（食品科学专业论文）地衣芽孢杆菌TS01培养条件的研究.pdf

摘要 地衣芽孢杆菌t s o l 由中国农业科学院畜牧研究所分离，经中国科学院微生物研究所鉴定，可 以用作饲用益生菌，其有效性已被饲喂实验所证明。为了实现地农芽孢杆菌t s o l 的工业化生产， 对该菌株的液态培养条件进行了研究；同时也对其固态培养进行了初步研究。 首先对地衣芽孢杆菌t s o l 的种子培养条件进行了研究，得到的结果为：最适生长温度为4 0 c 较适合的种子培养基为牛肉膏大豆蛋自胨培养基；最适初始p h 值为7 5 ；种龄为1 3 h 1 4 h 。 通过正交实验和单因素实验得出较适合的液态培养基为( g t l ) ：玉米粉1 4 ，豆饼粉4 6 ，玉米浆 3 ，m g s o 7 地o2 ，m n s o 一h z o0 0 4 。通过单因素实验得出最适初始p h 为6 5 ，最适接种量为1 0 1 5 。摇瓶培养周期以3 0 h 左右为宜。当在f o o l 发酵罐上4 0 培养2 6 h 时，得到的菌体浓度为1 1 4 1 0 ”c f u m l ，芽孢浓度为1 0 7 1 0 ”c f u m l ，芽孢形成率为9 3 。 通过正交实验得出较适合的固态培养基为：每千克固体物料中含米糠4 2 0 9 、麸皮5 8 0 9 、红 糖7 9 ，含水量为固体物料干重的6 0 。当采用液体种子接种。接种量为1 0 ( v w ) 时，3 7 。c 浅盘 培养4 8 h 的茵体浓度为9 1 5 ：0 9 c f u l g 鲜曲，芽孢浓度为7 5 0 x 1 d 9 c f u g 鲜曲，芽孢形成率在 8 0 以上。 关键词：地衣芽孢杆菌，液态培养，固态培养，培养条件 a b s t r a c t b a c i l l u s l i c h e n i f o r m i st s 一0 1 s e p a r a t e db yi n s t i t u t e o fa n i m a l s c i e n c e ，c h i n aa c a d e m yo f a g r i c u l t u r es c i e n c ea n di d e n t i f i e db yi n s t i t u t eo fm i c r o b i o l o g y , c h i n e s ea c a d e m yo fs c i e n c e s ，c a nb e u s e da sas t r a i no ff e e dp r o b i o t i c s ，w h o s ee f f e c t i v e n e s sh a sa l r e a d yb e e np r o v e db yf e e de x p e r i m e n t s i n o r d e rt or e a l i z ei n d u s t r i a lp r o d u c t i o no fb a c i l l u sl i c h e n i f o r m i s t s 0 1 1 i q u i ds t a t ec u l t i v a t i o nc o n d i t i o n s o f b a c i l l u sl i c h e n 和r r a i st s 一0 1w e r es t u d i e d ；a tt h es a n l et i m e ，s o l i ds t a t ec u l t i v a t i o nf o rt h i ss t r a i nw a s a l s op r e l i m i n a r i l yi n v e s t i g a t e d s e e dc u l t u r ec o n d i t i o n so fb a c i l l u s t i e h e n i f o r m i st s - 0 1w e r ef i r s t l yi n v e s t i g a t e d t h er e s u l t s s h o w e dt h a tt h eo p t i m a lg r o w t ht e m p e r a t u r ew a s4 0 c ；t h es u i t a b l es e e dc u l t u r em e d i u mw a sb e e f e x t r