第五章环境控制(NPowerLite).ppt

第五章环境质量控制 实验动物质量控制遗传质量控制微生物质量控制环境质量控制营养质量控制 第一节环境因素对实验动物的影响 一 实验动物环境控制的重要性实验动物几乎终身被限制在一个极其有限的环境范围内生活 这种环境就成了实验动物赖以生存的条件 动物实验在实验前和实验中控制各种环境因素十分重要 甚至可以说没有环境控制就没有动物实验 genotype基因型发育环境developmentalphenotype表现型周围环境proximatedramatype演出型 1959年Russell和Burch提出的影响实验结果的遗传和环境因素 动物对实验处理的反应可用以下公式表示 R A B C D ER 实验动物的总反应A 动物种的共同反应B 品种品系特有的反应C 个体反应 个体差异 D 环境影响E 实验误差环境因素与动物的总反应呈正相关 要尽量减少D的变化 排除实验处理以外的影响 二 实验动物环境因素的分类1 气候因素 温度 湿度 气流 风速等 2 理化因素 氧 二氧化碳 粉尘 臭味 噪音 照度 杀虫剂 消毒剂 有害化学物质等 3 居住因素 房屋 笼具 垫料等 4 营养因素 饲料 水等 5 生物因素 同种生物因素 社会地位 势力范围 咬斗和饲养密度等异种生物因素 微生物 人和其它动物的关系 环境对实验动物质量和动物试验结果的影响是多因素联合作用的结果 多种因素是共存的 所以在论述实验动物的环境时 应该按复合环境 environmentalcomplex 状态加以考虑 三 各种环境因素对实验动物质量和动物试验结果的影响1 温度 最适宜温度20 25 温差 3或4 温度对动物的影响 新陈代谢 低温时新陈代谢增加 摄食增加散热 除灵长类 其他动物汗腺不发达或无汗腺 高温时散热困难 难以维持体温恒定脏器重量 负相关生殖 高温时雄性睾丸萎缩 精子活力下降 雌性动物性周期紊乱 泌乳下降对动物实验的反应性 不同温度对药物LD50的影响 mg kg 药物15 5 26 7 苯异丙氨197 090 0盐酸脱氧麻黄碱111 033 2麻黄碱477 1565 0 表4 1不同环境温度时戊巴比妥钠 95mg kg 腹腔注射导致大鼠死亡率比较 实验动物的温度标准范围 2 湿度 相对湿度 实际水蒸气分压力相对湿度 100 饱和水蒸气分压力适宜的相对湿度是40 70 高温高湿导致机体蒸发散热受阻 高湿利于微生物繁殖和传播 湿度过低可导致粉尘飞扬 而微生物主要附着在粉尘上 动物室内变态反应原的含量随湿度的下降而上升 低湿 散热增加 产热增加 摄食增加低湿 大鼠环尾症 3 气流与风速换气次数 气流速度 压强梯度气流速度和散热正相关 实验动物体表面积与体重的比值较大 对气流速度更敏感 气流速度过大或气流直吹 动物体表散热过大 气流速度小 散热慢 0 1 0 2m s换气次数 洁净程度越高 要求换气次数越多 屏障环境 10 20次 h隔离环境 20 50次 h 压强梯度 洁净区高于污染区合理组织气流和风速可调节室内温度和湿度 又可降低室内粉尘和有害气体污染 控制传染病的流行 4 光照工作照度150 300lx动物照度15 20lx明暗交替时间12 12或10 14h照度对动物的生殖生理和行为活动有较大影响强光长时间照射引起角膜退行性变化 5 噪声60dB以下音域 人1000 2000Hz 小鼠1000 5000Hz 引起小鼠听力性痉挛 对生殖影响较大 如豚鼠流产 引起动物呼吸 心跳 血压 肾上腺皮质激素等生理指标变化 6 空气洁净状况气体污染 氨14mg m3有害气体 氨 甲基硫醇 硫化氢等颗粒污染 100级 10000级 100000级美国宇航局标准 每立方英尺空气中直径0 5微米以上粒子的个数 粉尘颗粒 是变应原 还是微生物的主要载体 落下菌数 0 隔离环境 3 屏障环境 或30个 皿 普通环境 在不饲养动物的状态下每5 10m2放置1个直径9cm的血琼脂培养皿 暴露30min培养48h的菌落数 7 