（食品科学专业论文）青霉素类药物残留ELISA检测方法研究.pdf

浙江大学硕士论文摘要 摘要 青霉素类药物是一类重要的b 一内酰胺类抗生素，园其高效、低毒是目前兽医学临床上应用 晟受青睐的药物之一。由于该类药物的广泛使用，使其在动物源性食品上的残留现象越来越严重， 虽然青霉素类药物本身对机体没有很强毒性，但容易引起药物过敏反应，是各类过敏药物之晟： 同时，若长期食用低浓度该类抗生素，会使细菌产生耐药性，菌群失调，导致人体免疫力降低； 此外，还给动物源性食品生产加工带来不可估计的损失。因此，建立针对青霉素类药物残留的快 检测方法，开发价格适中的试剂盒产品对控制动物源性食品卫生质量、保障消费者健康、保证工 业生产等具有重要的社会经济意义。本研究对青霉素类药物人工抗原的合成，动物免疫以及 e l i s a 检测方法的建立等进行了研究，得出如下研究结果： 选用半抗原氨苄青霉素、青霉素g 与载体蛋白牛血清白蛋白( b s a ) 通过生理学法和戊二醛 法合成3 种免疫抗原，经紫外、红外扫描和蛋白电泳实验证明半抗原与载体蛋白偶联成功，继而 用相同方法与载体蛋白卵白蛋白( 0 v a ) 合成了3 种包被抗原。 用合成的3 种免疫抗原免疫9 只新西兰大白兔，在6 次加强免疫后有8 只兔子产生高效价多 抗血清；通过3 种包被抗原进行多抗血清检测，比较了各血清的效价和亲和性，发现此两种合成 方法免疫兔子均能产生青霉素类药物核特异性抗体，在本实验中生理学法合成的免疫抗原免疫效 果优于戊二醛法合成法合成的，而同为生理学法合成的免疫抗原中，以氨苄青霉素为半抗原的免 疫抗原效果略优于青霉素g 的；并且选出多抗血清具有效价高、亲和性好、核特异性的免疫兔子 脾脏，用液氮妥善保存，提供给合作单位以便与其共同制备单克隆抗体。 在前面实验结果的基础上，从合作单位获得与本实验相符，通过生理学法免疫制备获得的鼠 单克隆抗体；同时，选择相应的包被抗原通过改良的过碘酸钠法与辣根过氧化物酶反应，用硫酸 铵沉淀法纯化，成功制备并获得酶标抗原。利用鼠单抗、包被抗原、酶标二抗和鼠单抗、酶标抗 原分别建立间接竞争e l l s a 检测方法和直接竞争e l i s a 检测方法；并对竞争性半抗原进行选择性 开环处理，以提高鼠单抗的亲和性：比较上述两种e l i s a 检测方法的灵敏度、线性范围、线性拟 台以及检测步骤、检测时间等因素，发现直接竞争e l i s a 法灵敏度与间接竞争e l i s a 法相当， 而直接e l i s a 法检测更为简便，较适合作为试剂盒产品的检测方法。 本研究对直接e l i s a 方法中的各检测条件通过单因素显著性分析和正交实验进行了比较并 确定底物溶液配方为1 0 m l b u f f e r + 4 5 0 u l t m b + 2 u l 砌玉，封闭液为5 甘氨酸，鼠单抗和酶标抗原 使用浓度分别为稀释8 0 0 倍和稀释8 0 倍，鼠单抗包被条件为直接4 冰箱放置过夜，封闭条件 为3 7 孵育2 5h ，反应条件为3 7 孵育1 0h ，显色条件为3 7 反应1 0 m i n ，此时可达最佳显色 效果。用优化后的直接竞争e l i s a 检测方法测得青霉素类药物最低检测限，其中氨苄青霉素 1 5 8 n ml j 青霉素go3 8n m l ，阿莫西林1 9 0n m l ，氯唑西林o 1 3n m l ，苯唑西林o 4 4 n 咖l ，均能达到食品中各青霉素类药物残留检测标准。 浙江大学硕士论文摘要 整个试剂盒实际检测操作时间在15h 以内 平均值，给出缓冲溶液条件下推荐的标准曲线， 以青霉素g 为对照物，通过多次重复实验，取 曲线方程为y = 03 2 7 x + o 2 4 1 9 ，x 为j o g ( 青霉素 浓度n 咖l ) ，y 为抑制率，最低检测限o 3 6 8 n m l ，检测范围o 5 1 0 0 n 咖l 尿样和牛奶样品 稀释1 0 倍后检测可参照此标准曲线，检测样品回收率在7 0 1 2 0 之间。由于青霉素类药物在奶 制品中残留的严重现象，针对牛奶特殊样品，用1 0 脱脂奶粉溶液做牛奶基质，得到以牛奶为基 质时的较理想标准曲线，曲线方程为y = 0 3 2 8 8 x 十o 1 6 6 6 ，x 为i o g ( 青霉素浓度n m l ) ，y 为抑 制率，最低检测限o 6 2 7 n 咖l ，检测范围1 o 1 0 0 n 咖l ，牛奶样品原浓度检测可参照此标准曲 线，检测样品回收率在7 0 1 2 0 之间。 