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上海海洋大学硕士学位论文 水产品中章鱼胺含量的比较及d 型章鱼胺的分离制备 摘要 章鱼胺( o c t o p a m i n e ) 是一种重要的生物胺和神经介质，起广泛 的生理作用，有调节代谢与能量平衡的功效，是目前唯一商品化的防 治肥胖症与糖尿病的1 33 肾上腺素能受体激动剂。作为一种天然的1 3 3 肾上腺素能受体激动剂，章鱼胺可以单独或与其它原料联合用于减 肥与糖尿病的治疗，可以作为食品、健康食品原料乃至临床药物的辅 助制剂。天然章鱼胺是d 型的，它的生物活性是l 型章鱼胺的三倍， 有资料指出枳实和鱼露是天然章鱼胺的主要来源，但枳实和鱼露中所 含章鱼胺的含量都不高，因此寻找新的天然章鱼胺的来源，并将之提 取出来，就是本课题的目的。本论文首先分析研究了市售水产品可食 部分的章鱼胺含量，其次是寻找从鱿鱼内脏水解液中提取章鱼胺的有 效方法，为进一步有效的开发利用天然章鱼胺打下了基础，最后是通 过化学拆分的方法对消旋的章鱼胺工业品进行d 型与l 型的拆分，从 而为得到d 型章鱼胺的纯品并测得其纯度提供实验依据。 1 水产品可食部章鱼胺含量的研究 测定各种淡水和海水水产品可食部中b3 肾上腺素能受体激动剂 上海海洋人学硕士学位论文 章鱼胺的含量，为水产品中章鱼胺的开发利用提供根据。取鱼、甲壳 类、头足类可食部位匀浆后超声处理，用h p l c 钡, t 定离心后上清液的章 鱼胺含量。结果表明8 种淡水鱼肉章鱼胺含量在3 0 - - - , 1 3 0g g g - 1 之间，其 中，背肉普遍比腹肉中含量高。海水鱼以及淡水甲壳类的章鱼胺含量 与淡水鱼大致相似。海水甲壳类中章鱼胺含量特别高，是淡水和海水 鱼，淡水甲壳类的几十倍，甚至千百倍。头足类的章鱼胺含量也比较 高，在海洋藻类中未检测出章鱼胺。海洋贝类等是水产品中章鱼胺最 丰富的来源，是减肥者与糖尿病人的理想食物。 2 鱿鱼水解液中章鱼胺的分离和提取 鱿鱼水解液中章鱼胺的含量与其他水产品相比高了很多，从水解 液中有效提取较纯的章鱼胺，为天然章鱼胺的进一步开发利用打下基 础，并使鱿鱼的废弃物继续得以利用，减少不必要的浪费。论文中采 用静态吸附和动态吸附相结合的方法，综合考虑吸附量、解吸率等因 素，研究硅胶分离提取鱼露中章鱼胺的吸附性能和洗脱参数。结果表 明：6 0 , - - , 1 0 0 目硅胶对水解液中章鱼胺有较好的吸附分离效果，该硅 胶对水解液中章鱼胺的静态饱和吸附量达3 2 0 9 m g g 。( 干树脂) ，3 0 的乙醇为最佳洗脱剂，洗脱率达9 5 。6 0 1 0 0 目硅胶处理后，能有 效分离章鱼胺，再将其过a m b e r j e t1 2 0 0 n a ( 2 c m 2 4 c m ) 柱，浓 缩收集到的氨水洗脱液，采用岛津s c l 一1 0 av ph p l c 分离系统，样 品在流动相0 0 2 m 柠檬酸珈0 2 m 磷酸二氧钠( 7 ：3 ) ，p h = 3 、流速 h 上海海洋大学硕十学位论文 1 0m l m i n 、检测波长2 7 4n i l l 的条件下被色谱柱s e p a xh p c 1 8 柱 ( 2 1 2 m m x2 5 0 m m ，1 0 p m ) 精制，冷冻干燥后得到较纯的章鱼胺白色粉 末。 3 章鱼胺工业品的手性拆分 天然章鱼胺是d 型的，它的生物活性是l 型章鱼胺的三倍，为了 使章鱼胺更有效的发挥功效，本论文采用了化学拆分，把等量左旋和 右旋体所组成的外消旋的章鱼胺工业品与另一种纯的光学异构体d 樟脑磺酸作用生成d 樟脑磺酸盐，即形成了两个非对映体，然后利用 其物理性质的溶解性不同，用过滤将其分开，再用结晶重结晶手段 将其提纯，然后去掉d 樟脑磺酸，就得到了较纯的d 章鱼胺结晶。 为得到d 型章鱼胺的纯品并测得其纯度提供了实验依据。 由于国内目前尚未对1 33 肾上腺素能受体激动剂章鱼胺有相应 完善的研究报告或产品，本课题的研究很有可能可以很好的推动对章 鱼胺的进一步研究，为更好地生产和应用章鱼胺提供坚实的基础。通 过对市售水产品可食部章鱼胺含量的比较过程中发现了鱿鱼的章鱼胺 含量很高，其废弃物也有很高的章鱼胺含量，达到超过5 0 0 0 p g g ， 考虑到我国当前鱿鱼加工业中存在资源利用率低和环境污染严重两个 问题，本研究以鱿鱼内脏的水解液为原料研究有效成分的分离，研究 从鱿鱼内脏水解液中提取章鱼胺的有效方法，为天然章鱼胺的制取提 i i i 上海海洋人学硕+ 学位论文 供实验依据。同时，试图用化学拆分的方法对消旋章鱼胺工业品进行 拆分从而得到较纯的d 型章鱼胺，为得到d 型章鱼胺的纯品并测得其 纯度提供实验依据。 关键词：章鱼胺，鱿鱼内脏，水解液，硅胶，分离提取，手性拆分 上海海洋大学硕士学位论文 r n o _ l 。