人源化抗体的制备策略PPT课件.pptx

人源化抗体的制备策略有哪些 2020 1 3 1 目录 一 嵌合抗体 二 CDR移植的人源化抗体 三 完全人源化抗体 1 抗体库技术 2 转基因小鼠技术 2020 1 3 2 一 嵌合抗体 应用DNA重组技术将小鼠抗体基因上的可变区与人抗体基因的恒定区重组 再将重组后的基因导入骨髓瘤细胞中表达 根据所用的载体质粒标记基因产物 选用适当的抗生素或制剂进行筛选 再用与传统技术相似的方法克隆出分泌人鼠嵌合抗体的细胞株 二 CDR移植的人源化抗体 鼠源性抗体V区中的FR仍残留一定的免疫原性 这种抗体还远非真正的人源化抗体 有些还能产生很强的抗独特型反应 为减少鼠源成分 人们进一步用人的FR替代鼠FR 形成更为完全的人源化抗体 即除了3个CDR是鼠源的外 其余全部是人源结构 又称CDR移植抗体 CDR graftedantibody 或改型抗体 reshapedantibody 2020 1 3 3 三 完全人源化抗体 1 抗体库技术噬菌体抗体库技术的产生依赖于3项实验技术的发展 一是PCR技术的发展使人们可以用一组引物 免疫球蛋白可变区中骨架部分的保守序列 通过RT PCR直接从B淋巴细胞总RNA克隆出全套免疫球蛋白可变区基因 从而使抗体库的构建简单易行 二是噬菌体展示技术 即将抗体通过与噬菌体外壳蛋白融合表达在噬菌体的表面 进而经亲和富集法筛选表达有特异活性的抗体 的建立 实现了基因型和表型的统一 提供了高效率的筛选系统 这是噬菌体抗体库技术的核心 三是从大肠杆菌分泌表达有结合功能的免疫球蛋白分子片段 噬菌体抗体库将基因型和表型统一于一体 将选择能力与扩增能力偶联起来 具有强大的筛选功能 能够在体外模拟体内的抗体生成过程 使抗体工程技术进入了一个新的时代 噬菌体抗体库技术的发展使体外不经过免疫获得抗体成为可能 由于它发生于体外 因此不依赖体内抗原识别和提呈系统 在理论上可以产生抗任何物质的抗体 目前噬菌体抗体库技术也存在不足之处 如从未经免疫动物的抗体库获得的抗体亲和力不高 受外源基因转化率的限制 抗体库的库容不足以涵盖一些动物的抗体多样性等 因此 大容量抗体库是获得高亲和力抗体和针对稀有抗原抗体的关键 2020 1 3 4 2020 1 3 5 2转基因小鼠技术 通过基因敲除技术使小鼠自身的基因失活并导入新基因 创造出携带人体抗体重 轻链基因簇 而自身抗体基因失活的转基因小鼠 这种转人抗体基因小鼠 humanantibodymouse HuMab 所携带的人DNA片段具有完备的功能 可以有效地进行同种型转换和亲和力成熟 转基因小鼠制备的人抗体 其功效优于其他技术生产的抗正常人体蛋白单抗 小鼠识别抗原和动员抗原的抗体系统仍保持完整 容易把人体蛋白识别为异物 此外 由于抗体是体内产生的 经历了正常装配和成熟过程 从而保证成品具有较高的靶结合亲和力 但转基因小鼠也存在一些缺陷 即转基因通常有体细胞突变和其他独特的序列 导致不完整的人序列 而且 由于抗体是在小鼠体内装配 因而产生的单抗具有鼠糖基化