关键词：青霉素类，残留，e l i s a ，抗体，酶标抗原 2 浙江大学硕士论文a b s c i a b s t r a c t p e n i c i l l i n s ，o n ei m p o r t a n t 母p eo fb e t a - i a c t a ma n t j b i o t i c s ，a r eu s e dc o m m o n i yi nt h ev e t e r i n a r y c l i n i cb e c a l l s eo ft h e i rh 追he f ! f i c i e n c ya n dl o wt o x i c i t y t h e ya r eu s e ds oe x t e n s i v e l yt h a tt h e p e n i c i l l i n sr e s i d u e si na | 1 i m a lf o o db e c o m em u c hm o r es e o u s e x p e r i m e n t a ls t u d i e sa n da n e c d o t a l e v i d e n c eh a v es h o w n 血a tp e n j c i n sd o n tp o s s e s ss e r i o u st o x i c i t yt oo 唱a n j s m s ，b u tt h e yc a nc a u s e t | l ea e 曜i cr e a c t i o n se a s i l hw i t ht h es 廿o n g e s ta b i l l qo fc a u s i n gt h ea 1 1 e r g i cr e a c t i o n si na i io ft h e a l j e r g i cm e d j c i n e s i f t h e s ep e n i c i j j i n sa r et a l ( e ni nf o ra 】0 n gt j m ej nl o wd o s a g e ，t h e yw i 】lp r o d u c et h e p r o p e r t i e si n c l u d i n gd e v e l o p m e mo fb a c t e r i a lr e s i s t a l l c e ，m a i a d j u s 协1 e mo f 扪o r a ，l o wi m m u n i t yo f o 曜a 1 1 i s ma n ds u b s t a i l t i a l 打n a n c i a ll o s s e si nt h ei n d u s t r yo fa n i m a if o o d t h e r e f o r e ，e s t a b i i s h i n gt l e r a p i dd e t e “o ns y s t e i no fp e n i c i l l i n sr e s i d u e sa n dd e v e l o p i n gt h ek i tw l mr e a s o n a b l ep r i c ew i l lp l a ya s i g n i 矗c a n tr o i ei nt h ec o n t m l l i n go ft h es 肌j t a t i o na n dq u a l i t yo fa n j m a lf o o da n de n s u n gt h e c o n s u m e r s h e a l t h y 1 n 血i ss n j d y ，t h eh 印t e n 啪p i c i l l i na 工1 dp e n i c i l l i n - gw e r ei i n k e dt ot h ec a r r i e p r o t e i na l b u m j n b o v i n es e r u m ( b s a ) b yp h y s i o l o 舀c a lb j n d i n ga n dg l u t a r a l d e h y d eb i n d i n gm e t h o d s ，a n dt h r e e i m m u n o g e n sw e r eo b t a i n e d t h es u c c e s s f u ic o u p i i n go ft l eh 印t e n sa n dt h eb s aw e r ep m v e db y u j 打a v i o j e ts c a n ，i n f r a r e ds p e c t r o g r a i t ls c a