（植物病理学专业论文）海南橡胶树丛枝菌根真菌种类鉴定及其多样性研究.pdf

、 海南大学学位论文原创性声明和使用+ 兰删 原创性声明 论文作者签名： 徽日期：z o ；o 年6 月5 日 学位论文版权使用授权说明 本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有 关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权海南大学可以将本学 位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和 汇编本学位论文。本人在导师指导下完成的论文成果，知识产权归属海南人学。 保密论文在解密后遵守此规定。 论文作者签名： 镳 日期：2 0 ，o 年6 月5 日 导师签名： 日期：冲年口加西 本人已经认真阅读“c a l i s 高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交 “c a l l s 高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按“章程”中规定享受相关权益。回童诠塞 握銮后进厦：旦圭玺i 旦= 生i 旦三生苤查。 论文作者签名：青旗 日期：z o f o 年6 月5 日 聊躲毽 日期：刃阵d 加。扣 、 一 j 1 ； 1 一， 摘要 本论文研究海南橡胶树丛枝菌根真菌多样性及其优势菌对橡胶树树红、褐根病病原 菌的拮抗作用，通过采集海南省l1 个市( 县) 的2 2 个胶园2 4 份橡胶树根际土样，采 用染色法镜检根系侵染情况，湿筛倾斜- 蔗糖密度梯度离心法分离丛枝菌根真菌孢子， 依据其形态学特征鉴定种类，取得以下研究结果： 1 染色镜检橡胶树根部组织，可见清晰的a m f 菌丝、泡囊、侵入点和丛枝结构，菌丝 为有隔菌丝，属疆南星型丛枝( a _ r u m - - t y p e ) ，泡囊以椭圆形居多。表明橡胶树根部确实 有a m f 的定殖。 2 根据分离的孢子形态特征，鉴定出6 属共6 8 种丛枝菌根真菌，其中球囊霉属g l o m u s 有4 3 种，无梗囊霉属a c a u l o s p o r a1 8 种，内养囊霉属e n t r o p h o s p o r a3 种，原囊霉属 a r c h a e o s p o r a 、巨孢囊霉属g i g a s p o r a 各1 种，盾巨孢囊霉属s c u t e l l o s p o r a2 种。球囊霉 属g l o m u s 是海南橡胶树根际丛枝菌根真菌的优势属，蜜色无梗囊霉( a c a u l o s p o r a m e l l e a ) 是优势种。 3 对海南1 1 个市( 县) 的橡胶树a m f 进行多样性分析，发现各市( 县) 橡胶树a m f 孢子密度为在2 9 1 - 2 0 4 8 个1 0 0 9 风干土之间，平均7 8 0 0 4 1 2 1 个1 0 0 9 风干土，文昌 橡胶树a m f 孢子密度最小，乐东孢子密度最大；物种丰富度在5 - 1 5 之间，平均1 0 1 ， 多样性指数在0 1 9 6 - 0 7 4 0 之间，平均0 4 3 7 ，屯昌橡胶树a m f 丰富度和多样性指数最 小，琼中橡胶树a m f 丰富度和多样性指数最大。相关性分析表明橡胶树根际土壤p h 与 a m f 孢子密度呈极显著相关，土壤全磷含量与a m f 孢子密度显著相关，表明橡胶树根 际土壤理化性质是影响橡胶树a m f 多样性的因素之一。 4 对海南o 5 年、5 1 0 年、1 0 1 5 年、1 5 2 0 年、2 0 2 5 年、2 5 3 0 年、3 0 3 5 年、3 5 4 0 年8 个年龄段橡胶树的a m f 进行多样性分析，各年龄段橡胶树a m f 孢子密度在3 6 0 - 1 0 0 4 个1 0 0 9 风干土之间，平均6 0 7 9 2 2 7 4 个l o o g 风干土，物种丰富度在6 1 7 之间，平均1 1 2 5 ，孢子密度和物种丰富度都在0 - - 3 5 年生的橡胶树呈上升趋势，在3 0 3 5 年生橡胶树孢子密度达最大，之后呈下降趋势：a m f 多样性指数在0 0 2 9 0 - 0 8 0 6 5 ，平 均0 4 9 5 1 ，多样性指数在0 5 年生的橡胶树也先呈上升趋势，在1 0 1 5 年生的橡胶树达 0 5 7 4 ，之后在1 5 2 0 年生橡胶树突然下降，此后又呈上升趋势，在2 5 3 0 年生橡胶树达 到最大，之后呈下降趋势。相关性分析显示橡胶树年龄与a m f 多样性指数极显著相关， 与孢子密度、物种丰富度显著相关，表明橡胶树年龄是影响根际丛枝菌根真菌多样性的 重要因素。 