（食品科学专业论文）猪血G型免疫球蛋白的分离提取研究.pdf

摘要捅姜免疫球蛋白( i m m u n o g l o b u l i n ，i g ) 是对抗原刺激应答中，b 淋巴细胞产生的能与相应抗原特异性的结合，产生各种免疫效应( 生理效应) 的一类球蛋白。大量研究报道了口服免疫球蛋白可以有效地预防和治疗婴幼儿由大肠杆菌和轮状病毒引发的肠道疾病。猪血中免疫球蛋白含量很高，其中以g 型免疫球蛋白( i m m u n o g l o b u l i n g ，简称i g g )为主。我国猪血资源十分丰富，但并未得到很好地利用，为了实现猪血的“变废为宝”，大力开发免疫球蛋白资源，对猪血中i g g 的开发应用进行了深入研究，为其在保健食品和饲料中的应用提供了工艺路线和科学依据，同时也为其它血液功能性蛋白资源的应用提供可借鉴的思路和方法。通过改进的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法测定样品中l g g 和其它血清蛋白的含量，从而掌握分离提取工艺对i g g 纯度和回收率的影响；利用直接酶联免疫吸附法测定样品中活性i g g 的含量，从而了解不同工艺参数对免疫球蛋白活性的影响。根据所得i g g纯度、回收率和活性保留率数据，选择合适的提取方法和工艺参数。建立了实验室分离纯化猪血清i g g 的方法。利用硫酸铵进行初分：室温下，样品p h 为7 4 ，硫酸铵饱和度为3 7 ，此时i g g 回收率为8 0 5 ( w w ) ，纯度为7 2 9 ( w w ) ；用d e a e 纤维素5 2 作进一步纯化，可以得到纯度大于9 7 ( w w ) 、活性保留率为9 4 ( w w ) 的猪血清i g g 。分别研究了多聚磷酸盐和三氯化铁分离提取猪血清i g g 的工艺。多聚磷酸盐沉淀法分离猪血清i g g 的最佳工艺参数为：多聚磷酸盐浓度o 1 ( w v ) ，p h 值3 9 ，反应温度4 5 ，此条件下i g g 的回收率与纯度分别为6 0 9 ( w w ) 和6 4 5 ( w w ) ，活性保留率为8 7 _ 3 ( w w ) 。f e c l 3 分离猪血清i g g 最佳工艺参数为：f e c l 3 浓度4 5 m m o l l ，温度4 0 ，p h 值4 5 ，此条件下i g g 的纯度为7 1 7 ( w w ) ，回收率为7 5 5 ( w w ) ，活性保留率约为9 0 5 ( w w ) 。所得到的产品中蛋白质主要为l g g ，其余部分大多为y球蛋白。通过比较发现，f e c l 3 分离猪血清i g g 的工艺操作简便，过程温和，分离效果好，安全可靠，具有很高的实用性，适宜食品用i g g 的工业化生产。选择螺旋卷式超滤设备，以截留液全循环错流方式对f e c l 3 分离所得i g g 样液进行超滤浓缩，超滤膜为截留分子量1 0 ，0 0 0 d a 的p e s 膜。超滤浓缩的最佳工艺条件为：样品p h 值为7 ，温度5 0 ，超滤压力0 1 m p a ，浓度提高1 0 倍。浓缩后得到的样品中蛋白质含量为2 0 8 ( w v ) ，l g g 含量为1 4 2 ( w v ) ，具有活性的i g g 所占比例比超滤前略有下降，从9 1 3 ( w w ) 降低到8 7 6 ( w w ) 。根据所采用的猪血清i g g 分离制备工艺，研究了低p h 环境和加热对i g g 活性的影响，结果显示：p h 低于4 以后i g g 稳定性下降，部分i g g 变性，其结构和构象发生改变。i g g 热变性的温度范围为7 0 2 6 5 7 2 1 6 2 吸热量为3 3 8 4 j 鹰。p h 为7 时，i g g 在5 5 时开始有轻微变性，其变性速度随着温度的升高逐渐加快。酸性条件下较低温度就会造成i g g 变性。因此，从猪血清中分离提取i g g 时，样品的p h 值不应小于3 5 ，反江南大学博二i ：学位论文应温度不宜高于5 0 。乳蛋白、寡糖、糖醇、氨基酸对1 2 g 均有热保护作用。将2 0 ( w v ) 的脱脂乳粉、0 5 ( w v ) 的甘氨酸和5 ( w v ) 的麦芽糖混合后作为热保护剂添加到超滤浓缩得到的料液中可以有效地减少喷雾干燥时i g g 的活性损失。以海藻糖为保护剂可以减少l g g冷冻干燥时的活性损失。干燥方式和是否添加保护剂决定了产品中1 2 g 的含量和活性保留率的高低，可以根据产品的具体要求选择合适的生产工艺。