a c ts o y ap e p t o n em e d i u m ；t h eo p t i m a li n i t i a lp hw a s7 5 ：t h eo p t i m a ls e e dc u l t u r et i m ew a s1 3 h 1 4 h l i q u i d s t a t em e d i u mw a s o p t i m i z e dt h r o u g ho r t h o g o n a le x p e r i m e n t a n do n e - f a c t o r e x p e r i m e n t s t h es u i t a b l em e d i u mc o n t a i n e d ( l ) ：c o i t ip o w e r1 4 ，s o y b e a np o w e r4 6 ，c o r ns t e e pl i q u i d 3 ，m g s 0 4 - 7 h 2 02 ，m n s 0 4 h z o0 0 4 i n i t i a lp ha n di n o c u l u ms i z ew e r ea l s oi n v e s t i g a t e db y o n e - f a c t o re x p e r i m e n t s t h er e s u l t sw e r e6 5 1 0 1 5 r e s p e c t i v e l y f l a s kc u l t i v a t i o nt i m ew a s3 0 h o rs o a f t e rt h ec u l t i v a t i o nf o r2 6 ha t4 0 ci na1 0 0 lf e r t n e n t o r , as p o r ec o n c e n t r a t i o no f1 0 7 x 1 0 ” c f u m lw a so b t a i n e dw i t ha s p o r ep e r c e n t a g e o fg r e a t e rt h a n9 3 a n dam a x i m u ml i v ec e l l c o n c e n t r a t i o no f1 1 4 1 0 1 0 c f u m l 、 s o l i ds t a t em e d i u mw a s o p t i m i z e dt h r o u g ho r t h o g o n a le x p e r i m e n t t h es u i t a b l em e d i u m c o n t a i n e d ( g k gd r ys o l i dm a t e r i a l ) ：w a t e r6 0 0 ，b r o w ns u g a r7 ，r i c eb r a n4 2 0 ，w h e a tb r a n5 8 0 w h e n t h eo p t i m a l m e d i u ma n di n o c u l u ms i z e1 0 ( v w ) w e r ea d o p t e d ，as p o r ec o n c e n t r a t i o no f7 5 0 x 1 0 9c f u g ( w e tq u ) w a so b t a i n e da f t e rt w od a y s c u l t i v a t i o ni nas h a l l o wp a nw i t has p o r ep e r c e n t a g eo fg r e a t e rt h a n8 0 a n dam a x i m u ml i v ec e l lc o n c e n t r a t i o no f9 1 5 x 1 0 9c f u g ( w e t q u ) k e y w o r d s ：b a c i l l u sl i c h e n i f o r m i s ，l i q u i ds t a t ec u l t i v a t i o n ，s o l i ds t a t ec u l t i v a t i o n ，c u l t i v a t i o nc o n d i t i o n s n 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。 尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰 写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过 的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并 表示了谢意。 研究生签名：爸备渣 时间： ，0 0 0 - 年6 月口日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送 交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手 段保存、汇编学位论文。同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学 位论文的全部或部分内容。 ( 保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研究生签名 导师签名： 榭 宝多 时间：如牛年6 月，g 日 时间：0 2 期岁年月，7 刀 。口田农业大学颂。f 学位论文 第一帚绪论 1 1 饲用益生菌概述 1 1 1 饲用益生菌的概念 第一章绪论 微生态学是一门在细胞水平或分子水平上研究微观层次生态规律的学科，其任务有三：研 究正常菌群的本质及其与宿主间的相互关系；阐明宿主的微生态平衡与失调的机制；在此基 础上，指导微生态制剂的研制与应用，借以调整宿主的微生态平衡，进而达到治疗和保健的目的 。益生菌，又称微生态靠4 剂，是一类根据微生态原理制成的含有大量有益菌的活菌制剂，有的 还含有它们的代谢产物或( 和) 添加有有益菌的生长促进因子，具有维持宿主的微生态平衡，调 整其微生态失调和提高他们健康水平的功能。而饲用益生菌( 又称饲用微生态制剂) ，则是近年 来出现的一类新型饲料添加剂，指可直接饲喂动物并通过调节动物肠道微生态平衡达到预防疾 病、促进动物生长和提高饲料利用率的活性微生物及其培养物“1 。 1 1 2 允许使用的饲用益生菌种 就饲用微生态制剂所使用的菌种而言，由于涉及其安全性和有效性，发达国家都有严格的审 批程序。美国食品药物管理局( f d a ) 和美国饲料行业协会( a a f c o ) 从2 0 世纪8 0 年代以来，不 定期地发表有“直接饲喂且一般认为是安全的微生物品种”。1 9 9 9 年 a a f c o 年鉴中发表的允 许使用的直接饲喂的微生物菌种有4 3 种。我国农业部于1 9 9 9 年7 月发布了1 0 5 号公告，明确规 定的饲用微生物添加剂的种类有1 3 种，这些有益微生物分别是干酪乳杆菌、植物乳杆菌、粪链 球菌、屎链球菌、乳酸片球菌、枯草芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、乳链球菌、啤酒酵 母菌、产航饭丝酵母、沼泽红假单胞菌、地表芽n t t - 菌。随着科学研究的不断深入，允许使用的 种类还会被逐步公布。 11 3 饲用益生菌的种类和特性。、” ( 1 ) 芽孢杆菌类属于需氧芽孢杆菌中的非致病性菌，以内生孢子形式存在，能耐酸、耐 盐、耐高温。芽孢杆菌不仅具有较强的蛋白酶、淀粉酶活性，还具有平衡和稳定乳酸菌的作用。 此类菌在动物肠道微生物菌群中仅少量存在。目前主要应用地表芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。 ( 2 ) 乳酸杆菌类为动物胃肠道中的正常微生物，应用最早，制剂种类也最多。属于革兰 氏刚性菌，厌氧或兼性厌氧，耐酸，p h 3 0 4 5 的酸性条件下能够生存但不耐热，6 5 。c 7 5 c 下致死。此类菌可以产生有机酸、过氧化氢、酶类、乳酸菌素等多种物质，有机酸包括乳酸、乙 酸、丙酸、丁酸等，本身既是营养物质，又可降低肠道p h 值，对病原菌和腐败苗有抑制作用： 过氧化氢和乳酸菌素对病原菌和腐败菌有抑制和杀灭作用，使其不能生长繁殖，从而减少内毒素、 腐胺、吲哚、氨、硫化氢等有害物质含量，使有益微生物在竞争中占优势。 中国农业大学硕二l 学位论文 第一章绪论 ( 3 ) 酵母菌类 同芽孢杆菌一样少量存在于动物肠道微生物曲群。具有多种水解酶活性， 蛋白质含鼙达5 0 6 0 y o ，并含有丰富的b 族维生素。 