5 利用本次研究鉴定的优势a m f 菌株进行橡胶树红、褐根病病原菌的拮抗实验，研 究表明接种蜜色无梗囊霉( a c a u l o s p o r am e h e a ，a m ) ，橡胶树根系内t t c 还原活性、 p o d 、s o d 活性均显著高于对照；先接种a m 3 5 天后接种红( h o n g ) 、褐( h e ) 根病 原菌的橡胶树，根系活力、p o d 、s o d 活性均高于只接种红( h o n g ) 、褐( h e ) 根病原 菌的处理，且使得橡胶树根系的p o d 、s o d 活性高峰提前3 天出现，初步研究结果显 示预先接种蜜色无梗囊霉对橡胶树根病病原菌有一定的拮抗效果。 关键词：橡胶树丛枝菌根真菌多样性 红根病 褐根病抗病性 a b s t r a c t t h i sd i p l o m aw o r kw e r ec o n c e n t r a t e do ns p e c i e sd i v e r s i t yo fa r b u s c u l a rm y c o r r i z a lf u n g i ( a m f ) a n dt h ea n t a g o n i s me f f e c to ft h e i rd o m i n a n ts p e c i ea g a i n s tp a t h o g e n so f r e dr o o tr o t 、 b r o w nr o o tr o ti nr u b b e rt r e eo fh a i n a np r o v i n c e c o l l e c t e d2 4r h i z o s p h e r es o i l a n dr o o t s a m p l e sf r o m2 2p l a n t a t i o n sw h i c hb e l o n gt o 11c i t i e so rc o u n t i e so fh a i n a np r o v i n c e ，u s e d r o o ts t a i n i n gm e t h o dt oe x p l o r ea mc o l o n i z a t i o n ，w e t - s i e v i n ga n dd e c a n t i n gm e t h o dt o i s o l a t e ds p o r e so fa m fa n dm o r p h o l o g i c a lw a y st oi d e n t i f i e d ，t h em a i nr e s u l t sa r e a sf o l l o w s ： 1 h y p h a ，v e s i c l e s ，e n t r yp o i n t s a n da r b u s c u l a rs t r u c t u r ew e r eo b s e r v a t e du n d e rm i c r o s c o p e , t h ea m s t r u c t u r ew a sa r u m t y p e ，h y p h ah a ds e p t a t ea n dm o s to fv e s i c l e sw e t ee l l i p t i c a l t h er e s u l t ss h o w e dt h er u b b e rt r e ec o u l dc o l o n i z a t e db ya m f 2s i x t y e i g h ts p e c i e so fa m fb e l o n g e dt os i xg e n e r a ，i n c l u d i n gf o r t h - t h r e es p e c i e so f g l o m u s ，e i g h t e e ns p e c i e so fa c a u l o s p o r a ，t h r e es p e c i e so fe n t r o p h o s p o r a ，o n es p e c i eo f a r c h a e o s p o r a ，o n es p e c i e so fg i g a s p o r aa n d t w os p e c i e so fs c u t e l l o s p o r a ，w e r ei s o l a t e da n d i d e n t i f i e df r o mr h i c o s p h e r es o i ls a m p l e so fr u b b e rt r e e t h er e s u l ts h o w e dg l o m u sw e r et h e d o