l la n ds d s - p a g ee l e c t r 叩h o r e s i s ，t h e nt h r e ee n v e l o p e a 1 1 t i g e n sw e r es y n t h e s i z e dw i t hc a 州e rp r o t e i na 1 b u m j nc h i c k e ne g g ( o v a ) 1 j k e w i s e t h et h r e e i m m u n o g e n sw e r eu s e di no r d e rt oi m m u n i z en i n en e wz e a l a l l dr a b b i t s a f t e rs i xt i m e so fb o o s t e i n j e c t i o n ，e i g h tr a b b i t sp r o d u c e dh i 曲t i t r ep 0 1 y c l o n a 】a m b o d i e ss e r u m w h e nt 1 1 e t h r e ee n v e l o p e 锄t i g e n sw e r eu s e dt od e t e c tt h ep o l y c 】o n a la n t b od j e ss e r u m ，t h er e s u 】t ss h o w e dt h ej m m u n i z e dr a b b i t s w i 血i m m u n o g c n sb yt 、v os y n t h e s i sm e t h o d sb o t h c o u l dp r o d u c es p e c i 矗ca f l t i b o d i e sa g a i n s tt h e p e n i c i l j i n 掣o u pb u tt h ee 僚c to ft h ei m m u n o g e n ss y n t h e s j z e d b yt h ep h y s i o i o g i c a lb i n d i n gw a sb e n e r t h a nt h a ts y n t h e s i z e db yt h eg l u t a r a i d e h y d eb i n d i n gc o m p a r a t i v e l y ，a n di m m u n o g e ns y n t h e s i z e db yt h e p h y s i o i o g i c a ib i n d i n gw i t hh 印t e na m p i c i nw a sb e n e rt h a nt h a tw i t hp e n i c i l l i n g 1 m m u n er a b b t s s p i e e n sw e r ec h o s e nw h i c hh a dp o l y c l o n a la n t b od i e sw i t hh i g ht i t r ea n dg o o da 所n i t yt h e nt h e yw e r e m a i n t a i n e dc a r e 血l l yi n1 i q u i dn i t r o g e na n dw o u l db eu s e df o r t h ep r e p a r a t i o no f m o n o c l o n a la n t i b o d j e s 3 浙江大学硕士论文 a b s t r a c t d u et 0t h el a c ko ft i m e ，m o u s em o n o c l o n a la f l t _ b o d i e sa c c o r d a n tw i t ht h ee x p e r i m e n tw e r e o b t a i n e df r o mo v e r s e a sc o o p e m “o nc o r p o r a t i o na n dt h e yw e r ep r e p a r e du s i n gt h ep h y s i o l o 西c a l b i n d i n g r e l e v a n te n v e l o p ea n t i g e n s 血r o u g ht h ej m p r o v e ds o d j u mp e