（食品科学专业论文）海产动物来源n3PUFA磷脂的提取及生物活性研究.pdf

海产动物来源n - 3 p u f a 磷脂的提取及生物活性研究 摘要 目前我国水产品产量已占世界总产量的三分之一左右，位居世界第一位，但 加工和综合利用方面与世界水平相比差距还十分明显。近年来，我国水产加工业 的产业结构正逐步发生变化，由过去的初步加工、粗加工向精深加工方向发展， 且追求多样化、系列化和高附加值的产品。 太平洋牡蛎( c r a s s o s t r e a g i g a s ) 产量每年居于我国养殖贝类前列，却尚无 好的精深加工利用方式；加工后得到的虾夷扇贝( p a t i n o p e c t e n y e s s o e n s i s ) 生殖 腺、鸢乌贼( s t h e n o t e u t h i so u a l a n i e n s i s ) 卵和阿拉斯加狭鳕( t h e r a g r a c h a t c o g r a m m a ) 鱼卵目前也得不到充分的综合利用。如何充分挖掘这类海产动物 原料的价值，提高其综合利用率，得到高附加值，高科技含量的产品，一直是亟 待解决的问题。海产动物中富含e p a ( 二十碳五烯酸) 、d h a ( 二十二碳六烯酸) 等n - 3 系列不饱和脂肪酸( n 3p u f a ) ，贝类和鱼卵又是含丰富磷脂的原料，因 而从上述海产动物原料中开发n - 3p u f a 磷脂是一个很值得研究的方向。 首先本文以太平洋牡蛎、虾夷扇贝生殖腺、鸢乌贼卵和阿拉斯加狭鳕鱼卵等 海产动物原料为研究对象，提取其中的总脂肪，分析其中的脂质组成和总胆固醇 含量，检测各脂质中的脂肪酸组成，并建立了对于海产动物来源磷脂的灵敏、精 确的h p l c e l s d 检测分析方法。发现鸢乌贼卵、鳕鱼卵磷脂中含大量p c ，论 证了以两者为原料，大量获取以d h a p c 、e p a p c 为主要功能成分的d h a e p a 磷脂的提取工艺的可行性。 其次，采用鸢卵粉为原料，用超临界c 0 2 萃取工艺对其中胆固醇进行脱除 后用乙醇浸提，并将工艺进行了优化和放大实验，最后得到的提取工艺提取效果 好，得到的磷脂产物产量高，纯度好，胆固醇含量低，而且整个工艺过程无任何 有毒有害的溶剂残留或污染，绿色环保，有着较高的生产应用价值。对得到的 d h a 磷脂产物分析，发现其磷脂含量达8 5 以上，p c 含量达6 0 以上，脂肪酸 组成中d h a 含量达3 0 以上。 再次，对d h a 磷脂产物中的p c 的脂肪酸组成情况进行了分析，发现d h a 含 量达4 0 ，证明其中富含d h a p c ；利用磷脂酶a l 对d h a - p c 进行酶法降解得到 2 - d h a l p c 产物，其脂肪酸组成中d h a 含量达5 0 ，证明d h a p c 中的d h a 以结 合在s n 2 上为主，即以2 d h a p c 为主。 最后，将d h a 磷脂产物制成脂质体，采用灌胃荷s 1 8 0 肉瘤小鼠的方法研究了 其抗肿瘤活性及对免疫功能的调节作用。实验结果表明d h a 磷脂脂质体具有抑 制肿瘤生长的作用，而且能全面调节机体的特异性和非特异性免疫功能。推测其 通过增强t 细胞、b 细胞和巨噬细胞等的功能以抑制肿瘤细胞的生长。分析认为 d h a 磷脂脂质体提高机体的免疫能力和其抗肿瘤作用主要是通过p c 和d h a 两种 活性物质来实现的，并且克服了d h a 单独存在时易被氧化的缺点，制备成脂质体 的形式显现更好的生理活性。2 - d h a p c 为主要功能成分的d h a 磷脂具有广阔的医 药和保健品的开发前景。 关键词：海产动物；磷脂；提取；d h a - p c ；生物活性 s t u d yo ne x t r a c t i o na n db i o a c t i v i t yo f n 一3 p u f ap h o s p h oi ipid sf r o mm a rir ea nim ais a b s tr a c t i ti sw e l lk n o w n 蛳埘a 】由a n i m a l sh a v el a r g ea m o t m t so fn - 3p o l y u n s a t u r a t e df a t t y a c i d s ( p u f a ) s u c ha se i c o s a p e n t a e n o i ca c i d ( e p a ) a n dd o c o s a h e x a e n o i ca c i df o i - 认) i ti sa l s ok n o w nt h a ts h e l l f i s ha n df i s hr o ec o n t a i nl a r g ep r o p o r t i o n so fp h o s p h o l i p i d s i nt o t a ll i p i d s i nr e c e n ty e a r s ，p h o s p h o l i p i d sr i c hi nn - 3p u f a ( n - 3p u f a - p l ) a r e f o u n dt oh a v em a n yn o v e lf u n c t i o n so t h e rt h a nt h ef u n c t i o n a l i t i e so fp u f a o y s t e rc r a s s o s t r e ag i g a sa n ds c a l l o pp a t i n o p e c t e ny e s s o e n s i s , a st w ok i n d so ft h e m o s ti m p o r t a n te c o n o m i cb i v a l v e si nc h i n a , n o wa r ew i d e l yc u l t u r e d t h ep r o d u c t so f o y s t e ra n ds c a l l o pa r eu s u a l l yv e r ys i m p l ea n dh a v el o wv a l u e s q u i ds t h e n o t e u t h i s o u a l a n i e n s i si st h o u g h tt ob et h em o s ta b u n d a n tl a r g es q u i di nt h et r o p i c a la n d s u b t r o p i c a lw a t e r s o ft h ei n d o p a c i f i c r e g i o na n da l a s k ap o l l o c k ( t h e r a g r a c h a t c o g r a m m a ) i so f t e np r o c e s s e di nf a c t o r i e so fq i n g d a ot og e tt h em e a tp r o d u c t h o w e v e rd u r i n gt h ep r o c e s s i n g ，t h eg o n a d sf r o ms c a l l o p ，e g g sf r o ms q u i da n dr o e f r o mp o l l o c ka r eu s u r y p i c k e do u ta n dh a v en og o o dw a y sf o rf u r t h e rn s e i nt h i sp a p e rm e a tf r o mo y s t e rc r a s s o s t r e ag i g a s ，g o n a d sf r o ms c a l l o pp a t i n o p e c t e n y e s s o e n s i s ，e g g sf r o ms q u i ds t h e n o t e u t h i so u a l a n i e n s i sa n dr o ef r o ma l a s k ap o l l o c k w e r ed e t e c t e da sm a t e r i a l st os e ei ft h e ya r eg o o ds o u r c e so fn 一3p u f a _ p l f i r s t ，t o t a l l i p i d sw e r ee x t r a c t e df r o mt h em a t e r i a l so fm a r i n ea n i m a l sa n ds e p a r a t e d i n t on e u t r a ll i p i d s ，g l y c o l i p i d sa n d p h o s p h o l i p i d 。f a t t ya c i dc o m p o s i t i o n so ft h el i p i d s w e r ea s s e s s e da n dc o m p a r e d ah i g h - p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p he q u i p p e d w i t ha l le v a p o r a t i v el i g h ts c a t t e r i n gd e t e c t o r ( e l s d ) ( h p l c e l s d ) w a sa l s ou s e dt o a s s a y t h ep h o s p h o l i p i d c o m p o s i t i o n so ft h em a t e r i a l s t h ea n a l y s i so ft h e p h o s p h o l i p i d sb yh p l c e l s dw a ss h o w