h ec o m p a r l s o no lo c t o p a m i n ec o n t e n t0 ta q u a t i cp r o d u c t s a n dt h es e p a r a t i o no fd o c t o p a m i n e a b s t r a c t o c t o p a m i n ei sa ni m p o r t a n tb i o g e n i ca m i n e sa n dn e u r o t r a n s m i t t e r s ， p l a yaw i d er a n g eo fp h y s i o l o g i c a le f f e c t s ，t h e r ea r er e g u l a t i n gm e t a b o l i s m a n de n e r g yb a l a n c eo fe f f i c a c y , i st h eo n l yc o m m e r c i a l i z e do b e s i t ya n d d i a b e t e sp r e v e n t i o na n dt r e a t m e n to f1 3 3 - a d r e n e r g i cr e c e p t o ra g o n i s t s a sa n a t u r a lp 3 - a d r e n e r g i cr e c e p t o ra g o n i s t ，o c t o p u sa m i n e sc a nb ea l o n eo r c o m b i n e dw i t ho t h e rm a t e r i a l su s e df o rw e i g h tl o s sa n dd i a b e t e st r e a t m e n t c a nb eu s e da sf o o d ，h e a l t hf o o di n g r e d i e n t sa sw e l la sc l i n i c a ld r u g s a u x i l i a r ya g e n t s o fn a t u r a lo c t o p u sa m i n e i sad - t y p e ，i t sb i o l o g i c a la c t i v i t y i st h r e et i m e st h el - o c t o p u sa m i n e s ，w ek n o wt h a tc i t r u sa u r a n t i u m ，a n df i s h s a u c ea r et h em a i ns o u r c eo fn a t u r a lo c t o p u sa m i n e s ，b u tt h ec i t r u s a u r a n t i u m ，a n df i s h s a u c ec o n t a i n e di nt h eo c t o p u sa m i n ec o n t e n ti sn o t h i g h ，s ol o o kf o rn e w s o u r c e so fn a t u r a lo c t o p u sa m i n e s ，a n dt h ee x t r a c ti s t h ep u r p o s eo ft h i st o p i c i nt h i sp a p e r , t h ef i r s ta n a l y s i so ft h ec o m m e r c i a l l y a v a i l a b l ee d i b l ep a r t so ff i s ho c t o p u sa m i n ec o n t e n t ，f o l l o w e db yt h es e a r c h f o ri n t e r n a lo r g a n sf r o mt h es q u i do c t o p u sa m i n ee x t r a c t e dh y d r o l y z a t ea n e f f e c t i v em e t h o df o rt h ef u r t h e re f f e c t i v ed e v e l o p m e n ta n du t i l i z a t i o no f v 上海海洋大学硕士学位论文 n a t u r a l o c t o p u sa m i n el a i d t h ef o u n d a t i o nf o rf i n a l l y , t h em e t h o db y c h e m i c a ls p l i r i n go ft h eo c t o p u so nt h ed lf o rd a m i n ei n d u s t r i a lo c t o p u s a m i n ew i t hl s p l i t ，s oa st oo b t a i nd - o c t o p u sp u r ea m i n e sa n dm e a s u r e dt o p r o v i d ee x p e r i m e n t a lb a s i sf o ro