（预防兽医学专业论文）食源性单核细胞增多性李斯特菌的生物学特性.pdf

c h a r a c t e r i z a t i o no fm a jo rb i o l o g i c a lp r o p e r t i e so f l i s t e r i am o n o c y t o g e n e si s o l a t e sf r o mf o o d s ad i s s e r t a t i o nf o rm a s t e r sd e g r e e s u b m i t t e dt o t h eg r a d u a t es c h o o l ，z h e j i a n gu n i v e r s i t y h a n g z h o u ，z h e ji a n g ，c h i n a g r a d u a t e ：j i n g ji n gx u s u p e r v i s o r ：p r o f e s s o rw e i h u a nf a n g m a j o r ：p r e v e n t i v ev e t e r i n a r ym e d i c i n e m a y 2 0 0 6 课题来源 科技部食品安全重大专项子课题： 食品安全关键技术应用的综合示范一海产品生产过程 中主要病原微生物污染监控 ( 项目编号：2 0 0 1 b a 8 0 4 a 2 5 ) 浙江大学硕士学位论文 目录 摘要1 a b s t r a c t 3 前言6日看6 第一部分文献综述：8 第一章单核细胞增多性李斯特菌的生物学特性及其流行特征9 1 生物学特性1 0 1 1 培养特性1 0 1 2 抵抗力1 0 2 病原生态学与流行特点1 l 2 1 病原生态学1 1 2 2 流行特点1 2 2 2 1 传播途径1 2 2 2 2 易感动物及临床表现1 2 2 2 3 易感人群及人类李斯特菌病发病情况1 3 第二章食源性单核细胞增多性李斯特菌检测与分型技术研究进展1 5 1 检测技术1 5 1 1 传统分离鉴定方法1 6 1 2 免疫学和分子生物学检测技术1 6 1 2 1 免疫学快速检测方法1 6 1 2 2 分子检测技术1 6 1 2 2 1 核酸探针1 7 2 几种常用的分型技术1 8 2 1 传统表型分析法18 2 2 分子分型1 8 2 2 1 随机扩增d n a 多态性分析1 9 2 2 2 扩增片段长度多态性分析1 9 2 2 3 单链构象多态性分析2 0 2 2 4 多位点序列分型2 0 浙江大学硕士学位论文 2 2 5 核糖体分型2 0 2 2 6 脉冲场凝胶电泳2 1 参考文献2 2 第二部分研究内容2 6 第一章海产品中单核细胞增多性李斯特菌的分离鉴定及其毒力与药敏性比较 2 7 1 材料与方法2 8 1 1 培养基、试剂与仪器2 8 1 2 试验动物和标准菌株2 8 1 3 样品采集2 8 1 3 1 李斯特菌的分离2 8 1 3 2 单增李斯特菌的鉴定2 9 1 3 3 单增李斯特菌海产品分离株的毒力和药敏性比较3 1 2 结果3 1 2 1 海产品中单增李斯特菌污染状况3 1 2 2 单增李斯特菌海产品分离株对鸡胚和小鼠的毒力3 2 2 3 单增李斯特菌海产品分离株对抗生素的敏感性3 3 3 讨论3 4 参考文献3 6 第二章单核细胞增多性李斯特菌海产品分离株的脉冲场凝胶电泳分型3 7 1 材料与方法3 8 1 1 培养基、试剂、仪器与设备。3 8 1 2 细菌菌株3 8 1 3 标准分子量d n a 片段的制备3 8 1 4 细菌d n a 的提取及样品栓的制备3 9 1 5 限制性内切酶的消化4 0 1 6 电泳4 0 2 结喜畏。4 l 3 讨论。工4 2 参考文献4 4 浙江大学硕士学位论文 第三章两个不同毒力单核细胞增多性李斯特菌奶源分离株的环境适应性比较 4 5 1 材料和方法4 6 1 1 材料4 6 1 2 鸡胚和小鼠体内的毒力试验4 6 1 3 溶血活性比较4 6 1 4 在低温保存牛奶中的生长试验4 7 1 5 在高浓度氯化钠或低p h 培养条件下的生存试验4 7 1 6 在不同p h 和不同浓度氯化钠培养条件下的生长试验4 7 2 结果。4 8 2 1l d 5 0 试验表明h 4 菌株毒力显著低于其余两菌株4 8 2 2 分离株h 4 具有较强的溶血活性4 8 2 3 单增李斯特菌奶源分离株在低温保存牛奶中的生长特性4 9 2 4 单增李斯特菌奶源分离株在高盐、低p h 培养条件下的相对存活率5 0 2 5 不同p h 和不同浓度氯化钠相互作用对单增李斯特菌生长的影响5 0 3 讨论。5 3 参考文献5 5 附录培养基及试剂5 7 致谢5 9 i i i 浙江大学硕士学位论文 摘要 单核细胞增多性李斯特菌( l i s t e r i am o n o c y t o g e n e s ，l m ) 是革兰氏阳性兼性 胞内寄生菌，广泛存在于自然界和一些特定的环境中，如土壤、水、污水管等。 上世纪8 0 年代以来，该菌作为一种重要的食源性病原菌已引起广泛关注。l m 在食品生产和加工过程中可以通过多种途径进入食品，对消费者的健康构成潜在 威胁。