、 n u p 8 8p o s s i b l yc o n c e m sw i t ht h ec o l o nc a n c e ro c c u l l r e n c e 4 、t h ee x p r e s s i o no fn u p 8 8m r n ai nt h ec a n c e ro r g a n i z e sw i t ht h e p a t i e n ts e x ，t h ea g e ，t h et u m o rs p o t ，t h eh i s t o l o g yc l a s s i f i c a t i o n ，t os p l i tu pt h e d e g r e e ，t h ei n f i l t r a t i o nd e p t h ，t h el y m p hn o d es h i f tt oh a v en o t h i n gt od ow i t h i ns h o r t ，n u p 88a sa ni m p o r t a n tc o m p o n e n to fn p c ，w e r e s i g n i f i c a n t i v i n c r e a s e dc o m p a r e dw i t hn o n _ c a n c e r o u st i s s u e t h e r ei ss i g n i f i c a n tc o r r e l a t i o n b e t w e e nt h ee x p r e s s i o no fn u p 88i nc o l o nc a n c e rt i s s u e sa n dc o l o nc a n c e r h i s t o l o g i c a lg r a d e ，l y m p hn o d em e t a s t a s i s ，c l i n i c a l s t a g e t h er e s u l t i n g h i g h n u p 8 8e x p r e s s i o na n dt h eo c c u r r e n c eo fc o l o nc a n c e ri sc l o s e l vr e l a t e dt o t h eo c c u r r e n c eo fc o l o nc a n c e rd e v e l o p m e n t h a v eas i g n i f i c a n ti m p a c t a n di t s d e t e c t i o no ft h ee x p r e s s i o no f n u p 8 8m a ya s s e s sp r o g n o s i so fc o l o nc a n c e r m o r e p r e c i s e l y k e yw o r d s ：c o l o nc a n c e r ，n u p 8 8 ，n u c l e a rh o l e c o m p o u n d ( n p c ) ， r t - p c r ，w e s t e r nb l o t ，i m m u n i t yh i s t o c h e m i s t r y 研究论文 结直肠癌中n u p 8 8 蛋白及m r n a 的表达及临床意义 珥! 皇 闲置 核孔蛋白复合体蛋白8 8 ( n u c l e o p o r i n8 8 ，n u p 8 8 ) 是一种在肿瘤细胞 中由单克隆抗体( m a b ) c 6 识别的抗原，在许多肿瘤中高表达堙1 。但 n u p 8 8 蛋白及其m r n a 在结直肠癌中的表达情况国内外尚未见到报道。 本实验拟用免疫组化法和r t - p c r 法检测n u p 8 8 蛋白及m r n a 在结直肠 癌及无瘤粘膜中的表达情况，并分析其与结直肠癌临床病理特征的关系， 探讨该基因能否成为评估结直肠癌生物学行为的分子标记物之一。 材料和方法 1 1 临床资料 收集唐山市工人医院病理科存档蜡块石蜡组织标本，其中结直肠癌组 织1 8 1 例，匹配的癌旁无瘤粘膜组织8 4 例及转移淋巴结组织1 8 例。年龄 3 9 8 8 岁，平均5 9 岁，中位年龄6 3 岁。其中男性8 8 例，女性9 3 例。 绒毛状+ 管状腺癌1 5 1 例，粘液腺癌3 0 例。