b t a i n i n g t h ep u r i t y 1 i n v e s t i g a t i o no fo c t o p a m i n ec o n t e n ti ne d i b l ep a r to ff i s h e r yp r o d u c t i nt h i ss t u d y ，t h ec o n t e n to fo c t o p a m i n e ，ak i n do fp 3 一a d r e n e r g i cr e c e p t o r a g o n i s t si ne d i b l ep a r to fv a r i o u sf r e s hw a t e ra n ds e a w a t e ra q u a t i cp r o d u c t w a sd e t e r m i n e d ，t o p r o v i d e d a t af o r e x p l o i t a t i o n a n du t i l i z a t i o no f o c t o p a m i n e i n a q u a t i cp r o d u c t s a f t e rh o m o g e n a t e a n du l t r a s o u n d t r e a t m e n t ，e d i b l e p a r t s o f f i s h ，s h e l l f i s h a n d c e p h a l o p o d i u m w e r e c e n t r i f u g a l i z a t e d ，t h e no c t o p a m i n e c o n t e n ti n s u p e r n a t a n tl i q u i d w a s d e t e c t e dw i t hh p l c t h er e s u l t ss h o w e dt h a ti ne i g h tk i n d so ff l e s hw a t e r f i s h ，t h eo c t o p a m i n ec o n t e n t so fd o r s a lm e a ta r eg e n e r a l l yh i g h e rt h a n a b d o m i n a lm e a t ，w h i c hf i r ei nt h er a n g eo f3 0 1 3 0 t g g 一1a n dr o u g h l y s i m i l a rt os e a w a t e rf i s ha n df r e s h w a t e rs h e l l f i s h t h eo c t o p a m i n ec o n t e n t s o fs e a w a t e rs h e l l f i s ha r ep a r t i c u l a r l yh i g h , a l m o s td o z e n se v e nt h o u s a n d s t i m e so ft h a ti nf i s ha n df r e s h w a t e rs h e l l f i s h c e p h a l o p o d i u ma l s oh a sa h i g hc o n t e n to fo c t o p a m i n ew h i l e i ti sn o td e t e c t e di no c e a n a l g a e s e a w a t e rm o l l u s k sa r et h em o s ta f f l u e n tr e s o u r c eo fo c t o p a m i n ei na q u a t i c p r o d u c t sa n di d e a lf o o do fw e i g h t w a t c h e r sa n d d i a b e t i c s 上海海洋大学硕士学位论文 2 s q u i d ，o c t o p u sh y d r o l y z a t es e p a r a t i o na n de x t r a c t i o no f a m i n e s s q u i d ，o c t o p u sh y d r o l y z a t ea m i n ec o n t e n ta n da l o t h i g h e rw h e n c o m p a r e dt oo t h e ra q u a t i cp r o d u c t sf r o mt h eh y d r o l y s i sm o r ee f f i c i e n t l y e x t r a c tp u r eo c t o p u sa m i n e s ，a m i n ea sn a t u r a lo c t o p u sl a yt h ef