nt ob ea na c c u r a t ea n dr e p r o d u c i b l e a n a l y t i c a l m e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no f c a r d i o l i p i n( c l ) ， p h o s p h a t i d y l e t h a n o l a m i n e ( p e ) ，p h o s p h a t i d y l i n o s i t o l ( p i ) ，p h o s p h a t i d y l s e r i n e ( p s ) ， p h o s p h a t i d y l c h o l i n e ( p c ) ，s p h i n g o m y e l i n ( s m ) a n dl y s o p h o s p h a t i d y l c h o l i n e ( l p c ) i tw a sf o u n dt h a tp cw a st h em o s tp r e d o m i n a n tp li np o l l a c kr o ea n ds q u i de g g b o t h p ca n dp ew e r et h em a i np li ns c a l l o po v a r ya n ds p e r m a r ya n do y s t e rm e a t i tc o u l d b es e e nt h a tt h ee g g g o n a df r o mm a r i n ef i s ha n ds h e l l f i s hw e r er i c hi np lo fd i f f e r e n t t y p e s a sar e s u l t , a l lt h em a t e r i a l sh a v el a r g ea m o u n t so fe p aa n dd h ai n p h o s p h o l i p i d sa n de s p e c i a l l yt h ep o l l o c kr o ea n ds q u i de g g sc o n t a i n e dl a r g ea m o u n t s o fn - 3p ir f a p c s e c o n d l y ，s q u i de g g sw e r ep r o c e s s e di n t op o w d e r s t h es q u i d e g gp o w d e rw a s e x t r a c t e df i r s tb ys u p e r c r i t i c a lc a r b o nd i o x i d e ( s c - c 0 2 ) t or e m o v et h ec h o l e s t e r o la n d t h e ne t h a n o lt og e tt h ep h o s p h o l i p i d sp r o d u c t t h et e c h n o l o g yo fu s i n gb o n ls c c 0 2 a n de t h a n o lf o re x t r a c t i o nw a sp r o v e dt ob ep r a c t i c a la n de f f e c t i v ea n dh a dn o p o l l u t i o n o fp o i s o n o u s o r g a n i c s o l v e n t a n a l y s i s r e s u l ts h o w e dt h a tt h e p h o s p h o l i p i d sp r o d u c t ( m o r et h a n8 5 o fp h o s p h o l i p i d s ) c o n t a i n e do v e r6 0 o fp c i nw e i g h ta n do v e r3 0m 0 1 o fd h ai nf a t t ya c i d s n e x t ，t h ep co fd h a - p lp r o d u c tw a sa n a l y z e dt og e tt h ef a t t ya c i dc o m p o s i t i o n m o r et h a n4 0m 0 1 o fd h aw a sf o u n di np c p h o s p h o l i p a s ea 1w a su s e dt oa c tw i t h t h ep co fd h a p lp r o d u c ta n dt oh y d r o l y z et h ef a t t ya c i d sa ts n - 1p o s i t i o na n