糖化血红蛋白实验室应用.ppt

糖化血红蛋白实验室应用 一 离子交换HPLC原理介绍二 血红蛋白各组分简介三 糖化血红蛋白实验室应用四 糖化血红蛋白检测的影响因素五 异常血红蛋白案例介绍 高效液相色谱是色谱法的一类 采用高压输液系统 将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂 缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱 在柱内各成分被分离后 进入检测器进行检测 从而实现对试样的分析 高效液相色谱法 HighPerformanceLiquidChromatography HPLC 又称 高压液相色谱 HPLC HPLC核心技术 分析柱 分析型到工业型 填料 阳离子交换树脂颗粒2 8um 高分辨电镜 HPLC模拟图 上样准备向层析柱加入混合物的样本 泵 阀门 样本 柱 检测器 泵 阀门 样本 柱 检测器 HPLC模拟图 加样注射混合物到层析柱 泵 阀门 样本 柱 检测器 HPLC模拟图 分离混合物在层析柱内分离 相互作用大 相互作用小 泵 阀门 样本 柱 检测器 HPLC模拟图 相互作用大 相互作用小 泵 阀门 样本 柱 检测器 HPLC模拟图 相互作用大 相互作用小 泵 阀门 样本 柱 检测器 HPLC模拟图 相互作用大 相互作用小 泵 阀门 样本 柱 检测器 相互作用大 相互作用小 泵 阀门 样本 柱 检测器 泵 阀门 样本 柱 检测器 检出层析柱分离出的各成分在检测部被检出 泵 阀门 样本 柱 检测器 输出 信号強度 時間 泵 阀门 样本 柱 检测器 出峰 信号強度 時間 泵 阀门 样本 柱 检测器 出峰 信号強度 時間 泵 阀门 样本 柱 检测器 信号強度 時間 泵 阀门 样本 柱 检测器 出峰 信号強度 時間 泵 阀门 样本 柱 检测器 信号強度 時間 泵 阀门 样本 柱 检测器 信号強度 時間 泵 阀门 样本 柱 检测器 泵 阀门 样本 柱 计算机处理 检测器 ABC液 离子交换HPLC介绍 基于血红蛋白 链N末端糖化后 HbA1c 所带电荷与其它血红蛋白不同而建立 在中性pH条件下 HbA1c携带的正电荷相对较少 因此可通过HPLC法将其与其它组分 HbA1c HbA1b HbA1a HbF HbA0 区分开 得到分离 HbA1c分离效果由检测系统的分辨率决定影响因素 分析柱柱效 洗脱液的梯度 系统压力 柱温波动性等分析柱柱效 分为高分辨率和低分辨率两种 抗干扰能力不同 此方法为DCCT的研究中唯一使用方法 参考范围4 6 及切值6 5 这些临床数据的测量方法 是目前检测HbA1c的金标准 伯乐公司的HPLC平台全部采用此检测原理 糖化血红蛋白 血红蛋白的糖基化产物 葡萄糖进入红细胞 在内部与血红蛋白发生反应 血红蛋白 葡萄糖 红细胞 血红蛋白各组分简介糖化和非糖化的血红蛋白 成人Hb 胎儿Hb 非糖化Hb 糖化Hb 离子交换色谱所分离的组分解释 非糖尿病样本 糖化血红蛋白实验室应用 HbA1a HbA1bHbA的次要组分 前HbA1c 希夫氏碱 和氨基甲酰化的Hb HbA1c A0 总面积为1M 4M A1c结果 A1c柱子补充说明 柱子批号 42010 糖化血红蛋白的实验室应用 糖化血红蛋白结果以糖化血红蛋白量在总的血红蛋白量中的比率表示 A1c报告结果可接受标准 质控 确认通过总面积 1M 4M VII 1 5M 4 5M A1c的线型范围内 3 18 A1c的可报告范围 4 15 HbF 其量少于15 Hb变异体 评估情况 A0前的 5 的P3P4峰是可以接受的A0之后的未知峰 需要进行评估 糖化血红蛋白检测的影响因素 红细胞寿命的影响 任何改变红细胞寿命的因素都将导致HbA1c结果的可靠性 如 溶贫 再障 疟疾 急性失血 输血等等药物的影响 据报道维生素C和E会使检测结果假性偏低 可能是由于抑制了血红蛋白的糖化作用 高甘油三酯血 高胆红素血 尿毒症 慢性酒精中毒 慢性服用水杨酸盐 麻醉剂上瘾会对某些检测方法有干扰 使结果假性偏高 某些心血管药物对结果也存在影响 年龄的影响 HbA1c随着年龄的增长而升高 种族的差异 几个研究认为在相同血糖水平下 非裔美国人和西班牙人的HbA1c水平比高加索人更高 异常血红蛋白的存在 如 胎儿血红蛋白 HbF HbS HbC等等 某些疾病的影响 在肾脏疾病时 可形成氨基甲酰血红蛋白 异常血红蛋白 一 已有定论变异体变异体 S C D E 结果可以报 常见变异体 镰状细胞血症 干扰红细胞寿命 导致溶血现象 脾脏分离 障碍性风险 中度溶血性贫血 中度镰状细胞贫血 常见于东南亚人口 严重贫血 白血病 不能鉴定变异体后果 变异体如何影响A1C的检测并干扰诊断呢 有变异体会使检测结果出现误差假性增高 医生会增加剂量或更换用药 结果导致低血糖 严重症状昏迷或死亡假性降低 医生会改变治疗方案 结果导致血糖过高 增加眼部 神经 肾脏并发症尽管不是所有的变异体都会导致结果影响 但医生需要一个准确的A1C结果 http diabetes niddk nih gov dm pubs traitA1C index aspx 美国糖尿病研究院 NIH DCCT的研究院 未有定论变异体这类变异体目前占到异常样本量的70 以上 出现几率比D E变异体还要高 目前是最高的结果有待进一步评估 中国6 8 的人群含有血红蛋白变异体部分实验室检测方法受到干扰 4 2 的实验室正在使用明显受HbAS和 或HbAC干扰的方法21 的实验室正在使用明显受HbE干扰的方法6 5 的实验室正在使用明显受HbD干扰的方法 数据来源 卫生部