r i o d a t er e a c t e dw i t hh o r s e r a d i s h p e r o 姬d a s ep r i o rt op u r i 矗c a t i o nb ya m m o n i u ms u l f n es e d i m e n t a t i o na n dt h e ne n z y m e - l a b e l l e da n t i g e n s w e r eo b t a i n e d m o u s em o n o c i o n a la n 曲o d j e s ，e n v e l 叩ea n t i g e n s ，e n z y m e 一】a b c l l e ds e c o n 出叫a n 廿b o d i e s w e r eu s e di no r d e rt oe s t a b l l s h t h ei n d i r e c tc o m p e t i t i v ee l l s ad e t e c t i o n ，a n dm o u s em o n o c l o n a l 蛐t i b o d i e s e n 纠m e l a b e l l e d 觚t i g e n sw e r eu s e dt 0e s 诅b l i s l l 廿1 ed i r e c tc o mp e t i t i v ee l i s ad e t e c t i o n c o m p e t i t i v eh 印t e n sw e r eo p e n e d1 0 0 p ss e l e c t i v e l yi n o r d e rt oe n h a n c et h ea 衢n 时o f 也ea n t i m o n o c l o n a ia n t i b o d i e s c o n s i d e r i n gt h ef k t o r si n c i u d i n gs e n s i t i v i t y ，】i n e a rr a l l g e ，d e t e c t i o np m c e s sa n d d e t e c t i o nt i m e ，d i r e c 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g eo f 1 0 1 0 0n m lt h em i l ka to r i g i n a l c o n c e n t r a t i o nc o u l dr e f e rt ot h i se q u a t i o na n dt h ed e t e c t e dm i i ks a m p l e sr e c o v e r yr a t er a n g ef r o m7 0 t o l 2 0 k e yw o r d s ：p e n i c i l l i n s ， r e s i d u e s ，e l l s a ，a n t j b o d i e s ， e n z y m e l a b e l l e da n t i g e n s 浙江大学硕士论文 文献综述 第一章文献综述 青霉素类药物是一类重要的b 一内酰胺类抗生素。自1 9 3 9 年大量生产使用以来，为人类和动 物感染性疾病的防治提供了高效、低毒的有力武器，迄今为止青霉素仍然是医学及兽医学i 临床上 广泛应用的药物之。但是随着青霉素类药物的广泛使用，尤其在5 0 年代后期，将青霉素药渣用 作畜禽生长促进剂以来，使其在肉食品中的残留现象变得越来越严重。虽然b 一内酰胺类药物本 身对机体没有很强的毒性，但是对于某些具有“过敏反应”体质的人，容易引起青霉素类药物的 过敏反应，轻者出现皮疹，重者出现血管神经性水肿等，是各类过敏药物之最；同时，该类药物 还会影响人体正常菌群的生长，若长期食用低浓度抗生素，会造成体内菌群失调，细菌产生耐药 性，导致人体免疫力降低：此外，青霉素类药物残留还给动物源性食品生产加工带来不可估计的 损失。 因此为了保证动物性食品的安全，保护消费者的利益，世界粮农组织( f a o ) 和世界卫生组织 ( w h o ) ，欧盟( e c ) 及美国食品和药品管理局( f d a ) 以及各国政府都相应明确规定了该类药物在食品 中的最大残留量。因而建立灵敏、可靠的药物残留检测方法来监控药物残留和避免一些可疑食品 危害人类健康显得非常重要。 