dg e t t h es n 2 - a c e t y l a t e dl p c t h ef a t t ya c i d sc o m p o s i t i o no ft h es n 2 - a c e t y l a t e dl p cw a s d e t e r m i n e da n do v e r5 0m 0 1 o fd h aw a sf o u n d t oi n v e s t i g a t et h ee f f e c t so ft h ed h a - p cl i p o s o m e so na n t i t u m o ra n di m m u n e r e g u l a t i o n d h a - p lp r o d u c tw a sm a d ea su n i l a y e rl i p o s o m e s d i f f e r e n td o s a g eo f d h a - p ll i p o s o m e sw e r eg i v e nt ot r a n s p l a n t e dt u l n o r b e a r i n gm i c er e s p e c t i v e l y t h e t u m o rw e i g h t 、s p l e e n b w ，t h y m u s b w ，h e m o l y s i nc o n t e n t ，d t ha n dt h e p h a g o c y t o s i sa b i l i t yo fp e r i t o n e a lm a c r o p h a g ew e r em e a s l l r e dr e s p e c t i v e l y r e s u l t s s h o w e dt h a te a c hd o s a g eo fd h a - p ll i p o s o m e sc o u l di n h i b i tt h eg r o w t ho ft u m o ri n s18 0b e a r i n gm i c ea n dt h ea v e r a g eo ft u m o r - i n h i b i t o r yr a t ew a s3 6 8 7 f u r t h e r m o r e t h e yc o u l de n h a n c es p l e e n b 。w ( p o 0 5 ) ；i n c r e a s eh e m o l y s i nc o n t e n to b v i o u s l l y ( p 0 0 5 ，p 0 0 1 ) ；h e i g h t e nd e l a y e da l l e r g i cl e v e l ( p o 0 5 ，p 0 0 1 ) ；p r o m o t e t h e p h a g o c y t o s i sa b i l i t yo fp e r i t o n e a lm a c r o p h a g e ( p 0 oi ) t h e ni tw a sc o n c l u d e dt h a t d h a p ll i p o s o m e sc a l lr e g u l a t eb o t hs p e c i f i ca n dn o n - s p e c i f i ci m m u l l ef u n c t i o n , i n h i b i tt h eg r o w t ho ft u m o rc e l l s k e y w o r d s ：m a r i n ea n i m a l ；p h o s p h o l i p i d s ；e x t r a c t i o n ；p h o s p h a t i d y 7 i c h o l i n er i c h i nd o c o s a h e x a e n o i ca c i d ( i ) r i a - p c ) ；b i o a c t i v i t y 中国海洋大学博士论文 本文所用缩略语 c l ( c a r d i o l i p i n ) d h a ( d o c o s a h e x a e n o i ca c i d ) e l s d ( e v a p o r a t el i g h t - s c a t t e r i n gd e t e c t o r ) e p a ( e i c o s a p e n t a e n o i ca c i d ) g c ( g a sc h r o m a t o g r a p h y ) h p l c ( h i 曲p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a m ) m s ( m a s ss p e c t r o m e t e r ) l p c ( l y s