关键词：g 型免疫球蛋白( i g g ) ；猪血；三氯化铁( f e c l 3 ) ；超滤浓缩；热保护剂i l摘要a b s t r a c ti m m u n o g l o b u l i n ( i g ) s e c r e t e db ybl y m p h o c y t et h a tf u n c t i o nw a sb i n d i n gt h es p e c i f i ca n t i g e n si nt h ei m m u n er e s p o n s e t h ei m p o n a n c eo fi g gi ni i l f a n tf e e d i n gi sw e l l d o c u m e n t e di nc l i n i c a lt e s tr e s u l t s ：i g gf r o md i f f e r e n tr e s o u r c e ss h o w e dc o n s i d e r a b l eb a c t e r i o s t a t i ce 行e c ta g a i n s th u m a l le n t e r o p a t h o g e n i cs t r a i n so f 西曲已，j 幽妇c d 矗，尺o m v f 删sa n dm u l t i p l es c l e r o s i si f e c t i o n sa l s oc o u l db ep r e v e n t e db yo r a la d m i n i s t r a t i o no fi g g p o r c i n eb l o o di sr i c hi ni m m u n o g l o b u l i na n dt h e o s ti m p o n a n tp o r c i n es e n l mi m m u n o g l o b u l i ni si g g p o r c i n eb l o o dr e s o u f c e sa r ea b u n d a n ti nc h i n a ，b u tt h eu t i l i z a t i o nw e r e n te n o u g h s ot h ee x p l o i t a t i o na n du t i l i z a t i o no fp o r c i n es e m ml g gw e r es t u d i e d i g gc o n c e n t r a t i o na n do t h e rp o r c i n es e r u mp r o t e i nc o m p o s i t i o nw e r ea n a l y z e db yi m p r o v e dp o l y a c r y a m i d eg e le l e c t r o p h o r e s i s ( p a g e ) t h ec o n t e n to fa c t i v ei g gw a sm e a s u r e db yd i r e c te n z y m e - l i n k e di m m u n o s e r b e n ta s s a y ( e u s a ) a c c o r d i n gt ot h ed a t e so fi g gp u r i t y ，r e c o v e r yr a t ea n da c t i v i t yp r e s e a t i o n ，o p t i m a lf r a c t i o n a t i o np r o c e s s i ga n dt e c l l l l o l o g i c a lp a r a m e t e r sw e r ed e t e n n i n e di tw a sr e s e a r c h e dt h a tp o r c i n es e r i l mi g gf r a c t i o n a t i o nm e t h o di nl a b o r a t o r y a m m o n i as u l f a t ew a su s e df b rp r h a r ye x t r a c t i o n ：8 0 5 ( w ，w ) p o r c i n es e r u mi g gw a sp r e c i p i t a t e di n3 7 s a t u r a t e da m m o n i as u l f a t ea tp h7 4a n dr o o mt e m p e r a t u r e ，t h ep u r i t yo fi g gi s7 2 9 ( w w ) u s i n gd i e t h y l a m