o u n d a t i o n f o rf u r t h e rd e v e l o p m e n ta n du t i l i z a t i o n ，a n dm a k es q u i dw a s t ec o n t i n u et o b eu s e dt or e d u c eu n n e c e s s a r yw a s t e p a p e r su s e di nt h es t a t i ca d s o r p t i o n a n dd y n a m i ca d s o r p t i o nm e t h o do fc o m b i n i n g ，c o n s i d e r i n gt h ea d s o r p t i o n a n dd e s o r p t i o nr a t ef a c t o r st oe x a m i n ei nt h es i l i c ag e ls e p a r a t i o na n d e x t r a c t i o no c t o p u sf i s hs a u c ea m i n ea d s o r p t i o na n de l u t i o np a r a m e t e r s t h er e s u l t ss h o w e dt h a t ：6 0 ，、10 0m e s hs i l i c ag e lr i g h th y d r o l y z a t e o c t o p u s a m i n e sh a v e g o o da d s o r p t i o ns e p a r a t i o n o ft h es i l i c o n e h y d r o l y z a t eo c t o p u so nt h es t a t i cs a t u r a t e da d s o r p t i o nc a p a c i t yo fa m i n e 3 2 0 9 m g g ( d r yr e s i n ) ，3 0 o fe t h a n o la st h eb e s te l u a n t ，e l u t i o nr a t eo f 9 5 6 0 10 0m e s hs i l i c ag e la r e rt r e a t m e n tc a nb ee f f e c t i v e l ys e p a r a t e d o c t o p u sa m i n e ，a n d t h e ni t so f fa m b e r j e t12 0 0 n a ( 2 c m 2 4 c m ) c o l u m n ，c o n c e n t r a t e da m m o n i ae l u a t ec o l l e c t e du s i n gs h i m a d z us c l 一10 a v ph p l cs e p a r a t i o ns y s t e m ，s a m p l e sm o b i l ep h a s ec o n s i s t e do f0 0 2 m c i t r i ca c i d 一0 0 2 ms o d i u md i h y d r o g e np h o s p h a t e ( 7 ：3 ) ，p h = 3 , f l o wr a t eo f 1om l m i n ，d e t e c t i o nw a v e l e n g t h2 7 4n mw a sc o l u m nu n d e rt h e c o n d i t i o n so fs e p a xh p - c18c o l u m n ( 21 2 r a m 2 5 0 m m ，lo l a m ) r e f i n i n g ， v h 上海海洋大学硕十学位论文 f r e e z e - d r i e do c t o p u sa m i n et ob em o r ep u r ew h i t ep o w d e r 3 o c t o p u sc h i r a la m i n e si n d u s t r i a lp r o d u c t s n a t u r a lo c t o p u sa m i n ei sad t y p e ，i t sb i o l o g i c a la c t i v i t yi st h r e et i m e s t h el a m i n e o c t o p u s ，o c t o p u s a m i n ei no r d e rt om a k em o r ee f f e c t i v e e f f e c t i v e ，t h i sp a p e ru s e st h ec h e m i c a ls e p a r a t i o n ，t h ec o n t o u rla n