o p h o s p h a t i d y l c h o l i n e ) p u f a ( p o l y u n s a t u r a t e df a t t ya c i d ) p a ( p h o s p h a t i d i ca c i d ) p c ( p h o s p h a t i d y l c h o l i n e ) p e ( p h o s p h a t i d y l e t h a n i l a m i n e ) p g ( p h o s p h a t i d y i g l y c e r 0 1 ) p i ( p h o s p h a t i d y 7 l i n o i t i d e ) p s ( p h o s p h a t i d y l s e r i n e ) s m ( s p h i n g o m y e l i n ) 2 d h a p c 1 3 9 二磷脂酰甘油心磷脂 二十二碳六烯酸 蒸发光散射检测器 二十碳五烯酸 气相色谱 高效液相色谱 质谱仪 溶血型磷脂酰胆碱 多不饱和脂肪酸 磷脂酸 磷脂酰胆碱 磷脂酰乙醇胺 磷脂酰甘油 磷脂酰肌醇 磷脂酰丝氨 鞘氨醇磷脂 s n 2 位结合d h a 的p c 独创声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得 ( 注! 垫逵查墓丝盂薹壁剔直阻数! 奎拦豆窒2 或其他教育机构的学位或证书使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 均 签字日期：汐昭年月乙日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人 授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息 研究所将本学位论文收录到中国学位论文全文数据库，并通过网络向社会公 众提供信息服务。( 保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：导师签字： 殳以3 ， 中国海洋大学博士论文 上j 一 刖吾 近2 0 年来，世界水产品总量一直保持持续增长趋势，总产量已超过1 3 亿t ，然 而每年因变质丢弃的水产品约占1 0 ，还有约3 0 的低值水产品被加工成动物饲 料，真正提供人类食用的水产品并不富裕。就我国而言，近几年来海洋中上层鱼类 和低值鱼、虾、蟹类、贝类、藻类等的产量呈上升趋势，而我国对这些大量、低 值水产品的加工利用甚少，鲜销又供大于求，严重制约了生产的发展。加强对这类 生物资源加工技术的研究，提高其利用价值和附加值是2 1 世纪我们面临的迫切任 务f 。 据农业部发布数据，2 0 0 7 年1 - 1 1 月份我国全国水产品产量4 5 3 8 0 万吨，比上 年同期增长4 5 。其中海洋捕捞产品产量1 3 0 2 5 3 万吨，增长1 3 0 ；海水养殖产 品产量1 2 11 2 3 万吨，增长3 2 5 。目前我国水产品产量已占世界总产量的三分之 一左右，位居世界第一位，但加工和综合利用方面与世界水平相比差距还十分明 显。 我国作为渔业大国，水产加工业相对落后，体现在水产加工品的科技含量低； 水产品加工的技术装备落后；水产品加工标准、法规、质量体系还不尽完善；海 洋药物技术体系不尽完善；开发的海洋生物资源领域狭窄等发展现状( 2 】。 由于缺乏综合加工利用技术的深入研究，目前低值鱼类及水产副产品主要 用于生产鱼粉等低附加值产品，甚至部分作为废物直接丢弃，不仅导致资源浪 费、产品附加值低，而且造成海洋、陆地环境的严重污染。我国水产加工品占水 产品总产量的比例仅为3 0 7 ，远远落后于发达国家7 0 以上的水平，而且初级产 品多，深加工、精加工产品少，尤其是大宗、低值水产品，如淡水鱼、中上层鱼 类和贝藻类的加工仍是薄弱环节【3 】。 2 0 0 2 年我国农业部制定的全国主要农产品加工业发展规划明确指出，今 后，水产品生产和加工要以大宗产品、低值产品和废弃物的精深加工和综合利用 为重点，优化产品结构，推进淡水鱼、贝类、中上层鱼类、藻类加工产业体系的 建立，向高综合利用率、高附加值，高科技含量，高市场占有率的“四高”产品 发展【3 】。其中低值水产品是一个相对概念，包括两种类型的水产品，一种是小鱼 中国海洋大学博士论文 毛虾等价值或价格较低的捕捞渔获物；另一种是在对传统经济水产品进行加工时 产生的下脚料等价值较低的部分。与传统经济水产品相比，低值水产品具有价格 低、营养也相当丰富、加工出产率高等特点【4 1 。 近年来，我国水产加工业的产业结构正逐步发生变化，由过去的初步加工、 粗加工向精深加工方向发展，且追求多样化、系列化和高附加值的产品【2 】。 当前国内外水产品加工的发展趋势有5 个方面【3 】：一、加快低值水产品的综 合开发利用：二、开发合成水产食品；三、开发水产保健食品；四、提高优质水 产品深加工的品位和档次；五、开发新型水产饮料食品和调味品。 水产保健食品在国际上发展相当迅速，已经逐渐成为当今世界食品工业发展 的新潮流。