1 1 青霉素类药物概况 青霉素类药物是一种高效、低毒的抗生素 属于b 一内酰胺类抗生素( 周新民等2 0 0 5 ) ， 其结构中均含有1 个b 一内酰胺环和1 个噻唑环 不同的侧链结构则形成了不同药物( 图l _ 1 ) 。 1 1 1 青霉素类药物分类 ( ”潜 ： 匕o o h 侧链 蛊蒙；噻唑环 青霉素 图1 1 ：青霉索类药物分子结构 f i 9 1 1 ：m 0 1 e c u l es t r u c t u r eo f p e n i c i l i i n s 根据该类药物的抗菌谱分为5 大类( 付文贵2 0 0 4 ) ，第一类：主要用于抗不产8 一内酰胺酶的 革兰阳性菌包括葡萄球菌、链球菌属、芽孢杆菌等所致的感染，属于窄谱青霉素，其代表抗生素 有青霉素g ( 注射用) 钠盐、钾盐、青霉素v ( 口服用) 、普鲁卡因青霉素、苄星青霉素等；第二 类：氨基青霉素，其抗菌谱广，代表抗生素有氨苄匹林、阿莫西林等：第三类：耐青霉素酶的青 霉素，对青霉素酶稳定，主要用于抗产酶葡萄球菌所致的各种感染，其抗菌谱窄，代表抗生素有 氯唑西林、双氯西林、苯唑西林、氟氯两林等；第四类：对绿脓杆菌等假单胞菌有活性的广谱青 霉素，其代表抗生素有羧苄西林、替卡西林，哌拉西林、呵洛西林、美洛西林等；第五类：主要 作用于革兰氏阴性菌的青霉素，仅对肠杆菌科细菌具有良好作用，抗菌谱窄，其代表抗生素有美 西林、匹美西林、替莫西林等。 6 浙江大学硕士论文文献综述 青霉素类药物是进入临床应用最早的一类抗生素，也是我国生产量最大、使用量最多的抗 生素。目前应用最广的青霉素类抗生素主要有：青霉素g ( p e n i c i l l i ng ) 、氨苄西林( a m p i c i l l i n ) 、 阿莫西林( a i n o x i c i l l i n ) 、氯唑西林( c l o x a c i l l i n ) 、双氯西林( d i c l o x a c i l li n ) 、苯唑西林 ( o x a c i l l i n ) 等( 张永信2 0 0 3 ) 。 1 1 2 青霉素g 理化性质 青霉素g ( b e n z y l p e n i c i l l i n ) ，别名青霉素、苄青霉素，分子量为3 3 44 0 ，分子结构见图 1 2 。青霉素g 易溶于水、生理盐水、葡萄糖溶液中，微溶于乙醇，不溶于脂肪油或液状石蜡，有 吸湿性，遇酸、碱、氧化剂、重金属等易失效，水溶液极不稳定，干粉密封于小瓶内保存，临用 前配制溶液，适用于葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、淋球菌、脑膜炎球菌等所引起的感染性疾病。 1 1 3 氨苄青霉素理化性质 氨苄青霉素( a m p i c i l l i n ) ，别名氨苄西林、氨苄青、c i l l e r a l ，p r i n c i p e n ，分子量为3 4 9 4 0 ， 呈白色或类白色粉末或结晶，无臭，味微苦，能溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚，不耐酶，对 酸稳定，适用于治疗呼吸道感染、肠炎、菌痢及脑膜炎等。 。w 趱。娥洲趱h 图1 2 青霉素g 分子结构 f i 9 1 2m 0 1 e c u l es t r u c t u r eo f b e n 纠i p e n i c i l l i n 1 2 青霉素类药物的作用机理 图1 3 氨苄青霉素分子结构 f i 9 1 3m o i e c u l es 仉l c t u r eo f a m p i c i i i i n 细菌细胞壁主要成分是黏肽( m u c o p i 州d e ，又称为肽聚糖) 。革兰氏阳性菌细胞壁较厚，黏 肽含量占6 5 9 5 ，而革兰氏阴l 生菌细胞壁黏肽含量仅占1 1 0 ，青霉素类抗生素主要通过抑制 细菌黏肽的合成，阻止黏肽链的交叉连接，使细菌无法合成细胞壁，从而抑制其生长或导致其死 亡。 青霉素类抗生素作用的靶分子是细菌细胞壁上的青霉素结合蛋自( p e n i c “h nb i n d i n g p r o t e i n s ，p b p s ) 。p b p s 是一组位于细菌内膜、具有催化作用的酶，参与细菌细胞壁的合成、形 态维持和糖肽结构调整等功能。p b p s 其中一种是转肽酶，功能是将5 个甘氨酸桥连到乙酰胞壁酸 的侧链上，从而完成细菌细胞壁的最终合成，当其与青霉素类抗生素结合后，抑制内肽酶活性， 影响中隔细胞壁合成，细胞的分裂受阻，造成细菌细胞壁缺损，菌体膨胀裂解；p b p s 还有几种属 于自溶酶，此酶一旦被激活就会导致菌体细胞裂解，缺乏自溶酶的变性细菌表现为对青霉素类抗 生素耐药性；其他还有一些p b p s 的功能主要是参与细菌细胞的正常形态的维持，中隔形成、细胞 延长及分裂繁殖。