m i n a n tg e n u sa n da c a u l o s p o r am e l l e aw a st h ed o m i n a n ts p e c i ei nt h er h i c o s p h e r eo f r u b b e r t r e ei nh a i n a n 3s t u d yt h es p e c i e sd i v e r s i t yo fa m ff r o mr h i c o s p h e r eo f r u b b e rt r e eb e l o n g st o1 1c i t i e s o rc o u n t i e so fh a i n a np r o v i n c e ，t h er e s u l t ss h o w st h es p o r ed e n s i t y ( s d ) o f 11s a m p l i n gs i t e s r a n g e df r o m2 9 1t o2 0 4 8w i t ha na v e r a g eo f7 8 0 0 + _ _ 4 1 2 1p e rl o o gd r yw e i g h t o fs o f t ， w e n c h a n gc i t yh a dt h el o w e s ts dw h i l el e d o n gc o u n t i yh a d t h eh i g h e s t ；s p e c i e sr i c h n e s s ( s r ) w e r er a n g e df r o m5t o15w i t ha na v e r a g eo f10 1a n ds h a n n o n - w e i n e rd i v e r s i t yi n d e x ( h ) w e r er a n g e df r o m0 19 6t o0 7 4w i t ha na v e r a g eo f 0 4 37p e rs a m p l i n gs i t e s ，t h eha n ds r o fa m fi s o l a t e df r o mt u c h a n gc o u n t i e sw e r et h el o w e s tw h i l ef r o mq i o n g z h o n gw e r et h e h i g h e s t a n a l y s i s o fc o r r e l a t i o ns h o w e dt h cp ho fr u b b e rt r e es o i l f a c t o r sh a dav e r y s i g n i f i c a n tc o r r e l a t i o na n dt h eo t a lp h o s p h o r u s ( p o ) h a ds i g n i f i c a n tc o r r e l a t i o nt ot h es d o f a m f ，b u ts o i lf a c t o r sh a dn os i g n i f i c a n tc o r r e l a t i o nt ot h eho fa m f ，i n d i c a t e dt h a ts o i l f a c t o r si so n eo ff a c t o ri n f l u e n c e dt h es p e c i e sd i v e r s i t yo fa m f 4s t u d yt h es p e c i e sd i v e r s i t yo f a m ff r o mr h i c o s p h e r eo f 0 5 ，5 - 1 0 ，1 0 1 5 ，1 5 - 2 0 ，2 0 - 2 5 ， 2 5 3 0 ，3 0 3 5 ，3 5 4 0y e a r sa g eb r a c k e tr u b b e rt r e e ，t h er e s u l t ss h o w e dt h es dw e r er a n g e d f r o m3 6 0t o10 0 4w i t ha l la v e r a g eo f6 0 7 9 + 2 2 7 4p e r1 0 0 9d r yw e i g h to fs o i la n ds rw e r e r a n g e df r o m6 t o17w i t ha na v e r a g eo f11 2 5p e rs a m p l i n gs i t e s ，b o t hs da n ds ri n0 - 5y e a r