临床感染性疾病实验诊断PPT课件.ppt

1,临床感染性疾病的实验诊断要求邢志广新乡医学院第二附属医院,2,临床感染性疾病实验诊断的要求,临床细菌实验室的任务：是从临床感染标本中分离出病原菌并进行准确鉴定，同时指导临床合理使用抗菌药物，为临床感染性疾病的诊断、治疗、预后和流行病学调查以及医院内感染的监控提供可靠的依据,3,一诊断对象和诊断目的,病原菌的临床变迁：感染性疾病病原菌的种类不断发生变迁，过去威胁人类的传染病如鼠疫、霍乱、白喉等己明显减少，相反，由条件致病菌引起的内源性感染却明显增多。新的病原菌不断出现，原有的病原菌因变异、耐药等又重新流行。目前，医院临床实验室遇到的主要是条件致病菌，它们在机体抵抗力下降，菌群失调或天然屏障防御功能被破坏时引起感染。,4,一诊断对象和诊断目的,正常菌群与病原菌的致病性正常菌群与病原菌的致病性差异是相对的，既不要轻易认为从病人标本中分离出的非致病菌是污染菌，也不要轻易认为所发现的细菌就是该感染的病原菌，根据临床症状和标本来源有助于病原菌的正确诊断。机体的某些部位是无菌的，如检到细菌即可视为病原菌，如血液，脑脊液，骨髓等。对于存在正常菌群的部位，应区别标本中是致病菌还是常居菌群的污染，如痰标本。,5,诊断对象和诊断目的,临床分离病原菌的鉴定水平一种细菌鉴定到哪一水平，取决于诊断的目的1.以疾病的病原学诊断为目的一般情况下只需鉴定到细菌的种2.为提供治疗方案为目的1）可以进行临床标本的直接药物敏感试验2）还可根据分离出病原菌种类直接提供选择抗生素范围和种类3）不少细菌对某种药物有天然耐药性.由于细菌耐药性的产生及变迁,临床上对分离的病原菌都要作进一步的药敏试验,以期提供更可靠的治疗方案.3.以作流行病学研究为目的必须对病原菌鉴定到型(血清型或基因型)的水平.只有这样才能明确传染源的所在.4.了解细菌与感染的关系为目的一种类型的感染可以由不同种细菌引起,一种细菌也可以引起多种类型的感染.现己知以前那些曾经被认为不致病的细菌在某些情况下会引起人体的感染.要了解这些细菌的致病菌性,必须进行细致的鉴定.,6,二诊断试验选择,鉴定一个细菌,尽可能用一个菌落做全部鉴定试验.如果一个菌落不够应考虑采用纯培养,即挑取单个菌落接种于斜面培养基,经过培养即可获得大量纯培养物.对一株细菌准确鉴定应综合多种特性进行分析.但临床实验室每天要处理大量标本,且由于经济原因不可能做很多试验,进行全面分析鉴定,因而需要选择一些合理的试验项目用于常规检测.挑选试验应以既能完成病原学鉴定又使试验项目尽可能少而快速为原则.,7,二诊断试验选择,1.选择有鉴定价值的试验要对两种细菌进行鉴别,须选择一项两种菌呈现绝然不同结果的试验,即一种菌呈现阳性(阳性反应菌株阳性率须大于90%),另一菌为阴性(阴性反应的菌株阳性率应小于10%),这项试验才有鉴定价值.否则,就没有鉴定价值.2.选择简易、快速、方便的试验(1)鉴定一种细菌可能有多种特异的方法,没必要逐一进行试验,只选其中一或两种达到目的即可,多选无意义.(2)选择操作简便,快速的方法.(3)选用复合培养基,一次操作可同时看几个生化反应.如此可简化操作,节约人力物力.3.综合考虑试验的敏感性和特异性敏感性=所有阳性结果数/所有感染病人数,试验敏感性越高,假阴性结果就越少.特异性=阴性结果总数/未感染病人总数,特异性越高,假阳性结果越少.试验一敏感性和特异性是相互联系的,试验的敏感性增加,会使特异性下降,反之亦然.,8,三常用诊断流程,完成一个细菌鉴定要做多项试验,将结果与己知细菌特性进行比较,才能最后确定.在选择试验项目以及分析试验结果时应遵循一个合理且思路清晰完整的思维模式,避免不必要的重复,少走弯路.在临床细菌鉴定中常借用一些简便的流程和方法.,9,三常用诊断流程,1双歧索引细菌的鉴定中经常选用的方法.主要针对那些相互区别比较容易,有较特殊特征的细菌.双歧索引是表明鉴定思路的一种流程,使用起来非常方便.如革兰阴性杆菌初步分群的鉴定流程.革兰阴性杆菌+葡萄糖发酵氧化酶非发酵菌+弧菌科肠杆菌科,10,三常用诊断流程,革兰阳性球菌双岐索引鉴定,11,三常用诊断流程,微球菌科双岐索引鉴定,12,三常用诊断流程,葡萄球菌属双岐索引鉴定,13,三常用诊断流程,链球菌属的双岐索引鉴定,14,三常用诊断流程,奈瑟氏菌属、布兰汉菌属的双岐索引鉴定革兰氏阴性球菌氧化酶+DNA酶+-布兰汉氏菌属营养琼脂上生长+-其他奈瑟氏菌麦芽糖+-脑膜炎奈瑟氏菌淋病奈瑟氏菌,15,三常用诊断流程,常见菌的初步分群双岐索引鉴定临床分离菌革兰染色+-球菌杆菌球菌杆菌触酶动力DNA酶发酵+-+-+-+-微链李棒卡奈氧化酶非球球斯状他氏+-发菌菌特菌布菌弧肠酵科科菌菌兰菌菌菌属等汉科科,16,三常用诊断流程,2表解法将各种细菌及其多种特性列成矩阵表格，使相互的区别点十分明显，便于分析比较此法对于相互区别比较复杂的细菌，如肠杆菌科的初步分属肠杆菌科初步分属试验埃希菌属沙门菌属克雷伯菌属变形杆菌属靛基质枸椽酸盐硫化氢葡萄糖酸盐苯丙氨酸,17,三常用诊断流程,3数字编码鉴定法编码是即将所得生化反应模式转化成数学模式，可以把某一细菌的全部生化反应结果转化成数字，经查阅检索手册又可将该数字转化成细菌名称编码的原则是：鉴定细菌的各种微量生化反应管组成系列试剂，将生化项目排序并依次进行分组，每组中的每个试验都有其一个数值代码试验阳性时结果用其数值代码表示，试验阴性时结果用0表示，将每组中各试验结果加起来得一总值，这样按顺序各组总值组成的数码组合，即为检索编码查编码手册，该编码所对应的细菌名称即为鉴定结果如肠杆菌科细菌生化编码鉴定,18,肠杆菌科细菌生化编码鉴定表,组别试验项目代码结果结果代码总值硫化氢1苯丙氨酸葡糖酸盐靛基质甲基红枸橼酸盐尿素动力产气赖氨酸鸟氨酸棉子糖山梨醇侧金花醇木胶糖,19,三常用诊断流程,3数字