ENA抗体PPT课件.ppt

抗ENA抗体检测及临床应用,中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科,1,半个世纪以来自身抗体的发现和检测,推动了自身免疫性疾病的诊断和治疗。,2,自身免疫病相关自身抗体的产生,人体免疫机制出现异常自身成分作为异体抗原T细胞巨噬细胞MHC细胞诱导细胞产生自身抗体,3,自身免疫发生的机制、抗体在自身免疫性疾病中的作用以及免疫耐受的损害仍然是研究的热点。,4,什么是自身抗体?,自身抗体的产生是易感者（易感基因）在环境因素（病毒等）诱导下对自身组织或成分异常的免疫反应。自身抗体是自身免疫性的标志。自身抗体的产生是自身免疫反应，与自身免疫性疾病不同义，它早于疾病产生。,5,自身抗体的临床意义,自身免疫的生物标记预示自身免疫病早期诊断和分类弥漫性结缔组织病指示疾病活动性、预后,6,自身抗体是自身免疫性风湿病（ARD）的生物标记（Bio-marker）,结缔组织病ANA干燥综合症SSA/SSBabSSAabM3Rab肌炎/皮肤炎Jo-labMi-2abSRPab（合成酶抗体）系统性硬化病Scl-70abACA核仁型ANA系统性血管炎ANCA-PR3ANCA-MPOENCA（内皮细胞抗体）原发性胆汁性AMAAMA-M2ab核包膜ab肝硬变,7,抗核抗体谱（ANAs）分类抗DNA抗体（anti-dsDNA，anti-ssDNA）抗组蛋白抗体（histons:H1,H2A,H2B,H3,H4,H2A-H2B复合物）抗ENA抗体（抗体:Sm,nRNP,SSA/Ro,SSB/La,rRNP,Scl-70,Jo-1,PCNA,RA33,ANAs抗非组蛋白抗体Ku,RANA,Mi-1,Mi-2,PL-7,PL-12.）抗着丝点抗体（anti-CENP-A,B,C，D，F，G）抗核仁抗体（抗体:RNA-polymerase-1,PM-Scl/PM-1，Th/To,U3nRNP/Fibrillaria，4-6-S-RNA）抗其他细胞成分抗体（高尔基体，中心体，纺锤体，线粒体，溶酶体，肌动蛋白，Vimentin，细胞角蛋白，Lamin),8,9,抗可提取性核抗原（ENA）抗体anti-extractablenuclearantigenantibodies,抗ENA抗体是抗核抗体在临床诊断和治疗中应用最多、最特异的一族抗体。,10,可提取性核抗原（ENA）extractablenuclearantigen,ENA：是核物质中一类核蛋白的总称，这类核蛋白可以用盐水进行提取，因此称为可提取性核抗原。成分：核酸与核蛋白，不含DNA，组蛋白。功能：参与细胞内DNA的复制、转录以及蛋白的翻译合成,11,可提取性核抗原（ENA）extractablenuclearantigen,来源：ENA抗原可以从多种组织中获得，无种属间差异，但有明显的组织不均一性。理化特性：ENA抗原对温度和RNA酶敏感。,12,13,抗ENA抗体检测方法,对流免疫电泳法(CIE)免疫双扩散法(IDorDID)免疫印迹法(IB)酶联免疫吸附法(ELISA)蛋白芯片（Proteinchip）,14,对流免疫电泳(CIE)结果判断,15,免疫双扩散(ID)检测结果判断上图为抗Sm、U1-RNP抗体阳性滴度均为1:4下图为抗SSA、SSB抗体阳性抗SSA抗体滴度1:64抗SSB抗体滴度1:16,16,17,18,19,抗Sm抗体：SLE标记性抗体（20%-30%）。可早于疾病12年出现，是前瞻及回顾性诊断的指标。Sm抗原决定族主要在与U1,U2,U4-u6RNA连接的B和D蛋白多肽上，分子量：（29KD），B（28KD),D(13.5KD)。,20,rRNP,rRNP,sm,sm,21,Sm和U1RNP是同一分子复合物中的不同位点，常与U1RNP抗体共存。