1 1 4 饲用益生菌的作用机理 ( 1 ) 优势种群学说：动物肠道内大量微生物种群之问的微生态平衡决定于优势菌群。一旦 失去优势菌群，该微生态平衡失调，原有优势菌群发生更替。试验证明“。，在5 个日龄下痢仔猪 的空肠中，需氧菌( 大肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌、酵母菌、沙门氏菌和芽孢杆菌) 与厌氧苗( 拟 杆菌、真杆菌、双歧杆菌、乳酸杆菌、小梭菌和消化球菌) 的对数均值之比，由正常时的l ：1 0 0 下降为1 ：l ，即厌氧菌的对数均值仅为正常值的1 1 0 0 ，菌群比例出现失调。 ( 2 ) 生物拮抗学说：微生态制剂中的有益蔼对病原菌有拮抗作用，这些有益菌定植在肠粘 膜上皮的靶细胞上，同病原菌争夺有限的营养物质和生态位，竞争性抑制病原菌的吸附和定植， 使病原菌不能生长繁殖。从而阻止其侵害。郑跃杰等”研究发现，双歧杆菌与肠上皮细胞系l o v o 细胞粘附后，能完全抑制肠致病性大肠杆菌( e p e c ) 和产毒性大肠杆菌( e t e c ) 的粘附。 ( 3 ) 生物夺氧学说：微生态制剂中有强需氧菌，能消耗掉肠道内的氧气而形成厌氧环境。例 如，在应用活菌靠4 剂整肠生时，由于地衣芽孢杆菌这一争夺氧气菌种在肠道内的定植，会持续地 对内环境产生生物效应，限制需氧性病原菌的繁殖而支持肠道内的生理厌氧菌的繁殖，有利于肠 遵正常菌群的生长繁殖，维持原有的微生态平衡，起到防病促生长的作用“1 ，陈惠等”1 给生长育 肥猪饲喂芽孢杆菌后，发现肠道菌群中厌氧菌增多，而需氧菌及兼性厌氧菌特别是大肠杆菌显著 减少。 ( 4 ) 此外，微生态制剂还可增强机体的免疫功能。赖新峰等用青春型双歧杆菌注射裸鼠腹 腔，分别以中性红吞噬法和m t t 法检测裸鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力和能量代谢水平。研究发现， 双歧杆菌注射组裸鼠膜腔巨噬细胞的吞噬能力和能量代谢水平均显著高于对照组( p 扁 届 儡，所以各因素的主次顺序为口一f 一月一且即含水量是主要因素，红糖次之，米糠再次之，麸皮是次要因素。 ( 2 ) 以各因素不同水平下的均值对各水平作图，如图4 2 所示：从中可以看出，对于因素a 和n 其均值水平的变化趋势相似，都是先升高后下降；因素曰呈上升趋势，而因素c 呈f 降 趋势。经比较后发现，他、昂、日、盘在每一因素的3 个水平下对菌体浓度提高最大。 ( 3 ) 由( 1 ) 、( 2 ) 可以确定地衣芽孢杆菌t s 0 1 固态培养基的撮佳配比为岛g 矗岛，即含水 量6 0 0g k g 基料、红糖5 9 、米糠0 5 k g 、麸皮0 7 k g 。经换算后，可如下计算：每千克固体物料 中含米糠4 2 0 9 、麸皮5 8 0 9 、红糖7 9 ，含水量为固体物料干重的6 0 。 在1 0 s 、1 1 # 两种培养基上取得的最高菌体浓度分别为：1 5 0 1 0 9 c f u g 鲜曲、4 4 0 1 0 9 c f u g 鲜曲，均低于6 # 培养基上取得的最高菌体浓度9 1 5 1 0 9 c f u g 鲜曲。可见，米糠或麸皮单独使 用时，不如二者复合使用时效果好。 4 3 2 最佳配比培养基上的培养过程 最佳配比培养基上的菌体浓度变化见图4 - 1 ，芽孢浓度变化见图4 3 ( 其它培养基上的芽孢 浓度变化略) 。圈4 - 3 表明：第3 6 h 、第4 8 h 的芽孢浓度分别约为第2 4 h 的2 5 倍和3 8 倍。采用 液体种子接种，当接种量为1 0 ( v w ) 时，培养4 8 h 的菌体浓度为9 1 5 1 0 9 c f u g 鲜曲，芽孢 浓度为7 5 0 1 0 9 c f u g 鲜曲，芽孢形成率在8 0 以上。 表4 - 1 正交实验因素水平表 t a b l e 4 - 1f a c t o r sa n dl e v e l su s e di no r t h o g o n a le x p e r i m e n t 0 3 0 5 0 8 o 2 o 5 0 7 5 0 1 0 o 2 0 0 5 0 0 6 1 ) 0 7 0 0 表4 - 2 正交实验 t a b l e4 - 2o r t h o g o n a le x p e r i m e n t 3 1 42 i2 3 4 3 0 522 3l 3 3 5 9 1 5 2 4 5 3 5 0 93 32i 3 9 0 k z1 6 8 01 4 5 01 5 8 5 1 9 2 5 k $9 ，8 51 6 1 58 9 0 l o 9 0 k k 3 r 5 6 04 8 35 2 8 6 4 2 3 2 85 3 82 9 7 3 ，6 3 2 ，3 21 9 62 4 l2 8 4 4 4 讨论 箩 野 t 9 p 目懿 。 