动物克隆1.ppt

第二章克隆技术 第三节动物的克隆 动物细胞与组织培养 细胞克隆 单克隆抗体 细胞核移植 动物的克隆常用技术 动物细胞融合 动物细胞与组织培养是动物克隆的技术基础 动物细胞的培养和克隆的形成 当一个人烧伤需要皮肤移植的时候 最好移植谁的 1 自己2 同卵双胞胎兄弟或姐妹3 父母4 一般兄弟或姐妹5 其他人 动物细胞的培养过程 幼龄动物 取动物器官和组织 剪碎组织 胰蛋白酶处理 细胞培养 单个细胞 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础 动物细胞培养过程 动物胚胎或幼龄动物的组织 器官 细胞悬浮液 机械消化 胰蛋白酶消化 原代培养 传代培养 单个细胞 加培养液 分装成多个培养瓶 接触抑制 成分 原代培养 传代培养 细胞系 有限细胞系 无限 连续 细胞系 恶性转化细胞系 转化细胞系 筛选特殊性质或标记物的单细胞增殖成的细胞群 细胞株 有限细胞株 无限 连续 细胞株 细胞株和细胞系的关系 获得细胞 细胞的全能性 细胞株 细胞系 植物体 培养结果 或细胞分泌蛋白 快速繁殖 培育无病毒植株等 培养目的 葡萄糖 动物血清 蔗糖 植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物组织培养和动物细胞培养的比较 具体应用 得到 动物组织培养 胚胎或幼龄动物的脏器 单个细胞 原代培养 传代培养 大量的组织细胞 构成组织或器官 修复受损皮肤 器官等 细胞株或细胞系 动物组织培养 胚胎或幼龄动物的脏器 单个细胞 原代培养 传代培养 药物 研究治疗癌症的药物及其疗效 某物质 检测有毒物质 致癌物质等 细胞株或细胞系 植物组织培养和动物细胞培养的比较 思考 2 为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料 1 动物细胞培养液的主要成分是什么 较植物组培培养基有何独特之处 3 为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞 4 动物细胞培养能否像植物组织培养那样最终培养成新个体 主要成分 葡萄糖 氨基酸 无机盐 维生素和动物血清等 独特之处有 1 液体培养基2 成分中有动物血清等 因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛 分裂能力强 成块组织不利培养 分散了做成细胞悬浮液利于培养 不能 动物细胞培养只能使细胞数目增多 不能发育成新的动物个体 动物细胞培养的条件 1 无菌无毒的环境2 营养3 温度和pH4 气体环境 2005年4月 美国一家非官方癌症研究中心发布信息说 高露洁 牙膏中含有的抗菌化学物质三氯生可能是致癌物质 公众对此表示怀疑 科研人员欲采用一定的技术手段探究三氯生对人体是否有危害 请回答 1 根据所学的动物细胞工程知识 采取下列哪种技术手段最合适A 动物细胞融合B 动物细胞培养C 胚胎移植D 核移植 2 根据上述选择 请你设计一个实验来探究 三氯生 对人体是否有危害 1 该实验的原理是 B 许多致畸物质加入动物细胞培养液后 培养细胞会发生染色体结构或数目的变异 根据变异细胞占观察培养细胞的百分数 可以判断某种物质的毒性 2 实验方法步骤 材料准备 从医院妇产科获得所需要的原始材料组织 浓度为0 09 的三氯生试剂 高倍显微镜 培养瓶若干 配置好的培养液 剪刀 培养箱 所需要的酶 制备检测细胞 配置细胞悬浮液 将细胞悬浮液分装到两个以上的培养瓶中 置于培养箱中培养一段时间 配置培养液 取两个培养瓶 分别编号1 2 将上述组织用剪刀剪碎 再用胰蛋白酶使其分散成单个细胞 然后利用培养液配置成一定浓度的细胞悬浮液 分别往其中加入等量的配置好的培养液 再往1号瓶中滴加几滴0 09 的 三氯生 试剂 摇匀 将上述某一个培养状况较好的培养瓶中的细胞培养液分成两份 分别加入1 2号培养瓶中 培养一段时间 检测过程 分别从1 2号培养瓶中取样做多次镜检 计算出变异细胞占观察培养细胞的百分数 预期结果和结论 a 若1号和2号培养瓶中变异细胞的百分比相当 则说明 三氯生 对人体无害 b 若1号培养瓶中变异细胞百分数大于2号 则说明 三氯生 对人体有害 克隆培养法 细胞克隆 把一个单细胞从群体中分离出来单独培养 使之繁衍成一个细胞群体的技术 细胞克隆的最基本要求 克隆来源于单个细胞 细胞克隆的最主要用途之一 分离缺乏特殊基因的突变细胞系 科学家分析 探索过程 1 体内B淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体 2 每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 3 临床医学目的 获得大量的单一抗体 理论方法 用单个B淋巴细胞进行无性繁殖 也就是通过克隆 形成细胞群 由该细胞群就能产生出单克隆抗体 化学性质单一 特异性强的抗体 4 遇到的难题 体外培养时 一个B淋巴细胞不可能无限繁殖 无法得到大细胞群 大胆设想 小鼠骨髓瘤细胞 能在体外培养下大量增殖 小鼠骨髓瘤细胞 某一种淋巴细胞 某一种淋巴细胞 能产生特异性抗体 过程 抗原 浆细胞 筛选 筛选 杂交瘤细胞 动物的细胞融合技术及其应用 细胞融合是将不同种类的两种细胞经过特殊处理后放在一起 在某些促融因子作用下发生融合 形成杂种细胞 二 动物细胞融合 1 过程 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合 形成杂种细胞 动物细胞融合的原理 与植物细胞原生质体融合的基本原理相同 利用 细胞膜的流动性 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 单克隆抗体的应用 疾病的诊断 治疗和预防 优点 特异性强 灵敏度高 优越性强 临床应用 单抗探针 正在研究 用单克隆抗体治疗癌症 全能性大小比较 受精卵 胚胎干细胞 组织干细胞 生殖细胞 高度分化的体细胞 1 动物细胞全能性的表现程度 去核的卵细胞 乳腺细胞核 重组细胞 细胞核移植实验和动物的克隆繁殖 2 动物难以克隆的原因 动物的克隆繁殖 动物体细胞难以克隆的原因 P34 36 1 动物基因组 维持生存 都处于活动状态选择性表达 有关闭 有开放 2 细胞质中的调节蛋白阻止了核基因的表达 3 动物核移植实验和克隆繁殖 实践证明 胚胎细胞核的移植成功率远高于成体细胞 277次乳腺细胞核移植实验 获