（生物化学与分子生物学专业论文）假单胞菌株m18抗生物质合成代谢的分子调控机制及相关性研究.pdf

上海兜通大学博士学位论文 锻单胞蘧株m t 8 挽生物质合成代谢的分子调羧机制及稠关性研究 摘要 假举脆菌株m 18 ( p s e u d o m o n a ss p mt8 ) 与邕报邋所育骰单施蓠j 蓠 蘩株不游，可黻阕对合残并分泌两类抗生秘震。癸蹩黔嗪( p h e n a z i n e ) ， 瑟娄怒藤黄绿蓥囊( p _ y o ! u t e o r i n 。p i t ) 。黔臻娄耪囊主要戚分是泠臻一1 羧酸( p h e n a z i n e l - _ c a r b o x y l i ca c i d ，p c a ) 。这两类抗生物质可以抑制蠛杀 灭葶l 起彳乍物病警的多荦申真菌等病原微生物。因此，该菌株在现代农业中 蠢广阕靛应霜静景。 为了阚骤镁单施菌株m t 8 酶抗生物质合残的调控路径、调控瓿麓以 及构建绿毽农业生产上高效的生防菌株，减少并最终替代化学农药的使 用，分别从该菌株的蒸因缝d n a 中克隆了群翻、r s m a _ 鞠r p o s 等与薇种 撬生秘质合成密锈藕关的诱控基麓及它们的稽邻降舞。鬻深性分轿结桊 显示，这些调掇基因与太爨杆蓥及其它革兰氏弱蝼蒙豹耀瘦基因基馥一 般肖6 0 9 0 9 6 的溯源性。箕中与铜绿假单脆蔚p a 0 1 ( 黧a e r u g i n o s ap a o t ) 的间源性最高，达到9 9 。 利躅簿源熏缝技术，分别椽建了_ 述调控基麟嚣积、r s t t 豇4 魏r p o s 的挽毽基媛定点播a 突变拣m 1 8 g 、m t 8 r 秘m 1 8 s 。在p p m 嚣k i n g sb 上海交通大学博士学位论文 f k m b ) 两种培养基发酵液中，提取并用高效液相色谱( h p l c ) 定量检测 突变菌株和野生菌株合成的抗生物质。 检测结果显示，g a c a 基因突变株m 1 8 g 与野生菌株m 1 8 相比，其 p c a 的合成与分泌量显著提高，尤其在k m b 培养基中与野生型相比提 高达3 0 倍。而不论在p p m 还是在k m b 培养基中，突变株m 1 8 g 的p l t 的合成则被完全抑制。表明与其它假单胞菌株g a c a 对抗生物质的正调控 作用不同，假单胞菌株m 1 8 的g a c a 对两种抗生物质合成代谢具有明显 的区别性调控，即对抗生物质p c a 的合成具有抑制作用( 负调控机制) ， 对抗生物质p i t 的合成具有促进作用( 正调控机制) 。 r s m a 基因突变株m 1 8 r 发酵结果显示，在上述两种培养基中抗生物 质p c a 的合成量比野生菌株显著减少，而抗生物质p l t 的合成量与野生 菌株相比有大幅度的提高。表明，假单胞菌株m 1 8 全局调控因子r s m a 对抗生物质合成代谢同样具有差异性调控。其中r s m a 对抗生物质p l t 合成具有负调控作用，对抗生物质p c a 合成具有正调控作用。 对假单胞菌株m 1 8 的r p o s 基因突变株m 1 8 s 的发酵分析表明，作为 静止期表达的转录调节因子( o r 3 8 ) 对抗生物质的合成代谢有显著的影响。 r p o s 基因的插入失活使抗生物质p c a 的合成显著减少，但抗生物质p 1 t 的合成量显著增加。由此推测，假单胞菌株m 1 8 的r p o s 因子对p c a 的 合成具有正调控作用，对p l t 的合成具有负调控作用。 对基因的反式互补实验和d 一半乳糖苷酶基因的翻译融合表达载体的 构建与分析，进一步证明了上述结果。 上海交通大学 博士学位论定 为了进一步确定全髑镤控因子g a c a 调控发生彳乍弱黝可缝水平，以 g a c a 基因突变株m 1 8 g 为出发菌株构建了r s m a 基因盼抗庚大霉索瑟曝 插入的双基因突变株m 1 8 g r 。双突变株的p c a 鄹p 1 t 合成蟪的变化分孝斥 袭骥，谲控闲子g a c a 缀可麓在转蒙詹东平上调控p c a 秘p i t 等挠生物 履的合成。 禳撵p c a 察戮t 台戚基嚣簇麓序戮结稔，分剐设诗了可戬扩墙2 5 0 b p 的p h z dp l t c 基因片段的两对引物。以野生激菌株m 1 8 和其衍生株 髓 8 毽、m 1 8 r 等懿总r n a 必摸叛进行步法r t - p c r 。该继暴表鲳，g a c a 和r s m a 在转荥后水平上调控p c a 和p i t 等抗生物质的合成。 尧了鳎明上述捃美蒸溜瓣抗生物鹱p c a 秘p l t 魏调控遴潞霸枧制， 磁上述研究蒸础上，进步通过构建调控基因与b 一半乳糖静酶基因的翻 译融合表达裁体( ：强) 嗣楣关融合突变株( 4 a e z ) 来鉴定调控基因闽 的耜互作臻种榴互影喻。结栗表瞬，在假单脆麓株m i8 中，其中g a c a 对r s m a 、r p o s 的表达没有影响，怛r s m a 对r o s 的表达有明显的正 调控俸溪。接灞r s m a 可能透过簿瓣尚未蓑分离或蓥定斡郧o s 转录葳瀚 译的阻遏因子，从而正调控r p o s 的淡达。由此，首次提出并建立一条假 蕈臆蓥撩m 1 8 拣生夔囊合成霞落麓可能囊控通鼹，帮r s m a 正瀵控釉o s 袭达，再通过r - p o s 区别性调控上述两种抗生物质的合成代谢。 在骚究上述嚣翳撬生貔震酶代辫攘关洼过稷中，发瑷p l t 戆合藏缺失 对p c a 的合成没有影响，但p c a 的合成减少却增加了p i t 的表达。过爨 麴p c a 可以影畹并罄分搀铡筘豇基圈簇的表达。在缀单憨藏m t 8 中，p l 1 1 1 上海交通大学 博士学位论文 也袭现出自调掇的规割。 