从产品结构来看，多数产品具有较明确的目标消费者和对人体有效的 生理功能。许多产品具有较明确的生理活性物质或功能因子，并对这些活性物质 的理化性质和作用机制等进行了深入的研究。从生理活性物质的研究出发，或从 特定消费者的特殊要求出发，指导开发新型的保健食品，这是保健品的发展方向。 在某些领域，如延缓衰老、抗肿瘤、减肥、降低血糖、抗疲劳和增强免疫力等方 面的保健食品的开发和生产已成为食品行业的重要组成部分。我国在水产保健食 品的研究方面尚处于起步阶段，研究开发还远远不够，与世界水产第一大国的身 份极不相称。因此，研究开发适合中国国情的水产保健食品是摆在我们面前的一 项艰巨而意义深远的工作【5 】。 水产品作为保健食品的市场前景广阔，低值水产品可以借此良机，加大开发 力度，充分利用丰富的资源，不断开发新产品【5 】。 o 1 海产动物来源脂质研究现状 海产品油脂中含有大量有益于人类健康的药用活性成分，具有降血脂、降血 压、抗癌等多种独特功能【l 】。海水鱼的脂肪中含有大量的多不饱和脂肪酸( p u f a ) ， 其中e p a ( 二十碳五烯酸) 、d h a ( 二十二碳六烯酸) 等n 一3 系列多不饱和脂肪酸( n 一3 p u f a ，也称( i ) 一3 系列多不饱和脂肪酸、- 3p u f a ) ，对预防心脑血管疾病、健脑、 增强记忆力、视力和增强人体免疫功能有着显著的功效【7 】。研究表明，d h a 是动 物大脑发育与功能维持的必需物质，也是视网膜功能作用所必需物质，具有“增 智保视”的作用。e p a 具有降低血液胆固醇和甘油三酯的作用，以及抗血小板凝 2 中国海洋大学博士论文 固和扩张血管的作用。因此，鱼油的加工利用是近年的研究热点【3 】。人们应用 油脂加工新技术，如分子蒸馏技术可将鱼油加工成去腥、脱色、提纯的精制鱼油； 也有利用微胶囊新技术进行包埋，加工成保健型的粉末油脂，或利用超临界等新 技术手段从鱼油中分离纯化出d h a 和e p a ，加工成各种功能保健食品【8 】。 目前水产品油脂的研究大多集中在以鱼类为原料获得的油脂上，而对其他水 产品原料来源油脂的研究相对较少【1 1 。 贝类原料中n - 3 系列p u f a 含量相当丰富，可达总脂肪酸含量的4 5 ，而且富含 磷脂成分【6 】。因而在开发贝类功能性油脂尤其是富含p u f a 的磷脂方面具有广阔前 景。国内外学者对贝类脂肪特别是磷脂成分及脂肪酸组成情况进行了大量研究工 作。 l i n e h a n 等【7 j 对养殖太平洋牡蛎( c r a s s o s t r e ag i g a s ) 的化学成分和脂肪酸组成 进行了连续1 3 个月的分析和比较，发现其总脂肪含量( 每l o o g 干物质) 在7 8 - 8 7 之间，脂肪酸组成中e p a 和d h a 含量都在1 0 - 1 5 左右波动。劳邦盛等【8 谰加了改性 剂的超临界二氧化碳萃取新冷冻干燥的牡蛎粉4 0 m i n ，测得脂肪的质量分数为 1 1 5 ，气相色谱一质谱法( g c m s ) 分析了粉中的2 3 种脂肪酸组分的质量分数， 发现d h a 和e p a 约占脂肪酸总量的1 4 。而放置9 0 d 后，牡蛎粉脂肪酸中e p a 由原来的 1 6 9 4 9 6 降至5 4 3 ，d h a 由9 2 5 9 6 降至2 8 6 。m a r c e li n a 等例对牡蛎( o s t e r e a e d u l i s ) 的脂肪种类及脂肪酸组成进行了1 6 个月的检测分析，发现其磷脂含量较 高，约占总脂的3 0 ；甘油三酯和磷脂中都富含p u f a 。张强【l o j 测定了扇贝真空干 燥粉中脂肪含量和脂肪酸组成。利用乙醚作溶剂利用快速脂肪提取器中测得脂肪 含量为1 7 0 ( 于重计) ，g c m s 法测得其脂肪酸组成中不饱和脂肪酸占6 7 4 ， 其中e p a 占1 5 4 5 ，d h a 占2 2 0 0 ，二者总和要高于海鱼类。陈炜等【1 1 】采用毛细 管色谱柱对繁殖期虾夷扇贝二倍体与三倍体的闭壳肌、外套膜及生殖腺的脂肪酸 组成进行了检测。发现二倍体的生殖腺p u f a 含量约为三倍体的1 7 倍；生殖腺脂 肪酸n 一3 n 一6 比值约为闭壳肌和外套膜的3 - 4 倍，说明虾夷扇贝生殖腺的发育需要 更多的n 一3 p u f a 。试验结果还表明除闭壳肌之外，虾夷扇贝的其它部位也含有较丰 富的e p a 和d h a ，所以扇贝边料不应随意废弃，完全可以再加工利用。易瑞灶等【1 4 1 对栉孔扇贝( c h l a m y s f a r r e r ijp ) 生殖腺的卵磷脂含量进行了测定，结果为0 3 4 ( 按湿重计) 。相对于贝类2 的总脂肪含量【6 】，其卵磷脂含量占总脂肪2 0 左右， 中国海洋大学博士论文 具有一定的可开发性。日本的林贤治【1 2 】对扇贝肠腺脂质中的e p a 进行了探讨，得 出扇贝的中肠腺脂质中e p a 含量比较高，且以甘油三酸酯( t g ) 的形式存在，其含量 随季节的变动而变化。作为从扇贝的中肠腺提取脂质实用方法的一种尝试，林贤 治探讨了添加鱼油的湿式炼油法，然后采用硅酸柱色谱分离法从脂质中分离出 e p a 含量高的甘油三酸酯。