（高分子化学与物理专业论文）齐聚谷氨酸多肽的合成.pdf

原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究 所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集 体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均 已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者：纠谛日期：刎d 年占月1 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门 或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学 可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印 或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文 或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。 保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者：匀坤 日期：d 年6 月j 日 摘要 摘要 作为生物体的重要组成部分，多肽在生物、医学、化学和材料科学等领域 有着重要的地位，因而有效地人工合成多肽具有非常重要的意义和价值。 本论文主要描述两种齐聚谷氨酸多肽，r 苄酯l 谷氨酸四肽和丫一异丙酰胺 l 谷氨酸四肽的有效合成及其表征。采用液相多肽合成法，以l - 谷氨酸为起始 原料，经氨基或羧基选择性保护或脱保护和酰胺化偶联反应，有效地合成了这 两种齐聚多肽，合成量达到几克级。通过优化实验条件，实现了较高的收率和 光学纯度。通过1 hn m r 对合成中的重要中间体和目标产物分别进行了表征。 关键词：齐聚多肽l 谷氨酸液相合成法酰胺化偶联 a b s t r a c t a b s t r a c t a sat y p i c a lb i o a c t i v em a t t e r , p e p t i d e sh a v eb e c o m ei n t e r e s t i n gc a n d i d a t e sf o r a p p l i c a t i o n si nt h ef i e l d so fb i o l o g y , m e d i c i n e ，c h e m i s t r ya n dm a t e r i a ls c i e n c e s oi t s v e r ys i g n i f i c a n ta n dv a l u a b l et os y n t h e s i z ep e p t i d e se f f e c t i v e l y i np r e s e n tt h e s i s ，s y n t h e s i sa n dc h a r a c t e r i z a t i o no ft w oo l i g o p e p t i d e sb a s e do n l - g l u t a m i ca c i dw e r ed e s c r i b e d w i t hh i g h l yo p t i m i z e da n df u l l yr e p r o d u c i b l e s o l u t i o n - p h a s em e t h o d s ，t - b z y le s t e r - t e r m i n a t e dl g l u t a m i ca c i d t e t r a m e ra n d t - i s o p r o p y la m i d e - t e r m i n a t e dl - g l u t a m i ca c i dt e t r a m e rw e r ep r e p a r e de f f e c t i v e l yo n t h em u l t i g r a