i n o e t h y ic e i i u i o s e5 2f o ra d v a n c e dp u r i f y ：9 7 ( w w ) p u r i t yi g g ( a c t i v i t yp r e s e r v a t i o nr a t ei s9 4 ( w w ) ) w e r eo b t a i n e d i g go fp o r c i n es e m mw a sp u r i f i e dw h e np o l y p h o s p h a t eo rf e i cc h i o r i d ew a sa d d e d t h eo p t i m a lp a r a m e t e r so fp o i y p h o s p h a t ew e r ed e t e r m i n e dt ob ea sf o u o w s ：t h ep o l y p h o s p h a t ec o n c e n t r a t i o ni s0 1 ( w v ) ，p hi s3 9 ，a n dt e m p e r a t u r ei s4 5 t h er e c o v e r yr a t ea n dp u r i t yo fe x t r a c t e di g ga r e5 2 7 ( w w ) a n d5 9 1 ( w ，w ) u n d e ro p t i m a lc o n d i t i o n i np o r c i n es e r u mt r e a t e dw i t h4 5 m m o l lf e r r i cc h l o r i d ea tp h4 5a n d4 0 ，7 5 5 ( w w )h n m u n 0 9 1 0 b u l i ng ( 9 0 5 ( w w ) j m m u n o c h e m i c a la c t i v i t y 培g ) a n da1 i t t l e 丫- g l o b u l i nw e r er c t a i n e di nt h es u p e m a t a n t ，t h ep u r i t yo fl g gi s7 1 7 ( w w ) m o r et h a n9 5 ( w w ) a d d e di m nw a ss u b s e q u e n t l ye l i m i i l a t e da sp r e c i p i t a t eb yh o l d i n gt h et r e a t e ds e m ma tp h9 c o m p a r e dw i t ht h em e t h o d so fp o l y p h o s p h a t ea n df e r r i cc h l o r i d e ，t h e 仃a c t i o n a t i o np r o c e s s i n go ff e i t i cc h l o r i d eh a v em a n ym e r i t s ，s u c ha se a s yp m c e s s i n g ，b l a n dp m c e s sc o n d i t i o n s ，f r a c t i o n a t i o ne f f e c tv e r yw e l l ，t h ep m d u c t ss a f e l ya n dt h et e c t l n i c sa r ep r a c t i c a l 咄s ot h ef e r r i cc h l o r i d ef r a c t i o n a t i o nt e c h n i c si sa p p l i c a b l et of o o di n d u s t r y t h e 培gs o 川o nf r a c t i 彻a t e d b yf b 玎j cc h l o r j d ew a sc o n c e n t r a t e db ys p i r er o l lu l t r a f i l t r a t i o nm e m b r a n em o d u l e u l t r a f i l t r a t i o nm o d ei sa ur e t e n t i o nc i r c u l a t e sc m s s c u r r e n tf l o w u l t r a f i l t r a t i o nm e m b r a n ei sp