基因检测在肿瘤个性化诊疗中的应用.ppt

金域检验个性化实体肿瘤检测中心报告人 牛洋洋 基因检测在肿瘤个性化诊疗中的应用 分子靶向治疗与基因检测 液相活检技术及其临床应用 非小细胞肺癌的靶向治疗 1 酪氨酸激酶抑制剂 EGFR TKIs 吉非替尼 易瑞沙 厄洛替尼 特罗凯 乳腺癌 胃癌的靶向治疗 HER 2抑制剂曲妥珠单抗 赫赛汀 结 直肠癌的靶向治疗 EGFR单克隆抗体西妥昔单抗 爱必妥 2 ALK ROS1抑制剂克唑替尼 赛可瑞 色瑞替尼 Zykadia 非小细胞肺癌的靶向治疗 1 酪氨酸激酶抑制剂 EGFR TKIs 吉非替尼 易瑞沙 厄洛替尼 特罗凯 埃克替尼 凯美纳 2 ALK ROS1抑制剂克唑替尼 赛可瑞 色瑞替尼 Zykadia 肺腺癌和鳞癌的驱动基因 7 检测时间段 2014年标本来源 手术组织 穿刺标本 胸腹水制备的蜡块标本量 共送检2322例 退单112例 实际检测2210例阴性结果 1260例阳性结果 950例 19del432例 L858R452例 T790M8例 其他58例 金域检验结果 阳性率 43 2019 12 30 Gefitiniborcarboplatin paclitaxelinpulmonaryadenocarcinoma NEnglJMed 2009Sep3 361 10 947 57 doi 10 1056 NEJMoa0810699 Epub2009Aug19 MokTS WuYLetal IPASS IPASS TKI药物是把双刃剑 NSCLC患者EML4 ALK基因重排 间变性淋巴瘤激酶 ALK 基因的异常激活 可促进肿瘤的生长2011年FDA批准克唑替尼用于治疗局部晚期或转移的ALK阳性NSCLC患者2013年CFDA批准克唑替尼用于治疗局部晚期或转移性ALK阳性的NSCLC患者2014年FDA批准色瑞替尼用于治疗局部晚期或转移性ALK阳性的NSCLC患者 包括既往接受克唑替尼治疗失败的患者 ALK基因与EGFR基因并列非小细胞肺癌靶向治疗首选推荐检测基因 克唑替尼治疗ALK阳性患者 ShawATetal NEnglJMed 2013Jun20 368 25 2385 94 中国ALK阳性NSCLC诊断专家共识 2013 ALK基因重排 FISH 方法 荧光原位杂交试剂盒 ABBOTTALK重排检测试剂盒优点 通过cFDA认证 目前检测ALK基因重排的金标准缺点 费用高昂 大部分患者很难承受 ALK基因重排 全自动免疫组化 方法 全自动免疫组化试剂盒 RocheVENTANA抗ALK单抗优点 通过cFDA认证 与FISH方法的一致性为99 23 优点二 费用远低FISH方法 时间快 VentanaALK的cFDA注册临床实验 三家医院 上海肿瘤医院 中国科学院肿瘤医院 北京大学人民医院 超过1100例NSCLC样本进行VENTANAALK D5F3 与FISHALK结果的对比验证实验结果表明VENTANAALK D5F3 与FISHALK的一致性为99 23 阳性率 12 7 31岁 男性 非吸烟EGFR无突变 ALK无重排一线吉非替尼治疗无效口服克唑替尼8周后高度部分缓解 ROSfusion FISH ROSfusion IHC BergethonK etal JClinOncol2012 30 863 870 克唑替尼治疗ROS1基因阳性患者 2019 12 30 乳腺癌 胃癌的靶向治疗 HER 2抑制剂曲妥珠单抗 赫赛汀 HER 2扩增检测的应用 辅助诊断FISH技术检测HER 2状态结果客观准确 为检测HER 2基因的金标准 制定治疗方案HER 2基因扩增患者 应用他莫昔芬治疗后的死亡风险明显增高 提示患者可能不适合他莫昔芬作为内分泌治疗的选择 HER 2基因扩增患者 对CMF化疗方案的反应性降低 宜采用高剂量强度的蒽环类药物方案 2019 12 30 指导靶向用药赫赛汀只有针对HER 2基因扩增和蛋白过度表达的病人才有效预后判断预后判断研究显示 HER 2基因扩增患者生存期较短 肿瘤负荷更大 淋巴结转移几率更高 激素受体阴性比例更高 复发风险更高 乳腺癌 HER2扩增阳性率25 左右 荧光原位杂交技术 NCCNClinicalPracticeGuidelinesinOncologyforbreastcancer v1 2014 胃癌 HER2扩增阳性率约15 27 荧光原位杂交技术 各类型胃肿瘤HER2阳性率 食管胃结合部腺癌 33 胃腺癌 21 肠道及弥漫型肿瘤 32 混合型肿瘤 6 乳腺癌 HER2扩增阳性率约20 25 荧光原位杂交技术 NCCNClinicalPracticeGuidelinesinOncologyforbreastcancer v1 2014 NCCNClinicalPracticeGuidelinesinOncologyforgastriccancer v2 2013 标本来源 组织标本 以乳腺癌为主 方法学 FISH方法标本量 检测2560例 阳性结果 1050例 金域检验结果 阳性率 41 02 结直肠癌驱动基因分布 爱必妥和维克替比仅适用于KRAS基因野生型的转移性结直肠癌患者 KRAS突变是早期NSCLC患者无法从辅助化疗中获益的预测因子 标本来源 组织标本 以结直肠癌为主 方法学 ARMS PCR Sanger测序标本量 检测1618例阳性结果 