p ：曩 督一 l 胁陆妇l 叫卜 j 既 i234567891 01 1 抖 培养基 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 一 1 日1 2 h 2 4 h ，i ：3 6 h ，玉4 8 h 图4 - i 各培养基上的菌浓一时间变化图 f i g 4 1 v a r i a t i o n so f c e l lc o n c e n t r a t i o nw i t hc u l t u r et i m ei ne v e r y m e d i u m 研究得出，地衣芽孢杆菌t s 一0 1 较适合的固态培养基为：每千克固体物料中含米糠4 2 0 9 、麸 皮5 8 0 9 、红糖7 9 ，含水量为固体物料千重的6 0 。o 。当采用液体种子接种，接种量为1 0 9 6 ( v w ) 时，培养4 8 h 的菌体浓度为9 1 5 i o 。c f u g 鲜曲，芽孢浓度为7 5 0 x 1 0 9 c f u g 鲜曲，芽孢形成 率在8 0 以上。 红糖是没有高度精炼的蔗糖，除了充当部分碳源、供给能量外还含有钙、铁等矿物质元 鲫鲫伯柏m o 薯黏宕nd0001)蜒粗 中国农业大学硕士学位论文 第四章埴衣芽孢杆菌r s 0 1 固态培养的初步研究 素，但高含量的红糖不利于该菌的固态培养，这是因为此时供氧不能满足菌体高速生长的需求， 造成“窒息”。米糠过量时，吸水后物料易结团，变得致密，阻碍培养基内部热量的释放和环境 中空气的进入。较多的麸皮可使培养基相对疏松，有利于释放发酵热和促进空气渗入物料内部。 适合的含水量对地衣芽孢杆菌t s 一0 l 的固态培养较为重要，水分过多时，物料中会产生游离水， 影响空气和菌体的直接接触，对生长不利。 影响固态培养技术的关键是固态发酵反应器”1 。随着对固态培养技术研究的不断深入，许多 可用于大规模纯种培养的周态培养设备陆续被开发出来。将固态培养的新技术、新设备用于饲用 微生态制剂的生产，对于提升其生产现代化进程，稳定产品质量，提高应用效果，具有重要的现 实意义。 叵至亟童三亟亘三三堡匿三受鱼鲴 图4 2 各因素在不同水平下的均值变化 f i g , 4 - 2v a r i a t i o n so f a v e r a 茹v a l u eo f e v e r yf a c t o r u n d e r d i f f e r e n tl e v e l s 暑 毽 量 曼 越 疑 最 璇 匿鳃 ll 圈 l ii 豳 i l 圈 j i - 。j i l 豳霞g l i i i隧i 豳i 2 4 h3 6 h4 8 h 培养时间( h ) 圈4 3 最佳培养基组台上芽孢浓度随培养时间 的变化 f i g 4 3v a r i a t i o n so f s d o r e c o n c e n t r a t i o nw i t h c u l t u r et i m ei nm o $ 1s u i t a b l er o o d t m m 中l i ；l 农业大学硕i 学位论文第五章结论与建泌 5 1 结论 第五章结论与建议 ( 1 ) 地衣芽孢杆菌t s 0 1 的最适生k 温度为4 0 。 ( 2 ) 该菌株适合的种子培养基为：牛肉膏0 3 、大豆蛋白胨1 o 、n a c l0 5 、水1 0 0 、 p h 7 0 ，0 1 m p a 灭菌2 0 m i n 。种子培养基晟适初始p h 值为7 5 。种龄为1 3h 1 4 h 。地衣芽孢杆 菌t s - 0 1 为需氧性菌，在生长过程中，对溶氧的需求较大，因而在摇瓶培养时要尽可能装最少， 转速高。 ( 3 ) 该菌株适台的液态培养基为；玉米粉t 4 9 、豆饼粉4 6 9 、玉米浆3 9 、m 西o t 7 h t 02 9 、 m n s o 。h ：00 0 4 9 、水1 l 。培养基最适初始p h 值为6 5 。最适接种量为l o 1 5 ( v v ) 。摇 瓶培养时间以3 0 h 为宜。