该菌具有很强的环境适应性，能够耐受的p h 范围为4 0 - 9 5 、温度范围为 1 。4 5 c ；其耐盐能力也相当强，能在高于1 0 n a c l 的环境中存活。这些环境适 应性使其很难在食品加工生产过程中被完全杀灭，对食品安全性构成严重威胁。 因此，在食品生产和加工过程中建立l m 简便、快速的检测方法及监控体系具有 重要意义。本研究的目的是通过对浙江省某市海产品从生产到加工过程中l m 的 污染状况进行检测，明确海产品中l m 的污染状况，并分析l m 分离株的毒力、 耐药性和基因型。此外，我们还对两株典型单增李斯特菌奶源分离株毒力和环境 适应性进行了研究。 在浙江省某市5 个海产品加工企业的虾和鱼制品及其原料和加工环境共采 样4 8 2 份，最终鉴定出8 株单增李斯特菌，其检出率为1 7 。其中主要分离自 成品鱼、成品虾。海产品分离株的毒力差异较大，可以分为强毒和弱毒两组。药 敏试验结果表明：单增李斯特菌海产品分离株对常用的十五种抗生素表现出较强 的敏感性，所有菌株均对四环素和喹诺酮类抗生素敏感；个别分离株对p 内酰胺 类、复方新诺明、红霉素或克林霉素具有一定程度的耐药性，其中分离株1 1 6 a 具有多重耐药性( 对庆大霉素、阿米卡星、头孢呋肟、复方新诺明、克林霉素均 有抗药性) 。 。 用限制性内切酶s m a i 对海产品分离株的基因组d n a 酶切后进行脉冲场电 泳分析，d n a 条带数在8 1 2 条之间，具有较好的分型性。聚类分析结果表明8 个单增李斯特菌海产品分离株中有7 个分属于2 个p f g e 亚型，分离株1 1 6 a 自 成1 个p f g e 亚型。l m l 0 5 6 ，l m l 0 5 7 和l m 6 三个菌株分离自同一加工厂，其指 纹图谱基本一致，属同一个克隆株系，l m 6 为环境分离株，表明成品分离株 l m l 0 5 6 和l m l 0 5 7 可能来自加工环境。 两株单增李斯特菌奶源分离株h 4 和3 2 0 在小鼠和鸡胚中的毒力不同，对 浙江大学硕士学位论文 小鼠的l d 5 0 分别为1 0 8 - 1 4 和1 0 5 彤，3 2 0 株的毒力与参考菌株接近( 1 0 5 4 9 ) 。单增 李斯特菌分离株可以在低温培养条件下稳步生长，8 c 培养条件下分离株3 2 0 和 h 4 的生长速度基本一致，培养6 天的活菌数比接种时分别增加1 4 8 和2 0 5 个 l o g ；培养9 天的活菌数比接种时分别增加2 4 1 和3 3 4 个l o g 。在1 2 。c 条件下 分离株h 4 的生长显著慢于3 2 0 株，培养2 天，分离株3 2 0 的活菌数比接种时增 加3 4 1 个l o g ，而h 4 株则增加1 7 7 个l o g ( p 0 0 5 ) 。这些结果提示：消毒牛 奶一旦受到环境中抗性和毒力较强的单增李斯特菌污染，可以对消费者健康构成 潜在威胁。牛奶中的李斯特菌在1 2 。c 温度培养条件下能够比较快速生长，若保 存牛奶的温度在8 1 2 。c 波动，其实际保质期将明显缩短。 在8 n a c l 条件下培养，两个分离株与参考菌株1 0 4 0 3 s 的相对存活率的变 化趋势基本一致。而在p h3 0 条件下，分离株的相对存活率高于参考菌株1 0 4 0 3 s ( p o 0 5 ) 。p h ( 3 0 。7 0 ) 和n a c i ( 浓度范围o 5 一1 0 ) 对单增李斯特菌的生长 呈现交互作用，即随着n a c l 浓度的增加和p h 值的下降，细菌的生长速度逐渐 减慢、滞后期渐长。上述结果表明，单增李斯特菌分离株的环境适应性比参考菌 株1 0 4 0 3 s 强。 本试验通过对单增李斯特菌分离株的毒力、药敏性、环境适应性和p f g e 分 型等研究，为今后进一步开展该菌对食品污染的风险性评估和h a c c p 体系中关 键控制点的建立奠定基础，对预防食源性李斯特菌病具有重要意义。 关键词：单核细胞增多性李斯特菌毒力药敏性环境适应性p f g e 分型 2 浙江大学硕士学位论文 a b s t r a c t l i s t e r i am o n o c y t o g e n e s ，ag r a m - p o s i t i v ef a c u l t a t i v ei n t r a c e l l u l a rp a t h o g e n ，i s r e s p o n s i b l ef o r s e v e r ef o o d b o m ei n f e c t i o n si nh u m a n sa n di sam a jo rc o n c e r nf o r p u b l i ch e a l t ha u t h o r i t i e sa n df o o di n d u s t r i e ss i n c et h ee a r l y19 8 0 s l m o n o c y t o g e n e s i s u b i q u i t o u s l yp r e s e n t i ne n v i r o n m e n t ss u c ha ss o i l ，w a t e ra n de f f l u e n t s l m o n o c y t o