ms c a l eb ys u c c e s s i v er e a c t i o n ss u c ha ss e l e c t i v ep r o t e c t i o n so fa m i n oo r c a r b o x y la n da m i d ec o u p l i n g t h e i rs y n t h e t i c a lc o n d i t i o n sw e r eo p t i m i z e dt oa c h i e v e e a s yp u r i f i c a t i o n s ，h i g hy i e l d sa n dg o o do p t i c a lp u r i t i e s t h et w oo l i g o p e p t i d e s 勰 w e l la ss o m ek e yi n t e r m e d i a t e sw e r ec h a r a c t e r i z e db y1 hn m r ，r e s p e c t i v e l y k e yw o r d s ：o l i g o p e p t i d e sl - g l u t a m i ca c i ds o l u t i o n - p h a s ep e p t i d es y n t h e s i s a m i d ec o u p l i n g i i 目录 目录 摘 要一i a b s t r a c t i i 目录i i i 1 前言1日l j 舌 1 1 多j 扶1 1 2 多肽的研究进展一2 1 2 1 螺旋多肽的研究2 1 2 2 环境响应型多肽的研究8 i 2 3 多肽的自组装研究1 2 1 3 多肽合成1 7 1 3 1 液相合成法1 8 1 3 2 固相合成法1 9 1 4 课题设想与意义2 l 2 实验部分2 2 2 1 主要原料和试剂2 2 2 2 溶剂的处理2 3 2 3 实验仪器及测试设备2 3 2 4l - 谷氨酸多肽中间体的合成2 4 2 4 1h - g l u ( o b z ) - o h 的合成2 4 2 4 2b o o - g h ( o b z ) - o h 的合成2 5 2 5 丫苄酯化l 谷氨酸四肽的合成2 5 2 5 1b o c - ( h ( o b z ) o s u 的合成2 5 2 5 2b o e - g 2 - o h 的合成2 6 i t i 2 6 3 结果与讨论3 8 3 1l 谷氨酸多肽中间体的合成3 8 3 1 1h g l u ( o b z ) o h 的合成3 8 3 1 2b o c - g l u ( o b z ) - o h 的合成3 8 3 27 苄酯化l 谷氨酸四肽的合成3 9 3 2 1b o c - g l u ( o b z ) - o s u 的合成。4 0 3 2 2b o c - g 2 - o h 的合成4 0 3 2 3b o e - - g 2 o p f p 的合成4 1 3 2 4h + - g 2 - o h t f a 的合成4 l 3 2 5b o e g 4 - o h 的合成4 2 3 3y 异丙酰胺化l 谷氨酸四肽的合成4 2 3 3 1b o e - - g l u ( o b z ) - o m e 的合成4 3 3 3 2b o c g l u o m e 的合成4 3 目录 3 3 3b o c - g l u ( n i p ) - o m e 的合成。4 4 3 3 4b o c - g 2 ( n i p ) - o m e 的合成4 4 3 3 5b o o - g 4 ( n i p ) - o m e 的合成4 5 结语4 6 参考文献4 7 致谢51 个人简历5 2 v 多 是由多 于氨基酸和蛋白质之间。大多数多肽具有良好的生物相容性和生物可降解性， 能够通过人工合成的方法模拟自然界的蛋白质。自然界中存在各种各样的活性 多肽和蛋白质，它们具有十分重要的生理作用，是生命不可缺少的物质【1 1 。每一 个蛋白质都是由2 0 种氨基酸按特定次序排列而成的多肽链( f i g u r e1 1 ) 。