SmAb和rRNPAb常同时检出，同为SLE标记性抗体。,22,抗U1RNP抗体在多种结缔组织病中存在,高滴度有利于MCTD的诊断。在AID中阳性率40%-60%。抗原表位分子量:73KD、32KD、17.5KD、28/29KD。,23,文献报告U1RNP和Sm的BB有共同的氨基酸序列，不但SmAb和BBC末端富含脯氨酸的区域结合，这个区域在其他的小核核蛋白尤其是U1RNP中都存在，所以它不止是SmAb识别的抗原表位，也是U1RNP重要的抗原表位。,24,RNP,RNP,RNP,RNP,sm,25,BB28/29KD69.9%,ID法与U1RNP抗体符合率=74.4%,ID法不支持抗Sm抗体,N=2096,26,CO,smu1Rnp,sm,27,抗U1RNP抗体在IBT检测中最具多态性，与上述4个抗原表位可有不同排列组合的连接。说明其在自身免疫中是多克隆、多位点的。在不同的病人中存在着显著地异质性。,28,29,抗SSA抗体是风湿免疫性疾病中出现频率最高的抗体,阳性率大约：60-75%。两个抗原表位，分子量52KD,60KD。有文献报告：用ELISA法为健康人检测抗SSA抗体，阳性率17%。在抗SSA抗体阳性的系统性红斑狼疮和干燥综合征病人的一级亲属中用同法检测,阳性率达25%。,30,抗SSA抗体在SLE和SS中最多见，常常和光过敏、血管炎、血小板减少、紫癜等有关。ANA阴性的ScLE常常有抗SSA抗体。抗SSA、SSB抗体可造成新生儿狼疮，婴儿心脏传导阻滞等先天性心脏病。抗SSB抗体：AID10-40%，在PSS,SLE中多见。分子量45KD、47KD、48KD,在各种检测方法中与抗SSA抗体伴随出现。,31,SSA,RO,SSB,32,CO,ssB,Ro52ssA,33,60KDSSA抗原为不连续表位折叠的三级分子结构，它的天然构象是SSA抗原性的保证。52KDSSA抗原不依赖这种空间结构，它的末端可非特异的和血清中的蛋白连接而形成线性的表位，因此特异性较差。,34,抗Scl-70抗体：SSc中25-75%,标记性抗体。抗Scl-70抗体阳性者较阴性者肺间质变的发生增加10倍。抗Jo-1抗体：PM/DM25%，标记性抗体。在合并肺间质变的PM/DM病人中抗Jo-1抗体阳性率高达60%。抗rRNP抗体：SLE特异性抗体（10%-30%）抗rRNP抗体与dsDNA、与SSA/RO、ACL相关。滴度升高仅限于SLE,其他疾病很少见。,35,36,抗可提取性核抗原（ENA）抗体anti-extractablenuclearantigenantibodies抗Sm抗体：SLE标记性抗体（20%-30%）抗U1RNP抗体：MCTD95-100%（高滴度）抗SSA抗体：CTD60-75%抗SSB抗体：CTD10-40%，PSS,SLE抗Scl-70抗体：SSc25-75%,标记性抗体抗Jo-1抗体：PM/DM25%，标记性抗体抗rRNP抗体：SLE特异性抗体（10%-30%）,37,抗ENA抗体检测方法,对流免疫电泳法(CIE)免疫双扩散法(IDorDID)免疫印迹法(IB)酶联免疫吸附法(ELISA)蛋白芯片（Proteinchip）,38,ENA抗体谱芯片-Luminex技术,39,BioPlex2200,40,Plate-BasedMultiplexAssaySystem,ArrayELISA,41,ELISA,Array,ArrayELISA,42,ENA抗体检测结果(Array-ELISA),43,自身抗体预示着自身免疫风湿性疾病（ARD）,易感性若干年自身抗体（+）若干时间（基因）无症状环境环境自身抗体先于ARD出现。虽无临床症状，但有自身抗体出现，并以具有很长潜伏期为特征。