g e n e sc a l lc o n t a m i n a t ef o o d st h r o u g hm a n y r o u t e sa l o n gt h ep r o c e s s i n gl i n e ， t h u sb e c o m i n gap o t e n t i a lh a z a r dt ot h ec o n s u m e r s i t sh i g ht o l e r a n c et oe x t r e m e e n v i r o n m e n t a ls t r e s s e sm a yc o n t r i b u t ei t sh i g hp r e v a l e n c ei nf o o d s i ti sw e l lk n o w n t h a t 厶m o n o c y t o g e n e sc a l lg r o wi n aw i d er a n g eo fp h ( 4 0 9 5 ) a n dt e m p e r a t u r e ( 1 - 4 5 。c ) a n di sa b l et os u r v i v ei nt h ep r e s e n c eo fh i g hs a l tc o n c e n t r a t i o n s ( u pt o10 n a c i ) ，w h i c hm a k e si tq u i t ed i f f i c u l tt o e l i m i n a t ed u r i n gm a n u f a c t u r i n gp r o c e s s e s h e n c e ，t h ei n c i d e n c eo fl i s t e r i o s i sv i ac o n t a m i n a t e df o o d sh a sb e c o m em o r ea n dm o r e f r e q u e n tw i t hm a n u f a c t u r e d ，r e a d y t o e a tf o o dp r o d u c t sw h i c ha r eb e i n gc o n s u m e di n i n c r e a s i n gq u a n t i t i e sn o w a d a y s t h e r e f o r e ，i ti sn e c e s s a r y t od e v e l o ps i m p l ea n dr a p i d t e c h n i q u e st od e t e c t 三m o n o c y t o g e n e s f u r t h e r m o r e ，e f f i c i e n ts u r v e i l l a n c es y s t e m s h o u l db ea l s oe s t a b l i s h e d i nt h i ss t u d y ，t h et r i p l e xp c ri d e n t i f i c a t i o nf o rlm o n o c y t o g e n e n se s t a b l i s h e di n o u rl a bw a su s e dt oi n v e s t i g a t et h es t a t u so fl m o n o c y t o g e n e n sc o n t a m i n a t i o ni nt h e s e a f o o dp r o d u c t sa n dt h e i rp r o c e s s i n ge n v i r o n m e n t t h e 厶m o n o c y t o g e n e si s o l a t e s w e r et y p e db yp u l s ef i e l dg e le l e c t r o p h o r e s i s ( p f g e ) a n da l s ot e s t e df o rv i r u l e n c et o m i c ea n dc h i c k e ne m b r y o s ，d r u gr e s i s t a n c e ，t o l e r a n c et ol o wp ha n dh i g hs o d i u m c o n c e n t r a t i o n s at o t a lo fe i g h ts t r a i n sw e r ei s o l a t e df r o m4 8 2s a m p l e so fs e a f o o d sa n dt h e i r p r o c e s s i n ge n v i r o n m e n t sw i t hap o s i t i v er a t i oo f1 7 t h ei s o l a t e sw e r em a i n l yf r o m t h ef i s ha n