罐上培养时，当将p h 值控制在6 o 7 8 ，d o ( ) 控制在3 5 以上时， 培养周期为2 6 h 左右，培养液苗体浓度达1 1 4 1 0 ”c f u m l ，芽孢浓度达1 0 7 1 0 ”c f 【j m l ， 芽孢形成率为9 3 ，残糖为3 9 l 。 ( 4 ) t s 一0 l 较适合的固态培养基为：每千克固体物料中含米糠4 2 0 9 、麸皮5 8 0 9 、红糖7 9 ， 含水量为固体物料干重的6 0 。当采用液体种子接种，接种量为1 0 ( v w ) 时，培养4 8 h 的菌 体浓度为9 ，1 5 t 0 9 c f w g 鲜曲，芽孢浓度为7 5 0 1 0 9 c 剐g 鲜曲，芽孢形成率在8 0 以上。 5 2 建议 ( 1 ) 在大规模液态培养过程中，可考虑用豆芽浸汁做种子培养基，以降低成本。 ( 2 ) 试验筛选得到的固态培养基可应用于固态发酵罐中，以扩大生产规模，降低劳动强度， 但培养基的含水量应根据所采用的灭菌条件予以调整。 ( 3 ) 最后，建议对菌体细胞定期进行同步培养将获得的同步培养物作为培养时的种子。 这样，接种后菌体细胞可以同时进行生长和分裂，并能步调一致地形成芽孢，将会进一步提高 芽孢形成率，缩短培养周期。 中国农业大学硕士学位论文 参考文献 参考文献 1 周德庆，郭杰炎我国微生态制剂的现状和发展殴想工业微生物，1 9 9 9 ，2 9 ( i ) ：3 5 4 3 2 杨风动物营养学北京：中国农业出版社，2 0 0 1 ，1 4 9 1 5 l 3 谢玺文，翠霞，陈丽媛，锋饲用微生物的应用及研究现状微生物学杂志，2 0 0 1 ，2 1 ( 1 ) ： 4 7 4 8 4 何明清，谢镜怀，朱玉兰，等病、健仔猪不同肠段菌群的研究畜牧兽医学报，1 9 8 6 ，1 7 ( 4 ) ： 2 7 6 2 8 3 5 郑跃杰，潘令嘉，叶桂安，等双歧杆菌对e p e c 和e t e c 粘附的竞争抑制作用中国微生态学 杂志，1 9 9 9 ，王王( 6 ) ：3 2 9 3 3 1 6 王柏清应用整肠生防治鸡感染腹泻的研究中国微生态学杂志，2 0 0 1 ，1 3 ( 6 ) ：2 8 6 7 陈惠，朱继喜，吕道俊。等芽孢杆菌对生长育肥猪肠道菌群及酶活性的影响四j l i s t 业大学 学报，1 9 9 4 ，1 2 ( 增刊) ：5 5 0 5 5 3 ，5 4 9 8 赖新峰，王立生，潘令嘉，等双歧杆菌对裸鼠腹腔巨噬细胞激活作用的初步观察，中国微生 态学杂志，1 9 9 9 ，1 1 ( 6 ) ：3 3 6 3 3 7 9 e e r d i 9 6 ng d em a c a l sm e ，a l v a r e zs , e t a 1 e f f e c to fp e r o r a l l ya d m i n i s t e r e dl a c t o b a c i l l io n m a c r o p h a g e a c t i v a t i o ni nm i c e i n f e c tl m m u n ，1 9 8 6 ，5 3 ：4 0 4 4 1 0 1 0 p e r d i 9 6 ng d em a c a i sm e ，a l v a r e zs ，e ta 1 s y s t e m i ca u g m e n t a t i o no ft h ei m m u n er e s p o n s ei nm i c e b yf e e d i n g f e r m e n t e dm i l k sw i t hl a c t o b a c i l l u se a s e l a n dl a c t o b a c i u u s a c i d o p h i l u s i m m u n o l o g y , 1 9 9 8 ，6 3 ：1 7 2 3 1 1 s c h i f f r i ne j ，r o c h a tf l i n k a m s t e rh ，e ta 1 i m m u n o m o d u l a t i o no fh u m a nb l o o dc e l l sf o l l o w i n g t h ei n g e s t i o no f l a c i da c i db a c t e r i a jd i a r ys c i ，1 9 9 4 ，7 8 ：4 9 1 4 9 7 1 2 m o r e a um c ，h u d a u l ts ，b r i d o