电泳技术在临床上PPT课件.ppt

电泳技术在临床上的应用,蒋刚健,1,使用范围和检测原理,电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小,形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离,鉴定或提纯的技术.在生化检测中,主要用于分离各类蛋白分子.,2,3,按电泳技术分类固体支持介质电泳,移动界面电泳滤纸电泳区带电泳醋酸纤维素薄膜电泳稳态电泳,凝胶电泳,琼脂糖,聚丙烯酰胺,4,移动界面电泳是将被分离的离子（如阴离子）混合物置于电泳槽的一端（如负极）,在电泳开始前,样品与载体电解质有清晰的界面.电泳开始后,带电粒子向另一极（正极）移动,泳动速度最快的离子走在最前面,其他离子依电极速度快慢顺序排列,形成不同的区带.只有第一个区带的界面是清晰的,达到完全分离,其中含有电泳速度最快的离子,其他大部分区带重叠,5,区带电泳是在一定的支持物上,于均一的载体电解质中,将样品加在中部位置,在电场作用下,样品中带正或负电荷的离子分别向负或正极以不同速度移动,分离成一个个彼此隔开的区带.区带电泳按支持物的物理性状不同,又可分为滤纸和其他纤维膜电泳、凝胶电泳等。,6,稳态电泳:带电颗粒在直流电场作用下迁移一定时间后达到稳定状态，此后电泳条带的宽度不随时间的变化而变化。如：等速电泳,等电聚焦电泳,7,等电聚焦电泳是将两性电解质加入盛有pH梯度缓冲液的电泳槽中,当其处在低于其本身等电点的环境中则带正电荷,向负极移动；若其处在高于其本身等电点的环境中,则带负电向正极移动.当泳动到其自身特有的等电点时,其净电荷为零,泳动速度下降到零,具有不同等电点的物质最后聚焦在各自等电点位置,形成一个个清晰的区带,分辨率极高.,8,琼脂糖凝胶电泳:琼脂糖凝胶适用于蛋白质和核酸的电泳支持介质,成本低,结果易保存.聚丙烯酰胺凝胶电泳:最常用的定性分析蛋白质的电泳方法,特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量,一般用于科研.毛细管电泳:经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物,9,10,新款Hydrasys2scan-琼脂糖全自动蛋白电泳仪,11,12,电泳技术的医学应用,蛋白质电泳分析是实验室必备的检测手段,可全面精确,描绘出患者蛋白质的全貌.对疾病的早期诊断,疗效观察及预后判断具有非常重要的临床价值.根据使用的染料或者是底物的不同，我们可以检测到不同类型的蛋白:血清蛋白脂蛋白(运送脂类)各种酶类血红蛋白正确解释电泳结果,为临床对疾病的判断提供可靠参考,13,14,电泳技术在临床应用中的意义,急,慢性炎症*造血系统疾病:多发性骨髓瘤,巨免疫球蛋白血症*肾脏疾病*肝脏疾病*中枢神经系统疾病:多发性硬化症,遗传性疾病:地中海贫血*心血管疾病:心梗,动脉粥样硬化*恶性肿瘤,15,血清蛋白电泳,常采用醋酸纤维素薄膜或琼脂糖凝胶，分离蛋白质区带后用氨基黑或丽春红S等染色后，扫描各区带进行吸光度检测。目前采用的自动电泳仪进行血清蛋白质分析，其电泳区带整齐、分离效果好、操作速度快；电泳时间短，重复性好，值得推广应用。,16,血清蛋白电泳检测的目的是什么?,检测异常:含量的变化:条带中蛋白含量的增加或减少性质的变化:异常条带的出现,17,临床意义,将电泳作为常规检测之一,基于蛋白含量的变化,有助于我们对以下疾病的筛查:炎症营养不良肺气肿,18,对异常条带的筛查,有助于我们检测下列疾病:骨髓瘤巨球蛋白血症(Waldenstrom)细菌和病毒感染在这些情况下,必须要做其他辅助测试,比如说免疫固定,使用不同类型的抗血清对异常蛋白进行检测.(对于后期治疗有很重要的指导意义),19,结合其他检测结果,可以确认炎症、肝炎、肝硬化、肾病等疾病对出现临床症状的疑似骨髓瘤患者进行电泳检测单克隆免疫球蛋白可以检出早期无症状骨髓瘤患者对骨髓瘤疾病进行随访,监测疗效,血清蛋白电泳可以帮我们解决如下问题问题,20,什么情况下必须进行电泳检测?