ddb o d y c o n s i s t i n go fr a c e m i ca m i n eo ft h eo c t o p u si n d u s t r i a lw i t ha n o t h e rp u r e o p t i c a li s o m e r sd c a m p h o rs u l f o n i ca c i dr e a c t sd - c a m p h o rs u l f o n a t e ，t h a t i s ，t h ef o r m a t i o no ft w od i a s t e r e o m e r i c ，a n dt h e nu s et h e i rt h es o l u b i l i t yo f t h ed if f e r e n tp h y s i c a lp r o p e r t i e s ，u s i n gf i l t e r sb es e p a r a t e d ，a n dt h e nc r y s t a l m e a n st ob ep u r i f i e db yr e c r y s t a l l i z a t i o n ，a n dt h e nr e m o v et h ed c a m p h o r s u l f o n i ca c i d ，g e tam o r ep u r ed o c t o p u sa m i n e s t og e td - o c t o p u sp u r e a m i n e sa n dm e a s u r e dt op r o v i d ea ne x p e r i m e n t a lb a s i sf o ro b t a i n i n gt h e p u r i t y b e c a u s eo ft h ec u r r e n th a sn o ty e tp 3 一a d r e n e r g i cr e c e p t o ra g o n i s t s - o c t o p u sa m i n ec o r r e s p o n d i n gc o m p l e t er e s e a r c hr e p o r t s o rp r o d u c t s ，t h e s t u d yo ft h i st o p i ci sl i k e l yt ob eag o o do c t o p u sa m i n ep r o m o t ef u r t h e r r e s e a r c h ，f o rm o r ep r o d u c t i o na n da p p l i c a t i o no fg o o dl a n do c t o p u sa m i n e t o p r o v i d e as o l i df o u n d a t i o n e d i b l e a q u a t i cp r o d u c t s s o l dt ot h e d e p a r t m e n tt h r o u g ht h ea m i n ec o n t e n to ft h ec o m p a r i s o np r o c e s so c t o p u s 上海海洋大学硕士学位论文 f o u n dh i g hl e v e l so fs q u i da n do c t o p u sa m i n e s ，t h e i rw a s t ea l s oh a v eah i g h a m i n ec o n t e n to fo c t o p u s ，r e a c h i n gm o r et h a n5 0 0 0 肛g g - l , t a k i n gi n t o a c c o u n tt h ec h i n a sc u r r e n ts q u i dp r o c e s s i n gi n d u s t r yt h e r ei sal o w u t i l i z a t i o nr a t eo fr e s o u r c e sa n de n v i r o n m e n t a lp o l l u t i o na r et w os e r i o u s p r o b l e m s ，t h i ss t u d y s q u i d v i s c e r a h y d r o l y s a t e s a sl a wm a t e r i a l ，t h e s e p a r a t i o no ft h ea c t i v ei n g r e d i e n tr e s e a r c ht os t u d yt h ei n t e r n a lo r g a n s f r o mt h es q u i do c t o p u sa m i n ee x t r a c t e dh y