614例 金域检验结果荟萃 阳性率 38 部分晚期患者无手术机会无足够的组织标本进行基因分型重复活检患者依从性差 作为金标本的组织靶基因检测也存在局限性一 取材困难 二 肿瘤异质性 同一肿瘤组织有异质性不同部位肿瘤的异质性 三 无法对疗效进行监测 组织标本无法用于动态检测 LiquidBiopsies 液相活检 Blood otherbodilyfluids Cell freeDNA 血浆游离DNA CirculatingtumorDNA 循环肿瘤DNA 有限的样本数量有限的取样频率取样时需要专业医生和专业机构有创伤地取样检测速度慢 目前实体肿瘤个体化治疗面临的困境 ctDNA的生物学属性 来源 总游离DNA 上皮组织5 10 肿瘤0 01 10 胃肠道5 10 血细胞80 90 largely 1 0 ctDNA的生物学属性 含量 29 血浆 水91 蛋白7 代谢物 微量 Cell freeDNA 微量 细胞层 白细胞2 3 血小板块2 3 红细胞90 CTC 微量 ctDNA的生物学属性 存在部位 2019 12 30 特殊保存方式 抑制核酸酶介导的ctDNA降解防腐剂稳定有核血细胞 ctDNA分子标记物存在周期短 能实时反应患者的基本情况 ctDNA的生物学属性 半衰期短 ctDNA的生物学属性 高特异性 ctDNA 所有肿瘤克隆的混合体 能反应肿瘤所有克隆的整体特征 基于血液的靶基因检测可惠及每一位患者 指导用药 匀质标本 实时监测 作为无法获取组织标本的补充 无创检测结果指导临床用药 循环而匀质的ctDNA标本 在一定程度克服了异质性 实现实时动态监测 提高全程管理水平 33 III IV期肺腺癌易瑞沙 特罗凯 凯美纳 等方法 ARMS PCR 基于血液的肺癌EGFR突变检测 EGFR基因突变位点 2019 12 30 共入组1060位高加索人群非小细胞肺癌患者 来自5个国家652例患者同时具有肿瘤组织和血液样本 采用Qiagen试剂盒进行检测这两者EGFR突变状态吻合率为94 3 特异性为99 8 37 IRESSA药品说明书更新 中国Gefitinib说明书更新 2015年2月13日cFDA批准更新 第4页当考虑本品用于晚期或转移性NSCLC患者的一线治疗时 推荐对所有患者的肿瘤组织进行EGFR突变检测 如果肿瘤标本不可评估 则可使用血液 血浆 标本中获得的循环肿瘤DNA ctDNA 用于EGFR突变检测 只能使用经论证可用于测定肿瘤或ctDNA的EGFR突变的检测方法 检测方法须稳定 可靠并且灵敏 以避免出现假阴性或假阳性的测定结果 38 200例标本对照 肿瘤组织对比外周血进行EGFR基因检测200例标本 共出现11例不相符标本 组织阳性而外周血检测阴性 组织阴性而外周血检测阳性 检测时机的选择 检测方法学的选定 金域实验室 ctDNA检测数据 统计2015年1月1日至3月31日数据 检测目前已使用一代TKI治疗的非小细胞肺癌患者 3个月 6个月 72例 出现T790M突变阳性例数为31例 与新药临床试验部联合推动患者加入针对 T790M 位点的第三代TKI新药临床试验 金域实验室 ctDNA检测数据 报告时间 ASCO2014背景 服用EGFR TKI药物的患者 一般在8 11月内出现耐药耐药原因 50 的患者产生T790M突变I期临床报告 入组199名患者 女性62 中位年龄60岁 亚裔65 T790M突变 132位患者进行了检测 89例检出T790M疗效 T790M c uORR 为64 T790M 为23 60例确认缓解的患者中 97 58 60 的患者在数据截止时疾病仍在持续缓解 最长缓解时间超过8个月 AZD9291I期临床研究 外周血中KRAS基因突变检测 III IV期肺腺癌III IV期结直肠癌爱必妥 维克替比 等方法 ARMS PCR 43 肺 肠癌22基因突变热点检测 III IV期肺腺癌III IV期结直肠癌指导用药 预后评估方法 二代测序 22基因列表 优势 高通量 覆盖了大部分非小细胞肺癌和结直肠癌的驱动基因 ctDNA的临床应用 未来潜在临床用途 恶性肿瘤治疗反应监测 恶性肿瘤的预后分层 恶性肿瘤复发监测 1 治疗反应检测 Diseaseprogression 1Dawsonetal NEJM2013Online DOI 10 10562Suetal AnnNYAcadSci2008 1137 197 206 Cell freeDNAwastheonlymarkerthatpredictedresponse CELL FREEDNA PIK3CA CA15 3ANTIGEN CIRCULATINGTUMORCELLS Patientsrespondstotherapyswitch Hormonaltherapy 47 2 预后分层 BettegowdaCetal DetectionofcirculatingtumorDNA ctDNA inearly andlate stagehumanmalignancies SciTranslMed 2014Feb19 6 224 224ra24 恶性肿瘤预后分层 随着每5ml血中肿瘤DNA片段含量的提升 所统计的2年预估生存率呈下滑趋势 ctDNA可以对手术切除后的患者进行微小残留的检测以评估复发的风险 APCG4189T作为突变参考指标 a 手术前 突变D