ds h r i m pf i n a lp r o d u c t s ，e x c e p tf o ro n ef r o ms e w a g e v i r u l e n c ev a r i e s a m o n gi s o l a t e s a n dc a l lb ed i v i d e di n t ot w og r o u p se x h i b i t i n gl o wa n dh i g l l p a t h o g e n i c i t yr e s p e c t i v e l ya sr e v e a l e db yt h e5 0 l e t h a ld o s ea s s a y si nm o u s ea n d c h i c k e ne m b r y om o d e l s m o s to ft h el m o n o c y t o g e n e si s o l a t e sw e r es e n s i t i v et o 3 浙江大学硕士学位论文 f i f t e e nc o m m o n l yu s e da n t i m i c r o b i a l s ，s u c ha st e t r a c y c l i n ea n df l u o r o q u i n o l o n e s s e v e r a li s o l a t e sw e r er e s i s t a n tt o m a c t a m s ，e r y t h r o m y c i n ，c l i n d a m y c i n o r s u l f a m e t h a z i n e t r i m e t h o p r i m t h e i s o l a t e1 16 ae x h i b i t e dm u l t i p l er e s i s t a n c et o g e n t a m i c i n ，c e f u r o x i m e ，a m i k a c i n ，s u l f a m e t h a z i n e t r i m e t h o p r i ma n dc l i n d a m y c i n p u l s e d f i e l dg e le l e c t r o p h o r e s i s ( p f g e ) w a su s e df o rm o l e c u l a rt y p i n go fl m o n o c y t o g e n e si s o l a t e st o t r a c et h ec o n t a m i n a t i o na l o n gt h ef o o dp r o c e s s i n g l i n e s t h eg e n o m i cd n ao f 三m o n o c y t o g e n e si s o l a t e st o g e t h e rw i t ht h er e f e r e n c es t r a i n s 10 4 0 3sa n ds c o t t aw a sd i g e s t e dw i t ht h e r e s t r i c t i o n e n z y m e s m a i a f t e r e l e c t r o p h o r e s i s ，t h en u m b e r so fd n a b a n d sv a r yf r o m8t o12 h i e r a r c h i c a lc l u s t e r a n a l y s i sr e v e a l e dt h a ts e v e ni s o l a t e sa n dt w or e f e r e n c es t r a i n sc o u l db eg r o u p e di n t o t w op f g et y p e ，a sw e l la si s o l a t e sl ml 一16 ab e l o n g e dt oo t h e rp f g et y p e m o r e o v e r ， i s o l a t e sl m l0 5 6 ，l m l0 5 7a n dl m 6e x h i b i t e di d e n t i c a lp f g ep a t t e r ni n d i c a t i n gt h a t t h ei s o l a t e sl m l 0 5 6a n dl m l 0 5 7f r o mt h es e a f o o dp r o d u c t sw e r ec o n t a m i n a t e db y t h ee n v i r o n m e n t a ls t r a i nl m 6 t w ot y p i c a l 三m o n o c y t o g e n e si s o l a t e sh 4a n d3 2 0f r o mc