o l y e t h e r s u l f o n em e m b r a ea n dr e t e n t i o nm o l e c u l a rw e i g h ti s1 0 ，0 0 0 d a t h eo p t i m a l t e c h n o l o g i c a lp a r a m e t e r so fu l t m f i l t r a t i o nc o n c e n t r a t i o nw e r ei江南大学博士学位论文d e t e n n i n e da sf o l l o w s ：t h es a m p l es o l u t i o np hi s7 ，t e m p e r a t u r ei s5 0 ，u l t r a f i l t r a t i o np r e s s u r ei s0 1 m p a t o t a lp r o t e i nc o n t e n tj s2 0 8 ( w v ) a n di g gc o n t e n ti s1 4 2 ( w v ) o f t h ec o n c e n t r a t e ds a m p l es o l u t i o n ，a c t i v i t yr e s e a t i o nr a t er e d u c e df r o m9 1 3 ( w ，w ) t o8 7 6 ( w w ) t 1 l e 衄a la n dp hs t a b i l i t yo fp o r c i n es e r u mi g gi nm o d e ls y s t e m sw e r es t u d i e d i g gw a sf o u n dt 0b eu n s t a b l ea n ds u s c e p t i b i et od e n a t u r a t i o nw h e ni n c u b a t e da tp h 1 0 ，阴性孔吸收值 1 0 ) 或过低时( 血球o血清o三氯化铁分离猪血清蛋白日白蛋白和a 、6 _球蛋白沉淀除去ui g g 纯度为7 1 7 ，得率为i g g 保留在上清中7 5 5 ，活性保留率9 0 5 。“超滤浓缩o冷冻干燥e 3l g g 含量1 4 2 ( w ) ，纯度6 8 3 ，。喷雾干燥o得率7 1 9 ，活性保留率8 7 6 。o添加保护剂：i g g 含量为4 4 添加复合保护剂5 ：i g g 含量为( w w ) ，活性保留率8 5 1 ；4 9 ( w w ) ，活性保留率7 5 4 ；不添加保护剂：i g g 含量6 5 - 2 不添加热保护剂：i g g 含量为( w w ) ，活性保留率8 0 1 。6 5 1 ( w w ) ，活性保留率4 5 ：从猪血清i g g 分离制备工艺流程图中可以看到，干燥前i g g 样品的回收率为7 1 9 ，活性保留率为8 7 6 ，因此通过三氯化铁分离纯化、超滤浓缩可以得到猪血清中6 3 具有生物活性的i g g ，而产品中i g g 的含量和活性保留率的大小则取决于干燥方式和是否添加保护剂，这就需要根据具体生产要求进行选择。江南大学博士学位论文6 5 本章小结1 酸性条件下，部分血清蛋白的结构和构象发生变化，从而改变了它们在电泳时的泳动速度和条带位置，低p h 环境造成部分i g g 变性，并在其上方形成新的电泳条带。样品中i g g 含量和活性随着p h 值的下降而逐渐降低。2 d s c 扫描结果显示：i g g 热变性的温度范围为7 0 2 6 5 7 2 1 6 2 ，峰值7 1 ，吸热量为3 3 8 4 j 佗。中性条件下，i g g 在5 5 时开始有轻微变性，其变性速度随着温度的升高逐渐加快，7 5 保温3 0 m i 后l g g 全部失活。酸性条件下较低温度就会造成i g g 变性。从猪血清中分离提取j g g 时，样品的p h 值不应小于3 5 ，反应温度不宜高于5 0 。3 乳蛋白、寡糖、糖醇、氨基酸对l g g 均有热保护作用。将2 0 的脱脂乳粉、0 5 的甘氨酸和5 的麦芽糖混合后作为热保护剂可以有效地减少喷雾干燥时i g g 的变性损失。以海藻糖为保护剂可以减少i g g 冷冻干燥时的活性损失。4 干燥方式和是否添加保护剂决定了产品中i g g 的含量和活性保留率的高低，可以根据产品的具体要求选择合适的生产工艺。i l o第六章猪血清i g g 稳定性研究参考文献【l 】王重庆，分子免疫学基础，北京，北京大学出版社，1 9 9 7 。【2 】杨贵贞，医用免疫学，吉林，吉林人民出版社，1 9 8 0 。 3 】于善谦，免疫学导论，北京，高等教育出版社，1 9 9 9 ：4 1 5 1 。 