海藻多糖对HL-60细胞体外增殖的影响.doc

海藻多糖对HL-60细胞体外增殖的影响 作者：林新梅 王国祥 陆羡 唐慎华 【关键词】 海藻 【摘要】目的探讨海藻多糖对人HL-细胞增殖的影响。方法采用集落培养、MTT、形态观察等方法，研究海藻多糖对(HL-）体外增殖的影响。结果海藻多糖对体外培养的HL-细胞的抑制作用随时间和浓度的增加而增强，MTT结果示当浓度为800，作用48时抑制率为(51.30.）。结论海藻多糖体外可抑制HL-细胞增殖，提示其在抗肿瘤方面有一定的开发应用前景。 【关键词】海藻多糖；HL-细胞；增殖 【Abstract】ObjectiveTo explore the effect of seaweed polyaccharide on the proliferation in the HL- cell line.MethodThe MTT,clone forming approaches and cell morphology were adopted.ResultsSeaweed polyaccharide can inhibit the proliferation of HL- cells in a dose- and time-dependent manner in a certain range of dose (0）After being treated with the polysaccharide (800 ） for 48 h,the inhibited rate is (51.30.）onslusionThe seaweed polysaccharide can inhibit the HL- cell proliferation,suggesting it can be used as an antileukemia drug. 【Key words】seaweed polysaccharide,HL-60 cell,proliferation 多糖在细胞的生命活动中起着重要作用，它参与了细胞的生长、分化、衰老和死亡过程。我国传统中医常用马尾藻等治疗乳腺癌与子宫癌,国外也开展了使用海藻多糖进行肿瘤防治的研究。本文采用由湛江产马尾藻中提取的海藻多糖研究其对HL-细胞增殖的影响。 1材料与方法 试剂与仪器海藻多糖(广东医学院刘秋英硕士惠赠)，RPMI-培养基(Gibco Co，)，四甲基偶氮唑(MTT，Sigma公司)，Hoechst 33258(Sigma公司)，碘化丙啶(PI，Sigma公司)，4000甲基纤维素(Sigma公司)。仪器：OLYMPUS IMT-型倒置相差显微镜(Japan)，丹尼酶标仪(Denmark)，SW-医用净化工作台(苏州安泰空气技术有限公司)，SHZ-培养箱(U）。 方法 细胞培养：HL-细胞株由广东医学院生化教研室提供。采用含10%新生牛血清终浓度为100 U青霉素、链霉素的RPMI 1640液体培养体系，置37、5%恒温培养箱中培养，隔天换液一次。实验选用对数生长期细胞。 MTT抑制实验：参照文献，将细胞以2密度接种于96孔培养板中，加入不同浓度的药物，置37、5%孵箱中分别培养24、后，每孔加入MTT(5）20，继续培养4，加入MTT裂解液(20%SDS%），、孵箱中孵育8，酶标仪检测各组细胞的A630值，计算抑制率(IR)。抑制率(IR)(用药组A值对照组A值)%。 半固体培养：培养体系为2细胞，RPMI 1640培养基，30%新生牛血清，不同浓度的药物，0.9%甲基纤维素，分别种入24孔板中，每孔1.5 ，重复3孔，置37、孵箱中培养，于第7天计算细胞集落数，以每团大于50个细胞为一个集落。 1.2.4形态学观察：培养体系为2细胞，RPMI 1640培养基，马尾藻多糖终浓度分别为0(对照)、300、，加入24孔板中，每孔2，重复3孔，分别在1 d，于倒置显微镜下观察细胞形态变化，并拍照。 1.2.5统计处理:本实验数据资料用表示，使用SPSS10.0统计软件进行统计描述，采用SNK-q检验。 结果 MTT结果以不同浓度(0、)的海藻多糖作用于HL-细胞24、和72，MTT法检测其对HL-细胞增殖的影响，见表。随着海藻多糖浓度的增加和作用时间的延长，抑制率逐渐增加。当浓度为800，作用48时抑制率为(51.），与对照组相比差异有显著性(P.）。 表1海藻多糖对HL-细胞增殖的抑制作用（略） 集落培养结果海藻多糖对HL-细胞集落形成有明显的抑制作用，在100浓度范围内，集落逐渐减少；浓度为800时未见有细胞存活，仅见残余细胞碎片；与对照组相比，差异有显著性(.），结果见表2。表2海藻多糖对HL-细胞集落形成的影响(，)浓度(）集落数0219.67.50.200.与对照组相比 .，.；.。 3海藻多糖对HL-细胞形态的影响处理后24，各浓度组细胞形态与对照组未见明显差异，72各处理组可见部分细胞核变大，约为普通细胞的1倍，以300g组较多见。随着处理时间的增加，较大细胞逐渐增多，少数体积达到普通细胞的3倍，相差显微境下可见部分较大细胞先是核膜边缘出现多个突起后细胞核逐渐碎裂、分散，最终细胞破碎死亡。浓度越高，出现破碎死亡的细胞越多。 讨论 白血病是人群发病率较高的恶性肿瘤之一，化疗是重要的治疗手段，但其副作用大是其几乎不可克服的缺点。在祖国医学中，中草药在抗肿瘤中的应用源远流长，如马尾藻等治疗乳腺癌和子宫癌。现代研究证明近100种中药多糖有不同程度的抗肿瘤作用。我们的研究结果表明，海藻多糖对HL-细胞增殖呈明显抑制作用，且随药物浓度的提高和作用时间的延长而增强。海藻多糖100作用24即可见对HL-细胞增殖的抑制，当浓度为800、作用48时抑制率为(51.），与对照组相比差异有显著性(P.）。其作用机制尚不清楚，已有研究表明可通过以下机制发挥抗白血病作用：抑制DNA合成，干扰细胞代谢。刘力生等报道螺旋藻多糖(PSP)对癌细胞的抑制作用主要是通过对DNA合成的抑制而起作用的。并认为PSP的抑癌机制属于代谢性抑制。影响细胞酶的活性。Sogawa等研究发现海藻多糖可完全抑制白血病K562细胞DNA拓扑异构酶活性，使白血病细胞不能无限增殖。改变细胞膜的流动性。海藻多糖可提高S180荷瘤小鼠肿瘤细胞的膜流动性，降低H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性，通过恢复膜流动性至正常而达到