d r o l y z a t ee f f e c t i v ew a y st of o r t h ep r e p a r a t i o no fn a t u r a lo c t o p u sa m i n e st op r o v i d ee x p e r i m e n t a lb a s i s a t t h es a m et i m et r y i n gt os p l i tm e t h o do fp a i r so fc h e m i c a lr a c e m i z a t i o n o c t o p u sa m i n e st os p i no f fi t si n d u s t r i a lp r o d u c t si no r d e rt ob em o r ep u r e d - o c t o p u s a m i n e ，d o c t o p u st og e tp u r ea m i n e sa n dm e a s u r e dt op r o v i d e e x p e r i m e n t a lb a s i sf o ro b t a i n i n gt h ep u r i t y k e y w o r d s ：o c t o p a m i n e ，s q u i do f f a l ，h y d r o l y s i s ， s i l i c ag e l ， s e p a r a t i o na n d e x t r a c t i o n ，c h i l a ls e p a r a t i o n i x 上海海洋大学硕上学位论文 上海海洋大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是 本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明 和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品 及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本 声明的法律结果由本人承担。 上海海洋大学学位论文版权使用授权书 学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借 阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于 保密 ，在年解密后适用本版权书。 不保密 学位论文作者签名：王簪 日期：妒c 睥 月j 7 日 鹏龟以 上海海洋大学硕十学位论文 引言 章鱼胺简介 章鱼胺( o c t o p a m i n e ，简称o a ) 是脊椎动物 0 ，。h 激素去甲肾上腺素的一个同类物，具有对一羟苯，扩人。，i i i 、h b 羟乙胺的化学结构。o a 又名章鱼涎胺或真 h 叼j 硝胺，因该生物单体胺最早由e s p a m e r 和b o r e t t i 在章鱼( o c t o p u s v u l g a r i s ) 的唾液中发现而得名。 章鱼胺与肾上腺素皆属于逆境激素，可刺激肝糖分解作用、增加 肌肉收缩力、调节体内能量状态、增加心跳率、调节呼吸运动，以应 付危急的逆境情况。它们也参与惊吓行为及调节飞行或运动时的能量。 章鱼胺为无脊椎动物的神经传递物质，例如支配萤火虫发光器的神经， 透过分泌章鱼涎胺控制发光。章鱼胺也是神经激素，可促进昆虫脂肪 体进行肝糖分解作用，使得血淋巴中的海藻糖( t r e h a l o s e ) 浓度上升。 昆虫的脂肪体相当于脊椎动物的肝脏，负责储存养分、代谢物质等功 能。海藻糖是昆虫主要的血糖，相当于脊椎动物的葡萄糖。而肾上腺 素作用在肝脏，增加血液中葡萄糖的浓度。由此可知，章鱼胺与肾上 腺素的生理功能，具有许多相似性【】。对于中枢的调节，章鱼胺与。肾 上腺素皆可调节神经系统的警觉状态。在脑或神经节，此物的分布很 广，可调节许多行为的表现。在无脊椎动物的生理作用中，章鱼胺同 上海海洋大学硕士学位论文 时具有神经传递物质、神经激素与调节神经的功能，这些特性也与肾 上腺素相似5 1 。 1 33 肾上腺素能受体及其能受体激动剂简介 1 33 肾上腺素能受体是细胞膜内外与肾上腺素结合的一种受体，而 1 33 肾上腺素能受体激动剂( 1 33 a d r e n o c e p t o ra g o n i s t s ) 往往引起人体 内不同器官和组织的不同反应，有重要的生理作用。虽然1 33 肾上腺素 能受体直至3 j 1 9 8 9 年才被克隆，但已被关注了多年嘲。1 33 肾上腺素受体 可分为不同亚型，其中1 33 肾上腺素能受体亚型于1 9 8 0 年代发现，主要 存在于白色脂肪组织( w h i t ea d i p o s et i s s u e ，w a t ) 、棕色脂肪组织( b r o w n a d i p o s et i s s u e ，b a t ) 、胆囊、结肠、膀胱和泌尿道中。