s o l dr u b b e rt r e es h o w e da nu pt r e n df i r s t l y ，a n dr e a c h e dt op e a ki nt h e3 0 - 3 5y e a r so l dr u b b e r t h e ns h o w e da nd o w nt r e n da f t e rt h a t ；hw e r er a n g e r df r o m0 0 2 9 0t o0 8 0 6 5w i t ha na v e r a g e o f0 4 9 5 4p e rs a m p l i n gs i t e s ，hi n0 - 5y e a r so l dr u b b e rt r e ea l s os h o w e da nu pt r e n df i r s t l y ， t h e nr e a c ht op e a ki nt h e10 15y e a r so l dr u b b e r ，a to 5 7 4 ，b u ts u d d e n l yd e s c e n di nt h el5 2 0 y e a r so l dr u b b e r ，a f t e rt h a t ，hs h o w e da nu pt r e n da n dr e a c h e dt op e a ki nt h e2 5 - 3 0y e a r so l d r u b b e rb u tr i g h tf o l l o w i n gs h o w e da nd o w nt r e n d ； a n a l y s i so fc o r r e l a t i o nr e v e a l e dt h eg r o w t h a g eo fr u b b e rt r e eh a dav e r ys i g n i f i c a n tc o r r e l a t i o nt oho fa m fa n ds i g n i f i c a n tc o r r e l a t i o n t os da n ds ri nt h er h i c o s p h e r eo fr u b b e rt r e e ，i n d i c a t e dg r o w t ha g eo fr u b b e rt r e ew a sa i m p o r t a n tf a c t o ri n f l u e n c et h es p e c i e sd i v e r s i t yo fa m f i nt h er h i c o s p h e r eo fr u b b e rt r e e 5i n o c u l m e da c a u l o s p o r am e l l e a ( a m ) t or e s e a r c ht h e a n t a g o n i s me f f e c to fa m f d o m i n a n ts p e c i ea g a i n s tp a t h o g e n so fr u b b e rt r e er e dr o o tr o t ( h o n g ) 、b r o w nr o o tr o t ( h e ) ， t h er e s u l ts h o w e dt h ed e o x i d i z i n ga c t i v i t yo ft t c 、s o d 、p o di nr u b b e rt r e er o o ti n o c u l a t e d a mw a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nc o n t r a s t ( c k ) ：p r e - i n o c u l a t e da ma n dt h e ni n o c u l a t e dr e d r o o tr o t ( h o n g ) 、b r o w nr o o tr o t ( h e ) p a t h o g e n s35d a y sl a t e r ，t h ed e o x i d i z i n ga c t i v i t yo ft t c 、 s o d 、p o di nr u b b e rt r e er o o tw a sh i g h e rt h a ni n o c u l a t e dr e dr o o tr o t ( h o n g ) 、b r o w nr o o tr o t ( h e ) o n l y ，a n dt h ep e a ko fs o d 