关键词：假单胞毽m 1 8 ，g a e a ，r s m a ，r p o s ，突燮，吩嗪一l 一羧酸，藤黄 绿菌索，调控机铆 上海交通大学博士学位论文 a 厘0 l e c u l a rr e g u l a t o r y m 匿c 娃a n l s m1 3 i fa n t l b i o t i ca n a b o l l s ma n d a n t i b l o 下i c sl n 下e r a c t i o ni n ，隰u d o m o n a ss p m 1 8 a b s t r a c t i th a sb e e ni n v e s t i g a t e dt h a tt h ew i l dt y p es t r a i no fp s e u d o m o n a ss p 。m 1 8 ，w h i c h i s o l a t e df r o mt h ea g r i c u l t u r a ls o i li nt h ev i c i n i t yo fs h a n g h a is u b u r b ，c a np r o d u c ea n d s e c r e t eb o t ho ft w oa n t i b i o t i c sp h e n a z i n g - 1 一c a r b o x y l i ca c i da n dp y o l u t e o r i n ，w h i c h c o n t r i b u t et oi t sb i o c o n t r o la n ds u p p r e s s i o no f s o i l b o r n ep a t h o g e n s i no r d e rt od e m o n s t r a t ea n dm a k eal i g h to nt h ep a t h w a ya n dm e c h a n i s mo f t h e s et w o a n t i b i o t i c sb i o s y n t h e s i s ，as e r i e so fr e g u l a t o r yg e n e sa n dt h e i rf l a n k i n gs e q u e n c e s ，w h i c h i n c l u d e 酗酬，r s m aa n dr p o sg e n e s ，w e r ec l o n e df r o mt h eg e n o m i cd n a o fs t r a i nm 1 8 i n t op b l u s c r i p t s k ，r e s p e c t i v e l y t h er e s u l t so fs e q u e n c ea l i g n m e n t ss h o wt h a tt h e n u c l e o t i d es e q u e n c e so f t h e s es t r u c t u r a l ( r e g u l a t o r y ) g e n e ss h a r e6 0 - 9 0 i d e n t i c a lt ot h a t o f t h ec o r r e s p o n d i n gg e n e so f e c o l ia n do t h e rg r a m * n e g a t i v eb a c t e r i a t h eg e n e so f s t r a i n m 1 8m e n t i o n e da b o v ew e r eb a s i c a l l yh o m o l o g o u st ot h ec o r r e s p o n d i n gg e n es e q u e n c e si n p s e u d o m o n a s a e r u g i n o s ap a 0 1w i t h9 9 i d e n t i t y o nt h eb a s i so ft h ew o r k ，t h ei n s e r t i o n a l t yc h r o m o s o m a lm u t a n t sw i t ha n t i b i o t i c s g e n e s ，w h i c hi n c l u d e da 彰叫m u t a n tm 1 8 q a l lr s m am u t a n tm 1 8 ra n da l l ，p 醛m u t a n t m 1 8 s ，w e r ec o n s t r u c t e dw i t ht h eh o m o l o g o u sr e c o m b i n a t i o n t h ei n s e r t i o n sw e r ev e r i f i e d w i t hs o u t h e r nb l o ta n a l y s e s t h e n ，t h em u t a n t sa n dt h ew i l dt y p es t r a i nm 18w e r e v 上海交通大学博士学位论文 i n o c u l a t e di n t op p mo rk i n g sb ( k m b ) m e d i u m ，r e s p e c t i v e l y d u r i n gt h ec u l t i v a t i o no f s t r a i nmi8a n dt h e i rd e r i v a t i v e s ，t h ea n t i b i o t i cp c aa n dp i tw e r ee x t r a c t e d ，a n dq u a n t i f i e d w i t hh p l c i nc o m p a r i s o nw i t ht