1 33 肾上腺素能 受体是由4 0 2 个氨基酸组成的蛋白多肽，主要分布在w a t 中，和1 3l 、 1 32 受体的氨基酸序列分别有5 l 和4 6 的同源性。它是一个g 蛋白偶 联的受体，具有特征性的7 个跨膜域，激活1 33 受体可以导致腺苷酸环 化酶( a c ) 系统的激活和细胞间环磷酸腺苷( c a m p ) 水平的增高。早期动 物试验发现，选择性激活b3 受体可明显减轻肥胖型啮齿动物的体重和 增加能量消耗，且减轻部分主要为脂肪，而体内的蛋白质含量维持不 变甚至有所提高【7 。1 0 1 。这一发现使得b3 受体激动剂成为加速能量消耗 型减肥药研究中的一大热点。人体的1 33 肾上腺素能受体在白色脂肪组 织，棕色脂肪组织以及人的骨骼肌的表达同样有效，并且在能量平衡 和葡萄糖的体内平衡的调节上起了作用。一些研究指出，1 33 肾上腺素 能受体激动剂在肥胖症的治疗和i i 型糖尿病的治疗上有潜在的价值。最 第2 丽 上海海洋大学硕士学位论文 引人注目的是1 33 肾上腺素能受体激动剂对胰岛素的致敏作用1 2 】，对 脂肪氧化的刺激作用迅速降低了细胞内的代谢产物浓度，如脂肪酰基 c o a 和二酰基甘油，由此调节了胰岛素信息，是临床应用研究的关注 点。 b3 肾上腺素受体激动剂能显著减轻啮齿动物体重，促进白色脂肪 组织的脂肪分解，并加强棕色脂肪组织非颤栗性产热作用，降低血糖， 也不影响摄食，因此被认为是抗肥胖和抗糖尿病的较理想药物。 目前研究中的1 33 肾上腺素受体激动剂，以美国w y e t h a y e r s t 公司研 制的c l 31 6 2 4 3 效果较好。对健康清瘦男性志愿者的研究表明， c l 3 1 6 2 4 3 i 皂以血浆浓度依赖方式增加胰岛素的活性和脂肪的氧化。此 外，正处于研发中的b3 肾上腺素受体激动剂还有k y o r i n 公司的n 5 9 8 4 、 布迈施贵宝公司的b m s 1 9 4 4 4 9 和b m s 1 9 6 0 8 5 ( i 期临床试验) 、赛诺 菲圣彼拉堡公司的s r 5 8 6 1 1 a ( i i 期临床试验) 、辉瑞公司的c p l1 4 2 7 1 ( i 期临床试验) * i c p 8 0 6 2 5 ( 临床前研究) 等1 3 1 。 虽然目前处于生物活性测试阶段的1 33 肾上腺素受体激动剂较多， 且在动物模型上有较好的作用，但真正对人体有效的化学实体却很少， 原因可能是由于人体和啮齿类动物的b3 肾上腺素受体的病理生理学 特性不同，或药物在人体或啮齿类动物体内的代谢和药代动力学方面 的差异引起的。因此，寻找高效、高选择性的人b3 肾上腺素受体激动 剂是减肥药研究的一个重要方向。 在人体内存在内源性的b3 肾上腺素能受体激动剂：章鱼胺。章 鱼胺是一种天然的b3 肾上腺素能受体激动剂，当然也是一种重要的 神经介质。传统的中药枳实的提取物，在欧美普遍用作减肥产品原料。 其功效成分之一即为章鱼胺( o o l 籼1 ) 。在美国，含章鱼胺的减 第3 页 上海海洋大学硕士学位论文 肥产品已在市场销售，商品名为t h e r m od y n a mx 与s y n t r a x sb e t a 3 1 1 4 1 5 l 。是目前唯一面市的1 33 肾上腺素能受体激动剂。 生物胺的提取 生物胺( b i o g e n i ca m i n e ，b a ) 是一类具有生物活性含氮的低分子 量有机化合物的总称。可看作是氨分子中1 3 个氢原子被烷基或芳基 取代后而生成的物质，是脂肪族，酯环族或杂环族的低分子量有机碱， 常存在于动植物体内及食品中。 生物胺根据其结构可分为三类： ，脂肪族：腐胺、尸胺、精胺、亚精胺等 芳香族：酪胺、苯乙胺等 l 杂环族：组胺、色胺等 腐胺、精胺、亚精胺和尸胺等是生物活性细胞必不可少的组成部 分，在调节核酸与蛋白质的合成及生物膜稳定性方面起着重要作用。 部分重要生物胺的前体物质主要有： 组氨酸一组胺 酪氨酸一酪胺 色氨酸一色胺 赖氨酸一尸胺 精胺酸一精胺、亚精胺 鸟氨酸一腐胺 生物胺不仅是生成荷尔蒙、核酸、蛋白质等物质的前体，也是生 成致癌物质和亚硝基类物质的前体。多胺( 腐胺、精胺、亚精胺) 是生 物活性细胞必不可少的组成成分。尽管早已研究出它们对生物的生长 非常重要，但它们在新陈代谢中所扮演的角色的确切任务仍不是很清 楚。所有的细胞都可以通过利用外部资源来合成多胺。尽管每个细胞 都有合成多胺的能力，但生物体仍需要源源不断地从食品中吸收多胺， 大量的多胺并不都存留在内脏组织中，而是输送到身体的各个器官 第4 页 上海海洋大学硕士学位论文 1 6 - 2 0 。一些种类的胺类物质，如儿茶胺、吲哚胺和组胺等能调节神经 系统活动，控制血压。苯乙胺和酪胺有升压作用，组胺则有降压作用。 食品中几种生物胺的药理作用见下表l 。 