一些活 性多肽和蛋白质一样，除了具有特定的氨基酸排列顺序即一级结构以外，还由 于分子内的氢键、盐键、疏水键等次级键的作用导致肽链产生特定的二级结构。 所谓多肽的一级结构是指蛋白质中共价键连接的氨基酸残基的排列顺序，多肽 的二级结构是指在局部区域内氨基酸残基的规则排列，是通过骨架上的羰基和 酰胺基团之问形成的氢键维持的【2 】。常见的二级结构【3 】有a 螺旋和d 折叠( f i g u r e 1 2 ) 。多肽的生物活性不仅取决于多肽链的一级结构，而且与其特定的空间二级 结构密切相关。多肽空间二级结构的异常很可能导致其生物活性的降低、丧失， 甚至会引发疾病。 图1 1 由氨基酸合成蛋白质的结构 f i g u r e1 1s t r u c t u r eo f p r o t e i ns y n t h e s i z e db ya m i n oa d d s 图1 2 多肽的二级结构 f i g u r e1 2t h es e c o n ds l r u c t u r eo f p e p t i d e s t 3 l 1 2 多肽的研究进展 多肽作为一类重要的生物活性物质，通常具有很好的生物相容性和生物可 降解性，在溶液中容易形成有序的二级结构如a 螺旋或d 折叠。多肽的螺旋结构 对于蛋白质的合成和d n a 遗传信息的复制起着决定性的作用。一些多肽分子如 e l p s 具有特殊的温敏性可以构筑“分子开关类型的材料，由酸性或碱性氨基 酸合成的多肽由于其侧链带有部分电荷，具有一定程度的p h 响应性。另外，多 肽作为构筑基元可以自组装形成纳米管、纳米球、纳米纤维和纳米带等纳米尺 度的有序结构，在生物传感器、组织工程、药物缓释、仿生医学、分子开关等 方面有着潜在的应用价值。目前关于多肽的研究越来越多，不断涌现智能多肽 的报道。下面就螺旋多肽、环境相应型多肽及多肽自组装方面的研究作一简单 的介绍。 1 2 1 螺旋多肽的研究 天然大分子如蛋白质和基因的高度功能化来源于它们有序的立体结构【4 5 】。 在这些有序的立体结构中，螺旋结构被认为是聚合物链中最基本的结构，在生 物活性方面起着很重要的作用。螺旋结构广泛存在于自然界中，如d n a 的双螺 旋、蛋白质二级结构的a 螺旋等【6 7 】。螺旋是一种手性结构，更确切的说，左手 螺旋和右手螺旋是不同的镜像体。所以，如果两种螺旋结构中的一种被选择性 合成，那么这个聚合物可能有光学活性即使它的侧链或主链中不包括手性基团。 螺旋结构有两种最基本的类型【8 】：一种是刚性螺旋即室温条件下稳定存在的螺 2 i 前言 旋，另一种是动态螺旋即在一定的条件下螺旋结构沿着聚合物链可以转化。按 照螺旋形成的方式不同，可以将螺旋聚合物分为两类：由自身结构形成的稳定 的螺旋聚合物和利用底物诱导形成的螺旋聚合物。自身结构形成的稳定的螺旋 聚合物主要是指由氨基酸形成多肽和蛋白质的螺旋等，后一类是利用底物的诱 导效应形成的螺旋如主客体组装形成的螺旋等。 螺旋分子的历史来源于一些天然聚合物分子螺旋构型的发现。2 0 世纪5 0 年 代，天然多肽的0 【螺旋结构 9 j 及d n a 的双螺旋结构【l o 】的发现在分子生物学领域有 了很大的突破。1 9 5 5 年n a t t a 】发现了全同立构的聚丙烯在固体状态时有一个螺 旋的结构，开始了合成螺旋分子的领域。1 9 5 6 年d o t y t l 2 以4 】证明了聚p 苄酯谷氨酸 随着链的增长可以由无规线团转化成伐螺旋结构。y a s h i m a 和o k a m o t o 1 5 】研究了 加入的手性小分子的相互作用能够诱导螺旋的形成。 由于螺旋聚合物的广泛应用和特有的性质，越来越多的人开始研究螺旋结 构，并开始合成一些具有功能性的螺旋聚合物。这些螺旋聚合物不仅可以模拟 自然界中的螺旋物质，解释生命现象，而且在生物医药、有机不对称催化、构 筑功能材料等方面具有重要的意义。多肽作为一类非常重要的具有螺旋结构的 物质，在药物载体和细胞穿透、修饰纳米粒子和生物矿化等方面有着潜在的应 用价值，人工合成一些具有螺旋结构的多肽已经吸引了研究人员的浓厚兴趣。 z h a i l g 等1 1 6 j 合成了一种含1 6 个氨基酸的低聚多肽d a r l 6 ，此多肽在水溶 液中以稳定的1 3 折叠形式存在，当溶液温度升高至7 0 。c 以上时，突然发生1 3 折叠 到q 螺旋的结构转变，而其中没有无规线团中间体的形成。