这种湿式炼油法可提高提取脂质的收率及效率，并降低 脂质的黏性。同时，采用硅酸柱色谱分离法，有可能比较大量地从深绿色的中肠腺 脂质中直接提取无色或淡黄色、富含e p a 的t g 。x u e 等【1 3 】研究了干紫贻贝( m y t i l u s e d u l i sl i n n a e u e ) 在贮藏过程中脂肪及脂肪酸组成的变化，发现其脂肪中富含磷酯 酰胆碱( p c ) ，总脂肪酸组成中e p a 及d h a 含量丰富，但随贮藏过程，游离脂肪酸 ( f f a ) 增加，磷脂含量减少。林洪等【1 4 】对贮藏在2 0 。c 、5 c 、- 1 0 和一1 8 温 度下的鲜活紫贻贝做了磷脂总量变化的研究，运用高压液相和比色法检测了贻贝 在不同贮藏温度和时间下的磷脂组分及其含量。发现新鲜贻贝中磷脂含量在0 5 左右，其中主要磷脂种类为p c 和磷脂酰乙醇胺( p e ) ，在- 1 8 c 贮藏2 0 d ，磷脂总 量损失了2 4 6 4 ，而在2 0 放置1 d ，就损失2 1 8 4 ，p c 、p e 含量随着贮藏过程而减 少，发生降解。林洪等【1 5 】对紫贻贝( m y t i l u se d u l i sl i n n a e u e ) 、褶牡蛎( c r a s s o s t r e a p l i c a t u l ag m e l i n e ) 、杂色蛤( p h i l i p p i n a r u mr u d i t a p e sar ) 、缢蛏( s i n o n o v a c u l a c o n s t r i c t al a m a r c k ) 、毛蚶( s c a p h a r c as u b c r e n a t al i s c h k e ) 、栉孔扇贝( c h l a m y s f a r r e r i j p ) 六种贝类的磷脂作了比较研究，对它们的出肉率、总脂、中性脂、极 性脂、磷脂及其组分、脂肪酸的组成做了检测分析。结果表明，各种贝类的贝壳 厚度不同，对其出肉率影响较大；其脂质含量在卜3 左右，由于采用了不同的脂 肪提取方法，与食物营养成分表的数值相比较都偏高5 0 以上；总体上看极性脂 约占总脂的2 5 - - - 4 5 ，磷脂约占总脂的1 8 - - 3 0 ，即磷脂在极性脂中占7 0 以上， 其余部分是由糖脂和未知成分组成；各脂肪酸组成与陆生动植物最大的不同在于 含有丰富的以e p a 和d h a 为代表的( i ) - 3 多不饱和脂肪酸，而且极性脂的e p a 和d h h 的含量要高于中性脂；六种贝类的磷脂特性有一定的差异，牡蛎中磷脂酰肌醇 ( p i ) 含量特别高，心磷脂( c l ) 只在牡蛎和毛蚶中被检出，毛蚶中只含e p a 而无 d h a ；六种贝类共同特点是p c 与p e 之和在7 0 左右。杨文鸽等【1 6 - 1 及林洪等【1 7 1 分别 对产自浙江和青岛的紫贻贝( m y t i l u se d u l i sl i n n a e u e ) 总脂和磷脂进行了提取和 定量，分别对磷脂的组分、总脂和磷脂的脂肪酸组成进行了分析，并与大豆磷脂 4 中国海洋大学博士论文 和蛋黄磷脂进行了比较，结果表明贻贝的总脂含量为2 - 3 ，磷脂含量占总脂肪 的2 0 一3 0 ，磷脂组分以p c 和p e 为主；贻贝的总脂肪和磷脂与大豆和蛋黄的相比 含有更多的p u f a 。尤其是贻贝磷脂中的脂防酸不饱和度及e p a 与d h a 之和要高于总 脂及中性脂，这一点是陆生动植物磷脂无法比拟的。贻贝磷脂不但具有磷脂的生 理功能，还能增加人体对e p a 和d h a 的摄入，从而提高了磷脂的利用价值。因此， 贻贝磷脂具有较好的食品、医药等方面的开发潜力。 随着鱼类加工业的飞速发展，约占鱼体总质量3 5 - 5 5 的鱼头、鱼皮、鱼骨 和内脏等副产品的加工利用水平成了影响水产业经济效益的关键所在，而这些 副产物中除含有大量的蛋白质外，还含有丰富的脑磷脂、矿物质和其他生物活性 成分f 1 8 1 。绝大部分的鱼卵，不但味道鲜美，营养丰富，还富含卵磷脂，是国际 上流行的美容及保健食品，鱼卵的深加工大有可为1 1 9 】。 杨文鸽 2 2 】测定了捕获旺季的马面纯( n a v o d o ns e p t e n t r i o n a l o s ) 卵巢中的总 脂和磷脂及脂肪酸其组成，发现磷脂的含量占总脂的2 3 0 1 一3 3 0 3 ，其中含有 较丰富的p c 、p e ；与大豆和蛋黄的磷脂相比，马面纯卵巢中的总脂和磷脂含有有 更丰富的p u f a ，此外卵巢磷脂中的脂肪酸不饱和度及e p a + d h a 之和要高于总脂。 杨文鸽等团】还用正交试验探讨了以氯仿、甲醇混合液提取从马面纯卵巢中提取 磷脂的方法，得到最佳工艺条件，为海洋生物磷脂的开发利用提供了依据。 鱿鱼是目前远洋渔业中最具有开发潜力的品种之一，近几年我国鱿鱼年产量 已达2 0 万吨以上。一般来说，鱿鱼有3 0 左右的头、足、内脏及表皮等废弃物产 生。对这些废弃物，一般处理方法是就地掩埋，这不但是对渔业资源的巨大浪费， 而且还存在着环境污染的隐患【2 4 】。