o w sm i l kw e r et e s t e d f o rv i r u l e n c ea n dt o l e r a n c et oe n v i r o n m e n t a ls t r e s s e s t h er e s u l t sd e m o n s t r a t e dt h a t m el m o n o c y t o g e n e si s o l a t e ss h o w e dd i f f e r e n tv i r u l e n c et om i c ea n dc h i c k e n e m b r y o s t h el d 5 0t om i c ew a s1 0 8 1 4f o ri s o l a t eh 4a n d1 0 5 5 5f o ri s o l a t e3 2 0 t h e v i r u l e n c eo ft h ei s o l a t e3 2 0w a sc l o s et ot h er e f e r e n c es t r a i n 10 4 0 3 s ( 10 5 舯) m o n o c y t o g e n e sm i l ki s o l a t e sc o u l dg r o wa tl o wt e m p e r a t u r e t h ev i a b l ec e l l so f b o t h i s o l a t e si n c r e a s e db y1 4 8a n d2 0 5l o g su p o ni n c u b a t i o na t8 cf o r6d a y s t h e r e s p e c t i v ei n c r e a s ew a s2 41 a n d3 3 4l o g sb yd a y9a tt h es a m et e m p e r a t u r e w h e n i n c u b a t e da t1 2 c ，t h ev i r u l e n ti s o l a t e3 2 0e x h i b i t e df a s t e rg r o w t ht h a nt h ea v i r u l e n t i s o l a t eh 4 ( i n c r e a s e db y3 4 2v s1 7 7 ) t h e s er e s u l t ss u g g e s t st h a tp a s t e u r i z e dm i l k m i g h tp r o p o s ep o t e n t i a lr i s kt oh u m a n h e a l t ho n c ec o n t a m i n a t e db yt h er e s i s t a n ty e t v i r u l e n t l m o n o c y t o g e n e s f r o mt h ee n v i r o n m e n t t h es h e l f - l i f ew o u l db e s i g n i f i c a n t l y s h o r t e n e dw h e nt h e r ei s t e m p e r a t u r ea b u s eb e t w e e n8a n d 12 b e c a u s et h eb a c t e r i u mg r e wf a i r l yf a s ta t12 c t h em i l ki s o l a t e sw e r ea l s ot o l e r a n tt oh i g hs a l tc o n c e n t r a t i o n su pt o8 a tp h 3 0 ，b o t ht h er e l a t i v es u r v i v a lw a si nt h eo r d e ro fh 4 ，3 2 0a n d10 4 0 3sw i t hh 4b e i n g 4 浙江大学硕士学位论文 一l 。一 t h em o s tr e s i s t a n ti s o l a t e b o t hp ha n dn a c li n t e r a c tw i t he a c ho t h e ra f f e c t i n gt h e b a c t e r i a lg r o w t h t h i sw a ss h o w na si n c r e a s e dl a gp h a s ea n ds l o w e rg r o w t hr a t ew i t h i n c r e a s i n gn a c ic o n c e n t r a t i o n sa n dd e c r e a s i n gp h t h e s ef i n d i n g si n d i c a t et h a tt h e m i l ki s o l a t e sw e r em o r er e s i s t a n tt