、p o da c t i v i t yi nf o r m e rt r e a t m e n ta p p e a r e d3d a y se a r l i e r t h a nt h el a t t e rt r e a t m e n t ，i n d i c a t e dt h a tp r e - i n o c u l a t e da mh a da na n t a g o n i s me f f e c ta g a i n s t p m h o g e n so f r e dr o o tr o t ( h o n g ) 、b r o w nr o o tr o t ( h e ) i nr u b b e rt r e e k e yw o r d s ：r u b b e rt r e e a r b u s c u l a rm y c o r r i z a lf u n g i s p e c i e sd i v e r s i t y r e dr o o t r o tb r o w nr o o tr o td i s e a s er e s i s t a n c e i l 目录 摘要。i a b s t t a c t i i 1 序言1 1 1 丛枝菌根真菌的介绍1 1 1 1 丛枝菌根真菌的概念1 1 1 2 丛枝菌根真菌对宿主植物的作用1 1 1 3 丛枝菌根真菌的分类研究2 1 1 4 丛枝菌根真菌的鉴定与培养方法3 1 1 5 我国丛枝菌根真菌资源5 1 2 橡胶树丛枝菌根真菌6 1 3 橡胶树根病的研究进展5 1 4 丛枝菌根真菌提高植物抗土传菌物病害的机制7 1 4 1 直接与病原物竞争7 1 4 2 改善植物营养与形态8 1 4 3 改变根际微生物区系8 1 4 1 生化和分子水平诱导抗病性9 1 5 课题来源11 2 材料与方法12 2 1 采集地的地理环境1 2 2 2 主要试剂及仪器1 2 2 2 1 主要试剂1 2 2 2 2 主要仪器1 3 2 3 采集方法1 3 2 3 1 土样采集方法1 3 2 3 2 根系染色1 3 2 3 3 孢子的分离。：1 3 2 2 4 孢子的鉴定1 4 2 3 5 土壤理化性质测定1 4 2 3 6 数据统计1 4 2 3 7 接种优势a m f 对橡胶树根病病原菌的拮抗效果1 4 3 结果与分析16 3 1 根系染色：。1 6 3 2 海南橡胶树根际丛枝菌根真菌分离鉴定1 7 3 2 1 海南橡胶树根际丛枝菌根真菌的种类1 7 3 2 2 海南橡胶树根际丛枝菌根真菌特征描述2 0 3 2 2 1 原囊霉属a r c h e o s p o r a 2 0 3 2 2 2 球囊霉属g l o m u s 2 0 3 2 2 3 无梗囊霉属a c a u l o s p o r a 2 7 3 3 2 4 内养囊霉属e n t r o p h o s p o r a 31 3 2 2 5 盾巨孢囊霉属s c u t e l l o s p o r 3 1 3 2 2 6 巨孢囊霉属g i g a s p o r a 3 2 3 3 土壤理化性质对橡胶树根际a m f 多样性的影响3 3 3 3 1 海南11 个市( 县) 橡胶树根际土壤理化性质3 3 3 3 2 海南1 1 个市( 县) 橡胶树根际a m f 种类及其多样性3 3 3 3 3 海南1 1 个市( 县) 橡胶树根际a m f 其多样性与土壤理化性质关系3 6 3 4 年龄对橡胶树根际a m f 多样性的影响3 7 3 4 1 不同年龄橡胶树根际丛枝菌根真菌种类3 7 3 4 2 不同年龄橡胶树根际丛枝菌根真菌多样性3 8 3 4 3 橡胶树的a m f 多样性与树年龄的关系3 9 3 5 优势a m f 对橡胶树根病病原菌的拮抗效果4 0 3 5 1 接种病原菌后橡胶树根系活力变化4 0 3 5 2 接种病原菌后橡胶树根系s o d 活性变化4 l 3 5 3 接种病原菌后橡胶树根系p o d 活性变化4 2 4 总结与讨论4 4 4 1 结论4 4 4 2 讨论4 5 参考文献4 8 致谢5 8 附录一：常用英文缩略语表5 9 附录二：常用溶液配制6 0 附录三：图版6 1 1 序言 1 1 丛枝菌根真菌的介绍 1 1 1 丛枝菌根真菌的概念 菌根( m y c o r r h i z a s ) 是一种植物营养根与土壤真菌形成的共生体，在自然界中分布 广泛，目前已发现7 0 札8 0 的植物能形成菌根( m a l l o c he la 1 ，1 9 8 0 ) 。能与植物形成菌 根的真菌称为菌根真菌( m y c o r r h i z a lf u n g i ) 。1 8 8 5 年，f r a n k 发表第一篇菌根研究的报告 并提出“菌根”概念后，正式开启了人们对菌根科学的研究时代。