血液沉降速度发生异常变化出现恶性疾病征兆在免疫球蛋白定量检测中发现某一种免疫球蛋白出现大量异常增加,21,22,23,电泳区带分析,24,甲胎蛋白,25,正常血清蛋白电泳图谱,26,白蛋白区带双白蛋白,或者一条宽峰,或者在白蛋白条带出现附属条带可能是由以下原因造成:遗传性双白蛋暂时性的双白蛋白血症可能是由于药物刺激导致的急性胰腺炎导致的双白蛋白血症:大量的胰酶的出现可以导致白蛋白降解,27,28,A.注射白蛋白，大剂量青霉素后,B。遗传性双白蛋白,29,双白蛋白血症,30,31,PN,32,33,下列情况下Alpha2区域会出现增加现象:-炎症症状-肾病综合征-出现游离轻链,34,肾病综合征,35,Betaglobulins(球蛋白区带),Beta球蛋白在下列情况下会出现增加现象:-胆管阻塞-肾病综合征-肝硬化-缺铁性贫血-血球蛋白异常-高脂蛋白血症-大量溶血,36,NP,电泳图谱-肝硬化Beta-Gamma桥,beta区：多克隆IgAgamma区：多克隆IgG,37,Gammaglobulins(免疫球蛋白区带),免疫球蛋白是机体的正常生理成分，机体保持一定水平。当这种正常水平打破时，则属于疾病，增多或减少则意味着免疫增殖病或免疫缺陷病。IgG-、lgG-IgA-、IgA-IgM-、IgM-IgD-、IgD-IgE-、IgE-,38,Ig异常合成,所谓“异常”一是指合成障碍，二是合成增殖，区带主要成分是Ig，有多株浆细胞所产生可表现为多克隆、单克隆和寡克隆。多克隆性增多，见于反复或慢性感染、自身免疫性疾病、肝细胞疾病或寄生虫感染，早期恶性肿瘤有多克隆增殖现象尤其淋巴瘤，区带呈弥散性升高。,39,高免疫球蛋白血症,40,检测到其他条带-单克隆免疫球蛋白-寡克隆免疫球蛋白,41,单克隆增殖，是一个细胞在某一分裂阶段发生突变，然后急剧分化、增殖,并大量表达某种单一的Ig，这种恶性增殖具有如下特点:1，均一型Ig2，Ig含量大(也可高达10余克)3，正常Ig成分减少(正常值以下)4，轻链型比例失调(/或2)单克隆带同时增殖,多出现在神经系统疾病或风湿免疫性疾病中,48,Totalprotein,Albumin,alpha1&2zones,betazone,gammazone(gammaglobulins),49,多发性骨髓瘤,MM是造血系统的恶性肿瘤,占整个恶性肿瘤的1%，是浆细胞异常增生的恶性肿瘤，因其引起骨破坏而得名。患者常伴有贫血、肾功损害和免疫功能障碍。近年发病有增高趋势，男性多发，男女比约为2:1，平均发病年龄是46.5岁。以往对此病认识不足，漏诊、误诊可达到70%以上.随着寿命的延长对此病认识的提高病例数显著增加.,50,MM临床表现特点,骨痛,骨骼肿块与病理性骨折,骨质疏松和溶骨现象贫血免疫功能低下,反复感染肾脏损害高钙,高粘(血浆相对黏度6以上)高尿酸血症表现MM的临床表现多样化,常常因此就诊于骨科、肾脏内科等,延误诊治,51,多发性骨髓瘤的免疫学特征,血中出现M蛋白,正常Ig水平明显减低尿中出现M蛋白和轻链蛋白(BJP)骨髓中浆细胞明显增加无免疫活性Ig导致免疫功能低下,52,Calcium,Renal,Anemia,Bone,CRAB,53,54,55,56,57,58,59,60,什么情况下必须要进行免疫固定电泳检测?,在血清蛋白电泳时,检测到异常条带的出现,或者是某一个条带的蛋白出现异常增加电泳结果显示为低免疫球蛋白血症,或者免疫球蛋白定量结果显示可能是游离轻链病尿蛋白检测结果异常(检测到单克隆游离轻链),查看患者是否做过血清蛋白电泳,如果有必要需要进行血清的免疫固定电泳,61,血清蛋白电泳,Gamma区出现异常条带r区明显降低有单克隆历史但无明显条带、2出现明显异常带2(21)2独自升高1、2出现异常带或无明显增高尿中出现本周氏蛋白，但血中无单克隆带有骨