生物因素动物社会因素和动物饲养密度微生物其它动物实验人员 Malemicewillfightwhenfirstco mingledinacage andtheyneedtobeobservedverycloselyduringthistimeofestablishingasocialdominancehierarchywithinthegroup Weakandnon aggressiveanimalsmightbeinjuredorkilledifnotremovedfromthecage 8 居住因素包括实验动物室的建筑 饲养笼具 垫料 饮水器和给食器等 动物试验设施环境指标 以屏障系统小鼠为例 温度 20 25 换气次数 10 20次 h日温差 3 气流速度 0 1 0 2m s相对湿度 40 70 压强梯度 20 50Pa噪声 60dB空气洁净度 10000级氨浓度 14mg m3落下细菌数 3个 皿照度 工作 150 300lx 动物 15 20lx昼夜明暗交替时间 12 12或10 14小时密度 20g 面积0 01m2 高度0 15m 第二节实验动物设施 一 实验动物设施laboratoryanimalfacility LAF是进行实验动物饲养 保种维持 生产 实验研究 试验等设施的总称 包括实验动物繁育 生产设施和动物实验设施 二 实验动物环境设施的分类实验动物设施根据对饲养动物的空气净化程度分为三类 开放系统 opensystem 屏障系统 barriersystem 隔离系统 isolationsystem 实验动物中心屏障环境特点 恒温 20 26 恒湿 40 70 足够的换气次数 10 20次 小时 保证有害气体浓度降低到最小正向梯度压差 20 50 使屏障外污染源不能进入万级空气洁净度保证空气洁净适合的动物照度 15 20 和对时明暗交替 12h 12h 符合动物生活习性 11楼IVC系统为动物提供更好的保护 屏障系统 实验动物垫料 屏障系统 IVC IndividuallyVentilatedCages IVC的特点 IVC IndividuallyVentilatedCages 是独立通风笼盒的简称 它的特点是具有一定的密闭性 同时让经HEPA过滤器的洁净空气流入盒内 使盒内保持正压 减少了可能的感染来源 适合于饲养SPF级动物 以及一些免疫缺陷动物 屏障系统 层流架 隔离系统 隔离器的基本构造示意图 实验动物设施的监控 监控内容温度湿度压差人员进出情况 环境级别和动物级别的对应关系动物级别环境级别 洁净度 落下菌 普通动物开放系统 30 清洁动物屏障系统 万级 3 SPF动物屏障系统 万级 3 无菌动物或悉生动物隔离系统 百级 0 三 特殊动物实验设施感染动物实验设施放射性同位素动物实验设施 RI 特殊化学物质动物实验设施 1 感染动物设施是指使用病原体对动物进行实验感染的设施 此种设施除备有通常动物设施要求外 还必须具备防止由动物传染人 动物相互间的交叉感染 动物向设施外感染的结构和功能 此类设施设计的目的是防止生物性危险和有害因素向动物实验设施和外界的污染 目前通常采用物理学隔离 主要是在气密性结构内采用负压通风 以达到防止气溶胶扩散污染的目的 NIH P1 P2 P3 P4美国疾病管理中心 BSL1 BSL2 BSL3 BSL4 我国2004 5 1颁布 10 1实施 实验室生物安全通用要求 国家标准 一级 对健康成年人已知无致病作用的微生物二级 对人或环境具有中等潜在危害的微生物 三级 通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素 通常已有预防传染的疫苗 艾滋病病毒的研究 血清学实验除外 应在三级生物安全防护实验室中进行 四级 对人体具有高度的危险性 通过气溶胶途径传播或传播途径不明 目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素 以及上述情况类似的不明微生物 