当降低溶液的温度时， 依然保持o 【一螺旋结构，经过数周才慢慢有转化成1 3 一折叠构型的倾向，显示了向p 折叠构型转化的动力学不可逆性。这种低聚肽可以作为一种模型用来研究存在 于一些疾病如s c r a p i e 或a l z h e i m e r 中蛋白质构型的改变，进而研究一些疾病的发 病原理等。而对于从1 3 折叠结构到q 螺旋结构的剧烈转变可用来设计一种生物传 感器来检测环境的变化，还可以用于“分子开关”方面的研究。 d e m i z u 掣7 】合成了由a 氨基异丁酸( a i b ) 和仅，b 脱氢苯丙氨酸( f f p h e ) 残基组 成的结构不同的四个肽片段，然后将一个手性l - 缬氨酸插入到非手性的肽片段的 c 端，分别通过i r 、1 h n m r 和c d 对组成的肽构型进行了研究。发现 b o e - a i b z x p h e - ( a i b ) 2 一l v a i - n h b n ( 3 ) 和b o c - a i b a p h e - ( a i b h l - v a l - n h - b n ( 4 ) 在 溶液中的主要构型是右手螺旋结构。同时，通过x r a y 检晶仪对其研究发现两者 在晶体状态时只形成右手螺旋构型( f i g u r e l 3 ) 。 3 图1 3 多肽的结构和多肽4 通过x 光观察的构型叠加垂直方向图( a ) 及通过计算的最小能量 构型沿螺旋轴方向图( b f i g u r e l 3s t r u c t u r e so f p e p t i d e sa n ds u p e r i m p o s i t i o no f t h ec o n f o r m a t i o nd e t e r m i n e db yx - r a y a n a l y s i s ( b l u e ) a n dt h ec a l c u l a t e dm i n i m u m - e n e r g yc o n f o r m a t i o n ( g r e e n ) o f h e x a p e p t i d e4a s v i e w e d ( a ) p e r p e n d i c u l a rt oa n d ( ”a l o n gt h eh e l i c a la x i s 自然界中的生命现象都是非线性的，一些生物大分子不仅具有特定的空间 结构，而且分子尺寸都比较大，如蛋白质和核酸等。近年来，研究人员试图合 成一些非线性的大尺度多肽聚合物，并将多肽的螺旋结构引入大尺度聚合物， 以模拟自然界中的生物大分子，同时结合其分子结构上的特点，在分子容器、 药物输送和催化等领域有很好的应用前景。目前研究较多的大尺度多肽聚合物 有树形多肽和多肽分子刷。树形多肽的研究可以分为以多肽作为构筑基元的树 形多肽聚合物和多肽与其它树形聚合物的组装研究，而关于多肽分子刷的研究 主要集中于分子刷侧链为多肽的分子。下面分别就这两类大尺度聚合物的相关 研究做一简单的介绍。 张阿方等【l m 采用液相多肽合成法有效地合成了三种互为非对应异构体的二 代树枝化基元( 2 s ，4 s ) 一l 、( 2 s ，4 r ) 一1 和( 2 r ，4 s ) 1 ( f i g u r e l 4 ) 。通过手性h p l c 分析 其光学纯度高达9 8 。将这种高刚性、紧密堆积的树枝化基元连接到线型聚合物 上不仅对骨架的柔顺性产生很强的影响，还可能促使骨架形成一个螺旋构型， 在制备螺旋状树枝化聚合物及有机不对称催化合成领域有很高的研究价值。 4 1 前言 荩荩一 i 2 s , 4 r f i 图1 4 基于脯氨酸二代树枝化基元l 的三个非对应异构体结构 f i g u r e l 4t h et h r e ed i a s t e r e o m e r i cp r o l i n e - b a s e d ( 3 2d e n d r o n si 随后，张阿方等1 1 9 将- - 个枝化点构型都是( 2 s ，4 s ) 的4 氨基脯氨酸一代至二代 树枝化基元分别连接上甲基丙烯酸甲酯进行自由基聚合，得到树枝化多肽聚合 物p g l 和p g 2 。