h ew i l dt y p es t r a i nm 1 8 ，t h ep c a p r o d u c t i o nw a se n h a n c e dw i t h 3 0f o l di nk m bm e d i u mi nm u t a n ts t r a i nm l8 go nt h eo t h e rh a n d ，n om a t t e rw h i c h m e d i u mw a su s e df o rm18 gc u l t i v a t i o n ，p i tw a sn od e t e c t e d t h i sd a t ai n d i c a t et h a ta g l o b a lr e g u l a t o rg a c am a ye x e r tn e g a t i v ee f f e c to nt h ep c ab i o s y n t h e s i sa n dp o s i t i v e i n f l u e n c eo nt h ep l tp r o d u c t i o n i np p mo rk m bm e d i u m ，t h er s m ag e n em u t a n tm18 rc o u l db i o s y n t h e s i z e dm u c h m o r ep l tt h a nt h ew i l dt y p es t l - a mm 1 8 ，i n d i c a t i n gt h a tat r a n s l a t i o n a lr e p r e s s o rr s m a n e g a t i v e l yr e g u l a t e dp i tp r o d u c t i o n p c ap r o d u c t i o no fs t r a i nm 1 8 rw a sv e r yl o wi n c o m p a r i s o nt ot h a tp r o d u c e db yw i l dt y p es t r a i nm 1 8 t h er e s u l t si n d i c a t et h a tr s m am a y e x e r tp o s i t i v ee f f e c t s0 1 1p c a p r o d u c t i o n w i t ht h ea n a l y s i so ff e r m e n t a t i o no fs t r a i nm 1 8 s ，i tw a sd e m o n s t r a t e dt h a t t r a n s c r i p t i o n a lr e g u l a t o r0 3 8 ，w h i c he x p r e s s e do nt h eo n s e to fs t a t i o n a r yp h a s e ，g r e a t l y a f f a c t e dt h ea n t i b i o t i cp r o d u c t i o n , r e s u l t i n gi nt h er e p r e s s i o no fp c ap r o d u c t i o na n d i n c r e a s eo f p l tb i o s y n t h e s i s a l lt h e s er e s u l t sw e r ef i l r t h e rv e r f i e db yt h ec o m p l e m e n t a t i o na s s a yi nt r a n sa n d t r a n s l a t i o n a lf u s i o nw i t hl a c z g e n e i no r d e rt oi d e n t i f yt h es i t ew i t hw h i c hg a c af o u n c t i o n a l l yb i n d s 。g a c a r s m ad o u b l e m u t a n tw a sc r e a t e do ut h eb a s i so fp a r e n t a ls t r a i nm18 ga c c o r d i n gt ot h ea n t i b i o t i c p r o d u c t i o no fp c aa n dp i t ，i tw a ss u g g e s t e dt h a tp c aa n dp i tr e g u l a t i o no c c u r r e da tt h e p o s t t r a n s c i p t i o n a ll e v e l a c c o r d i n gt ot h es e q u e n c e so f p h z do rp l t cg e n e s ，t h ep r i m e r s w e r es y n t h e s i z e df o rr t - p c ru s i n gt h et o t a lr n aa st e m p l e t ee x t r a c t e df r o mt h es t r a i n m 1 8o ri t sd e r i v a t i v e s + t h er e s u l t ss h o wg a c aa n dr s m a ，a sg l o b a lr e g u l a t o r s ，r e g u l a t et h e g e n e sr e l a t e ds e c o n d a r ym e