埃博拉出血热采样及标本运送.ppt

埃博拉出血热的采样与防护,.,一、基本情况,潜伏期2-21天,一般为5-12天。传播途径：接触传播、气溶胶传播。临床表现：突然发病，各器官出血，肌肉疼痛，DIC（弥散性血管内凝血）等90%的死亡患者在发病后12天内死亡(7-14天)。病死率高，可达50%-90%。尚无特效药和疫苗。埃博拉出血热是最严重的出血热,一、基本情况,型别扎伊尔型（Ebola-Zare）：毒力强，人感染后病死率高。苏丹型（Ebola-Sudan）：科特迪瓦（Ebola-CtedIvoire）：对黑猩猩有致死性,对人的毒力较弱。雷斯顿型（Ebola-Reston）：在非人灵长类中有致死性,人感染不发病。抵抗力埃博拉病毒在室温下稳定，601小时大部分病毒被灭活,对紫外线、射线、甲醛、次氯酸、酚类等消毒剂和脂溶剂均敏感。,二、临床表现及诊断,1、流行病学：来自疫区，或3周内有疫区旅行史，或与患者、感染动物接触。2、临床表现：急性起病，发热伴极度乏力、牙龈出血、鼻出血、黏膜出血、瘀点和紫斑、血便等及其他症状（头痛、肌痛、咽痛、恶心、呕吐)。3、实验室检测：（1）病毒抗原阳性（2）血清特异性IgM抗体阳性（3）恢复期血清IgG比急性期有4倍升高（4）核酸阳性（5）分离到埃博拉病毒疑似病例：1+2确诊病例：疑似病例+3中任一检测阳性,三、标本采集-生物安全防护,1、所有样本的采集或处理应遵守医院感染管理规范和病原微生物实验室生物安全管理条例等相关生物安全规定，在标准预防的基础上采用飞沫和接触隔离的预防措施。2、样本采集时，应严格按照BSL-3级实验室规定做好个人防护。应穿戴医用防护服、可遮盖口鼻的医用防护口罩(N95)、双层乳胶手套、护目镜、头部面部保护罩、专用橡胶靴等。,三、标本采集-生物安全防护,3、采血场所应在相对独立的场所，应符合负压要求。如果不具备上述条件，可用相邻的房间提供足够的安全空间，备有除了病人常规护理的材料外应具备手套、防护服和防护面具等，同时要装备有洗手的设施和装有消毒液的桶。4、采样人员应由经过生物安全防护培训的人员执行，采血时应2人在场。,四、标本采集与保存,1、标本采集时间初次送检：目前检测方法中主要是核酸检测，埃博拉出血热患者发病后3天内的血标本，病毒核酸阳性的可能性很小，因此建议采集发病72小时后的血标本送检。再次送检：如果留观/疑似病例发病72小时后血标本实验室检测阴性，但临床表现比较典型的患者，可在初次检测24-48小时后再次采集血标本送检。解除隔离治疗送检：确诊病例解除隔离治疗前采集血标本进行复检。,四、标本采集与保存,2、标本采集方法.用分离胶无菌真空促凝管采集静脉血，每管3mL，标记后4保存。并填写标本采集登记表（附表1）.标本采集数量留观病例、疑似病例采集4管，其中2管送省疾控中心进行埃博拉病毒检测，2管保存于本单位，待排除埃博拉病毒感染后用于其他病原体的筛查；确诊病例采集恢复期血标本，送国家疾控中心病毒病所进行检测。,四、标本采集与保存,3、标本保存方法.未分离血清的全血标本应4保存，并尽快分离血清；.血清标本长期保存应置于-70以下；.标本保存不超过1周可置-20。4、标本信息收集（填写埃博拉出血热流行病学个案调查表）病例一般信息：姓名、性别、年龄、国籍来自疫区国名、入境时间，发病日期，发病前21天的疫区居住史，旅行史、类似病例接触史等。主要临床症状：发热、严重乏力、头痛、肌痛、呕吐、腹泻、出血表现等标本详细信息：采样时间、种类、标本量等。送样信息：负责送检的联系人姓名、联系电话、送检时间等,标本容器,第一层2mL,可离心有垫圈第二层15mL,封口膜封口易标记,五、标本包装与运输,1、包装方式：A类包装（UN2814要求）按照三重包装系统包装：第一层包装（可密封样本袋、50mL离心管）；第二层安全壳容器（防水、防漏）；第三层外层运输包装。样本袋放入防水防漏的第二层安全壳容器中，为降低破碎或泄漏的风险，用吸水纸等填充物固定标本袋。安全壳容器和外包装放冰袋。,五、标本包装与运输,2、运输方式：全血采用冷藏运输，血清可采用冷冻运输不要打开采集管或分装样本。专人专车。,六、实验室检测,凡涉及埃博拉病毒的分离、培养和动物实验，需在生物安全4级（BSL-4/ABSL-4）实验室内进行。涉及未经培养有感染性材料的实验活动，需在BSL-3实验室内进行。血清学检测应在BSL-3实验室内，且标本需先601小时灭活后，再进行后续实验操作。核酸检测时,需在BSL-3实验室内加入核酸提取裂解液,完成病毒RNA提取，并对装有病毒RNA样品管的外表面进行彻底消毒后，可在BSL-3实验室以外进行扩增检测。,六、实验室检测,1、病原学检测：核酸检测：主要检测方法。发病后3天内，血标本中埃博拉病毒核酸检出率低，检测阴性不能排除埃博拉病毒感染。发病后310天血标本病毒核酸检出率高，检测阴性可排除埃博拉病毒感染。病毒抗原检测：用酶联免疫法检测埃博拉病毒核蛋白抗原。病毒抗原检测阳性可确诊。发病后3天内，血标本中埃博拉病毒抗原检出率低，检测阴性不能排除埃博拉病毒感染，发病后310天血标本病毒抗原检出率高。,六、实验室检测,2.血清学检测：血清特异性IgM抗体：采用捕获法ELISA方法检测。IgM抗体阳性可确诊。血清特异性IgG抗体：目前采用间接法ELISA检测IgG抗体。单份血清埃博拉病毒IgG抗体阳性提示曾感染埃博拉病毒，双份血清埃博拉病毒IgG抗体阳转或恢复期滴度较急性期4倍或者以上增高者可确诊。,七、样本保存和销毁,实验室检测埃博拉病毒阳性血标本，应根据相关生物安全规定保存在-70以下，实行“双人双锁”管理和取样“审批”制度。实验室检测埃博拉病毒阴性血标本，应所采集疑似患者或密切接触者完全排除埃博拉病毒感染后，转入其他血清库保存或销毁。所有血清销毁时，均应在冰箱内取出后，在生物安全柜内，待其自然融化后，置于含有效消毒剂（0.5%有效氯）内浸泡，然后高压灭活。所有销毁样本均应在相应数据库清单内标明，销毁的时间和操作人，阴性样本销毁记录