4 】王璋等，食品化学，北京，中国轻工业出版社，1 9 9 9 ：1 4 0 1 4 8 。【5 】陶慰孙，李惟蛋白质分子基础，北京，人民教育出版社，1 9 8 0 。【6 】p a c k a r dv s ，h u m a nm i l ka n di n f a n tf 0 皿u l a ，a c a d e m i cp r e s s ，i n c ，n e wy o r k tn y ，1 9 9 2 7 】杨严俊，免疫球蛋白资源的开发及其在食品应用中的最新进展，天津，食品与发酵工业，1 9 9 7 ，2 3 ( 2 ) ：6 6 6 9 。【8 】郊建仙，功能性食品( 第三卷) ，北京，中国轻工业出版社，1 9 9 9 ：3 5 2 3 5 7 。 9 】蒋爱民主编，乳制品工艺及进展，西安，陕西科学技术出版社，1 9 9 6 。【1 0 】y 0 u n g - z 0 0 nk e ，j e o u n gs ，s i i ne ta l ，s e p a r a t i o no f i m m u n o g l o b u l i n sf r o mb 1 0 0 db yp o i y p h o s p h a t ep r e c i p i t a t i o na n dc h r o m a t o g r a p h y ，a m e r i c a nc h e m i c a ls o c i e t y ，1 9 8 8 ，5 2 ( 7 ) ：6 5 4 6 5 9 1 1 a n e ms g ，m c k e n n e a b ，r e a c t i o n n e t i c s o f t h e m a ld e n a t u r a t i o no f w h e yp r o t e i n s i n h e a t e dr e c o n s t i t u t e dw h o l em i l k ，j o u m a lo f a 鲥c u i t u r a lf o o dc h e m i s t r y ，1 9 9 6 ，4 4 ：4 2 2 4 2 8 【1 2 】f u k u m o t olr ，s t a b i l i t yo fm e m b n n c es t e m i z e db o v i n ei m m u n 0 9 1 0 b u l i n sa s e p t i c a l i ya d d e dt ou h tm i l k ，j f o o ds c i ，1 9 9 4 ，5 9 ：7 5 7 7 5 9 【1 3 】l i c h a ne ，k u m m e r a i s s oj n ，e ta l ，s t a b m t yo f b o v i n e i 姗u n o g l o b u l i n t o t h e 肿a l t r e a t m e n ta n dp m c e s s i n g ，f o o dr e s e a r c hi t e m a t i o n a l ，1 9 9 5 ，2 8 ：9 1 6 ，【1 4 】o o i z u m i t ，y a m a m u r a h ，h a s h i m o t o a ，t h e 皿a ld e n a t u r a t i o no f m y o f i b r i lp r o t e i no f a n t a r c t i cl la n dp m t e c t j v ee 如c to fs u g a r ，b u l j p s o c s c i f i s h ，1 9 8 2 ( 4 8 ) ：2 1 9 2 2 6 【1 5 u s t u n j lz ，s y p i e nc ，h e a ts t a b i l i t yo f b o v i n em j l kj m m u n o 百o b u l i n sa n di h e i ra b j l i t yt ob j n dl a c t o c o c c ia sd e t e 丌n i n e db ya ne u s a ，j f o o ds c i ，1 9 9 7 ，6 2 ：1 2 1 8 1 2 2 2 【1 6 】龙中儿，钟青萍，刘活林等，卵黄免疫球蛋白的稳定性研究，中国生物制品学杂志，1 9 9 7 ，l o ( 4 ) ：2 1 8 2 2 0 。【1 7 】罗永康等，猪血免疫球蛋白的热稳定性及动力学研究，中国农业大学学报，2 0 0 4 ，9 ( 5 ) ：6 7 7 0 。