t a b o l i s ma tt h ep o s t t r a n s c r i p t i o n a ll e v e li np s e u d o m n a ss p m 1 8 t oe l u c i d a t et h er e g u l a t o r ym e c h a n i s ma n dr e l a t i o n s h i pb e t w e e nr e g u l a t o rr p o sa n d 上海交通大学 博士学位论文 r s m a ，t h et r a n s l a t i o n a l f u s i o nr p o s 一 a e za n dr s m a4 7 a c zw e rc o n s t r u c t e da n d t r a n s f o r m a t e di n t ow i l dt y p es t r a i nm 1 8a n di t sd e r i v a t i v e sm 1 8 ro rm 1 8 s t h e 6 w g a l a c t o s i d a s ea c t i v i t i e ss h o wt h a te x p r e s s i o no fr p o si sp o s i t i v e l yr e g u l a t e db yr s m a ， a n dr p o sm a ya c t sa sa u t o i n d u e e ri nr e g u l a t i n gi t so w n e x p r e s s i o nw i t hp o s i t i v es t y l e ，t o e l i m i n a t et h ei n f l u e n c eb r o u g h tb yp l a s m i dc o p i e s ，t h ec h r o m o s o m a l l yi n s e r t e df u s i o n s r p o s - l a c zw c o n s t r u c t e di nf r a m ew i t ht h ep a r e n t a l s t r a i nm 1 8o rm 1 8 r ，t og e n e r a t e s t r a i nm 1 8 s l a c zo rm 1 8 r s - l a c zr e s p e c t i v e l y t h ep - g a l a c t o s i d a s ea c t i v i t yo f m 1 8 r s l a c zw a so n l y3 0 t h a to fs t r a i nm 1 8 s - l a c z ，t h er t - p c ra s s a yi n d i c a t e st h a l r s m am a yi n f l u e n et h ee x p r e s s i o no fr p o sa tp o s t t r a n s c r i p t i o n a ll e v e l t h e s ed a t a s u g g e s t e dt h a tp c a a n dp i tp r o d u c t i o nw e r er e g u l a t e db yr s m a ，i n v o l v i n gt h em e d i a t o r r p o si ns t r a i nm 1 8 t ob ee x a c t ，t h er s m ap o s i t i v e l yr e g u l a t e st h ee x p r e s s i o no f 釉o s ， w h i c he x e r t sp o s i t i v ee f f e c to np c a p r o d u c t i o na n dn e g a t i v ei n f l u e n c eo np l tp r o d u c t i o ni n p s e u d o m o n a ss p m t 8 ， i nr e l a t i o n s h i pb e t w e e np c aa n dp i tp r o d u c t i o n ，s o r l l en e wf i n d i n g sw e r eo b t a i n e d 。 t h ee x p r e s s i o no f p h zg e n ec l u s t e rd i dn o ta l t e rw h e np tg e n ec l u s t e rw a sk n o c k e do u ti n s t r a i nm 1 8 t t h ed e c r e a s e so fp c ap r o d u c t i o nb 矗i 堪a b o u t , h o w e v e r , i n c r e a s eo fp i t p r o d u c t i o n p i ta l s op o s i t i v e l ya u t o i n d u c e si t se x p r e s s i o n i ns t r a i nm 18 。 k e yw o r d s ：p s e u d o m o n a s s p m 1 8 ， 辞喇， r s m a ， r p o s , m u t a t i o n ， p h e n a z i n e 一1 一c a r b o x y l i ca c i d e ，p y o l u t e o r i n ，r e g u l a t o r ym e c h a n i s m 上海交通大学学位论文答辩决议书 u l 串请者 葛宣秘 | | 绣在学科( 专业)| ! 