ot h er e f e r e n c es t r a i n10 4 0 3 s i nc o n c l u s i o n ，t h ep r e s e n ts t u d yi n d i c a t e st h a tt h ei s o l a t e sf r o mf o o d sc o u l db ea s p a t h o g e n i ca st h ev i r u l e n ts t r a i n ，e x h i b i t e ds o m er e s i s t a n c et oc e r t a i na n t i m i c r o b i a l s a n dw e r et o l e r a n tt oe n v i r o n m e n t a ls t r e s s e s p f g et y p eh e l pt r a c k e dt h es o u r c eo f c o n t a m i n a t i o ne n v i r o n m e n t a ll m o n o c y t o g e n e st os e a f o o da c c o r d i n gt h eu n i q u e c l o n a ls u b t y p e t h ei n f o r m a t i o nt h u so b t a i n e dc o u l db eu s e f u lf o rr i s ka s s e s s m e n to f c o n t a m i n a t i o no ff o o dp r o d u c t sb yt h i sp a r t i c u l a rp a t h o g e na n dp r o v i d eag o o db a s i s f o rt h ee s t a b l i s h m e n to fk e yc o n t r o lp o i n t sa sp a r to fh a c c pp r o g r a m ，t h u sp l a y i n ga s i g n i f i c a n tr o l ei nt h ep r e v e n t i o no ff o o d b o m el i s t e r i o s i si nt h eh u m a nb e i n g s k e y w o r d s ：l i s t e r i a m o n o c y t o g e n e s ；v i r u l e n c e ；s e n s i t i v i t y t o a n t i m i c r o b i a l s ； t o l e r a n c et oe n v i r o n m e n t a ls t r e s s e s ；p u l s e d - f i e l dg e le l e c t r o p h o r e s i sf o rt y p i n g 浙江大学硕士学位论文 前言 李斯特菌属细菌包括：绵羊李斯特菌( 三i v a n o v i i ) 、英诺克李斯特菌 i n n o c u a ) 、威尔斯李斯特菌w e l s h i m e r i ) 、西尔李斯特菌犯s e e l i g e r i ) 、格氏 李斯特菌g r a y i ) 、默氏李斯特菌m u r r a y i ) 、单核细胞增多性李斯特菌 ( l i s t e r i am o n o c y t o g e n e s ，简称e r a ) ，其中仅单增李斯特菌和绵羊李斯特菌对动物 具有致病性。而l m 还能感染人，引起脑膜炎、骨髓炎、心肌炎、孕妇流产以及 产褥感染等临床表现的李斯特菌病。l m 在自然界中分布极广，如土壤、污水、 人和动物的粪便、饲料以及多种食品等。自从上世纪8 0 年代以来，单增李斯特菌 就被认为是危害公共卫生和食品行业的一种重要人畜共患病致病菌，九十年代 w h o 将其列为四大食源性致病菌之一。 食源性李斯特菌病发病率虽然不高，但其死亡率高达3 0 ，对人类( 尤其对 孕妇、儿童和老年人等免疫力较低的人群) 健康构成潜在的危害。另外，l m 亦会 给食品工业带来巨大的经济损失。2 0 0 1 年由于l m 污染肉制品而使法国的食品在 国内外市场上面临危机，经济损失惨重。在我国亦有进口食品因污染l m 而导致 退货、销毁事件。例如2 0 0 4 年5 月，北京出入境检验检疫局在空港口岸，查获了 一批1 3 5 件2 6 9 1 k g 的三文鱼，经检测单核细胞增多性李斯特菌呈阳性，货物全部 销毁。 l m 污染的食品涉及范围很广，包括蔬菜、水产品、畜禽产品、乳及乳制品。 其污染源包括内源性和外源性两种。内源性主要是由食品原料本身携带，外源性 主要是加工环境中存在的l m 。令人担忧的是l m 具有很强的环境适应性：能够耐 受的p h 和温度范围分别为4 0 , - - , 9 5 和- - 4 , - 4 5 ；能在高于1 0 n a c l 的环境中存活， 故很难在食品加工环节中将其彻底杀灭。