青霉素类抗生素通过抑制这些p b p s ，使细菌变形，细胞分裂延迟( 张风凯等 2 0 0 0 ：c h a r 口e n t i e re e ta 1 2 0 0 0 ) 。 黼江太学硕士论文文献综述 遮一过程发生在蹋蕊缌穗静繁殖期，因此该类药物为繁麓期杀菌药，显其捧爝特点怒选择经 掷铡脆壁的台成，对无腿壤的动物缁脆毒性小：对繁疆期缎葛 乍用强，对静止期缨蘸已合成的交 联张肽无作用，医面授大爨广泛的应用于医学及兽医学晒雕上， 1 3 青霉素类药物残留的危害 。3 1 过敏反应的危害及其反应机翩 膏霉素类药物在体痰残窝主要不良反应是过敏爱癍率麓，斌备粪药物之酋，据露簖卫生缝织 统计，青霉素娄药物过敏葳磁发生率为o 。7 l o 。青霉紊过敏反应包括速发型过敏反应稿避发型 过敏反应，前者悔床表现有过敏性休克、荨麻疹、血管神经性水肿等，属i g e 套导的超敏反应： 后者临床表现为斑丘疹、接触性皮炎、血清病等，t 细胞可能参与这类反应。其中以过敏性休克 域为严重，可在短时间内致死( 乔海星等2 0 0 2 ) 。 有研究者认为，过敏反应的嚣魁祸首是在动物体内残留的翡物预先形成的致敏原，如青霉索 一蛋自囊结合物( d e w d y 戎a l 。1 9 8 4 ) 。根据现代免疫学理论，榫为过敏原必须有特定鹊抗原 决定簇班及多债等必要条体，现在旗庶上应用的青霉素娄抗生素分子量均小于l 0 0 0k d ，翻藏葜 本身无免疫原性，但通过与蛋彝质、多获、多糖等大分予载传结合成完全抗原或自夯聚合成多徐 半抗原，成为诱发过敏反鹰的主要原因之一。此外，还存研究报道，青霉素可壹接与t 细胞袭面 的删c 一肽复合物分子结合，刺激t 细胞增殖而诱发进一步的反应，不需要抗原递呈细胞的递是 ( b r a n d e rc1 9 9 5 ) 。 根据蛋白质、多肽等与鬻霉索类抗生素分子的结合俄点不同，其抗原决定簇主要有置类：第 一粪是青霉素类抗生素母核的肉酰胺环打开与组织磺自等结合形成青霉噻唑抗原决定簇，习 馕上也称之为主要抗原凌是蔟；第二粪是一些共辘物翔p 铋 c 搬a n y i 、p i e i l l e n a 把、青霉烯酸、 p e n a | d a t e 、 p e n a m a l d g 埝，d 一毒霉胺稻p e n i e o y l 等，德稍谯在鬻霉泰母菝上，遵鬻被称为攘簧抗 原决定簇；第三类是僻镳抗原浃定簇。研究表鹱，8 0 螺等赓跨婚过敏患者与青霉豢g 主爱撬驻汝 定簇有关( b e n z y l p e n i c i l l o y l + b p 0 ) ，9 3 。3 的过敏性休克意番与次要抗原决定簇有关。 由于抗原决定簇的多样性，造成临床青霉素类药物过敏患者产生特异性抗体的多样性，可分 为核特异性抗体和侧链特异性抗体。核特异性抗体可识别一系列青霉素类药物，意味着患者有可 能对所有青霉素类抗生索发生越敏反应，表现为青霉素类抗生豢党全交叉过敏反应；侧链特异性 抗体，搜识到囊l 链结构丽对舒核结构无反应，即意昧麓患者设对该药麴或具有相同侧链结构的药 物发生过敏反应，两瓣受葵铯黪篱霉素类挠生襄，此时裁表现受毒霉素娄抗生素部分交叉或燹交 叉过敏反应。 1 3 2 耐药性的危害及其机制 动物在反复接触某一抗生索后，体内的敏感菌株可能会照到选择性抑制，而使耐药菌株丈量 辫殖。人在经常食用禽抗生索残留的动物性食品后，动物体内的耐药菌株可通过动物性食晶传播 给人体。有学者研究证明，覆乳、肉和动物脏器中都存在耐药菌株，当这些食品被人食用后，耐 8 浙江大学硕士论文文献综述 约菌株就可能通过食物链进入剑人n 勺消化道i = i = | ，当人体发生疚痫耐，再川j 蒯种抗生紊浒疗根难奏 效，给临床r 的治疗带米定的困难。至今为l l 。，1 具有耐药陛的微生物通过动物性食- 铺迁移刨人 体而给人体健康带来危害的问题尚未甜到解决( 赵丹宇2 0 0 3 ) 。 同时，由卜肠道内某些阿群耐药性的增强，会改变肠道黼群的代谢活动，影响肠道不同菌属 l | | 勺细菌数日垧i 相对比例，可能改变菌群的平衡，破坏肠道菌群对病原凶的肼障作i _ l ，影响某些正 常黼群合成b 旅维生素会和维生素k ，导致人体免疫山的r 降，或者王1 5 l 长期脏弼歧维生素缺乏 等不良症状( c e m i g ( 1 ee ta i 1 9 9 9 ) 。 b 一内酰胺类抗甜药的耐药机制主要在0 ：细黼j 。生的口内酰胺酶，是一大类p 一内酰胺环 抗生素钝化酶的总称。它使0 一内酰胺环水解开环生成青霉噻唑酸，火去了j p b p s 结合的活性功 能部位，无法干扰细菌细胞壁合成，从而失去抗黼活性。