其中占鱿鱼重量1 4 的内脏，目前只有少部 分被做为饲料添加剂利用，其他大部分尚无好的利用途径【1 9 1 。然而鱿鱼内脏含 有2 0 - 3 0 的粗脂肪，对其脂肪酸组成的气相色谱分析表明，鱿鱼内脏油的脂肪 酸组成与鱼类的鱼油组成很相似，不饱和脂肪酸约占8 6 ，n - 3 系列脂肪酸约占 3 7 ，其中e p a 占1 2 、d h a 占2 4 左右，可见鱿鱼内脏是提取鱼油的良好原料【2 4 j 。 乌贼内脏粉是以乌贼( 或其它头足类) 内脏为原料，经发酵、分离油脂、添加载 体、干燥、冷却、粉碎等工序制得的黄褐色、褐色、黑褐色或黑色粉末状制品， 常作为饲料添加剂。但通过与鱼粉和贻贝粉比较，发现乌贼内脏粉的蛋白质含量 比较低。作为提供蛋白质的原料，乌贼内脏粉远不如鱼粉和贻贝粉。然而各种乌 中国海洋大学博士论文 贼内脏粉的粗脂肪含量均在1 0 以上，台湾产的乌贼内脏粉的脂肪更是高达 2 0 5 ，而鱼粉、贻贝粉的脂肪含量一般都低于1 0 0 。此外，乌贼内脏粉富含卵 磷脂【2 0 】。将其作为提取磷脂的原料而进行精深加工大有潜力可挖。 鸢乌贼( 舶e n o t e u t h i so u a l a n i e n s i s ) 广泛分布在印度洋、太平洋的赤道和亚 热带等海域【2 7 1 。近年来，渔获产量不断增加，资源潜力很大，是很有希望开发的 一种渔业资源，前景十分看好。据有关资料介绍，鸢乌贼在出生后7 个月，胴长可长 至u 1 0 0 m m ，已接近参加繁殖的最小胴长范围，雌性生长较快，1 年左右即能产卵。在 不同时期的捕获的样本，大部分都是性成熟产卵或将要产卵的群体。说明鸢乌贼 具有生命周期短，世代更新快、繁殖力强，资源恢复快和补充迅速的特点【2 1 1 。浙 江舟山渔业公司对此种鱿鱼资源进行了开发，加工后在内脏中发现有大量发育成 熟的卵巢。但目前对此类原料还没有好的加工方式，如何更好地利用这一资源优 势，进行精深加工，提高产品的附加值，成为亟待解决的问题。 赵建滨等瞄】报道过从鱿鱼卵中提取卵磷脂的工艺，但并没有对其磷脂种类 及脂肪酸组成进行分析，也没有描述鱿鱼种类。d e n g 等【2 3 】对鱿鱼o m m a s t r e p h e s b a r t r a m i 表皮的脂肪研究发现其磷脂含量高达8 0 一8 5 ，而且主要为脂肪酸组成 中富含d h a 的p c 和p e ，认为其具有较高的开发利用价值。目前为止，有关头 足类( 包括乌贼类在内) 的从肌肉到头、足、内脏及表皮等各部位的脂质及脂肪 酸组成都有广泛的研究，大多发现其含有较高含量的富含e p a 、d h a 的磷脂( 部 分内脏如肝脏等以富含e p a 、d h a 的甘油三酯为主) 【2 4 。2 9 】。但尚未见有对鸢乌 贼卵的脂肪含量及脂肪酸组成有相关报道。 最近的研究表明，d h a 和e p a 的生理功能因其在脂肪中的分子形式不同而不 同，人们因此而重视d h a 、e p a 等n - 3p u f a 与磷脂的双重作用，研究结合有n 一3 p u f a 的磷脂( n - 3p u f a 磷脂，n - 3p u f a p l ) 的生理功能。e p a 磷脂与e p a 甲酯 相比，前者在降低血清胆固醇的作用方面作用更强。另外用从鱼类肠道菌产生 p u f a 磷脂对大白鼠口服试验，发现其对脂肪组织的降低有新功能，同时发现 p u f a p c 对细胞分化具有诱导作用，从而导致人们对d h a 与e p a 的脂肪分子形式 的研究日渐活跃。d h a 、e p a 作为脂肪酸或其甲、乙酯及甘油酯容易氧化，而d h a 、 e p a 的磷脂则使其氧化稳定性增强，并且磷脂分子形态可以原封不动地由细胞摄 取，在细胞内分解为d h a 、e p a 与磷脂，显示出增效作用，所以可以作为保健食品、 6 中国海洋大学溥士论文 化妆品、药品来利用【3 0 】。 0 2 磷脂概述 0 2 1 磷脂的研究历史 磷脂是一类存在于生物界的含磷脂类，在植物的种子、动物血液、脏器、蛋 黄及细菌中与油脂并存，是生物细胞的构成物质，也是生命的基础物质之一。p 8 】 磷脂最早由u a u q u e l i n 于1 8 1 2 年从人脑中发现，又由g o b l e y 于1 8 4 4 年从蛋黄 中分离出来，并于1 8 5 0 年按希腊文l e k i t h o s ( 蛋黄) 命名为l e c i t h i n ( 卵磷脂) ， 继而陆续从许多动植物中分离、确认了许多磷脂物质。1 9 2 5 年l e v e n 将卵磷脂 ( 磷酯酰胆碱) 从其他磷脂中分离出来。1 8 6 1 年t o p l e r 又在植物种子中发现了 磷脂的存在，而迄今认为的最为丰富的大豆磷脂是1 9 3 0 年发现的1 3 1 1 。 磷脂的研究二十世纪3 0 年代始于德国，6 0 年代以来在发达国家已实现工 业化，广泛应用在食品、医药、化妆品和工业助剂领域。随着对磷脂研究和应用 的深入发展，科学界、实业界对磷脂的结构、性能、功效和生理、生化作用的认 识在逐步深化。由于磷脂实用价值的拓展，开展了磷脂的精细分离技术、精细有 机合成技术以及化工系