在1 9 2 6 年，r a y n e r 对菌根学研究的早期历史做了介绍。菌根是生物界最广泛、最重要的一类共生体，对促 进各生态系统中生物之间的物质交换、能量流动、信息传递，生物的演化与分布，保护 生物多样性，稳定生态系统，保持生态平衡和可持续发展，促进农、林、牧业生产，具 有不可替代的深远的经济、社会和生态意义( 刘润进，陈应龙2 0 0 7 ) 。 传统上人们根据真菌的侵入位置，将菌根分为：外生菌根( e c t o m y c o r r h i z a s ，e c m ) 、 内生菌根( e n d o m y c o r r h i z a s ，e m ) 、内外兼生菌根( e c t o e n d o m y c o r r h i z a s ，e e m ) 三大 类型。1 9 8 9 年h a r l e y 根据真菌和植物种类以及其共生体的特点，在原有分类的基础上 对菌根进行了重新划分，将菌根分为7 种，即泡囊一丛枝菌根( v e s i c u l a r - a r b u s c u l a r m y c o r r h i z a s ，v a m ) 、外生菌( e c t o m y c o r r h i z a s ，e c m ) 、内外生菌根( e c t o e n d o m y c o r r h i z a s ， e e m ) 、浆果鹃类菌根( a r b u t o i dm y c o r r h i z a s ，a r m ) 、水晶兰类菌根( m o n o t r o p o i d m y c o r r h i z a s ，m m ) 、欧石南类菌根( e r i c o i dm y c o r r h i z a s ，e r m ) 、兰科菌根( o r c h i d m y c o r r h i z a s ，o m ) 。由于原先所称的泡囊丛枝菌根后来发现有部分不产生泡囊，但都 有丛枝结构，故常将将其改称为丛枝菌根( a r b u s c u l a rm y c o r r h i z a s ，a m ) 。能与植物形 成丛枝菌根的真菌称为丛枝菌根真菌( a r b u s c u l a rm y c o r r h i z a lf u n g i ，a m f ) 。 1 1 2 丛枝菌根真菌对宿主植物的作用 丛枝菌根真菌是林地土壤中最为普遍( g e r d m a n n ，1 9 6 8 ) 、最为重要( r e a d 。1 9 9 4 ) 、 专性活体营养共生( 刘润进，陈应龙2 0 0 7 ) 的真菌类群。植物根系被丛枝菌根真菌感 染形成菌根后，根系的外部形态几乎没有或很少发生变化，用肉眼一般很难区别出有无 丛枝菌根形成。丛枝菌根真菌进入植物根系皮层细胞后，在适当条件下原初的菌丝可发 育成泡囊、丛枝、根内菌丝和根内孢子等，经染色等技术处理后，在显微镜下可清晰看 到。a m f 广泛存在于自然生态系统，它能与绝大多数的草本植物及部分木本植物形成共 生体系。据统计，全世界有高等植物4 0 0 科3 5 万种，其中3 8 0 个科的3 0 多万种是丛枝 菌根的宿主植物。到2 0 0 8 年7 月，世界范围内已报道丛枝菌根真菌有2 0 7 种( 蔡邦平 博士论文2 0 0 9 ) 。 a m 的形成可以改善宿主植物对土壤中磷、锌、钙等多种矿质元素与微量元素的转 化、吸收和输送，以及促进植物激素和抗生素的生成和水分的吸收等( 唐明，杨慧 平2 0 0 4 ) 。a m f 可以促进宿主植物的生长已经在许多植物上得到证实( 吴强盛等，2 0 0 6 ； 齐国辉等，2 0 0 3 ；王倡宪等，2 0 0 3 ) 。另外，a m f 能提高作物的产量( 林先贵等，1 9 9 4 ) 、 品质( 刘柏玉，1 9 9 2 ；刘延荣等，1 9 9 7 ) 以及宿主植物的抗盐( j i n d a l 等，1 9 9 3 ) 、抗 病( 黄京华等，2 0 0 6 ) 、抗旱性( 王幼珊等，1 9 9 2 ) 。 1 1 3 丛枝菌根真菌的分类研究 化石证据和分子遗传技术研究表明，早在4 亿年前，陆生植物的根被就被现代丛枝 菌根真菌的祖先侵染。在1 9 0 0 年人们就知道分布最广的一种内生菌根真菌是能在植物 根细胞内产生“泡囊”( v e s i c l e ) “丛枝”( a r b u s c u l e ) 。对v a 菌根真正开始研究并做 出贡献的是法国的微生物学家d a n g e a r d ( 1 8 9 6 ) ，他详细研究了杨树的v a 菌根，精细地 绘制了杨树菌根的泡囊、丛枝以及菌丝中的油滴等形态特征图，并对其进行了鉴定，使 人们对a m 有了初步的了解。1 9 8 6 年，n i c o l s o n 和g e r d e m a n l l 首先描述了第一个种。 