第三节屏障系统管理 一 人流路线 二 物流路线 三 消毒与灭菌高压锅 121 0 11Mpa 30分钟132 0 21Mpa 15分钟传递窗 紫外线 表面消毒 30分钟渡槽 0 1 新洁尔灭浸泡4小时Co60照射2 过氧乙酸喷雾高锰酸钾 福尔马林熏蒸 四 废弃动物处理深埋或焚烧 实验动物中心可以提供的实验条件 10楼南 开放环境 饲养普通级猴10楼北 屏障环境 饲养清洁级大 小鼠11楼南 屏障环境 饲养SPF级小鼠 大鼠 引进动物进入清洁级屏障动物房 从外面引进的动物必须有与其适用范围相符的实验动物生产许可证 同时必须附带动物的品系 性别 年龄等信息经实验动物中心工作人员审查后方可准备进入动物房 动物运输时必须有合格的包装箱 清洁级及以上动物包装箱必须以高效滤膜封闭窗口 包装箱以胶带封口 封口破损或滤膜破损者不得传入屏障系统 将检查合格的动物包装箱在外准备间以70 酒精棉球或5 碘伏仔细擦拭表面 将包装箱放入灭菌通道进行喷雾消毒或紫外线消毒 在内准备间打开灭菌通道的门 在门口拆开包装箱 轻轻提起鼠尾根部 放入准备好的盒子中 盖好盖子 动物包装箱仍退回灭菌通道 将刚装了动物的笼盒放在架子上 并填写 悬挂卡片 加饲料 饮水 从外准备间打开灭菌通道 取出动物包装箱 注意 新引进动物应在单独房间 单独笼架饲养一段时间 待观察健康无病后再移入其它房间不得向屏障动物房内传入不符合相应的实验动物生产许可证的动物 实验用品和器具进出清洁级屏障动物房 用70 酒精或5 碘伏仔细擦拭消毒物品表面紫外灯照射15min或直接喷雾消毒手术器械可经高压消毒或经消毒液中浸泡后在紫外灯下照射15min传入小型仪器经灭菌通道喷雾消毒后传入 IVC的使用要点 对IVC中的动物进行的一切工作均在动物超净工作台中进行使用超净工作台前30分钟用70 酒精喷雾工作站内表面 同时放入经表面消毒的各种灭菌物料和实验用品 并打开紫外灯和风机用70 酒精喷雾工作车 双手手套和IVC的外表面 将笼盒移入工作台后进行换窝 喂饲 喂水 实验等工作 物品进出SPF动物实验室 所有物品在经过进入屏障系统时的一次消毒后 在进入超净工作台时必须经过酒精喷雾或紫外线照射15min再次消毒 实验用品和器具在实验结束后可经内准备间从传递窗或灭菌通道传出 也可经缓冲间 出屏障系统 动物实验废弃物品的处理 垫料等废弃物与动物笼盒一起从缓冲间 出系统注射器等尖锐物品套上套子后再放入垃圾桶 以防刺伤工作人员屏障内无排水系统 液体废弃物请传出系统后再处理废弃的动物包装盒从灭菌通道出系统口罩 手套 帽子 鞋套为一次性物品 用过后就应丢弃 灭菌工作服可放在一更 中心工作人员会对其进行处理 EthicalandScientificIssues Pain DistressStresshasbeendefinedas theeffectproducedbyexternal i e physicalorenvironmental eventsorinternal i e physiologicorpsychologic factors referredtoasstressors whichinduceanalterationinananimal sbiologicequilibrium NRC 1992 Notallstressisharmfulandmayactuallybebeneficial suchaspairorgrouphousinganimals Iftheanimalcanadapttothestressthenitwillreturntoastateofcomfort TheThreeRs Replacement Substitutionofnon livingmaterial i e tissuecultures ormethods putermodeling foranimals 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