高分化6 2 例、中分化8 8 例、 低分化3 1 例。伴有淋巴结转移者5 6 例，无淋巴结转移者1 2 5 例，d u k e s 分期：a 一4 6 例，b 7 8 例，c 51 例，d 6 例。同时收集2 0 0 7 年1 0 月 2 0 0 8 年1 2 月手术的2 9 例新鲜结直肠癌组织以及癌旁2 c m 无瘤粘膜组织 和切缘粘膜。其中2 0 例来自唐山市工人医院，5 例来自河北医科大学第 一医院，4 例来自河北医科大学第四医院。年龄3 7 8 3 岁，平均6 1 岁， 中位年龄6 0 岁。男性17 例，女性1 2 例。绒毛状+ 管状腺癌2 5 例，粘液 腺癌4 例。高分化4 例、中分化2 2 例、低分化3 例。所有诊断均经两位 高年资病理医师证实。病变标本离体半小时内取结直肠癌组织、癌旁无瘤 粘膜组织、上残端粘膜组织和下残端粘膜组织各o 1 克，保存于一8 0 。c 冰箱， 用于r t - p c r 方法和w e s t e r nb l o t 方法分别检测结直肠癌组织、癌旁无瘤 粘膜、上残端粘膜和下残端粘膜组织结直肠癌组织、癌旁无瘤粘膜组织、 上残端粘膜组织和下残端粘膜组织中n u p 8 8m r n a 的含量和n u p 8 8 蛋白 的表达，比较其差异性，以期明确n u p 8 8 在结直肠癌发生、发展中的作 研究论文 用。采集同组病人结直肠癌组织、癌旁无瘤粘膜组织、上残端粘膜组织和 下残端粘膜组织标本，经4 中性甲醛液固定，石蜡包埋，5 f m 连续切片， 利用免疫组织化学s p 法检测n u p 8 8 蛋白的表达情况，同时分析n u p 8 8 蛋白与结直肠癌临床病理特征间的关系，探讨n u p 8 8 蛋白及m r n a 的表 达在结直肠癌发生、发展中的作用及可能的机制。 1 2 实验仪器及试剂 仪器： 匀浆器 水平电泳槽 夹芯式垂直电泳槽 立式高压蒸汽消毒器 c 0 2 细胞培养箱 c k 4 0 型光学显微镜 p x 2 型t h e r m op c r 仪 d y y 7 b 型稳压稳流电泳仪 b i o p h o t o m e t e r 分光光度计 低温超速离心机 - 8 0 超低温冰柜 轮转式切片机 捞片机 j d 8 0 1 图像采集及图像分析系统 实验试剂： t r i z o l 10 0 b p d n al a d d e r t a qd n a 聚合酶 琼脂糖( a g a r o s e ) c d n a 第一链合成试剂盒 引物 江苏省海门市华盛实验仪器有限公司 北京市六一仪器厂 意大利b i o r a d 公司 山东省鸡西市医疗器械厂 美国t h e r m of o r m a 公司 日本o l y m p u s 公司 美国t h e r m oe c 公司 北京六一仪器厂 德国e p p e n d o r f 公司 ( 德国e p p e n d o r f 公司5 4 1 7 r 型) 日本三洋公司m d f 3 8 2 型 上海l e i c a 仪器有限公司r m 2 0 1 6 型 上海l e i c a 仪器有限公司h 1 1 2 1 0 型 南京大学公司 美国i n v i t r o g e n 生物工程公司 广东东盛生物科技有限公司 美国p r o m e g a 生物工程公司 西班牙进口，上海分装 美国p r o m e g a 公司 北京赛百盛生物工程技术服务有限公司 研究论文 胎牛血清 多聚甲醛( p f a ) 鼠抗人n u p 8 8 多克隆抗体 免疫组化( s p ) 试剂盒 p v d f 膜 1 y i s h c l e d t a 溴化乙锭 硼酸 t 、忑，e e n 2 0 甲醇 甘氨酸 s d s 牛血清白蛋白( b s a ) m c c o y s5 a 培养基 1 p e s t l 谷氨酰胺 1 0 f b s 1 3 实验方法 1 3 1r n a 的提取： 杭州四季青公司 天津市永大化学试剂开发中心 英国n o v o c a s t r a 生物技术有限公司 北京中山金桥生物有限公司 美国m i l i p o r e 公司 北京s o l a r b i o 生物技术发展中心分装 华美生物工程公司 华美生物工程公司 美国s i g m a 华美生物工程公司 天津市永大化学试剂开发中心 上海博光生物科技有限公司 河北博海生物工程开发有限公司 河北博海生物工程开发有限公司 美国s i g m a 公司 美国g i b c o 公司 美国g i b c o 公