在f r a n k 之前，很多早期的学者将a m f 大的球形接合孢子、厚垣孢子或泡囊错认 为是子囊菌的子囊，而将其放在子囊菌中，被归入内囊霉属( e n d o g o n e ) 。2 0 世纪五 六时代，随着“纯盆培养技术”和“湿筛法”的出现，人们分离得到a m f 种类日益增加， 逐渐对a m f 分类有了新的认识，又将这类真菌被放回接合菌中，归入接合菌纲 ( z y g o m y c e t e s ) 、内囊霉目( e n d o g o n a l e s ) 、内囊霉科( e n d o g o n a c e a e ) ( b e n j a m i nr k ，1 9 7 9 ) 中。 1 9 9 0 年，m o r i o n 提出a m f 与内囊霉属应分别属于单元类群和多元类群。同年， m o r o n 和b e n n y 提出一个新的分类系统：新立球囊霉目( g l o m a l e s ) ，下分两个亚目 一一球囊霉亚目( g l o m i n e s e ) 和巨孢囊霉亚目( g i g a s p o r i n e a s ) 。下设球囊霉科 ( g l o m a c e a e ) ( 球囊霉属和硬囊霉属) 、无梗囊霉科( a c a u l o s p o r a c e a e ) ( 无梗囊霉属 和内养囊霉属) 、巨孢霉科( g i g a s p o r a c e a e ) ( 巨孢囊霉属和盾巨孢囊霉属) 。1 0 年后， m o r o n 和r e d e c k e r 又对上述分类系统进行了调整，增设原囊霉科( a r c h a e o s p o r a c e a e ) 和类球囊霉科( p a r a g l o m a c e a e ) ( 见图1 ) 。 随着分子生物学技术的引入，a m f 分类有了长足的进展。s c h t i l 3 1 e r ( 2 0 0 1 ，2 0 0 2 ) 基于s s ur r n a 基因序列的研究结果，将a m f 的分类地位上升到门，即在真菌界建立 一个新的门：球囊门，下设l 纲4 目7 科9 属。近年来，基于基因序列分析，丛枝菌根 真菌的分类研究中不断有新的科属出现，如o e h l 和s i e v e r d i n g ( 2 0 0 4 ) 基于形态特征 新建立了和平囊霉属( p a c i s p o r a ) ；w a l k e r 和s c h f i p l e r ( 2 0 0 4 ) 基于1 8 sr r n a 序列分 析又新建立多孢囊霉目( d i v e r s i s p o r a l e s ) 、多孢囊霉科( d i v e r s i s p o y a c e a e ) 、平囊霉 科( p a c i s p o r a c e a e ) 、多孢囊霉属( 1 万v e r s i s p o r a ) 。w a l k e r 等( 2 0 0 7 ) 根据孢子形态和 s s u 、i t s 、5 8 sr d n a 序列分析，建立两性囊霉科( a m b i s p o r a c e a e ) 和两性囊霉属 2 ( a m b i s p o r a ) ，归于原囊霉目( a r c h a e o s p o r a l e s ) 中( 见表1 ) 。 球囊霉目 ( g l o m a l e a ) 球囊霉亚目 ( g l o m i n e a s ) 原囊霉科原囊霉属 ( a r c h a e o s p o r a c e a e ) ( a r c h a e o s p o r a ) 球囊霉科球囊霉属 ( g l o m u a c e a e ) ( g l o m u s ) 类球囊霉霉科类球囊霉霉属 ( p a r a g l o m u a c e a e ) ( p a r a g l o m u s ) 无梗囊霉科无梗囊霉属 ( a c a u l o s p o r a ) 内养囊霉属 ( e n t r o p h o s p o r a ) 巨孢囊霉亚目 巨孢囊霉科一 巨孢囊霉属 ( g i g a s p o r i n e a e ) ( g i g a s p o r a c e a e ) ( g i g a s p o r a ) 盾巨孢囊霉属 ( s c u t e l l o s p o r a ) 图l ：丛枝菌根真菌分类系统( m o r t o na n dr e d e c k e r2 0 0 1 ) f i 9 1 t h ec l a s s i f i c a t i o ns y s t e mo f a mf u n g i ( m o r t o na n d r e d e c k e r2 0 0 1 ) 表1a m 真菌最新分类系统( w a l k e r & s c h i i p l e r ，2 0 0 7 ) t a b l e1t h el a t e s tc l a s s i f i c a t i o ns y s t e mo f a mf u n g i ( w a l k e r & s c h n b l e l 2 0 0 7 ) g l o 球m e 囊r o 菌m y 门c o t ag l o 球m 囊e r o 菌m y 纲c e t e 球g l 囊o m 霉a l e 目sg 球l o 囊m a 霉c e 科a e 球g 囊l o m 霉u 属s 1 0 4 种1 u 1 。