PCR实验教学组织.ppt

PCR特异性扩增DNA片段北京四中赵晓刚 课标标准 实验目的1 PCR技术扩增特异性DNA2 琼脂糖凝胶电泳检测 一 实验室准备二 实验准备三 教学组织 一 实验室准备1 PCR仪 1 美国MJRESEARCHMinicycler 2 德国Eppendorf产品 一 实验室准备2 移液器 1 德国Eppendorf 2 芬兰ThermoScientificFinnpipette 一 实验室准备3 灭菌锅 一 实验室准备4 离心机 一 实验室准备5 电泳仪 北京六一仪器厂 川布兰公司 一 实验室准备二 实验准备三 教学组织 二 实验准备 课前 一 PCR准备工作1 人性别鉴定试剂盒 克隆Y染色体SRY基因 1 在引物管中各加入40 LddH2O 充分溶解 离心备用 2 4位同学一组 上课前15分钟 每个实验台上摆放好一个两面板 上面要摆上2个灭菌的0 2mL离心管 一个冰盒 含上表试剂 2支移液器 一盒灭菌10 L吸头 一把剪刀 一个废液缸 烧杯 1记号笔 4人一组的仪器和试剂 2 学生操作 1uL 12 4uL 教师与提供试剂公司进行协调 技术人员做预实验 3 PCR程序设计 二 电泳相关实验准备 二 电泳相关实验准备 二 电泳相关实验准备 1 琼脂糖凝胶电泳试剂盒 1 将50 电泳缓冲液稀释成1 电泳缓冲液 即20mL50 电泳缓冲液中加入980mL蒸馏水 稀释成1L的1 电泳缓冲液 2 制备2块胶备用 3 将6 loadingbuffer和核酸荧光染料各取30 L 充分混匀 然后取24个0 2mL离心管 每管分2 L的混合物 置于学生的两面板上备用 一 实验室准备二 实验准备三 教学组织 2节课时间 三 教学组织 2节课时间 一 第1节课1 PCR条件和原理 10min 2 移液器的使用 5min 3 配置反应体系 10min 4 PCR程序设计和反应5 教师将反应后体系 20 保存 三 教学组织 2节课时间 二 第2节课1 电泳原理 5min 2 胶的制备 5min 3 染色 点样 5min 4 电泳约20min 继续按进度讲课或学生观摩 5 观察 下课前5min 三 教学组织 仅供参考 问题1 体内DNA复制的条件 问题2 体内DNA复制的特点 问题3 如果只复制特定DNA片段 Gene2 呢 一 PCR的原理和条件 10min 一 PCR的原理和条件 1 原理变性退火延伸 2 条件模板DNA引物 保证复制的精确起始 4种脱氧核糖核苷三磷酸DNA聚合酶 二 PCR实验操作 1 实验目的PCR扩增人类性别决定基因SRY 并检测 2 实验材料和器具2 1男生2根带有明显毛囊的头发女生2根作对照 2 2移液器 吸头 离心管 每取一种试剂更换枪头 每位同学尝试用移液器一次 2 3人性别鉴定试剂 3 配制反应体系 10min A 4 PCR程序设计 10分钟 B 5 教师将反应后体系 20 保存 作业 已知DNA聚合酶合成DNA的速度是1000碱基 min 克隆1500bp基因 75min理论上能合成该基因的数目约是 已知变性30S 退火30S 230 思考 PCR实验结束后如何鉴定是否克隆到SRY基因呢 三 电泳 1 原理琼脂糖凝胶电泳常用于DNA RNA大片段的分离 核酸磷酸基团带负电荷可向阳极移动 在电场驱动