自身抗体的检测及应用PPT课件.ppt

自身抗体的检测及应用 自身抗体 概念 由各种原因造成的机体B细胞产生针对自身组织成分的抗体 称为自身抗体 自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志 每种自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱 自身抗体的意义 自身免疫性疾病的诊断 疾病活动性的判断 疗效的观察及预后 指导临床用药等 进行不同疾病的鉴别诊断 自身抗体的检测方法 1 间接免疫荧光法 IFT 检测ANA的金标准 具有很高的敏感性和特异性 将稀释的血清与生物载片 反应区内固定有包被基质的生物薄片 温育 如果样本是阳性的 特异性IgG IgA和IgM抗体与相应的核抗原结合 在第二次温育时 荧光素标记的抗人抗体与结合在生物基质上的抗体反应 形成荧光显微镜下所观察到的特异性荧光模式 2 免疫印记法 将经亲和层析纯化的抗原包被在固定的位置 每一种抗原只对应一条条带 不会产生非特异性反应条带 结果灵敏度高 特异好 判断实验结果简单 每个反应区均有质控带 可以显示操作是正确 阴性与阳性的结果明显 容易判断 条带显色与抗体滴度相关 3 酶联免疫吸附测定法 ELISA 该法检测自身抗体快速 敏感及特异性高 但对抗原的要求很高 必须使用高质量的纯化抗原 由于一种抗原只能检测一种抗体 多种抗体的检测就必须多种单独的抗原 因此该法在临床免疫实验室的应用受到一定限制 自身抗体检测常用方法学 间接免疫荧光法 解决有与无的问题免疫印迹法 解决有什么的问题酶联免疫吸附试验 解决有多少的问题 2019 12 22 抗核抗体 ANA 定义 ANA是抗核酸和核蛋白抗体的总称 泛指抗各种细胞核成分的抗体 分类 1 抗核蛋白抗体 2 抗DNA抗体 包括抗dsDNA和抗ssDNA 3 抗可提取性核抗原 ENA 抗体 抗核抗体 ANA 检测方法 间接免疫荧光法 检测总抗 根据荧光显微镜下细胞的形态确定核型 颗粒型 均质型等 用荧光强度判定抗体滴度 1 100 1 320 1 1000 1 3200等 优点 敏感性高缺点 操作复杂 对人员要求高 各实验室标准有差异 抗核抗体 ANA 均质型与AHA 抗组蛋白抗体 抗DNA有关 引起LE形成主要见于SLE 药物性狼疮 核膜型与抗ds DNA有关 多见于SLE 特别是有肾炎者 抗核抗体 ANA 核点型与抗ENA有关 应进一步查特异性抗体 核仁型多见于系统性硬皮病 特异性抗体检测 检测除ANA以外其他项目 其中抗中性粒细胞胞浆抗体 ANCA 和抗双链DNA抗体 抗dsDNA 是用间接免疫荧光法 而其他特异性抗体 包括抗Sm抗体 抗着丝点抗体 抗SSA抗体等 均采用免疫印迹法 抗ENA抗体谱 是以核内可提取核抗原为靶抗原的自身抗体的总称 它主要包括抗Sm 抗RNP 抗SSA 抗SSB 抗Jo 1 抗Scl 70 抗组蛋白抗体 抗核小体抗体 抗核糖体P 蛋白抗体 抗着丝点抗体 抗dsDNA 不同的自身免疫性疾病可以产生不同的抗ENA抗体 ENA抗体的检测对自身免疫性疾病的诊断和鉴别具有重要意义 欧蒙印迹法试剂盒用于体外定性检测血清或血浆中的人抗nRNP Sm SS A 天然SS A和Ro 52 SS B Scl 70 Jo 1 CENPB dsDNA 核小体 组蛋白和核糖体P蛋白等14种不同抗原lgG类抗体 自身抗体检测结果正确解读 检测方法局限性 假阳性 假阴性 临床意义局限性 非特异性 生理性 疾病前期 临床表现阳性 实验室检查阴性实验室检查阳性 临床表现阴性 自相矛盾 的结果 ANA 间接免疫荧光法 阳性 靶抗原阴性ANA 间接免疫荧光法 阴性 靶抗原阳性 膜条法 占10 为客观存在ANCA 荧光法阴性 但靶抗原阳性 5 指标阴性是否意味着疾病的排除 指标阳性意味着什么 ANA阳性 可见于多种临床情况 出了风湿病外 也可见于正常人或非风湿病 1 健康人 年龄越大 阳性率越高 60岁的阳性率为20 25 但为低滴度 2 有SLE家族史的一级亲属 有近50 为阳性 3 肺疾病 肝病 血液病 慢性感染等 注意 正常人中一般ANA滴度较低 ANA阳性 ANA阳性的意义需结合临床资料综合分析 阳性并不能确定某种临床诊断 反之 ANA阴性也不能排除自身免疫性疾病 但是临床上如果ANA滴度 1 1000肯定可以考虑为结缔组织病或自身免疫性疾病 具体是哪一种疾病 要结合其他临床病史 症状体征和实验室结果综合考虑下结论 一般ANA滴度为1 100时 临床意义不大 ANA阴性 1 正常人