表1 食品中几种生物胺的生理作用 t a b l p h y s i o l o g i c a lr o l eo fs e v e r a lb i o g e n i ca m i n e si nf o o d 生物胺生理作用 组胺 酪胺 腐胺和尸胺 b2 苯乙胺 色胺 释放肾上腺素和去甲肾上腺素，刺激子宫、肠道和呼吸道的平滑 肌，刺激感觉神经和运动神经，控制胃酸分泌 边缘血管收缩，增加心律，增加呼吸作用，增加血糖浓度，消除 神经系统中的去甲肾上腺素，引起偏头疼 引起低血压，破伤风，四肢痉挛 消除神经系统中的去甲肾上腺素，增加血压，引起偏头疼 增加血压 生物碱( a l k a l o i d ) 是存在于自然界( 主要为植物，但有的也存在 于动物) 中的一类含氮的碱性有机化合物，有似碱的性质，所以过去 又称为赝碱。大多数有复杂的环状结构，氮素多包含在环内，有显著 的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一。具有光学活性。但也 有少数生物碱例外【2 1 2 2 1 。 生物碱可分为水溶性生物碱和脂溶性生物碱，章鱼胺即为一种水 溶性生物碱，下面我就具体介绍一下水溶性生物碱的分离提取方法。 水溶性生物碱是指指一类在水中溶解度大的伯、仲、叔胺型生物 碱，和季铵型生物碱两类 2 3 - 2 5 】。 n 氧化物类( 如氧化苦参碱，醚难溶) 、 ( 具有配位键)即溶于水，也溶于c h c l 3 等亲脂性溶剂。 小分子生物碱( 小分子叔胺、仲胺等) 7 它们的提取用亲属的脂溶性生物碱提取法是不行的。而应采用下 第5 页 上海海洋大学硕+ 学位论文 列方法【2 6 ，2 7 1 。 1 ) 溶剂提取法：水溶性生物碱溶于水，即行大，要将其从水中提 取出来就要采用于水不能混溶的亲水性有机溶剂，如正丁醇、戊醇、 含1 0 甲醇或乙醇的氯仿等，自中草药的水提取液中多次萃取，回 收有机溶剂，得到混合的水溶性总碱。 2 ) 沉淀法：此法是利用水溶性生物碱遇生物碱沉淀试剂可以从中 草药的酸水提取液中沉淀析出，滤出沉淀，再用适当的时机进行分 解，最后分出生物碱。 生物碱+ 生物碱沉淀试剂_ 难溶于水的复合物i ( 与水 溶性杂质分离) 最常采用的是雷氏铵盐( 硫氰化铬银) 沉淀法。具体操作时 将烟酸水提取液滴加饱和的雷氏铵盐水溶液，使生物碱沉淀完全。 过滤后将沉淀溶于丙酮，再在此溶液中加入饱和的硫酸银水溶液， 使生物碱雷氏铵盐沉淀转变为溶于水的硫酸生物碱盐，而雷氏盐 转变为银盐( 硫氰化铬银) 沉淀，过滤后除去。在滤液中加入计 算两的氯化钡溶液，使过量的硫酸银转变成硫酸钡及氯化银沉淀， 同时生物碱的硫酸盐也转变成盐酸盐，过滤去除沉淀，滤液中含 有生物碱的盐酸盐，蒸干即可得到。 b + + n h 4 c r ( s c n ) 4 ( n h 3 ) 2 】b c r ( s c n ) 4 ( n h 3 ) 2 】i + n h 4 季铵型生物碱雷氏铵盐沉淀物 阳离子( 新配饱和水溶液) 2 b c r ( s c i 椰1 4 ( n h 3 ) 2 + a g s 0 4 b 2 s 0 4 + a g c r ( s c n ) 4 ( n h 3 ) 2 饱和水溶液 b 2 s 0 4 + b a c l 2 _ 2 b c i + b a s 0 4 3 ) 盐析法：水溶性生物碱的水提取液在用溶剂提取时也可配合盐 析法提高提取效率，即在水提取液中加入无机盐，如氯化钠、硫酸 铵等，一般盐的浓度在百分之七以上直至饱和。无机盐的加入可使 生物碱在水中的溶解度降低，从而易于被有机溶剂提出，一次可以 减少有机溶剂的萃取次数。 第6 页 上海海洋大学硕士学位论文 有些季铵型生物碱的碱水溶液在加入无机盐后，可降低其在 水中的溶解度而析出。 4 ) 阳离子树脂交换法：生物碱的酸水提取液通过离子交换树脂。 生物碱盐以阳离子的形式交换到树脂上，而中性、酸性杂质( 如糖 类、有机酸) 不被交换，可随溶液流出树脂柱，从而达到分离的效 果。交换完后可用氨水或用稀酸水溶液进行洗脱，可分别得到游离 生物碱或生物碱盐。 生物碱的离子交换过程蛊葑下： 7 “。r f ”t 一一 r h 哼 ：+ ” e 乏8 h 3 争 一 r7 转h 3 十+ l 一 ； 戮瘸子璎交换错辫 垒物躐戮离子 ； ，”：， 用氨水洗脱褥铡游离生物城： ? ； ， ，7 ： r 【b 辩j 辱+ n i l 。h 。( 卜r n h t + 转手h 2 0 5 溺黢水洗脱褥到黛物躐箍：。 。；。一4 ： j ：， ，。一j 歉一 转 】，+ h 串c i 一一r 董幸+ b | _ 毒c i 一 “ 手性物质的拆分 象人的左右手一样，虽然相似但不翻转是不能完全重叠的，只 为实物和镜象的关系。我们把这种结构上的不对称性称为手性。只要 物质的分子中具有不对称结构，如不对称中心亦称手性中心，就能 产生互为镜象的光学异构体。这种异构体的一般理化性质相同，但对 偏振光的旋转方向不同。一种顺时针向右旋即右旋体( + ) ，另一种逆 时针向左旋即左旋体( 一) ，这种光学异构体亦称对映体。当药物的分 子结构中含有手性中心时称为手性药物。其对映体左旋体( 一) 和右旋 体( + ) 所表现的药理活性往往不同 2 8 1 。从表2 所列的几种常见手性药 物可以看出，由于含有手性中心即手性碳原子，从而表现出不同的 药理活性。 上海海洋大学硕十学位论文 表2 手性药物对映体不同的药理活性 t a b 2t h ep h a r m a c o l o g i c a la c t i v i t yo fc h i r a ld r u g