因此，要控制食品中l m 污染的关键是 要研究l m 的分布和传播规律，建立l m 的监控技术体系。这也就是要建立食品从 原料一食品加工厂一零售的全过程有害物质分析与关键控制点体系( 简称 h a c c p ，h a z a r da n a l y s i sa n dc r i t i c a lc o n t r o lp o i n t s ) 以确保食品的卫生质量。 欧美发达国家已经建立、并正在逐步完善食源性病原微生物的检测以及食物 中毒病的监控和管理体系。w h o 于2 0 0 1 年2 月在其总部日内瓦组织召开了“食 品安全性战略计划会议”，强调了微生物性和化学性食品安全性、风险分析与评 6 浙江大学硕士学位论文 估、食源性疾病的监测、立法、成员国之间的合作等问题。而我国相应的食品安 全性监管体系还不健全，主要表现在快速检测和准确溯源技术落后、没有完善的 食源性病原微生物主动监测和危险性评估体系等。因此，建立适合于我国国情并 与国际接轨的食品安全性检测与监控体系对提高食品的卫生质量、保障人民健 康、促进我国的产品出口等方面具有重大的经济和社会意义。 本研究的内容：1 ) 海产品中单核细胞增多性李斯特菌的分离鉴定及其毒力 与药敏性比较；2 ) 海产品单核细胞增多性李斯特菌分离株的p f g e 分子分型；3 ) 两个不同毒力单核细胞增多性李斯特菌奶源分离株的环境适应性比较。 研究目的：是通过对浙江省某市海产品从生产到加工过程中l m 的污染状况 进行检测，明确海产品中l m 的污染状况，分析l m 海产品分离株的毒力、耐药性 和基因型。此外，我们对两株典型单增李斯特菌奶源分离株毒力和环境适应性进 行了研究。这些试验为今后进行食品中单增李斯特菌污染的风险性分析和控制奠 定基础，有助于食品加工过程中h a c c p 体系的建立和完善。 7 一塑堑奎兰堡主堂堡笙壅二一 一 、 第一部分文献综述 p a r til i t e r a t u r er e v i e w 浙江大学硕士学位论文 第一章单核细胞增多性李斯特菌的生物学特性及其流行特征 单核细胞增多性李斯特菌( l i s t e r i am o n o c y t o g e n e s ，以下简称l m 或单增李斯 特菌) 是李斯特菌属细菌中对动物和人类危害最大的一种食源性致病菌。1 8 9 1 年法国学者h a y e n 最早在人体组织中观察到该菌，1 9 4 0 年p i r i e 将之命名为l i s t e r i a m o n o c y t o g e n e s 1 。除单增李斯特菌外，国际上公认的李斯特菌还包括以下几种： 绵羊李斯特菌i v a n o v i 0 、英诺克李斯特菌犯i n n o c u a ) 、威尔斯李斯特菌 w e l s h i m e r i ) 、西尔李斯特菌s e e l i g e r o 、格氏李斯特菌g r a y i ) 、默氏李斯 特菌但m u r r a y i ) 。其中只有单增李斯特菌和绵羊李斯特菌具有致病性，且只有 l m 能够对人类构成一定的威胁。l m 在自然界中分布极广，如存在于土壤、污水、 人和动物的粪便、饲料及多种食品中。而人们食用那些被单增李斯特菌污染了的 食物后，可引发李斯特菌病，出现脑膜炎、骨髓炎、心肌炎、孕妇流产以及产褥 感染等临床症状 2 3 】。自1 9 2 6 年m u r r a y 4 等首次报道李斯特菌病以来，此病已 陆续在多个国家发生。特别是近二十年以来，美国和西欧等许多发达国家食源性 李斯特菌病例日渐增多，国内亦有单增李斯特菌污染食品及李斯特菌病发生的报 道。不同于其它食源性病原菌，e m i l 起疾病的发生率不高，但死亡率却可达2 0 3 0 5 8 】。在欧美、日本由该菌造成的临床疾病和食物污染问题，已超过在 细菌性食物中毒中占第1 位的沙门氏菌。我国的香港、福建、辽宁、云南等地先 后也有因该菌引发疾病的报道。由于易受单增李斯特菌污染的食品种类繁多，而 且其引起食物中毒的危害也日趋严重，因此在2 0 0 0 年被w h o 食品安全工作计划 列为重点检测的食源性致病菌( 沙门氏菌、大肠杆菌0 1 5 7 ：h 7 、副溶血性弧菌、 单增李斯特菌) 之一。 l m 有16 个血清型：1 2 a , 1 2 b ，1 2 c ，3 a , 3 b ，3 c ，4 a ，4 a b ，4 b ，4 c ，4 d ，4 e ，5 ，6 a ，6 b ，7 ， 其中1 2 a , 1 2 b ，1 2 c ，3 a ，3 b ，3 c ，4 a ，4 b ，5 被公认为致病性血清型。在美国，9 0 的 人类李斯特菌病是以由4 b ，1 2 a , 1 2 b3 种血清型引起的 9 】；英国引起人类李斯特 菌病血清型的主要是1 2 ，3 ，4 1 1 0 】。由动物源性食品引起的李斯特菌病则多是血清 型4 b 型。现在许多国家和地区都已经采取相应措施来控制食品中的单增李斯特 菌，并制定相应指标方法进行检测。 9 浙江大学硕士学位论文 1 生物学特性 1 1 培养特性 l m 为革兰氏阳性短杆菌，需氧或兼性厌氧，无芽孢，不产生荚膜。在2 0 2 5 c 时可形成1 4 根周身鞭毛，有运动性。革兰氏染色阳性，但在陈旧培养基上呈革 兰氏阴性。该菌生长温度范围为1 5 0