SOP.AD.VE.02.08质粒丢失率检测SOP.doc

质粒丢失率检测SOP文件编号Document No.SOP.AD.VE.02.08版本号Version No.01职务或岗位Title姓名Name签名Signature日期Date起草人/修订人Drafted By分析工程师穆玲玲年 月 日审核人Reviewed By分析主管王涛年 月 日审核人Reviewed ByQA专员丁敏年 月 日审核人Reviewed By年 月 日审核人Reviewed By年 月 日审核人Reviewed By年 月 日批准人Approved By分析副总裁朱祥平年 月 日批准人Approved ByQA副总监梅林年 月 日生效日期Valid Since年 月 日颁发部门Issued by质量保证部复审日期Review Date年 月 日文件拷贝号 Copy No.文件分发至Distributed to质量保证部 分析开发部 生产部 行政办公室 财务部 技术转移部 药品注册部 工程部 人力资源部 IT部 It is prohibited to use, disclose or copy this document without authorization.严禁任何无授权使用、泄露或复印。文件名称Document Name质粒丢失率检测SOP文件编号Document No.SOP.AD.VE.02.08版本号Version No.01文件页数Pages5/5目录1. 目的 Purpose32. 范围 Scope33. 定义Definition34. 职责 Responsibilities35. 引用标准Reference to standard36. 材料 Materials37. 流程图Flow Chart38. 程序 Procedure39. EHS410. 派生记录Derived records411. 相关文件 Reference documents412. 注意事项 Notes513变更记载 Change record51. 目的 Purpose规程描述了质粒丢失率检测的标准操作方法及步骤，使其检测操作规范化、标准化。2.范围 Scope适用于本公司重组人源化抗VEGF单克隆抗体（Fab）发酵时，诱导前与加热前的质粒丢失率检查。3. 定义DefinitionE.coli：Escherichiacoli大肠杆菌CFU：Cell Forming Unit 细胞形成单位Kana：Kanamycin卡那霉素4. 职责Responsibilities分析部负责维护本规程，分析主管，QA负责确保依据本规程实施。5. 引用标准Reference to standard中国药典2015年版三部附录 G 质粒丢失率检查法。6. 材料 Materials6.1仪器全自动高压灭菌锅，超净工作台，37培养箱。6.2试剂胰蛋白胨，酵母粉，NaCl，琼脂粉和卡那霉素溶液以及无菌的PBS。6.3器材蓝盖瓶，试管，空平皿，酒精灯，涂布器，移液器，枪头等。6.4培养基的配制6.4.1 LB固体培养基6.4.1.1称取胰蛋白胨2.50g、酵母粉1.25g、NaCl2.50g、琼脂粉2.50g于蓝盖瓶中，加Milli-Q水至250 mL，于高压蒸气灭菌锅内121灭菌20 min。6.4.1.2 30左右上述培养基在超净工作台里分装到空平板中，每个分装大约15-20ml，凝固后放28冰箱中可以保存一个月。6.4.2 含卡那霉素的LB固体培养基6.4.2.1将卡那霉素250L(浓度为50mg/ml)加入冷却至30左右的LB固体培养基中，混匀，使其工作浓度为50g/ml。6.4.2.2 30左右上述培养基在超净工作台里分装到空平板中，每个分装大约15-20ml，凝固后放28冰箱中可以保存一个月。注：配制体积可根据需求成比例增加。7.流程图Flow Chart无。8. 程序 Procedure8.1诱导前的菌体质粒丢失率检测8.1.1用移液器吸取100L诱导前的菌体，加入无菌PBS 900L，稀释至10-1，以此类推稀释至10-8；8.1.2用移液器分别吸取100L的10-6、10-7 、10-8 稀释度的菌液，分别涂布到LB固体培养基平板上，置37培养箱中培养17小时；8.1.3挑取100个生长良好的单菌落，分别接种到LB固体培养基和含卡那霉素的LB固体培养基平板上，置37培养箱培养12-15小时；8.1.4计算质粒丢失率：=LB固体培养基上的菌落数-含卡那霉素LB固体培养基上的菌落数LB固体培养基上的菌落数x100%8.2加热前的菌体质粒丢失率检测8.2.1用移液器吸取100L加热前的菌体，加入无菌PBS 900L，稀释至10-1，以此类推稀释至10-6；8.2.2用移液器分别吸取100L的10-4、10-5 、10-6 稀释度的菌液，分别涂布到LB固体培养基平板上，置37培养箱中培养17小时；8.2.2挑取100个生长良好的单菌落，分别接种到LB培养基和含卡那霉素的培养基上，置37培养箱培养12-15小时；8.2.4计算质粒丢失率:=LB固体培养基上的菌落数-含卡那霉素LB固体培养基上的菌落数LB固体培养基上的菌落数x100%8.3 判定标准无。8.4记录填写质粒丢失率检测记录。9. EHS无。10.派生记录Derived records质粒丢失率检测记录11. 相关文件 Reference documents高压灭菌