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实验六植物细胞骨架的光学显微镜观察 一实验目的1通过对洋葱内皮细胞的处理 掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察 2掌握考马斯亮蓝R250对植物细胞骨架染色的方法 1 二实验原理 细胞骨架是由蛋白质丝组成的复杂网状结构 成分有微丝 微管和中间纤维 TritonX 100可溶解抽提细胞中的蛋白质和脂质 但不破坏细胞骨架系统 戊二醛固定 考马斯亮蓝R250染色 光学显微镜观察网状结构的由微丝组成的细胞骨架 2 三实验仪器 材料和试剂 1仪器 用具 普通光学显微镜等2材料 洋葱鳞茎3试剂 M 缓冲液 6mmol L磷酸缓冲液 1 TritonX 100 0 2 考马斯亮蓝R250 3 三实验仪器 材料和试剂 3试剂 3 戊二醛 50 70 95 乙醇 叔丁醇 正丁醇 二甲苯 中性树胶 4 四实验方法 1洋葱鳞茎内表皮 1cm大小 50ml烧杯 磷酸缓冲液 下沉2吸去缓冲液 加1 TritonX 10020 30分钟3吸去TritonX 100 M 缓冲液洗3次 10分钟43 戊二醛固定0 5 1小时 5 四实验方法 5PH6 8磷酸缓冲液洗3次 10分钟60 2 考马斯亮蓝R250染色20 30分钟7蒸馏水洗1 2次 装片 观察8制作永久切片 6 四实验方法 取洋葱内皮1cm左右置于含PBS液的载玻片上湿润后 吸去PBS加2滴1 TritonX 100 M 缓冲液 5min吸去缓冲液 加3 戊二醛 PB溶液 固定30min加PBS洗2次 共3min加0 2 考马斯亮蓝R250染色30min用PBS洗2次 共2min 吸干镜检并绘图细胞骨架标本制作过程 7 五作业 1绘出植物细胞骨架微丝结构图 2分析和论述在光学显微镜下观察到的细胞骨架的形态特征 3为什么用TritonX 100的缓冲液处理材料 8 植物细胞骨架微丝结构图 9 植物细胞骨架微丝结构图 10 植物细胞骨架微丝结构图 11 植物细胞骨架微丝结构图 12 植物细胞骨架微丝结构图 13 植物细胞骨架的形态特征 细胞骨架观察结果光学显微镜下洋葱内表皮细胞的轮廓清晰可见 如图 细胞壁及其分界明显 10 10倍镜下可粗略观察到细胞内粗细不等的蓝色纤维 团块形成的网状结构 同一细胞内各处骨架的密集度不均匀 细胞核区域的纤维相对密集 蓝色浓重 甚至分辨不出网络结构 另外可见细胞壁区域有零星蓝色纤维分布 相邻细胞的密集程度基本一致 但有少数细胞有较大不同 14 植物细胞骨架的形态特征 细胞骨架观察结果10 40倍镜下可清楚观察到蓝色的网状结构确实由线性纤维交织成 纤维间的结合点稍膨大 细胞边缘骨架较稀疏 但可见由与胞壁相同走向的纤维形成的细胞质膜的轮廓 与细胞内部的纤维通过纵向的纤维相连 相邻细胞有纤维穿过胞间的细胞壁 调节显微镜焦距可观察到细胞不同横切面的网络结构的变化 表
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