n n e a uc ，e ta 1 s y s t e m i ca n t i b o d yr e s p o n s et o o v a l b u m i ni n g n o t o b i o t i c c 3 h a l e j m i c ew i t h b i f i d o b a c t e r i u m6 罅幽m o re s c h e r i c h i ac o l i m i e r o e c o l t h e r , 1 9 9 0 ，2 0 ：3 0 9 3 1 2 1 3 y a s u ih ，n a g a o k an ，m i k ea e ta 1 d e t e c t i o no fb i f i d o b a c t e r i u m s t r a i n st h a ti n d u c el a r g e q u a n t i t i e so fi g a m i c r o be c o l h e a l t hd i s 1 9 9 2 ，5 ：1 5 5 1 6 2 ( 1 4 l s o l a u r ie ，m a j a m a ai f , a r v o l at ，e ta l l a c t o b a c i l l u sc a s e is t r a i ng g r e v e r s e si n c r e a s e di n t e s t i n a l p e r m e a b i l i t yi n d u c e db yc o w m i l ki ns u c k l i n gr a t s g a s t r o e n t e r o l o g y , 1 9 9 3 ，1 0 5 ：1 6 4 3 1 6 5 0 1 5 3 胡尚勤整肠生菌纯培养物的环境动力学研究生物数学学报，1 9 9 7 ，1 2 ( 4 ) ：3 5 0 3 5 5 1 6 胡尚勤，刘天贵地衣芽孢杆菌营养要求的研究河北省科学院学报，2 0 0 0 ，1 7 ( 4 ) ：2 2 4 2 2 7 1 7 艄尚勤整肠生菌的生长条件和罐上发酵试验微生物学通报，2 0 0 2 ，2 9 ( 6 ) ：5 4 5 8 1 8 胡尚勤生物素对地衣芽孢杆菌生长和乳酸形成的影响生物工程学报，1 9 9 8 ，1 4 ( 1 ) ：1 1 6 1 1 7 1 9 刘天贵不同基质对地衣芽孢杆菌生长曲线的影响重庆师范学院学报( 自然科学版) 。1 9 9 8 ， 1 5 ( 4 ) ：2 1 2 3 。扣圈j 爪业入学碗i 学位论文参考文献 2 0 刘天贵，州尚勤不同抑制剂对地衣芽孢杆菌生长影响的研究微生物学通报，2 0 0 0 ，2 7 ( 5 ) ： 3 4 9 4 3 5 2 2 1 削尚勤，袁原，张远琼微生态系统中地衣芽孢杆菌消长的研究应用生态学报，1 9 9 8 ，9 ( 6 ) ： 6 1 7 6 2 0 2 2 潘康成，何明清，刘克琳地衣芽孢杆菌对家兔细胞免疫功能的影响四川农业大学学报， 1 9 9 7 ，1 5 ( 2 ) ：3 6 8 3 7 l 2 3 潘康成，何明清地衣芽孢杆苗对家兔体液免疫功能的影响研究中国微生态学杂志，1 9 9 8 ， 1 0 ( 4 ) ：2 0 4 2 0 6 2 4 文心田，何明清，朱继熹，等饲用芽孢杆菌大罐液体培养生产工艺研究四川农业大学学报， 1 9 9 4 ，1 2 ( 增刊) ：6 4 6 6 4 9 2 5 赵新海，张庆华，王艳华长效益生菌菌株的筛选及生产工艺的初步研究微生物学杂志， 2 0 0 3 ，2 3 ( 3 ) ：5 2 5 5 2 6 姜文侠，史连生，程伟，等益生素粉剂的研制动物科学与动物医学，2 0 0 2 。1 9 ( 7 ) ：m 1 m 5 2 7 吴克力，梁冰，房芳，等地衣芽孢杆菌对实验性家兔阴道炎金葡菌的消除作用中国微生 态学杂志，1 9 9 5 ，7 ( 4 ) ：6 0 6 1 2 8 全艳玲地衣芽孢杆菌对有害微生物的拮抗作用食品科学，2 0 0 2 ，2 3 ( 8 ) ：6 7 6 9 2 9 周德庆微生物学教程北京；高等教育出版社，1 9 9 1 ，1 0 3 3 0 钱柔存，黄仪秀微生物实验教程北京：北京大学出版社，1 9 9 9 ，1 0 0 1 0 1 、1 9 8 - 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