生物化学与分子生物学 ， 沦文题蹦假单胞菌株m 1 8 抗生物质合成代谢的分子调控机制及相关性研究 。答辩日期 2 0 0 5 0 4 0 1 l i 答辩地点 | i 上海交通大学 ” 答辩委员会成员 担任职务f姓名职称所在工作单位备注f签名 主席洪孟民l研究员 中辩院上海植物生理鼙三态磷 无 抛影 l 究所 委员鼹伟臀教授华东师范大学无 隧筛。 委员曹同教授上海师范大学无 审黼 委员 徐晋麟 教授上海交通大学 无 | | 鼻| j r 绷 委员l 张雪洪 。教授 上海交遥大学 l 无 朔卅月 评语葶瑟决议： v 浚论文在全强综遂扭美领域文献瓷辩的赘础上。剥用本实验室特有的假单胞菌株m 1 8 进行定向突变、 反式互补以及与b 一半乳糖替酶融台表达分析等实验，对g a c a 、坩胁、r p o s - - 个基因调控唠臻- l - 羧酸( p c a ) 与藤黄绿蕊素( p i t ) 两静不周类挺抗生素合成的分子机制及这兰个调控基因之间的相嚣关系，进行了深入 研究，为阐明m 1 8 菌株的p c a 与p i t 合成代谢的醒别性调控网络提供了新的证瓣与信息，其有一定理论寐 义秘痰用徐擅。为掏建基黩王醒莲攮，提赢m 1 8 抗生素合成本平、改普生舫效果提供了可供选择豹途径。 论文立题新颖，襄验方案设计科学、台琏，结槊可靠。论黛条理清晰论文答辩憨鼯清晰，袭达准确， 对专家提爨静瓣题齄捧接合理豹鞭答或解释。研究结果姆沦文充分艇殃乎# 者具舞7 扎实的专业理沧知识与 相关实验技能，具备了从事分子生物学等方蕊的科研工作能力 彩峰姜媳一跨遁婕等拳沦曩- 瓤，；霞蠛吝t 名 博土欹至， 答辩委员主荐滞壶反 ，j g 京，褥学基敷赣，1 9 8 4 ，1 6 6 9 【2 】张纪忠，微生物分类学，上海，复旦大学出版社，1 9 9 0 t2 1 * 2 7 f 3 】饕丈姥，棼被，表遂徽生秘萋嚣工程，j 索，辩学毒舨社，2 0 0 1 ，2 3 7 蠢7 0 f 4 】c a m p b e l l ，r ，g r e a v e s ，m p i ，a n a t o m ya n dc o m m u n i t ys t r u c t u r ei nt h er h i z o s p h e r e ，c h i c h e s t a r e n g l a n d ，w i l e y & s o n s ，1 9 9 0 ，1 1 - 3 4 瑟】c o o k ，琵王，m a k i n gg r v a t e rh o fi m r o d u e e dm i e r c 日r g a n i s m sf o rb i o l o g i c a lc o n t r o lo fp l a n t p a t h o g e n s ，a n n u r e v 聊t o p a a 【 o l , 1 9 9 3 ，3 1 ，5 3 - 8 0 f 6 lc o o k ，r j ，t h o m a s h o w , l sw e l l e r , d m ，州a lm o l e c u l a rm e c h a n i s m so fd e f e n s eb y f 1 1 i z o b a c t e d aa g a i n s tr o o td 溉a s e , p r o c n a t l a c a d u s a ，t 9 9 5 ，9 2 ，4 1 9 7 - 4 2 0 1 【7 】t h o m a s h o w ，l s ，w a l l e r ，d m ，c u r r e n tc o n c e p t si nt h eu s eo fi n t r o d u c e db a c t e r i af o rb i o l o g i c a l d i s e a s ec o n t r o l ，n e wy o r k ：c h a p m a n h a l l ，1 9 9 5 mp l a n t - m t h r o b ei n t e r a c t i o n s , e d s t a c e y , g 。， k e e n ，豫，l ，1 8 7 心3 5 【8 】l a m ，s t ，g a f f z e y 。t d ，i nb i o t a c h n o l o g yi np l a n td i s e a s ec o n t r o l ，n e wy o r k , w i l e y - l i s s ，1 9 9 3 ， 2 9 l - 3 2 0 f 9 lt h o m a s h o w , l sb i o l o g c a ic o n t r o lo fp l a n tr o o tp a t h o g e n s , c u r t o p i n b i o t e e h n o l , 1 9 9 6 ，蠢 3 4 3 3 4 7 【1 0 jd e i h g o ，g ，h a a s dp s e 礁o m o n a d s 鹳a n t a g o n i s t so f s o i l b o r n ep a t h o g e a t s , m a r c e ld a k k c r , n e w y o r k ，1 9 9 0 ，m o d e so fa c t i o na n dg e n e t i ca n a l y s i s ，l i ls o i lb i o c h e m i s t r y , v o l 、6 ，e d b o l l a g ，j m s t o t z k y , g 。2 4 9 9 1 f il jb a k k e r , e a 。