【1 8 张和平，郭军，李立民等，免疫乳中l g g 热变性动力学研究，中国乳品：i ：业，2 0 0 1 ，2 9 ( 4 ) ：4 8 。【1 9 1 郑海英，利用微胶囊化提高牛初乳免疫球蛋白稳定性的研究，哈尔滨，东北农业大学，2 0 0 1 。2 9 ( 4 ) ：4 8 。【2 0 】c 一c ，c h e n ，y - y ，t u ，a i l dh 一m ，c h a n g ，t h e 衄a ls t a b n i t yo f b o v i n em i l ki m m u n o g l o b u l i g( 1 9 g ) a n d i h ee 雠c to fa d d e d t h e m a lp r o t e c t a n t so n t h es t a b i i i t y ，j f o o ds c i ，2 0 0 0 ，6 5 ( 2 ) ：1 8 8 1 9 3 江南大学博士学位论文【2 1 】【2 2 】【2 3 2 4 】【2 5 】 2 6 】【2 7 】【2 8 】【2 9 】【3 0 】f 3 1 】f 3 2 】c h a o c h e n gc h e na n dh u n g - m i nc h a n g ，e 骶c to ft h e 丌n a lp r o t e c t a n t so nt h es t a b i l i t yo f b o v i i l em n ki m m u n o g l o b u l i ng ，j a f i c f b o dc h e m ，1 9 9 8 ( 4 6 ) ：3 5 7 0 3 5 7 6 张意静主编，食品分析技术，北京，中国轻工业出版社，2 0 0 l 。易薇，胡一桥，差示扫描量热法在蛋白质热变性研究中的应_ j ，中国药学杂志，2 0 0 4 ，6 ( 3 9 ) ：4 0 1 4 0 3 。周理红，许梓荣，酶的失活机理及稳定化技术，浙江畜牧兽医，2 0 0 4 ，6 ：7 8 。罗贵民，酶的稳定化研究进展，生物化学与生物物理进展，1 9 9 2 ，1 9 ( 2 ) ：8 8 5 8 9 1 。陈兵，钱玉英，论饲州酶的稳定化，中国饲料，1 9 9 3 ，( 4 ) ：2 7 2 8 。h j r a n os ，m i h a r ak ，y a m a z a 虹y ，e ta l ，r o i eo f c t e r i i l i n a lr e g i o no fs t a p h y l o c o c c a ln u c l e a s ef o rf o l da b i l i t y ，s t a b i l i t y ，a n da c i i v i t y ，p r o t e i n ，2 0 0 2 ，4 9 ( 2 ) ：2 5 5 2 6 3 y a m a g a t ay ，m e a d ah ，n a k a j i m at ，e ta l ，t h em o l e c u l a rs u r f a c eo f p r o t e o l y t i ce n z y m e sh a sa ni m p o r t a n if o l ei ns t a b i l i t yo f l h ee n z y m a t i ca c t i v “yi ne x t r a o r d i n 8 r ye n v i r o n m e n t s ，e u lj b i o c h e m 2 0 0 2 ，2 6 9 ( 1 8 ) ：4 5 7 7 4 5 8 6 秦华明，宗敏华，梁世中糖在蛋白质药物冷冻干燥过程中保护作用的分子机制，广东药学院学报，2 0 0 1 ，1 7 ( 4 ) ：3 0 5 3 0 7 。姚祖华李亦德，生物制品的冻干及保护剂的应用，中国微生物学杂志，1 9 9 7 ，9 ( 6 ) ：4 8 5 2 。孙东坡，胡一桥，蛋白质冷冻干燥制品中的保护剂及其保护机制，药学进展，2 0 0 3 ，2 7 ( 4 ) ：2 0 l 2 0 5 。罗永康，周新华，鲢鱼蛋白质低温变性保护荆的研究，肉类研究，1 9 9 5 ，4 ：1 5 1 9 。1 1 2论文主要结论及展望论文主要结论及展望1 、建立了非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳定性定量检测i g g 的方法：在胶浓度1 l ，分离胶d h 值9 5 ，提高电泳电流强度并延长电泳时间，相应地改变电泳的具体操作步骤的基础上，i g g 能够电泳成一条清晰的条带。