二代树枝化基元的紧密堆积，不仅使聚合物刚性增加，而且树枝 化基元的相互作用诱导了右手螺旋构型的形成。此螺旋结构能够在不同极性的 溶剂( 如甲醇和四氢呋喃) 和较宽的温度范围内稳定存在，聚合物脱保护后，右手 螺旋结构依然保持。 s c h l i i t e r 等【2 0 1 采用脱保护后带正电荷的树枝化聚合物( p g 2 和p g 4 ) 与带负 电荷的d n a 复合，成功的制备了有机生物大分子复合分子材料，发现d n a 链以 螺旋状缠绕在树枝化聚合物链e ( f i g u r e l 5 ) 。s f m 结果表明复合物的长短取决于 树枝化聚合物的链长，而与d n a 无关。这个树枝化聚合物和d n a 的复合体对于 研究带相反电荷的聚电解质相互作用理论是一个很有用的模型，而且，这种新 奇的复合体可被用于非病毒基因的传输系统和优化基于向量体系结构的转染效 率。 矗 b x 胞 x p m 图1 5d n a 环绕树枝化聚合物p g 2 ( a ) 和p g 4 ( b ) 的复合体模型及相应的螺距 f i g u r e1 5m o d e lo ft h ec o m p l e x d n aw r a p sa r o u n dt h ed e n d r o n i z e dp o l y m e rp g 2 ( a ) a n dp g 4 c o ) r e s u l t i n gi np i t c h e sx p g 2a n d x p g 4 5 单 在 在 通 药 f i g u r e1 6s y n t h e s i so fc h i r a lp o l y ( p h e n y l a c e t y l e n e ) b e a r i n gl - l y s i n e - b a s e dd e n d r i t i cp e p t i d ei n t h es i d ec h a i n k o l t o v e r 等【2 2 采用“接枝到表面”路线，通过高效的酯化反应，合成了以单分 散的螺旋聚谷氨酸多肽为主链，f r 6 c h e t 型树枝化基元为侧链的树枝化聚合物 ( d p p ) 。此树枝化聚合物是一类新型的圆柱形树枝状大分子，其尺寸、形状及 溶解性均达到了预期的目标，而且能够自组装成长程有序的液晶相( f i g u r e l 7 ) 。 通过改变多肽的序列、树枝化基元的功能性和树枝化基元的立体结构，可以进 一步研究d p p 的相互作用和自组装形状。 图1 7 d p p 溶液的自组装结构图 f i g u r e1 7s c h e m a t i ci l l u s t r a t i o no ft h es e l f - a s s e m b l e ds t r u c t u r eo fd p ps o l u t i o n s 张阿方等采用“大单体路线，合成了以单分散脯氨酸八肽为侧链，聚甲 6 l 前言 基丙烯酸酯为主链的多肽分子刷( f i g u r e l 8 ) ，同时利用圆二色谱对分子刷在溶 液中的构象进行了研究。研究发现与自由脯氨酸八肽不同，多肽分子刷的脯氨 酸八肽侧链在水及正丙醇中均呈现p ph 螺旋构象，经三氟乙酸脱表面b o c 保护 后，分子刷仍然呈现稳定的p pi i 构象。这种螺旋构象不仅具有很高的热稳定性， 而且与聚合物主链链长关系甚微。p pi i 螺旋构象是天然蛋白质中常见的二级结 构，在许多生物学过程如蛋白质识别，细胞渗透中起着重要的作用。 p o l y m e r i z a b l eu n t l 射程贸狮一 | o j g o p r o l t n e 图1 8 多肽分子刷中高稳定性的p p i i 螺旋 f i g u r e1 8h i 曲s t a b i l i t yo f t h ep pi ih e l i xi np o l y p e p t i d eb o t t l e b r u s h e s s c h m i d t 等t 冽在多肽链与带相反电荷的表面活性剂复合可以诱导a 一螺旋或p 折叠结构的基础上，将侧链为聚赖氨酸的柱状分子刷与十二烷基硫酸钠复合， 得到了螺距为1 4 2 4 姗的螺旋结构分子届u ( f i g u r e l 9 ) 。