其次，某些细蔺通过改变p b p s 的质和量 而使其对b 一内酰胺类鲥物的敏感度降低。一疗面是由于p b p s 的结构发生了改变，使其与这类抗 生素的亲和山降低，另。方面是 i ：现了新的青霉素结台蛋白即新靶值，抑制了青霉素类药物与 p b p s 的结合，降低了抗苗活性( 牟颍欣2 0 0 3 ) 。 1 3 3 影响乳产品的加工生产 南1 二青霉素被广泛州j 。治疗牛乳腺炎和其他乳牛疾病，其不可避免地被转移到最初儿天的乳 汁中，带有青霉素残留n 乳汁会对乳制品质茸带来严重的影响。青霉素对乳酸凿的抑制作川j 其 他抗生素相比是晶强烈的，般l m l 牛乳巾岔有0 0 5 o 1 ( ) i l 青霉素就会对乳酸闭的生k 广生 影响，当舍餐达1 i u ，m l 时，则能完全抑制乳酸发酵过程，而j _ _ l 青霉素的热稳定性相当蚶，超过 任何。种其他常h | 抗生素， 。般的加热杀菌处理不能将其完全破坏( - f 文钾，1 9 9 5 ) 。 牛奶生产中，如果使州含有青霉索残留的生乳生产巴氏消毒目锑l 超高温火苗奶，产品中仍会 有相当量的青霉素残留：酸牛乳生j o 中，发酵前期嗜热链球黼的生k 速度商j 。保加利弧l i 蔷酸杆菌， 起着酸化发酵f _ 勺主导f 1 ：j h ，由于青霉素的存在，嗜热链球齿f _ j 勺生k 受到抑制，中乳酸化凝结进程 明显变慢，致使发酵时间加k 、牛乳不凝结或产讳稠度降低；酸性黄油生j 。巾，乳酪链球浦利乳 酸链球菌都能发酵乳糖成为乳酸参与酸化过程，青霉紊残留使得稀奶油不可能搿到允分n 勺发醉， 南此m 制得的黄油j “l 讯缺少艿香，井带有不沾味，排 j 的酪乳也无法而利用( g 】u n w a i ( i2 0 0 3 ) 。 生产中类似例子比比皆是，严重损害了生产者手消费者的利葡。 1 4 青霉素类药物残留的管理 菏霹紊类抗生索的人量使川使得i 7 r 多动物源性食r i l f 存在一定的安全隐忠，为r 避免消费者受 到抗生素贱科的危害，避免，r 产厂家不必要的经济损火利确保发酵乳产 h 质爿：，再同纷纷采取相 应的措施，颁布约物残留控制标准，剥动物源性食品从源头开始进行严格控制管理。 往食晶法典委必会( c a c ) 的倡导卜，由f a o ( f i o o da n da 鲥c l i l t u 陀o r g 酬2 a t j o n ) 和w h o ( w o r l dh e a i t h o 曜a n i z a t i o n ) 联合发起并组织成立j ，食品中兽药残留法典委员会( c c l w d f ) ，制定动物组织成产鼎 中兽约残附的最高限掣。f m r l s ) 标准垌f 休药= | i 法规；瞅共体( e e c ) 建立了兽z 产品委妯会 f c v m p ) 配合兽药产，铺许呵证 ，! 序的执行：再个国家根据本国情况制定相应的约物最高残留限 9 浙江大学硕士论文文献综述 量；中国也于1 9 9 4 年、1 9 9 7 年以及1 9 9 9 年，农业部先后发布动物性食品中兽药的最高残留 量的通知，2 0 0 2 年1 2 月又进行了修订，对兽药使用和残留作了明确规定，以此作为国内兽药管 理监查工作的标准依据。表1 1 为目前各组织机构、各国现行的青霉素类抗生素最高残留限量一 览表。 表1 1 青霉素类抗生素最高残留限量表( 单位：n g m l = p p b ) t a b i e i 1 t h em a ) i m u mr e s i d u el i m i to f p e n i c f j l i n s( n 咖l ：p p b ) 药物青霉紊g氨苄青霉素羟氨苄青霉素苯唑青霉素邻氯青霉索双氯青霉素 名称b e n z y l p e n i c i l l i na 叩i c i l l i n a m 。x l c i l l i n 。x a c i l l i nc l 。x a c i l l i n 。i c l 。x a c i l l l n 国家 ( 青霉素) ( 氨苄西林)( 阿莫西林)( 苯唑西林)( 邻氯西林)( 双氯西林) 组织机构( 苄青霉素) 4m i 5 0 m 几k f 牛 1 0 e t 猪 4 0 e t 4 5 0m 几k f 牛 1 0 e t 3 0 m i 3 0 0 m l k f 3 0 m i 3 0 0 m 几k f 3 0m i 3 0 0 m 几k f 加拿大l o m ilomi 牛 5 0 i u m le t 牛 1 0 e t 火鸡 1 0 i u l l l le t 猪 1 0 e t 中国 牛 州i5 伽l k 牛 1 0 m i 羊 5 伽l k 牛 i o