在同一电泳胶板上，培g 上样量为1 5 4 靴g 时，定量结果与上样量呈线性关系，其变异系数小于5 ，并通过添加内标的办法消除板间差异。2 、对直接酶联免疫吸附法测定i g g 滑陛进行了考察与优化：在选择合适酶标抗体稀释度的基础上，纯i g g 包被量在1 0 6 0 n g ，血清i g g 包被量在1 0 4 0 n g 时，吸光度与样品包被量之间有非常好的线性关系，因此最适i g g 包被量为2 0 4 0 n g 。直接酶联免疫吸附测定i g g 时酶标板内与酶标板间变异系数均小于5 ，测定结果准确可靠。3 、1 0 倍稀释猪血清白蛋白硫酸铵沉淀分离的最佳方法为：d h 值7 4 时，调节硫酸铵饱和度达到5 0 ，离心除去沉淀，用1 柠檬酸调节上清液p h 值到4 5 ，加入硫酸铵使饱和度升至5 5 ，沉淀所得白蛋白纯度为7 7 9 ，回收率6 2 。4 、1 0 倍稀释猪血清i g g 硫酸铵沉淀最佳试验参数为：p h 值7 4 ，硫酸铵饱和度为3 7 。此时i g g 回收率为8 0 5 ，纯度为7 2 9 。将硫酸铵盐析和d e a e 一纤维素5 2 离子交换结合起来进行分离纯化，可以得到纯度大于9 7 、活性保留率为9 4 的猪血清i g g 。d e 一5 2 阶段洗脱时，第1 、2 吸收峰所对应的蛋白质为猪i g g 。5 、多聚磷酸盐沉淀法分离猪血清i g g 的最佳工艺参数为：多聚磷酸盐浓度0 1 ( w v ) ，p h 值3 9 ，反应温度4 5 ，此条件下i g g 的回收率与纯度分别为6 0 9 和6 4 5 ，活性保留率为8 7 3 。分离猪血清样品所得蛋白质中除了i g g 、y 球蛋白、白蛋白和少量其它血清蛋白，还有部分由血清蛋白通过多聚磷酸盐形成的聚合物。6 、f e c l 3 分离猪血清i g g 最佳工艺参数为：f e c l 3 浓度4 5 m m o l ，l ，温度4 0 ，p h 值4 5 ，此条件下i g g 的纯度为7 1 7 ，回收率为7 5 5 ，活性保留率约为9 0 5 。所得到的产品中蛋白质主要为i g g ，其余部分大多为y 球蛋白。f e c l 3 分离猪血清i g g 的工艺操作简便，过程温和，分离效果好，安全可靠，具有很高的实用性，可以用于食品用i g g 的工业化生产。7 、选择螺旋卷式超滤设备，以截留液全循环错流方式进行超滤浓缩，超滤膜为截留分子量1 0 ，0 0 0 的p e s 膜，对于样品中的蛋白质截留率可达1 0 0 。超滤浓缩的最佳工艺条件为：样品p h 值为7 ，温度5 0 ，超滤压力0 1 m p a ，浓缩倍数为1 0 倍。浓缩后得到的样品中蛋白质含量为2 0 8 ( w v ) ，i g g 含量为1 4 2 ( w v ) ，具有活性的1 2 g 所占比例比超滤前略有下降，从9 1 3 降低到8 7 6 。8 、酸性条件下，部分血清蛋白的结构和构象发生变化，从而改变了它们在电泳时的泳动速度和条带位置，低p h 环境造成部分l g g 变性，并在其上方形成新的电泳条带。样品中i g g 含量和活性随着p h 值的下降而逐渐降低。9 、i g g 热变性的温度范围为7 0 2 6 5 7 2 1 6 2 ，峰值7 l ，吸热量为3 3 8 4 j 值。中性条江南大学博士学位论文件下，1 2 g 在5 5 时开始有轻微变性，其变性速度随着温度的升高逐渐加快，7 5 保温3 0 m i n 后i g g 全部失活。酸性条件下较低温度就会造成i g g 变性。从猪血清中分离提取l g g 时，样品的p h 值不应小于3 5 ，反应温度不宜高于5 0 。1 0 、乳蛋白、寡糖、糖醇、氨基酸对1 2 g 均有热保护作用。将2 0 的脱脂乳粉、0 5 的甘氨酸和5 的麦芽糖混合后作为热保护剂可以有效地减少喷雾干燥时i g g 的变性损失。以海藻糖为保护剂可以减少1 2 g 冷冻干燥时的活性损失。干燥方式和是否添加保护剂决定了产品中1 2 g 的含量和活性保留率的高低，可以根据产品的具体要求选择合适的生产工艺。我国猪血资源十分丰富，目前并未得到充分利用，大量猪血甚至被直接排放，造成环境污染。如何实现猪血的“变废为宝”是目前食品科研人员面对的重要课题，在这方面也作了大量的研究工作，提出了种种方案：除了对猪血中血浆蛋白和血红蛋白进行水解，作用人或者牲畜的营养强化剂以外，对于血浆中的免疫球蛋白、运铁蛋白、溶菌酶、凝血酶和红血球中的s o d 、血红素等功能性成分的利用也均有报道，但这些研究往往缺乏系统性，只对猪血资源进行了部分利用，其提取工艺甚至会对其它蛋白造成破坏：如提取s o d 时要加热到7 5 ，以便沉淀除去其它血红蛋白：提取血红素时要用到有机溶剂。因此，改进猪血功能成分的提取工艺以及选择合适的分离顺序是全面、充分利用猪血资源的关键。本论文就是对血清中i g g 的提取