i 。l 多孢囊霉目 d i v e r s i s p o r a l e 巨孢囊霉科 g i g a s p o r a c e a e 无梗囊霉科 a c a u l o s p o r a c e a e 内养球囊霉科 e n t r o p h o s p o r a c e a e 和平囊霉科 p a c i s p o r a c e a e 多孢囊霉科 d i v e r s i s p o r a c e a e 类球囊霉目类球囊霉科 p a r a g l o m e r a l e sp a r a g l o m e r a c e a e 原囊霉目地管囊霉科 a r c h a e o s p o r a l e s o e o s i p h o n a c e a e 两性囊霉科 a m b i s p o r a c e a e 原囊霉科 a r c h a e o s p o r a c e a e 巨孢囊霉属9 种 g i g a s p o r a 盾巨孢囊霉属3 3 种 s c u t e l l o s p o r a f 无梗囊霉属3 4 种 a c a u l o s p o r a 环孢囊霉属2 种 k u k l o s p o r a ： 内养球囊霉属2 种 e n t r o p h o s p o r a 和平囊霉属7 种 p a c i s p o r a 多孢囊霉属3 种 d iv e f s i s p o f a 类球囊霉属3 种 p a r a g l o m e r a 地管囊霉属 1 种 g e o s i p h o n 两性囊霉属 7 种 a m b i s p o r a 原囊霉属1 种 a r c h a e o s p o r a 内生囊霉属1 种 1 = ! ：! = ! 圣三量兰2 ：l 1 1 4 丛枝菌根真菌的鉴定与培养方法 孢子的形态特征是目前进行丛枝菌根真菌鉴定的主要依据，其观察内容包括孢子的 3 形态大小、孢壁特征和结构、连孢菌丝、产孢子囊和土生辅助细胞、孢子果的有无及形 态、孢子的聚集方式等。其他丛枝菌根真菌的鉴定方法还有组织化学分类法( 特异性染 色) 、比较解剖分类法( 菌根侵染形态与特点) 、生化分类法( 主要包括酶联免疫吸附 技术、免疫荧光抗体技术聚丙烯酰胺凝胶电泳一选择酶染色技术、单克隆抗体技术) 、 分子生物学方法( 主要包括p c r 、r f l p 、r a p d 、生物芯片技术) 等。 孢子的形态特征孢子的形态特征是是区别丛枝菌根真菌的主要特征之一。不同种 a m f 的孢子颜色、大小、形状等的差异较大。 孢壁和孢壁结构孢子壁源于孢子着生的产孢菌丝，与之相连或脱落。当孢子停止 生长时，各层孢子壁已经基本形成，但其颜色、硬度、厚度等可继续进行某种程度的分 化( 刘润进，陈应龙2 0 0 7 ) 。孢子壁通常有2 4 层，很少超过4 层( 目前最多为s c u t e l l o s p o r a n o d o s a 的2 组7 层壁) ，常从外到内依次标记l 1 、l 2 、l 3 ，而不是按形成的顺序确 定。孢壁的类型共分八种，包括单一壁( u ) 、层状壁( l ) 、易逝壁( e ) 、膜状壁( m ) 、 革质壁( c ) 、无形壁( a ) 、膨胀壁( x ) 、菌丝包被( p ) 。一个孢子的几层壁按照 相互关系的密切程度划分成组，由外至内按a 、b 、c 排列。在上述基础上组成孢壁的 结构式和示意图，用以表示一个种的孢壁。 连孢菌丝不同的种、属a m f 连孢菌丝的数目、颜色、形状、宽度、菌丝壁厚度、 与孢子中轴的同向性、在孢壁处的封闭情况等均有一定差异。巨孢囊霉属( g i g a s p o r a ) 和盾巨孢囊霉属( s c u t e l l o s p o r a ) 的孢子着生在“球茎状柄样细胞”上；内养囊霉属 ( e n t r o p h o s p o r a ) 和无梗囊霉属( a c a u l o s p o r a ) 的孢子产生于产孢子囊附近的孢囊柄内 或侧面；球囊霉属( g l o m u s ) 的种其连孢菌丝壁大多为一层，有的种则为两层或两层以 上。连孢菌丝壁