这种柱状分子刷聚合物螺 旋结构的形成是由聚赖氨酸侧链和表面活性剂的复合体形成b 折叠结构的疏水 性诱导的。 图1 9 柱状分子刷聚合物螺旋结构的绘画图和3 - da f m 图 f i g u r e1 9g r a p h i c a ls k e t c ha n d 3 - da f mp i c t u r eo ft h eh e l i xf o r m e db yac y l i n d r i c a lb r u s h p o l y m e r 7 1 前言 1 2 2 环境响应型多肽的研究 环境响应型聚合物即智能聚合物，是指聚合物能对外界刺激如温度、p h 值、 溶嗣、盐浓度、光及电场等产生响应。许多生物过程依赖于信息的可控反馈， 其中包括核酸、蛋白质和多肽等。这些生物大分子能够根据环境的变化改变它 们的构型和自组装程度，是一种生物模拟过程。溶液中的响应性聚合物可以改 变分子链的尺寸大小、二级结构、溶解性或分子间的结合度来适应环境的变化。 智能聚合物在生物医药应用方面如可控药物输送、生物传感诊断学、智能膜和 用于组织工程的基质等有着广泛的应用价值【2 5 】。近年来，环境响应型多肽作为 一种特殊的智能聚合物，已经引起了人们广泛的研究兴趣。在这些多肽的研究 中，弹性蛋白类的多肽( e l a s t i n 1 i k ep o l y p e p t i d e s ) i 0 e l p s ，由于其特殊的温敏 性及作为构筑基元构筑“分子开关类型的材料在药物输送和释放方面的应用 吸引了合成工作者的浓厚兴趣，成为了近十年来的研究热点。 弹性蛋白是一类细胞外的基质蛋白，广泛存在于结缔组织、皮肤、肺和韧 带中【2 睨羽。e l p s 通常由( v p g x g ) n 组成，其中，x 是除脯氨酸以外的其它氨基酸， 1 1 代表了e l p s 中v p g x g 五肽的重复数。e l p s 具有一个可逆的相转变温度t t ，温 度低于t t 时，e l p s 在水溶液中可溶，而温度高于t i 时，e l p s 聚集形成不溶的凝聚 相【2 9 3 0 。t t 依赖于溶液的p h 和离子强度，对于一个给定的溶液环境，t 。可通过改 变氨基酸的组成及e l p s 链的长度进行调节。e l p s 是一类新奇的温敏性智能生物 聚合物，能够把精确地分子直接编码到e l p s 的序列和结构中，使这些设计的生 物聚合物很容易地通过重组d n a 的方法合成。e l p s 的低毒性、可编码的生物降 解性、单分散性及潜在的生物相容性使之成为一种有用的生物材料在药物输送 和组织工程等方面有着广泛的应用。由于e l p s 由氨基酸组成，可以通过设计多 肽来精确控制e l p s 的序列和链长。因此，e l p s 比聚异丙烯丙烯酰胺p n i p a a m 更 具优点【3 1 1 ，成为了环境响应型多肽领域最具有前途的一类。 k l o k 等1 3 2 研究了通过改变e l p s _ 五肽重复单元中氨基酸链长度和化学组成对 e l p s 的二级结构和l c s t 行为的影响。随着温度的增加，所研究的大部分肽呈现 了典型弹性蛋白的构型行为即由无规线团结构转化成b 转折特性。e l p s 的l c s t 随着多肽部分链长度的增加而降低，随着疏水性的增加而降低。清楚的证明了 弹性蛋白类型的短肽作为一种潜在的构筑基元在生物医学和工程材料方面的应 用。 c l a r k 3 3 1 等研究了利用一种新型的电喷法来构造基于e l p s 的生物响应性微 8 l 前言 粒，使之能够形成药物胶囊( f i g u r e l 1 0 ) 。为了产生纳米微粒( 直径在3 0 0 4 0 0 n m ) ， e l p s 和药物共溶于有机溶剂中，通过一个电压梯度加速，转运过程中蒸发干燥， 最后在一个靶面收集。研究发现微粒的直径、多分散性和形貌是随溶液的浓度、 喷雾电压和聚合物的分子量而变的。较高的流速和较低的喷雾电压容易使微粒 形成纤维状，低分子量的e l p 聚合物容易形成球形微粒。令人惊讶的是，药物在 2 0 w w 的装载并不影响颗粒的形貌。这些粒子的药物释放和e l p s 溶解性有关， 同时也说明了电喷法对于产生温敏性的药物粒子是一种很有效的方法。 