耩mr a n ，l ，x ，p i e t e r s 。“, c m j ，e t 最u n d e r s t a n d i n g t h ei n v o l v m c mo f r h i z o b a c t e r i a - m e d i a t e di n d u c t i o no fs y s t e m i cr e s i s t a n c ei nb i o o o n t r o lo fp l a n td i s e a s e s ，c a n z p l a n tp a t h o t , 2 0 0 3 ，2 5 ，5 - 9 f 1 2 jy e d i d i a , l ，s h o r e s h ，砬，k e r e m z ，e t 醇c o a e o m i m n ti n d u c t i o no fs y s t e m i cr e s i s i a n e e t o p s e q m o m o n a ss y r i n g a ep v l a c h r y m a n si nc u c u m b e rb yt r i c h o d e r m aa s p e r e l l u m ( t - 2 0 3 ) a n d a c c u m u l a t i o no f p h y t o a t e x i n s , a p p le n v i r o n m i c r o b i o l , 2 0 0 3 ，6 9 ，7 3 4 3 - 7 3 5 3 1 3 1w e l l e r ，d m ，b i o l o g i c a lc o n t r o lo fs o i l b o r n ep l a n tp a t h o g e n si nt h er h i z o s p h e r ew i t hb a c t e d a ， a n n u r e v p h y t o p a t h o l , 1 9 8 8 ，2 6 ，3 7 94 0 7 1 4 1t h o m a s h o w , l s ，w e n e r , d m ，r o l eo f ap h e n a z i n ea n t i b i o t i cf r o mp s e u d o m o n a s f i u o r e s c e n si n b i o l o g i c a lc o n 廿o l o f g a e u m a n n o m y c e s g r a m i n i s v a t , t r i t i c i ，b a c t e r i o l , t 9 8 8 ，1 7 0 ，3 4 9 9 - 3 5 0 8 15 1r a a i j m a k e r s ，j m ，v l a m i ，m ，d es o u z a ，j t ，a n t i b i o t i cp r o d u c t i o nb y b a c t e r i a lb i o c o n t r o la g e n t s ， ；| 。b ev 酩tl e e u w e n h o e ki n t 0 。g e n m o lm i c r o b i o l2 0 0 2 ，8 1 ；5 3 7 - 5 4 7 1 6 】h o l l o w a y , b w ，k r i s t m a p i l l a i ，v ，m o r g a n ，a e ，c h r o m o s o m a lg a n e f i e a o fp s e u d o m o n a s ，j = b a c t e r i o t , 19 7 9 ，1 3 9 ，2 6 4 * 2 6 9 1 1 7 1m a v r o d i ，d v ，k s a n z e n k o ，v n ，b o n s a l l ，r f ，e t8 as e v e n g o n e l o c u sf o rs y n t h e s i so f p h e n a z i n e 一1 - c a r b o x y l i ca c i db y p s e u d o m o n a sf l u o r e s c e n s2 - 7 9 。，b a c t e r i o l , 1 9 9 8 ，1 8 0 ， 2 5 4l 2 5 4 8 1 8 1m a w o d i ，d 。v 1 ，b o n s a l l ，r f ，d e l a n e y , e ta l ，f u n c t i o n a la n a l y s i so fg e n e sf o rb i o s y n t h e s i so f p y o c y a n i na n dp h e n a z i n e 一1 - c a r b o x a m i d ef r o m p s e u d o m o n a sa e r u g i n o s ap a 0 1 ，j b a c t e r i o l , 2 0 0 1 ， 1 8 3 ，6 4 5 4 6 4 6 5 1 9 1h a a s ，d ，b l u m e r ，c ，k e e l ，c ，b i o e o n t r o la b i l i t yo ff l u o r e s c e n tp s e u d o m o n a d sg e n e t i c a l l y d i s s e c t e d ：i m p o r t a n c eo f p o s i t i v ef e e d b a c kr e g u l a t i o n c u r r o p i n b i o t e c h n o l , 2 0 0 0 ，1 1 ，2 9 0 _ 2 9 7 2 0 1n o w a k - t h o m p s o n ，b 。，c h a n e y ，n 。，w i n g ，j 。s ，e t # c h a r a c t e r i z a t i o no ft h ep y o l u t e o r i n b i o s y n t h e t i cg a n ec l u s t e ro f p s e u d o m o n a s f l u o r e s c e n sp f - 5 ，zb a c t e r i o t , 1 9 9 9 ，1 8 1 ，2 1 6 “2 1 7 4 211n o w a k t h o m p s o n ，b ，g o u l d ，s j ，l o p e r , j e ，i d e n t i f i c a t i o na n ds e q u e n c ea n a l y s i so ft h eg e n e s e n c o d i n gap o l y k e t i d es y n t h a s er e q u i r e df o rp y o l u t a n r i nb i o s y n t h e s i si np s e u d o m o n a s f l u o r e s c e n s p f - 5 ，g e n e ，1 9 9 7 ，2 0 4 ，1 7 以4 f 2 2 】l a v i l l e ，j ，v o i s a r d ，c ，k e e l ，c ，e ta t , g l o b a lc o n t r o li np s e u d o m o n a $ f l u o r e s c e n sm e d i a t i n g a n t i b i o t i cs y n t h e s i sa n ds u p p r e s s i o no f b l a c kr o o tr o to f t o b a c c o ，p r o c n a t l , a c a d s c i u s a ，1 9 9 2 ， 8 9 ，1 5 6 2 - i 5 6 6 2 3 】s c t m i d e r - k e e l ，u 。，s e e m a t t e r , a + ，m a n r h o f e r , m ，e t 8 t a u t o i n d u c t i o no f 2 , 4 - d i a c e t y l p h l o r o g l u e i n o lb i o s y n t h e s i si nt h eb i o c o n t r o la g e n tp s e u d o m o n a sf l u o r e s c e n sc h a 0 2 8 a n dr e p r e s s i o nb yt h eb a c t e r i a lm e t a b o t i t e ss a l i c y l a t ea n dp y o l u t e o r i n ，zb a c t e r i a l2 0 0 0 ，1 8 2 ， 1 2 1 5 1 2 2 5 f 2 4 a b b a s ，a ，m o r r i s s e y ，j p ，m a r q u e z ，p c ，e ta l ，c h a r a c t e r i z a t i o no fi n t e r a c t i o n sb e t w e e nt h e t r a n s c r i p t i o n a lr e p r e s s o rp h l fa n d i t sb i n d i n g 建辩艇如西敬p r o m 拱e ri np s e u d o m o n a s f l u o r e s c e n $ f l l 3 zb a c t e r i o l2 0 0 2 ，1 8 4 ，3 0 0 8 - 3 0 1 6 【2 s d e l a n y , i ，s h e e h a n ，m m ，f a n t o n ，a ，e ta t , r e g u l a t i o no fp r o d u c t i o no ft h ea n f i f u n g a lm e t a b o l i t e 2 a - d i a c e t y l p h l o r o g h , e l a o ti np s e u d o m o n a sf l u o r e s e e r t s f 11 3 ：g e n e t i ca n a | 辨i so f 舞汐a s t r a n s c r i p t i o n a lm p r e s s o r ，m i c r o b i o l o g y , 2 0 0 0 ，1 4 6 ，5 3 7 5 4 6 2 6 1d e l a n y , i r ，w a l s h , u f ，r o s s ，i ，e ta l ，e n h a n c i n gt h eb i o c o n t r o le f f i c a c yo fp s e u d o m o n a s s h o f c m sf tt 3b ya l t e r i n gt h er e g u l a t i o na d dp r o d u c d o no f2 , 4 d i a c e t y l p m o r o g l u c i n o l ，p l a n t s o i l ，2 0 0 1 ，2 3 2 ，1 9 5 - 2 0 5 【