e i ps o l u t i o n d o xs o l u l i o m dl 一目u p o w e l rm a n l y 图1 1 0 制备e l p 药物输送粒子的电喷装置示意图 f i g u r e1 10s c h e m a t i cd i a g r a mo fa ne l e c t r o s p r a y i n gs e t u pf o rp r e p a r i n ge l pd r u gd e l i v e r y p a r t i c l e s c h i l k o t i 等【3 4 】设计了第一个基于温敏性e l p s 的线性a b 双嵌段共聚物( e l p a c s ) 。对比一系列具有不同分子量和亲水疏水嵌段比例的嵌段共聚物，发现当温 度升至人体温度以上时e l p b c s 自组装成球形胶束( f i g u r e l 1 1 ) 。当这种双嵌段共 聚物的亲水疏水嵌段比例在1 ：2 和2 ：1 之间时，e l p s c s 首先经过单聚体到球形胶 束的转变，随着温度的继续升高，继续转变成块状聚集体。临界胶束温度由疏 水嵌段的长度决定，而胶束的大小由整个e l p b c s 长度和亲水一疏水嵌段比例控 制。胶束的临界胶束浓度在4 8 微米，证明了这个结构的高稳定性。e l p a c s 可 以被用在由温度诱发的靶向癌细胞，这种结构在医学和生物学等不同领域温敏 性纳米粒子的设计上有着广泛的应用。 9 i 前言 e l a s t i n j i k ep o l y p e p t i d eb l o c kc o p o l y m e r - 翰戮翩搦瓣溅溺黝澄戮缓搦骶 t e m p e r a t u r e 蕾3 7 。c 驾。 气1 色 f r e e l ys o l u b l ee l p s cs p h e d c e l 盯i ；柏 图1 1 1e l p 双嵌段共聚物形成多化合价球形胶束的温度诱导组装图 f i g u r e1 1 lt e m p e r a t u r et r i g g c 掀ls e l f - a s s e m b l yo f a ne l p b ct of o r mm u l t i v a l e n ts p h e r i c a l m i c d l c s 以上是关于弹性蛋白类多肽e l p s 温敏性的相关研究，关于其它环境响应型 多肽如离子诱导、p h 敏感和光敏感的研究也层出不穷。 l i m b a c h 等【3 5 】研究了固相聚赖氨酸( p l l ) 俱u 链氨基的酸碱和碱一碱相互作用 及相关的二级结构，并用高分辨率的固相1 5 n 和”c c p m a s 核磁光谱对这些酸诱 导的相互作用进行了分析。研究发现在较低的酸碱比率条件下可以形成1 ：2 和1 ：3 的酸碱复合体( f i g u r e l 1 2 ) 。 纛b矗 图1 1 2 固相聚赖氨酸在酸碱比率x a x s 0 2 n g h 3 十c 2 h s o h 型吣仑s 哪2 邺 叫 n o 吲 s c h e m e3 4s y n t h e s i so fc o m p o u n dc h 2 n 2 3 3 2b o e - g l u - o m e 的合成 氨基酸脱去苄酯保护的方法有碳酸钾删和催化加氢旧等。本实验首先采用 了碳酸钾在水和四氢呋喃的混合溶剂中，0 c 条件下脱苄酯的方法。可能是氨基 用b o c 保护后亲油性增强，2 4 h 后依然没有反应。故采用催化加氢的方法脱去苄 酯，用t l c 板检测反应的进行，发现反应在3 5 h 时即反应完毕，收率较高约1 0 0 ， 4 3 3 结果与讨论 而且产物较纯，直接进行下一步反应。 3 3 3b o e - g l u ( n i p ) - o m e 的合成 该步反应是b o c - g l u - o m e 末端羧基的异丙酰胺化，由于a 羧基已甲酯化， 故这里采用了碳二亚胺法即直接地酰胺化偶联反应将氨基和羧基结合起来，而 没有活化羧基，这样可以避免活化羧基反应中的原料损失。 关于羧基和氨基在缩合剂如d c c 存在下的缩合反应，首先是羧基和d c c 反应生成0 酰基异脲，o 酰基异脲是一种活化的羧酸衍生物，它同酰氯和酸酐 一样，容易与胺起亲核取代反